專利名稱：食物垃圾降解消除型微生物菌劑及其制法和所用菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生活垃圾處理領(lǐng)域，涉及一種用于食物垃圾的微生物降解消除技 術(shù)，具體涉及一種食物垃圾的微生物降菌劑的制備方法。
背景技術(shù)：
隨著我國社會經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，城鎮(zhèn)居民的生活垃圾不僅數(shù)量日益增加，而且 生活垃圾中包括瓜皮果殼、剩菜剩飯等食物垃圾的比重也越來越大。由于食物垃圾含水 率高(90%)、焚燒熱值低(2100 3100kJ/kg)，與其他城市垃圾成分混合后，采用填埋 處置不僅占用寶貴的土地資源而且會產(chǎn)生大量滲濾液而污染地下水系；采用焚燒發(fā)電處 置因不能滿足垃圾的發(fā)熱量要求(即5000kJ/kg以上)會致使焚燒爐燃燒不充分而產(chǎn)生二 惡英，嚴(yán)重危害周邊居民身體健康。由于這類垃圾來源分散，在收集轉(zhuǎn)運(yùn)過程中易腐爛 發(fā)臭而污染環(huán)境，因此難以從一家一戶收集匯總后通過飼料加工、堆肥或沼氣發(fā)酵處置 技術(shù)實(shí)現(xiàn)資源化利用。所以食物垃圾已成為影響城鎮(zhèn)環(huán)境質(zhì)量的重要污染源。為此，研 發(fā)一種將這類垃圾就地生產(chǎn)就地降解消除的高度無害化、減量化處置新技術(shù)，對于經(jīng)濟(jì) 社會的可持續(xù)發(fā)展和保護(hù)生態(tài)環(huán)境安全具有極其重要的作用?；谏鲜隼砟睿壳拔覈蜒邪l(fā)出一些食物垃圾原位消除技術(shù)，如申請?zhí)?03151167.8的發(fā)明公開了一種廢棄食物微生物分解處理機(jī)，該機(jī)器先將剩菜剩飯、瓜皮 果殼等食物垃圾粉碎，再利用所設(shè)置的微生物菌群將食物垃圾碎粒分解成水、二氧化碳 和無機(jī)離子，然后經(jīng)過濾顆粒層的過濾后，最后呈流質(zhì)排入下水道，不會引起下水管道 賭塞。這種技術(shù)在減少固體垃圾的排放量的同時卻增加了污水處理壓力，因此，未能從 根本上解決餐廚食物垃圾的環(huán)境污染問題。也有發(fā)明專利(申請?zhí)?2150972.7)公開了 一種應(yīng)用YB微生物功能菌的生活有機(jī)垃圾處理機(jī)，該YB微生物功能菌由枯草芽孢桿菌 和脫氮副球菌組成。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種食物垃圾降解消除型微生物菌劑III及其制 備方法和所用菌。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種蠟狀芽孢桿菌，該蠟狀芽孢桿菌 (Bacilus cereus)保藏名稱為No.6，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心，保藏地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏 日期2010年6月1日，保藏號CGMCC N0.3884。本發(fā)明還同時公開了一種食物垃圾降解消除型微生物菌劑III，該菌劑III為 3.0 X IO8 1.4 X IO11CiVml 的雅致放射毛霉(Actinomucor elegans) CGMCC No.3881 和 3.0 X IO8 1.8 X IO11CfoAnl 的蠟狀芽孢桿菌(Bacilus cereus) CGMCC No.3884 的復(fù)合液體菌劑。本發(fā)明還同時公開了上述食物垃圾降解消除型微生物菌劑III的制備方法，包括以下步驟1)、斜面培養(yǎng)將雅致放射毛霉(Actinomucor elegans) CGMCC No.3881接種于在PDA斜面，將 蠟狀芽孢桿菌(Bacilus cereus)CGMCC No.3884接種于牛肉膏蛋白胨斜面，分別于15 43°C培養(yǎng)24 72h，進(jìn)行菌株的活化；2)、一級種子液培養(yǎng)將步驟1)活化后所得的雅致放射毛霉接種于PDA液體培養(yǎng)基、活化后所得的蠟 狀芽孢桿菌接種于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，于15 43°C、100 250r/min搖床振蕩培 養(yǎng)48 120h ；分別得雅致放射毛霉的一級種子液和蠟狀芽孢桿菌的一級種子液；3)、細(xì)菌液體發(fā)酵培養(yǎng)在發(fā)酵罐內(nèi)放置培養(yǎng)液I，將步驟2)所得的蠟狀芽孢桿菌的一級種子液按照占培 養(yǎng)液I 5 25%體積比的接種量接種于培養(yǎng)液I中，于15°C 43°C、30 100r/min發(fā)酵 培養(yǎng)48 72h;獲得細(xì)菌菌液；4)、真菌液體發(fā)酵培養(yǎng)在發(fā)酵罐內(nèi)放置培養(yǎng)液II，將步驟2)所得的雅致放射毛霉的一級種子液按照占 培養(yǎng)液II 5 25%體積比的接種量接種于培養(yǎng)液II中，于15°C 43°C、30 100r/min 發(fā)酵培養(yǎng)48 72h ；獲得真菌菌液；5)、將步驟3)所得的細(xì)菌菌液與步驟4)所得的真菌菌液進(jìn)行混合，獲得食物垃 圾降解消除型微生物菌劑III。作為本發(fā)明的食物垃圾降解消除型微生物菌劑III的制備方法的改進(jìn)步驟3)中的培養(yǎng)液I為將味精廢液稀釋10 200倍，并加堿調(diào)pH至7.1 7.3 ；步驟4)中的培養(yǎng)液II為將味精廢液稀釋10 200倍，并加堿調(diào)pH至5.4 5.6。在本發(fā)明中 雅致放射毛霉(Actinomucor elegans) No. 1，保藏單位中國微生物菌種保藏管理
委員會普通微生物中心，保藏地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生 物研究所，保藏日期2010年6月1日，保藏號CGMCCN0.3881。蠟狀芽孢桿菌(Bacilus cereus)No.6，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員 會普通微生物中心，保藏地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研 究所，保藏日期2010年6月1日，保臧號CGMCCN0.3884。PDA固體培養(yǎng)基的配方與制備法如下馬鈴薯200g去皮切塊加800g水煮沸 0.5h，紗布過濾，加蔗糖20g，瓊脂18g，加蒸餾水至IOOOmL ；在壓力1.05kg/cm2，溫度 121°C 下滅菌 20min。PDA液體培養(yǎng)基的配方與制備法如下馬鈴薯200g去皮切塊加800g水煮沸 0.5h，紗布過濾，加蔗糖20g，加蒸餾水至IOOOmL ；在壓力1.05kg/cm2，溫度121°C下滅 菌 2 Omin。牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的配方與制備法如下牛肉膏3g，蛋白胨10g， NaC15g，瓊脂18g，加蒸餾水至lOOOmL，調(diào)pH至7.0 7.2 ；在壓力1.05kg/cm2，溫度121°C 下滅菌 20min。牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的配方與制備法如下牛肉膏3g，蛋白胨10g， NaC15g，加蒸餾水至lOOOmL，調(diào)pH至7.0 7.2 ；在壓力1.05kg/cm2，溫度121°C下滅 菌 2 Omin。味精廢液為味精生產(chǎn)中產(chǎn)生的離交廢液，營養(yǎng)豐富，氨基總含量達(dá)10%左右，同時無重金屬污染，各項(xiàng)含量遠(yuǎn)低于城鎮(zhèn)垃圾農(nóng)用控制標(biāo)準(zhǔn)，因此，具有質(zhì)量安全、營 養(yǎng)豐富的特點(diǎn)，作為微生物菌劑的培養(yǎng)基利用可以達(dá)到以廢治廢、廢棄物資源化利用的 目的。例如，可選用杭州西湖味精集團(tuán)有限公司在味精生產(chǎn)過程中所產(chǎn)生的味精廢液。本發(fā)明的食物垃圾降解消除型微生物菌劑III的優(yōu)選方案為該菌劑III為 4.3 X IO9 1.4 X IO11CiVml 的雅致放射毛霉(Actinomucor elegans) CGMCC No.3881 和 1.IXlO9 1.8 X IO11CfoAnl 的蠟狀芽孢桿菌(Bacilus cereus) CGMCC No.3884 的復(fù)合液體 菌劑。本發(fā)明中的雅致放射毛霉(Actinomucor elegans)No.l和蠟狀芽孢桿菌(Bacilus cereus)No.6是從自然界分離、篩選獲得，他們具有或兼具蛋白質(zhì)、淀粉、纖維素和脂肪 高效降解的功能。