專利名稱：一種用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒。
背景技術(shù)：
我國每年因重大動(dòng)物疾病造成的直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)到了 300多億元人民幣，重大動(dòng)物疾病給畜牧生產(chǎn)帶來了嚴(yán)重影響。動(dòng)物抗病育種研究進(jìn)展緩慢，易感個(gè)體數(shù)量增加，重大傳染性疾病時(shí)有發(fā)生。特別是人畜共患病(如禽流感等)的出現(xiàn)，給人類的社會(huì)生活也造成了巨大影響。單核細(xì)胞是動(dòng)物外周血中的一類多能干細(xì)胞。單核細(xì)胞核大，常呈腎形或馬蹄形， 胞質(zhì)豐富，在瑞氏染色血涂片中，胞質(zhì)為極弱嗜堿性，呈淺灰藍(lán)色，細(xì)胞形狀不一，有圓形， 多角形等。單核細(xì)胞具有趨化作用和吞噬作用，可以吞噬、消化與消滅侵入機(jī)體的病原體， 也可以將特異性抗原呈遞給T細(xì)胞引發(fā)體液免疫。同時(shí)單核細(xì)胞還具有其他功能識(shí)別和清除變性的血漿蛋白、脂類等大分子物質(zhì)；識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞；清除衰老與損傷的細(xì)胞和細(xì)胞碎片；在吞噬衰老的紅細(xì)胞和溶血時(shí)逸出的血紅蛋白后，參與鐵和膽色素代謝；參與調(diào)節(jié)粒系造血祖細(xì)胞的增殖和分化。動(dòng)物外周血中的單核細(xì)胞在特異性免疫與非特異性免疫中發(fā)揮著重要作用，既具有吞噬、消化與消滅侵入機(jī)體的病原體的功能，又具有將特異性抗原呈遞給T細(xì)胞引發(fā)體液免疫的雙重功能。單核細(xì)胞吞噬能力具有良好的遺傳基礎(chǔ)、 在品種間差異較大、且經(jīng)過幾代選育能夠穩(wěn)定遺傳，因此可以作為一個(gè)重要的標(biāo)記用于動(dòng)物的抗病育種?，F(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)能夠從外周血液中快速分離單核細(xì)胞以及單核細(xì)胞的鑒定，且充分證明了單核細(xì)胞吞噬特性同動(dòng)物機(jī)體的抗病能力、病原體清除能力，以及攻毒后抗體產(chǎn)生水平有著顯著的相關(guān)性，可以很好地反映機(jī)體的免疫能力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒。本發(fā)明所提供的用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒，包括經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞。經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞在制備用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。上述試劑盒或上述應(yīng)用中，所述試劑盒包括細(xì)胞儲(chǔ)存液，所述經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞混合于所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中；所述細(xì)胞儲(chǔ)存液組成由磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉和水組成，磷酸二氫鈉在所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為1. 14g/L，磷酸氫二鈉在所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為0. 2g/L，氯化鈉在所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為8g/L。上述試劑盒或上述應(yīng)用中，所述試劑盒包括單核細(xì)胞培養(yǎng)液和二甲基亞砜；所述單核細(xì)胞培養(yǎng)液為添加胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，胎牛血清在所述單核細(xì)胞培養(yǎng)液中的濃度為10% (體積百分含量)。
上述試劑盒或上述應(yīng)用中，所述試劑盒由所述經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞、所述細(xì)胞儲(chǔ)存液、單核細(xì)胞培養(yǎng)液和二甲基亞砜組成；所述經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞混合于所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中。 上述試劑盒或上述應(yīng)用中，所述試劑盒中，所述染料染色的腫瘤細(xì)胞在所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為1000個(gè)細(xì)胞/ml、2000個(gè)細(xì)胞/ml、4000個(gè)細(xì)胞/ml、6000個(gè)細(xì)胞/ml、 8000個(gè)細(xì)胞/ml、10000個(gè)細(xì)胞/ml或12000個(gè)細(xì)胞/ml。上述試劑盒或上述應(yīng)用中，所述經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞是按照包括如下步驟的方法制備得到的將所述腫瘤細(xì)胞預(yù)培養(yǎng)，得到預(yù)培養(yǎng)后的腫瘤細(xì)胞，將所述預(yù)培養(yǎng)后的腫瘤細(xì)胞與染料溶液混合，培養(yǎng)10h-12h，得到經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞。