專利名稱：?jiǎn)魏思?xì)胞特異性微粒運(yùn)送載體的制作方法
單核細(xì)胞特異性微粒運(yùn)送載體本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2002年4月1日，申請(qǐng)?zhí)枮?2811102. 8的、發(fā)明名稱和本發(fā)明 相同的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
背景技術(shù)：
以基因?yàn)榛A(chǔ)的藥物直接涉及編碼于核酸分子中的治療性或預(yù)防性基因產(chǎn)物的 運(yùn)送。利用正常細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄和翻譯機(jī)制在所需的地方原位生產(chǎn)基因產(chǎn)物。原則上當(dāng)基因產(chǎn) 物被設(shè)計(jì)為整合到患者的遺傳互補(bǔ)物中時(shí)，遺傳缺陷是可以治愈的。此外，當(dāng)被用于運(yùn)送預(yù) 防性藥劑，如疫苗方式中的抗原時(shí)，數(shù)量和質(zhì)量上優(yōu)勢(shì)的免疫應(yīng)答是可能發(fā)生的。然而，迄今為止，以基因?yàn)榛A(chǔ)的藥物受制于運(yùn)送體系中的缺陷。雖然合成體系 (如以脂質(zhì)體為基礎(chǔ))和所謂“裸DNA”體系是可獲得的，但眾所周知它們的效率很低。因 此優(yōu)選的運(yùn)送載體是改良的病毒。然而，它們也受制于一些缺陷。這些缺陷包括免疫應(yīng)答 的限制，及與獲得傳染性病毒相關(guān)的生產(chǎn)難題。基因槍(biolistic)體系也可被利用。這些體系典型地需要用核酸包被金屬珠， 并用基因槍運(yùn)送已包被珠體。基因槍物理上將DNA射進(jìn)可被帶入其射程內(nèi)的任何細(xì)胞中。 不過，基因槍方法是非特異性的。因此在尋求特異性運(yùn)送的治療性和預(yù)防性方法中，該方法 是次優(yōu)的。例如，在癌癥治療方法中，理想的是只將基因產(chǎn)物運(yùn)送到癌癥細(xì)胞，或立即包圍 細(xì)胞(immediately surrounding cell) 0就疫苗應(yīng)用而言，希望產(chǎn)物被特異性地運(yùn)送到最好的抗原呈遞細(xì)胞。然而就這一 點(diǎn)而言，常規(guī)運(yùn)送是不夠的。事實(shí)上，相信在目前基因疫苗方法中，大部分抗原呈遞是通過 可呈遞抗原的肌肉細(xì)胞完成的，但遠(yuǎn)不如單核細(xì)胞譜系的所謂“專業(yè)的”抗原呈遞細(xì)胞有 效。單核細(xì)胞在免疫應(yīng)答中扮演著核心角色。它們成熟為肌體主要的抗原呈遞細(xì)胞， 巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞。此外，當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)時(shí)，作為血管生成過程的一部分，它們產(chǎn)生可使單 核細(xì)胞接近腫瘤的巨噬細(xì)胞吸引因子(MAF)。因此，單核細(xì)胞如果被特異性地靶定，就既可 用于運(yùn)送治療性基因產(chǎn)物到腫瘤細(xì)胞，也可通過其優(yōu)勢(shì)抗原呈遞特性產(chǎn)生治療性或預(yù)防性 免疫應(yīng)答。單核細(xì)胞通常巡查肌體以搜尋外源、非自身抗原，典型的是細(xì)菌。單核細(xì)胞吞噬細(xì) 菌，隨后細(xì)菌在溶酶體中被消化為較小的抗原性部分。得到的細(xì)菌抗原被循環(huán)返回到細(xì)胞 表面，以呈遞到免疫系統(tǒng)的體液和細(xì)胞分支。相應(yīng)地，本領(lǐng)域需要用于以基因?yàn)榛A(chǔ)的藥物的更具特異性的運(yùn)送體系。一個(gè)合 適的運(yùn)送體系將具有比基因槍法更高的特異性，比現(xiàn)有合成體系更為有效，且對(duì)失活作用 沒有以病毒為基礎(chǔ)的運(yùn)送體系敏感。發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于定向進(jìn)入單核細(xì)胞的組合物，該組合物含有 ⑴編碼抗原或治療性蛋白質(zhì)的核酸(ii)溶酶體逃避組分(evading component)，及(iii) 可被吞噬的微粒。在不同實(shí)施方案中，核酸可以是DNA或RNA。一些實(shí)施方案中，核酸可以 被編碼在表達(dá)載體中，該表達(dá)載體可以含有一個(gè)核內(nèi)啟動(dòng)子，如CMV啟動(dòng)子。其它實(shí)施方