本發(fā)明的食物垃圾降解消除型微生物菌劑III實(shí)際使用時，菌劑III與具有良好吸 水保水能力、質(zhì)地疏松的載體材料混合，從而組成食物垃圾降解固體基質(zhì)；具體降解原 理如下將食物垃圾降解固體基質(zhì)置于垃圾處理機(jī)內(nèi)，通過垃圾處理機(jī)的運(yùn)行，營造出 食物垃圾降解系統(tǒng)的適宜溫度和好氧環(huán)境，每天投入一定量的食物垃圾；在垃圾降解 系統(tǒng)運(yùn)行過程中，微生物菌群快速生長繁殖，釋放出大量的分解酶蛋白，其中包括脂肪 酶、淀粉酶、纖維素酶、蛋白酶等，將食物垃圾中的脂肪、淀粉、粗纖維、蛋白質(zhì)等分 解為脂肪酸、糖和氨基酸等短鏈低分子有機(jī)物，菌群以此為營養(yǎng)代謝出H2CK CO2和生物 熱能，同時以幾何級數(shù)迅速繁殖。在菌群繁殖過程中，不斷消除食物垃圾，周而復(fù)始， 實(shí)現(xiàn)食物垃圾的無害化和高度減量化。一般情況下，在載體中按照15% 30%的重量比添加本發(fā)明的食物垃圾降解消 除型微生物菌劑III構(gòu)成食物垃圾降解固體基質(zhì)，然后置于垃圾降解處理機(jī)內(nèi)，通過垃圾 處理機(jī)的運(yùn)行對投加的食物垃圾進(jìn)行降解處理。


下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作進(jìn)一步詳細(xì)說明。圖1是菌株Νο.6(蠟狀芽孢桿菌Bacilus cereus)在蛋白質(zhì)培養(yǎng)基上生長3d的溶菌 圈；圖2是菌株Νο.6 (蠟狀芽孢桿菌Bacilus cereus)的生長曲線圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、蠟狀芽孢桿菌(Baciluscereus)的采集、分離、篩選與鑒定1)、采集、分離、純化取畜禽糞高溫堆肥發(fā)酵所得的有機(jī)肥10g，置于裝有IOOmL牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶內(nèi)，lOOr/min振蕩24h富集培養(yǎng)，接種環(huán)蘸取所得的懸濁液在細(xì) 菌選擇性培養(yǎng)基平板上劃線，置于30°C下培養(yǎng)48h，從平板上挑取若干形態(tài)不同的單菌 落，分別在細(xì)菌選擇性培養(yǎng)基平板上劃線，反復(fù)數(shù)次，直至各菌落純化，獲得若干細(xì)菌 分離物。細(xì)菌選擇性培養(yǎng)基平板制備牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaC15g,瓊脂18g，加蒸 餾水至IOOOmL,調(diào)pH至7.0 7.2 ；在壓力1.05kg/cm2，溫度121°C下滅菌20min。冷 卻后加制霉菌素30單位/L、青霉素2000單位/L，倒平板。2)、溶菌圈法篩選鑒于食物垃圾的主要成分為蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉、纖維素等，作為食物垃圾降 解功能菌應(yīng)具有或兼具這四大類物質(zhì)的高效降解能力。采用溶菌圈法分別測定上述采 集、分離、純化過程中獲得的若干細(xì)菌分離物對四類物質(zhì)的降解能力，從中篩選出高效 菌株接種針挑取細(xì)菌選擇性培養(yǎng)基平板中分離純化獲得的不同分離物的斜面菌落， 分別點(diǎn)接于蛋白質(zhì)、淀粉、脂肪、纖維素培養(yǎng)基平板，觀察溶菌圈直徑隨培養(yǎng)時間的變 化，從中篩選出溶菌圈直徑較大的細(xì)菌分離物，編號N0.6。分離物N0.6的在蛋白質(zhì)培 養(yǎng)基平板上培養(yǎng)的溶菌圈如圖1所示。蛋白質(zhì)培養(yǎng)基脫脂奶粉50g/L，可溶性淀粉10g/L，酵母膏5g/L，KH2P04lg/L, MgSO4 · 7H20 0.2g/L,瓊脂 20g/L，其余為蒸餾水；pH 7.0 7.2，121°C滅菌 20min， 冷卻后倒平板。淀粉培養(yǎng)基蛋白胨10g/L，可溶性淀粉2g/L，牛肉膏5g/L，NaCl 5g/L，瓊 脂20g/L，其余為蒸餾水；pH 7.0 7.2，121°C滅菌20min，冷卻后倒平板。脂肪培養(yǎng)基(NH4)2S042g/L，K2HP04lg/L,KCl 0.5g/L, MgSO4 · 7H20 0.5g/L, FeS040.01g/L,瓊脂20g/L，橄欖油乳化液12mL(橄欖油20g/L聚乙烯醇 (PVA)Sl 3的體積比，轉(zhuǎn)速1000r/min，5min)，溴甲酚紫0.04g/L，其余為蒸餾水， pH自然，121°C滅菌20min，冷卻后倒平板。