此過程中，一般培養(yǎng)IOh 后貼壁細(xì)胞容易被移液槍吹起。上述試劑盒或上述應(yīng)用中，所述預(yù)培養(yǎng)的方法包括如下步驟將所述腫瘤細(xì)胞以 IO6個(gè)/ml密度接種于腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)基中，置于37°C、5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，至所述腫瘤細(xì)胞匯合至60% -70%，得到所述預(yù)培養(yǎng)后的腫瘤細(xì)胞；所述將所述預(yù)培養(yǎng)后的腫瘤細(xì)胞與染料溶液混合，培養(yǎng)12小時(shí)中，所述培養(yǎng)的方式為37°C、5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。上述試劑盒或上述應(yīng)用中，所述腫瘤細(xì)胞為結(jié)直腸癌HCT-8細(xì)胞或細(xì)胞；上述試劑盒或上述應(yīng)用中，所述染料為3- (4，5- 二甲基噻唑- -2，5- 二苯基四氮唑溴鹽或熒光染料；所述熒光染料為PI、DAPI、Hoechst 33342, Hoechst 33258, EB, cy3或 cy5 ；所述染料溶液由3- (4，5- 二甲基噻唑- -2，5- 二苯基四氮唑溴鹽和水組成3_ (4， 5- 二甲基噻唑-2)-2，5- 二苯基四氮唑溴鹽在染料溶液中的濃度0. 5% (質(zhì)量百分比)。上述試劑盒或上述應(yīng)用中，所述用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒為用于檢測雞單核細(xì)胞吞噬能力或羊單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒；所述雞為矮小雞，所述羊?yàn)樗_福克羊。傳統(tǒng)檢測單核細(xì)胞吞噬能力是利用異種紅細(xì)胞為吞噬物，在顯微鏡下觀察單核細(xì)胞吞噬、消化的紅細(xì)胞數(shù)量，此方法耗時(shí)長、準(zhǔn)確率低、成本高、人為因素也很多，且檢測量比較少，不利于規(guī)?；爱a(chǎn)業(yè)推廣。本發(fā)明針對傳統(tǒng)紅細(xì)胞檢測方法的缺陷與不足，改進(jìn)工藝技術(shù)，實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確穩(wěn)定、高通量、自動(dòng)化、低成本檢測單核細(xì)胞吞噬能力。本發(fā)明中不以紅細(xì)胞為特異吞噬物，而是以經(jīng)染色的腫瘤細(xì)胞系為吞噬物，腫瘤細(xì)胞系可從商業(yè)途徑得到，使吞噬物的來源更加廣泛，易于獲得，降低成本。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的試劑盒中的吞噬物(即經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞)性能穩(wěn)定，在4°C條件下保存2周、3 周、1個(gè)月或二個(gè)月，其中經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞混合于所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中形成的混合物的 OD57tl值均無顯著差異，不影響單核細(xì)胞吞噬能力的檢測結(jié)果。實(shí)驗(yàn)證明，相同條件下，用本發(fā)明試劑盒檢測的結(jié)果與用傳統(tǒng)方法檢測的結(jié)果無顯著差異，表明用本發(fā)明試劑盒檢測單核細(xì)胞吞噬能力的結(jié)果可靠。本發(fā)明試劑盒制備簡單，成本低廉。用本發(fā)明試劑盒實(shí)現(xiàn)了單核細(xì)胞的高通量快速檢測。用本發(fā)明試劑盒進(jìn)行檢測時(shí)，可以在96孔板中進(jìn)行，將樣品及試劑盒中的試劑加入96孔板中，使其相互作用一定時(shí)間后，用酶標(biāo)儀或熒光分光光度計(jì)檢測各孔的OD值，再根據(jù)OD值計(jì)算出各孔中檢測的單核細(xì)胞的吞噬能力。采用酶標(biāo)儀等儀器進(jìn)行讀數(shù)，人為顯微鏡下讀數(shù)相比，既節(jié)省時(shí)間，又避免了人為誤差，提高了檢測準(zhǔn)確性和檢測效率。傳統(tǒng)方法每天僅可檢測30只個(gè)體，而本發(fā)明每天可以檢測2-300個(gè)樣品、150-300只個(gè)體，大大提高了檢測效率。實(shí)踐中，一般通過檢測單核細(xì)胞吞噬能力，來評估待測動(dòng)物機(jī)體的抗病能力、病原體清除能力等免疫能力，然后將動(dòng)物個(gè)體的免疫能力作為重要指標(biāo)用于動(dòng)物的抗病育種。 用本發(fā)明試劑盒加快了動(dòng)物個(gè)體單核細(xì)胞吞噬能力的檢測速度，有利于短期內(nèi)大規(guī)模判定禽類的免疫能力，為加快動(dòng)物抗病育種進(jìn)程提供了有力的保障，因此本發(fā)明試劑盒對動(dòng)物育種及畜牧業(yè)發(fā)展起到了巨大的推動(dòng)作用。


