專利名稱：來自番茄的具有抗氧化和降血脂作用的乳酸菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提高機體抗氧化酶活性和降低血脂水平的乳酸菌，它是從番茄汁 中獲得的。
背景技術(shù)：
環(huán)境污染、紫外線輻射以及生命活動的某些代謝過程與體內(nèi)活性氧自由基的產(chǎn)生 有密切關(guān)系。目前發(fā)現(xiàn)殘留農(nóng)藥、化學(xué)試劑及其各種輻射的影響均會導(dǎo)致機體自由基含量 升高，而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，人類的衰老與體內(nèi)的自由基等活性分子有關(guān)。正常情況下體內(nèi)防御 系統(tǒng)維持著自由基產(chǎn)生和清除的生理平衡，但當(dāng)防御系統(tǒng)不能有效的清除或有外源性的自 由基大量入侵時，活性氧諸如超氧陰離子(O2-)，過氧化氫(H2O2)和羥自由基(0H ·)等水平 就會超出正常范圍從而導(dǎo)致氧化應(yīng)激的出現(xiàn)，損害細(xì)胞的遺傳物質(zhì)DNA，作用于體內(nèi)的酶、 蛋白質(zhì)等生理活性物質(zhì)，從而導(dǎo)致衰老并引發(fā)多種疾病，如癌癥、糖尿病、心血管疾病、高血 壓等，故自由基是人體疾病、衰老和死亡的直接誘因之一。迄今為止，已有數(shù)百種抗氧化劑被發(fā)現(xiàn)，大部分抗氧化劑來源于化學(xué)合成和天然 產(chǎn)物提取。但隨著科學(xué)的進(jìn)步，人類逐漸的意識到化學(xué)合成抗氧化劑的危害；天然物質(zhì)的提 取又因為分離鑒定、復(fù)配和改性等問題的限制阻礙其發(fā)展。近幾年發(fā)現(xiàn)很多細(xì)菌的代謝產(chǎn) 物中含有很多抗氧化物質(zhì)，而微生物資源豐富，生產(chǎn)周期短，原料低廉，因此微生物發(fā)酵有 望成為大規(guī)模獲得食用抗氧化劑的一條有效途徑。乳酸菌是指一群可發(fā)酵碳水化合物并產(chǎn)生大量乳酸及細(xì)菌素的厭氧或兼性厭氧 的革蘭氏陽性球菌或桿菌的統(tǒng)稱，在自然界廣泛存在。大量研究表明，絕大部分乳酸菌是正 常人畜腸道中極為重要的生理菌群，擔(dān)負(fù)著機體多種重要的生理功能，能夠調(diào)節(jié)機體胃腸 道正常菌群、保持微生態(tài)平衡、降低血清膽固醇、抗腫瘤和免疫賦活作用、可抑制腸道內(nèi)腐 敗菌生長繁殖和腐敗產(chǎn)物的產(chǎn)生、增加營養(yǎng)、促進(jìn)免疫能力，從而對機體的生理功能、免疫 反應(yīng)、腫瘤發(fā)生、衰老過程和應(yīng)激反應(yīng)等產(chǎn)生作用。本發(fā)明對其進(jìn)行分離，并對其抗氧化及 降血脂的效果進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)該乳酸菌具有明顯的提高抗氧化酶活性和降血脂作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于從番茄中分離到一種乳酸菌，通過體外及體內(nèi)實驗證明其具有 抗氧化和降血脂的功效。
具體實施例方式以下通過實驗來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述乳酸菌的有益效果，這些實驗包括了本發(fā) 明藥物的藥效學(xué)實驗和臨床療效觀察實驗。乳酸菌上清發(fā)酵液的制備將菌種接入已滅菌的MRS液體培養(yǎng)基中30°C培養(yǎng)48h，連續(xù)傳代3次。培養(yǎng)液經(jīng) 4000 X g離心lOmin，收集上清液，放于4°C冰箱待用。
乳酸菌上清發(fā)酵液體外抗氧化能力的測定方法清除超氧自由基能力的測定取4.5!1^的1^8-此1(0.0511101/1，？!18.2)置于 25°C恒溫水浴中預(yù)熱 20min，加入 樣品溶液0. lmL，再加入0. 4mL在25°C恒溫水浴中預(yù)熱好的鄰苯三酚溶液(2. 5mol/L)，混勻 后于25°C恒溫水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)％iin，然后加入0. ImL濃鹽酸(8mol/L)終止反應(yīng)。反應(yīng)物 在320nm波長處測定吸光度。清除率(％) = [I-(Ab-Ac)/AJ X 100%Aa-不加樣品，加入鄰苯三酚Ab-加入樣品和鄰苯三酚A。-加入樣品，不加鄰苯三酚清除羥自由基能力的測定ImL 的鄰-菲羅琳(2. 5mmol/L)，ImL 的磷酸鹽緩沖液(PBS, 0. 02mol/L, pH 7. 4)與 ImL的蒸餾水混合均勻，然后加入ImL的硫酸亞鐵溶液(i^eS04，2. 5mmol/L)，再次充分混勻 后加入ImL過氧化氫溶液(H202，20mmol/L)，37°C水浴1. 5h后于536nm處測定吸光度?？?br> 白管用蒸餾水代替。清除率(<%) = (As-Ap) / (Ab-Ap) X 100%Ab-加入樣品，不加H2AAp-不加樣品，加入H2AAs-加入樣品和H2A抗脂質(zhì)過氧化能力的測定新鮮的雞蛋黃液與磷酸鹽緩沖溶液(PBS，0. lmol/L, pH 7. 4)等體積混合并磁力 攪拌lOmin。然后按照1 25(V/V)的比例加入該PBS溶液稀釋成蛋黃懸液。