纖維素培養(yǎng)基K2HP040.50g/L，MgS040.25g/L,CMC-Na 1.88g/L，剛果 紅0.20g/L，瓊脂16.00g/L，明膠2.00g/L，其余為蒸餾水，pH 7.0 7.2，121°C滅菌 20min,冷卻后倒平板。3)、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶的活力測定生長曲線測定接種分離物Νο.6菌液ImL于約30mL牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基 中，30°C、120r/min振蕩培養(yǎng)，每隔2h取菌液于560nm處測定吸光值(紫外可見分光光 度計(jì)，Beckmann，DU640)，繪制生長曲線，如圖2所示。為進(jìn)一步明確分離物No.6菌株對4類物質(zhì)的降解能力，測定該菌株的4種胞外 酶活性，結(jié)果列于表1。i.蛋白酶活測定蛋白種子培養(yǎng)液(AnshuGupta，S K Khare，2006) K2HP047.0g/L, KH2P042.0g/L, MgSO4 · 7H20 0.2g/L,干酪素 4.0g/L，酵母膏 6.0g/L，NaCl 0.5g/L， 甘油 7.0g/L，CaCl2, 0.067g/L,其余為蒸餾水，pH7.0，121°C滅菌 20min。接種分離物No.6對數(shù)生長期菌液0.5mL于25mL蛋白種子培養(yǎng)液，30°C、120r/min振蕩培養(yǎng)，每隔特定時間取樣，按Folin-phenol試劑法(Cuiping Li et al，2005)測 定中性蛋白酶活性取離心分離(10000g，5min, 4°C )后的上清液即粗酶液0.5mL加 0.5mLddH20,取ImL含有10A (W/V)酪蛋白的0.02M磷酸鈉緩沖液，分別在30°C恒 溫振蕩箱放置5min?；旌洗置敢汉途彌_液，在30°C靜置lOmin。然后加3mL10% TCA(三氯乙酸)后輕微振蕩，再在13000g(4°C )離心lOmin。取ImL上清液，另加 3mLNa2C03(0.55M),再加 lmLFolin-phenol 試劑，振蕩后，于 30°C靜置 20min。最后， 于640nm處測其吸光度。以標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸濃度梯度作為標(biāo)準(zhǔn)曲線。其中Folin-phenol試劑 按照OliverHLowry等人(1951)方法配置。蛋白酶活力單位定義每min催化酪蛋白水 解得到1 μ g · mL—1酪氨酸所需的酶量。ii.淀粉酶活測定淀粉種子培養(yǎng)液淀粉IOg · L1,蛋白胨5g · L1, K2HP042g · L1, NaCl Ig · ΙΛ CaCl2O.Ig · ΙΛ MgSO4 · 7Η20 O.lg · Λ 其余為蒸餾水，121°C 滅菌 2 Omin。接種分離物Νο.6對數(shù)生長期菌液0.5mL于25mL淀粉種子培養(yǎng)液，30°C、120r/ min振蕩培養(yǎng)，每隔特定時間取樣，按DNS法(Gashaw Mamo，Amare Gessesse，1997) 測定淀粉酶活性取菌液離心(lOOOOg，5min, 4°C )上清液即粗酶液0.5mL，加淀粉-磷 酸鹽緩沖液混合液(50mM，pH7.0磷酸緩沖液加入淀粉)1.5mL，在70°C水浴中反應(yīng) 30min,然后加3mLDNS試劑煮沸5min。最后，在540nm處測定吸光值。粉酶活力單 位定義為每min催化淀粉水解形成Iyg · ml/1還原糖時所需的酶量。DNS試劑配置方法準(zhǔn)確稱取無水的3，5 二硝基水楊酸6.5g溶解待用。無水 氫氧化鈉40g溶解后移入500mL容量瓶，冷卻后定容。將水楊酸溶液移入IOOOmL容量 瓶并加入325mL的氫氧化鈉溶液，再加入15mL丙三醇溶解定容至IOOOmL,貯存于棕色 試劑瓶中。iii.脂肪酶活測定脂肪種子培養(yǎng)液NaN032g/L，MgSO4· 7H20 0.3g/L, NaCl 10g/L,橄欖油 20g/L，CaCl20.3g/L, NH4Cl 0.3g/L,其余為蒸餾水，121°C滅菌 20min。接種分離物No.6對數(shù)生長期菌液ImL于50mL脂肪種子培養(yǎng)液，30°C、120r/ min振蕩培養(yǎng)，每隔一定時間取樣，然后按滴定法(Pignede Get al，2000)測定脂肪酶 活取菌液離心(10000g，5min，4°C )上清液即粗酶液ImL加入5mL乳化液和4mL磷 酸鹽緩沖液(Na2HPO4-KH2PO4, IOOmM, pH 8.0)的混合液中。