圖1為經(jīng)MTT處理的腫瘤細(xì)胞HCT8的形態(tài)QOO X)。圖2為染色后不同保存時(shí)間HCT8 OD值變化。圖3為雞外周血單核細(xì)胞鑒定。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實(shí)施例1、用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒的組成及應(yīng)用結(jié)直腸癌HCT-8細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心，產(chǎn)品目錄號為TCHu 18。MTT (化學(xué)名稱為3-G，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名稱為噻唑藍(lán)，)購自amresco，產(chǎn)品目錄號為0793。一、試劑盒組成1、經(jīng)噻唑藍(lán)染液(MTT染液)染色的HCT-8細(xì)胞和細(xì)胞儲(chǔ)存液的混合物(細(xì)胞保存在細(xì)胞儲(chǔ)存液中)；細(xì)胞在細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為IxlO6個(gè)/ml。細(xì)胞儲(chǔ)存液組成由磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉和水組成，磷酸二氫鈉在細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為1. 14g/L，磷酸氫二鈉在細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為0. 2g/L，氯化鈉在細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為8g/L。2、單核細(xì)胞培養(yǎng)液添加胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，胎牛曲清在單核細(xì)胞培養(yǎng)液中的濃度為10% (體積百分含量)。3、二甲基亞砜(DMSO)。二、試劑盒的制備1、經(jīng)噻唑蘭染液(MTT染液)染色的HCT-8細(xì)胞的制備方法將HCT-8細(xì)胞以106/ml密度接種于IOOmm裝有細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，置于 37°C、5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞匯合至60-70%，去培養(yǎng)液，向培養(yǎng)皿中加入 2ml,0. 5%的MTT染液，37°C、5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12小時(shí)，棄上清，PBS洗2遍后收集細(xì)胞，即為經(jīng)噻唑蘭染液(MTT染液)染色的HCT-8細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)基為DMEM，購自sigma，產(chǎn)品目錄號為C7710。噻唑蘭染液的組成由噻唑藍(lán)和水組成，噻唑蘭在染液中的濃度0. 5% (質(zhì)量百分比)。2、將染色后的HCT-8細(xì)胞置于細(xì)胞儲(chǔ)存液中，保存。細(xì)胞在儲(chǔ)存液中的濃度為IxlO6 個(gè)/ml。三、試劑盒的功能及性能檢測Hoechst 33342 購自 sigma，產(chǎn)品目錄號為 B2261。(一 )檢測保存不同時(shí)間的經(jīng)MTT染色的HCT-8細(xì)胞的形態(tài)將MTT染色的HCT-8細(xì)胞置于細(xì)胞儲(chǔ)存液中(細(xì)胞在儲(chǔ)存液中的濃度為IxlO6個(gè) /ml)，4°C保存，檢測保存1周和1個(gè)月后的細(xì)胞形態(tài)。方法(1)直接檢測方法顯微鏡觀察。結(jié)果如圖1中a-Ι和b_l所示。(2)用Hoechst33M2染色檢測方法H0eChst33342染液(10微克/毫升，覆蓋住細(xì)胞即可)，靜置10分鐘，吸出染液， PBS溶液洗2遍，熒光顯微鏡觀察(激發(fā)波長320納米)。結(jié)果如圖1中a-2和b_2所示。(3)用PI染色檢測方法PI染液(10微克/毫升，覆蓋住細(xì)胞即可)，靜置10分鐘，吸出染液，PBS溶液洗2遍，熒光顯微鏡觀察(激發(fā)波長520納米)。結(jié)果如圖1中a-3 和b-3所示。結(jié)果經(jīng)MTT染色后一周及一個(gè)月的細(xì)胞形態(tài)無顯著差異。熒光顯色觀察到細(xì)胞核破裂釋放核小體(a_2和b-幻，細(xì)胞死亡(a_3和b-幻，但細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)未隨保存時(shí)間不同而變化(a_3和b-3)。(a)為染色后一周的細(xì)胞形態(tài)、(b)為染色后一個(gè)月的細(xì)胞形態(tài)。 1為明視場、2為Hoechst染色、3為PI染色。表明，無論細(xì)胞儲(chǔ)存一周還是一個(gè)月，細(xì)胞均死亡，且細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)均未變化，均可以用來檢測單核細(xì)胞的吞噬能力。 實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，結(jié)果無顯著差異。( 二)染色后不同保存時(shí)間HCT8 OD值變化將MTT染色的HCT-8細(xì)胞置于細(xì)胞儲(chǔ)存液中，其中細(xì)胞濃度分別為1000、2000、 4000、6000、8000、10000、12000個(gè)細(xì)胞/ml，4°C保存，檢測保存不同時(shí)間的OD值。OD值檢測方法將保存后的樣品直接用熒光分光光度計(jì)進(jìn)行檢測，每種濃度樣品每次檢測100微升ml，檢測波長為490nm。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，結(jié)果取平均數(shù)。