將ImL蛋黃 懸液、0. 5mL樣品、ImLPBS (0. lmol/L, pH7. 4)和硫酸亞鐵溶液混勻后于37°C保溫振蕩1. 5h。 混合液加入ImL三氯乙酸(TCA，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2. 5% )，混勻后于4000Xg離心20min。取上 清液3mL加入2mL的硫代巴比妥酸(TBA，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 8% )，混勻后于100°C加熱lOmin， 在532nm處測定吸光度。抑制率(%) = (A0-A1)/A0X 100%Atl-空白，用等量樣品溶劑代替A1-樣品體外抗氧化試驗結(jié)果表明該乳酸菌上清發(fā)酵液的超氧自由基清除率為23.81%， 羥自由基的清除率為80. 47%，脂質(zhì)過氧化物的抑制率為52. 92%。繼續(xù)通過動物試驗對本發(fā)明的乳酸菌進(jìn)行藥理學(xué)研究，觀察其對小鼠肝和腎組織 抗氧化酶活性以及血脂水平的影響。1.實驗材料1. 1 動物健康、成熟、體重02士3)g、ICR種清潔級小鼠，雌雄各半，由中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 實驗動物中心提供。小鼠飼養(yǎng)條件為室溫22士2°C，l i光照和黑暗循環(huán)，自由飲水和攝食7 天，適應(yīng)后開始進(jìn)行實驗。將M只小鼠隨機分為4組，即正常組、高脂對照組、乳酸菌正常 飼料組和乳酸菌高脂飼料組、每組6只。實驗前常規(guī)飼養(yǎng)2天，分別給予2X 109CFU/mL的乳酸菌懸0. 2mL，高脂對照組及正常對照組給與等體積生理鹽水，連續(xù)給藥觀天。1. 2 試齊[J乳酸菌懸液；過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒(可見光法)、超氧化物歧化酶(SOD) 測試盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-px)試劑盒和丙二醛(MDA)測定試劑盒由南京建成生物 工程研究所提供；總膽固醇試劑盒-TC (酶法)、甘油三酯試劑盒-TG (酶法)、高密度脂蛋白 膽固醇試劑盒HDL-c (選擇沉淀法)和低密度脂蛋白膽固醇試劑盒LDL-c (選擇沉淀法)由 北京北化康泰臨床試劑有限公司提供?？剐∈驝D4+、CD8+和Nrf2單克隆抗體由美國santa cruzebiotechnoIogy 公司提供。1.3高脂血模型鼠構(gòu)建豬油12%、膽固醇1%、雞蛋黃0.5%和基礎(chǔ)飼料86. 5%，連續(xù)飼喂小鼠觀天。1. 4肝和腎組織抗氧化酶活性的測定試驗結(jié)束后，各組小鼠被禁食不禁水12h，在乙醚麻醉下被解剖，快速取出肝、腎、 脾和胸腺組織，用冰冷的生理鹽水漂洗并稱重，制備10 %的組織勻漿液，用相應(yīng)測定試劑盒 進(jìn)行檢測。1. 5血脂指標(biāo)的測定試驗結(jié)束后，小鼠用乙醚麻醉，固定在解剖板上，將注射器用肝素濕潤，從眼眶取 血2mL，注意不要溶血，取出后立即4000rpm，4°C，離心lOmin，獲得血清，利用試劑盒來測定 血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-c)和高密度脂蛋白(HDL-c)指標(biāo)。2.方法與結(jié)果2. 1乳酸菌對小鼠肝和腎組織抗氧化酶的影響測定了各組受試小鼠肝和腎組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽 過氧化物酶(GSH-px)和過氧化氫酶(CAT)這4種抗氧化酶活性指標(biāo)，結(jié)果如表1所示。 由結(jié)果可以看出，與正常對照組相比，乳酸菌正常組小鼠的肝組織SOD活力顯著升高(ρ < 0.05)，MDA含量顯著降低(ρ <0.01)，腎組織的GSH-px活性顯著增高(ρ < 0. 05)；與高 脂對照組相比，乳酸菌高脂組小鼠的肝組織SOD活力顯著升高(ρ < 0. 05)，肝和腎組織的 MDA含量顯著降低(ρ < 0. 01)。表1乳酸菌對小鼠組織抗氧化酶活性的影響
權(quán)利要求
1.一株來自番茄的具有抗氧化和降血脂作用的乳酸菌，其特征是所述乳酸菌獲取于 新鮮的番茄汁中，具有提高機體氧化酶活性，降低血脂水平的醫(yī)療用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳酸菌，其特征是上述乳酸菌可制備成口服液、膠囊劑、散 劑、顆粒劑或片劑在臨床應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的乳酸菌，其特征是可加入適量淀粉或其它輔料作為添加劑。
全文摘要
本發(fā)明所涉及的乳酸菌具有抗氧化和降低血脂的作用，它是從新鮮的番茄汁中得到的。經(jīng)藥理實驗證明，它具有提高機體肝和腎組織抗氧化酶的活性以及降低血脂的功效，其作用持久，無毒副作用，具有廣泛的實用價值。
文檔編號C12N1/20GK102093964SQ20101056699
公開日2011年6月15日 申請日期2010年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月26日
發(fā)明者朱光華, 高大威 申請人:燕山大學(xué)