水浴37°C反應(yīng)lOmin。 然后用15mL 95% (V/V)的乙醇停止反應(yīng)。用50mM NaOH滴定反應(yīng)生成的脂肪酸。脂 肪酶活力單位定義為每min催化脂肪水解產(chǎn)生Iymol · mL—1脂肪酸所需的酶量。iv.纖維素酶活(CMCase)測定纖維素種子培養(yǎng)液牛肉膏1.5g/L，蛋白胨1.0g/L，CaC032.0g/L ；每試管分 裝成高7cm深層，并放入IX 6cm濾紙條1條，其余為蒸餾水，121°C滅菌20min。接種分離物No.6對數(shù)生長期菌液ImL于50mL纖維素種子培養(yǎng)液，30°C、120r/ min振蕩培養(yǎng)，每隔一定時間取樣，采用3，5-二硝基水楊酸比色定糖法(DNS) (Miller GL, 1959)測定酶解液中還原糖含量，用葡萄糖溶液作標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體方法為取ImL 菌液放入離心管，10000g/min離心5min，移取上清液0.5mL于試管中，加入含0.5%CMC-Na的檸檬酸緩沖液(0.05mol/L，pH 4.4) 1.5mL，然后在50°C水浴準(zhǔn)確作用30min 后，立即在每試管內(nèi)加1.5mLDNS試劑，再在沸水中浸泡5min后，立即用流水冷卻，定 容至25mL，在520nm處測定光密度值。再對比標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得其糖含量。纖維素酶活 力單位定義每min催化纖維素水解形成Iyg · mL—1葡萄糖時所需酶量。表1、分離物Νο.6的4類胞外酶活性
培養(yǎng)時間蛋白酶淀粉酶脂肪酶纖維素酶2d21. 0454. 6964. 316d2. 364)、安全性鑒定分離物Νο.6的菌液(樣品名稱6號菌液)和雅致放射毛霉(Actinomucor elegans)CGMCC No.3881送浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)研究所，進(jìn)行大鼠急性經(jīng)口毒性試 驗(yàn)、大鼠急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)、家兔急性眼刺激性/腐蝕性試驗(yàn)和家兔皮膚刺激性/腐蝕性 試驗(yàn)，結(jié)果歸納如下表2:表2
項(xiàng)目
試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)論
大鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)
灌胃后，觀察期間未觀察到雌雄性大 鼠有明顯中毒癥狀
灌胃后，觀察期間雌雄性大鼠均未出 現(xiàn)死亡
試驗(yàn)結(jié)束時，試驗(yàn)動物大體解剖均未 見明顯異常
雌雄性大鼠急性經(jīng)口 LD5tJS均大于 5000 mg/kg
根據(jù)《化學(xué)品毒性鑒定技術(shù)規(guī) 范》——衛(wèi)生部2005年的急性 經(jīng)口毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，6號菌液的 大鼠急性經(jīng)口毒性屬低毒級。 CGMCC No. 3881的大鼠急性經(jīng) 口毒性屬低毒級。
大鼠急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)
涂皮后，觀察期間未觀察到雌雄性大 鼠有明顯中毒癥狀
涂皮后，觀察期間雌雄性大鼠未見死 亡
試驗(yàn)結(jié)束時，試驗(yàn)動物大體解剖未見 異常
雌雄性大鼠急性經(jīng)皮LD5q值均大于 2000 mg/kg
根據(jù)《化學(xué)品毒性鑒定技術(shù)規(guī) 范》——衛(wèi)生部2005年的急性 經(jīng)皮毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，6號菌液的 人鼠急性經(jīng)皮毒性屬低毒級。 CGMCC No. 3881的人鼠急性經(jīng) 皮毒性屬低毒級。
家兔急性眼刺激性/腐蝕 性試驗(yàn)
染毒后，4只家兔可見受試右眼結(jié)膜 充血呈鮮紅色，無水腫、分泌物，角 膜、虹膜末見異常 染毐后前4d最高總積分平均值2 刺激反應(yīng)持續(xù)時間第