結(jié)果如圖2所示。結(jié)果顯示相同濃度細(xì)胞，不同保存時(shí)間的OD值之間無顯著性差異，說明MTT染色的HCT8的OD值穩(wěn)定，細(xì)胞濃度相同時(shí)，OD值檢測結(jié)果穩(wěn)定，無顯著性差異，表示以任何濃度保存細(xì)胞均可。(三)試劑盒應(yīng)用1、雞單核細(xì)胞吞噬能力的檢測矮小雞品種購自北京北農(nóng)大動(dòng)物科技有限責(zé)任公司。本實(shí)驗(yàn)分別用如下試劑盒進(jìn)行檢測經(jīng)噻唑蘭染液(MTT染液)染色的HCT-8細(xì)胞在細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為IxlO6個(gè)/ml，試劑盒在4°C保存了 1周、2周、3周、1個(gè)月和2個(gè)月。1-1、雞單核細(xì)胞的分離人淋巴分離液購自天津?yàn)笊镏破房萍加邢挢?zé)任公司，產(chǎn)品目錄號為LTS1077。矮小雞雞翅下靜脈采血，將雞抗凝血液加入等體積的Hanks溶液中，混合均勻，然后將該混合液1 1沿管壁緩慢加到人淋巴分離液面上，2000r/min離心20min;收集細(xì)胞并加入Hanks溶液，3000r/min離心lOmin，棄上清，取細(xì)胞，即為單核細(xì)胞。1-2、雞單核細(xì)胞吞噬能力的檢測完全培養(yǎng)液為添加胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，胎牛血清在完全培養(yǎng)液中的濃度為10% (體積百分含量)。RPMI-1640培養(yǎng)基購自Sigma，產(chǎn)品目錄號為R6504。將單核細(xì)胞接入完全培養(yǎng)液中，得到細(xì)胞懸浮液(細(xì)胞在細(xì)胞懸浮液中的濃度為 IxlO5個(gè)/ml)，接種到96孔板中(每孔中0. Iml細(xì)胞懸浮液)，37°C，5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，棄培養(yǎng)液；向每孔中加入經(jīng)噻唑蘭染液(MTT染液)染色的HCT-8細(xì)胞和細(xì)胞儲(chǔ)存液的混合物(混合物中HCT-8細(xì)胞濃度為IxlO6個(gè)/ml) 20 μ 1和完全培養(yǎng)液80 μ 1， 37°C，5%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱孵育不同時(shí)間(8h、10h、12h)；棄上清，PBS清洗2次；加入 DMSO 100 μ 1，充分溶解，后酶標(biāo)儀(570nm)測量吸光值。計(jì)算，吞噬積=OD57tlnm值/單核細(xì)胞總數(shù)，其中單核細(xì)胞總數(shù)是指剛開始接種時(shí)單核細(xì)胞的初始數(shù)目。吞噬積即代表細(xì)胞吞噬能力。通過檢測樣品的OD值(不同的濃度細(xì)胞OD值不同)來檢測吞噬細(xì)胞的濃度或數(shù)量。陰性對照單核細(xì)胞和100 μ 1 DMSO。陰性對照的OD值是零。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次實(shí)驗(yàn)從4只矮小雞中分離單核細(xì)胞，再分別檢測。結(jié)果取平均值士標(biāo)準(zhǔn)差。在4°C保存了 2個(gè)月的試劑盒的檢測結(jié)果如表1。表1 雞單核細(xì)胞吞噬積(平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)
權(quán)利要求
1.一種用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒，包括經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞。
2.經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞在制備用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒或權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述試劑盒包括細(xì)胞儲(chǔ)存液，所述經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞混合于所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中；所述細(xì)胞儲(chǔ)存液由磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉和水組成，磷酸二氫鈉在所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為 1. 14g/L，磷酸氫二鈉在所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為0. 2g/L，氯化鈉在所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為8g/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的試劑盒或權(quán)利要求1或3所述的應(yīng)用，其特征在于所述試劑盒包括單核細(xì)胞培養(yǎng)液和二甲基亞砜；所述單核細(xì)胞培養(yǎng)液為添加胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，胎牛血清在所述單核細(xì)胞培養(yǎng)液中的濃度為10% (體積百分含量)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、3或4所述的試劑盒或權(quán)利要求1、3或4所述的應(yīng)用，其特征在于 所述試劑盒由所述經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞、所述細(xì)胞儲(chǔ)存液、單核細(xì)胞培養(yǎng)液和二甲基亞砜組成；所述經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞混合于所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的試劑盒或權(quán)利要求1-5中任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述試劑盒中，所述經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞在所述細(xì)胞儲(chǔ)存液中的濃度為1000個(gè)細(xì)胞/ml,2000個(gè)細(xì)胞/ml,4000個(gè)細(xì)胞/ml,6000個(gè)細(xì)胞/ml,8000個(gè)細(xì)胞/ml、10000個(gè)細(xì)胞 /ml或12000個(gè)細(xì)胞/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的試劑盒或權(quán)利要求1-6中任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞是按照包括如下步驟的方法制備得到的將所述腫瘤細(xì)胞預(yù)培養(yǎng)，得到預(yù)培養(yǎng)后的腫瘤細(xì)胞，將所述預(yù)培養(yǎng)后的腫瘤細(xì)胞與染料溶液混合，培養(yǎng) 10h-12h或IOh或12h，得到經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一所述的試劑盒或權(quán)利要求1-7中任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述預(yù)培養(yǎng)的方法包括如下步驟將所述腫瘤細(xì)胞以IO6個(gè)/ml密度接種于腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)基中，置于37°C、5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，至所述腫瘤細(xì)胞匯合至 60% -70%，得到所述預(yù)培養(yǎng)后的腫瘤細(xì)胞；所述將所述預(yù)培養(yǎng)后的腫瘤細(xì)胞與染料溶液混合，培養(yǎng)lOh-ia!或IOh或Ia1中，所述培養(yǎng)的方式為37°c、5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；所述細(xì)胞培養(yǎng)基為DMEM培養(yǎng)基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一所述的試劑盒或權(quán)利要求1-8中任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述腫瘤細(xì)胞為結(jié)直腸癌HCT-8細(xì)胞或細(xì)胞；和/或，所述染料為3- (4，5- 二甲基噻唑- -2，5- 二苯基四氮唑溴鹽或熒光染料；所述熒光染料為 PI、DAPI、Hoechst 33342, Hoechst 33258、EB、cy3 或 cy5 ；所述染料溶液由3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽和水組成，3-(4， 5- 二甲基噻唑-2)-2，5- 二苯基四氮唑溴鹽在染料溶液中的濃度為0. 5% (質(zhì)量百分比)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一所述的試劑盒或權(quán)利要求1-9中任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒為用于檢測雞單核細(xì)胞吞噬能力或羊單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒；所述雞為矮小雞，所述羊?yàn)樗_?？搜颉?br> 全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒。該用于檢測單核細(xì)胞吞噬能力的試劑盒，包括經(jīng)染料染色的腫瘤細(xì)胞。用本發(fā)明試劑盒實(shí)現(xiàn)了單核細(xì)胞的高通量快速檢測。用本發(fā)明試劑盒進(jìn)行檢測時(shí)，可以在96孔板中進(jìn)行，將樣品及試劑盒中的試劑加入96孔板中，使其相互作用一定時(shí)間后，用酶標(biāo)儀或熒光分光光度計(jì)檢測各孔的OD值，再根據(jù)OD值計(jì)算出各孔中檢測的單核細(xì)胞的吞噬能力。采用酶標(biāo)儀等儀器進(jìn)行讀數(shù)，人為顯微鏡下讀數(shù)相比，既節(jié)省時(shí)間，又避免了人為誤差，提高了檢測準(zhǔn)確性和檢測效率。傳統(tǒng)方法每天僅可檢測30只個(gè)體，而本發(fā)明每天可以檢測2-300個(gè)樣品、150-300只個(gè)體，大大提高了檢測效率。
文檔編號C12Q1/02GK102337321SQ201010233980
公開日2012年2月1日 申請日期2010年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月22日
發(fā)明者牟進(jìn)菲, 連正興, 韓紅兵 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)