根據(jù)《化學(xué)品毒性鑒定技術(shù)規(guī) 范〉〉——衛(wèi)生部2005年的眼刺 激強(qiáng)度分級標(biāo)準(zhǔn)，6號菌液對眼 的剌激強(qiáng)度屬無刺激性。 CGMCC No. 3881對眼的刺激強(qiáng)
權(quán)利要求
1.一種蠟狀芽孢桿菌，其特征是該蠟狀芽孢桿菌(Baciluscereus)保藏名稱為 No.6,保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址北京市 朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏日期2010年6月1日， 保藏號CGMCCN0.3884。
2.—種食物垃圾降解消除型微生物菌劑III，其特征是該菌劑III為3.0X108 1.4 X IO11CfoAnl 的雅致放射毛霉(Actinomucor elegans) CGMCC No.3881 和 3.0 X IO8 1.8X10ncfti/ml的蠟狀芽孢桿菌(Bacilus cereus) CGMCC No.3884的復(fù)合液體菌劑。
3.—種如權(quán)利要求2所述食物垃圾降解消除型微生物菌劑III的制備方法，其特征是 包括以下步驟1)、斜面培養(yǎng)將雅致放射毛霉(Actinomucor elegans) CGMCC No.3881接種于在PDA斜面，將蠟狀芽孢桿菌(Bacilus cereus)CGMCC No.3884接種于牛肉膏蛋白胨斜面，分別于15 43°C 培養(yǎng)24 72h，進(jìn)行菌株的活化；2)、一級種子液培養(yǎng)將步驟1)活化后所得的雅致放射毛霉接種于PDA液體培養(yǎng)基、活化后所得的蠟狀 芽孢桿菌接種于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，于15 43°C、100 250r/min搖床振蕩培養(yǎng) 48 120h ；分別得雅致放射毛霉的一級種子液和蠟狀芽孢桿菌的一級種子液；3)、細(xì)菌液體發(fā)酵培養(yǎng)在發(fā)酵罐內(nèi)放置培養(yǎng)液I，將步驟2)所得的蠟狀芽孢桿菌的一級種子液按照占培養(yǎng)液 15 25%體積比的接種量接種于培養(yǎng)液I中，于15°C 43°C、30 100r/min發(fā)酵培養(yǎng) 48 72h ；獲得細(xì)菌菌液；4)、真菌液體發(fā)酵培養(yǎng)在發(fā)酵罐內(nèi)放置培養(yǎng)液II，將步驟2)所得的雅致放射毛霉的一級種子液按照占培養(yǎng) 液115 25%體積比的接種量接種于培養(yǎng)液II中，于15°C 43°C、30 100r/min發(fā)酵培 養(yǎng)48 72h ；獲得真菌菌液；5)、將步驟3)所得的細(xì)菌菌液與步驟4)所得的真菌菌液進(jìn)行混合，獲得食物垃圾降 解消除型微生物菌劑III。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的食物垃圾降解消除型微生物菌劑III的制備方法，其特征是所述步驟3)中的培養(yǎng)液I為將味精廢液稀釋10 200倍，并加堿調(diào)pH至7.1 －7.3 ；所述步驟4)中的培養(yǎng)液II為將味精廢液稀釋10 200倍，并加堿調(diào)pH至5.4 －5.6ο
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蠟狀芽孢桿菌(Bacilus cereus)，保藏名稱為No.6，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏日期2010年6月1日，保藏號CGMCCNO.3884。本發(fā)明還同時公開了一種食物垃圾降解消除型微生物菌劑III，為3.0×108～1.4×1011cfu/ml的雅致放射毛霉和3.0×108～1.8×1011cfu/ml的蠟狀芽孢桿菌的復(fù)合液體菌劑。本發(fā)明還同時公開了上述食物垃圾降解消除型微生物菌劑III的制備方法。該微生物菌劑III用于降解食物垃圾。
文檔編號C12N1/20GK102010843SQ20101027280
公開日2011年4月13日 申請日期2010年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月2日
發(fā)明者吳海龍, 張?jiān)噬? 張杰鋒, 方萍 申請人:寧波市通用塑料機(jī)械廠, 浙江大學(xué)