3案中，核酸可以被編碼在胞質(zhì)載體中，如T7載體體系。不同的實(shí)施方案中，溶酶體/吞噬體 逃避組分可以是病毒、病毒的一部分、或者蛋白質(zhì)。病毒可為腺病毒，蛋白質(zhì)可為腺病毒五 鄰體(penton)蛋白質(zhì)。一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于定向進(jìn)入單核細(xì)胞的組合 物，該組合物包括可以裂解溶酶體的病毒的重組非復(fù)制性形式，其中病毒為腺病毒，并含有 編碼了抗原或治療性基因的核酸。一些實(shí)施方案中，組合物可進(jìn)一步含有核酸保護(hù)組分，如 精蛋白(protamine)、聚精氨酸、聚賴氨酸、組蛋白、組蛋白類似蛋白質(zhì)、合成聚陽離子聚合 物或具有合適包裝序列的逆轉(zhuǎn)錄病毒核心蛋白，該包裝序列包含于RNA序列中。組分可通 過任何允許附著的方式被附著到微粒上。一些實(shí)施方案中，核酸和溶酶體逃避組分是通過 抗體結(jié)合方式被附著到微粒上。其它實(shí)施方案中，核酸和溶酶體逃避組分是通過抗生物素 蛋白與生物素之間的相互作用被附著到微粒上。其它實(shí)施方案中，核酸充當(dāng)多重結(jié)合載體。 本發(fā)明也提供了制備上述組合物的方法。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種將生物材料定向運(yùn)送進(jìn)入單核細(xì)胞的方法，包括將 上述組合物與單核細(xì)胞，如樹突細(xì)胞或巨噬細(xì)胞接觸。本發(fā)明提供了一種基因治療方法，包 括將上述組合物施用給需要的患者，其中的核酸編碼治療性蛋白質(zhì)，如抗腫瘤蛋白質(zhì)。本發(fā) 明提供了一種基因接種的方法，包括將上述組合物施用給需要的患者，其中核酸編碼抗原， 如過敏原、病毒抗原、細(xì)菌抗原或寄生蟲來源的抗原。本發(fā)明也提供了一種治療癌癥的方 法，包括將上述組合物施用給需要的患者，其中的核酸為抗腫瘤基因，如抗血管生成因子、 免疫調(diào)節(jié)劑或抗炎因子。在上述方法中，組合物可通過靜脈或皮下給藥。附圖簡(jiǎn)述

圖1是處理過的鼠類動(dòng)物單核細(xì)胞的培養(yǎng)照片。圖 2 是經(jīng)過 AD-GFP 珠處理，并于含有 10%FBS、100U/ml IL4 和 800U/ml GMCSF 的 RPMI 1640中培養(yǎng)7天的人類外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞的照片。AD-GFP珠的吞食不影響細(xì)胞成熟 為樹突細(xì)胞，通過細(xì)胞的鋸齒狀手指樣邊緣可證實(shí)這一點(diǎn)，因?yàn)樵撔螒B(tài)是樹突細(xì)胞的特征。發(fā)明詳述前言本發(fā)明提供了定向進(jìn)入單核細(xì)胞的以固體基質(zhì)為基礎(chǔ)的組合物(下文為“珠載 體”)。本發(fā)明的基本珠載體(basic bead vector)通常由核酸組分、溶酶體逃避組分和可 被單核細(xì)胞吞噬的微粒組成。珠載體對(duì)類似單核細(xì)胞的吞噬細(xì)胞，包括樹突細(xì)胞和巨噬細(xì) 胞具有高度特異性。對(duì)單核細(xì)胞的高選擇性使得珠載體在基因藥物方法，如基因接種、基因 治療和癌癥治療中極為有用，這些方法需要將基因?qū)氩⒈磉_(dá)到單核細(xì)胞系細(xì)胞中。單核細(xì)胞是攝取(ingest)并呈遞大抗原，如細(xì)菌的吞噬性免疫細(xì)胞。本發(fā)明利用 這一特性提供了位于“看”似細(xì)菌的基質(zhì)上的載體。因此相信珠載體微粒的尺寸有助于珠 載體對(duì)單核細(xì)胞的高特異性。珠載體微粒優(yōu)選的尺寸大約為單核細(xì)胞典型攝取的細(xì)菌抗原 的尺寸。通常載體微粒約0. 5到約2. 5微米，但是更為優(yōu)選的是約0. 5到約1微米。從攝 取的角度看，該范圍的下限是優(yōu)選的，因?yàn)樗鼈兏鼮榻咏?xì)菌的尺寸。另一方面，出于生產(chǎn) 目的，稍大的珠是優(yōu)選的，因?yàn)樗鼈儾蝗菀渍掣皆谝黄?，而且較大的珠更容易從結(jié)合組分中 被洗去。當(dāng)然，形態(tài)或材質(zhì)并不構(gòu)成對(duì)珠載體的限制?？傃灾?，珠載體微粒可以是任何形 態(tài)、尺寸或材質(zhì)，只要這些條件可以使珠載體被單核細(xì)胞吞噬。出于制造上的便利，優(yōu)選的基質(zhì)結(jié)構(gòu)具有被聚合物涂層覆蓋的鐵磁核心。優(yōu)選的鐵磁微粒為Dynabeads (Dynal Biotech)。Dynabeads 是具有不同尺寸可供選擇、并由多種不同材質(zhì)涂布的單排列 (monodisposed)聚苯乙烯微球體(見http //www. dynalbiotech. com/)。其它優(yōu)選的鐵磁 微粒是微珠。優(yōu)選這種珠體的原因是在處理過程中，可應(yīng)用磁性分離使珠體從其結(jié)合組分 上分離。核酸組分本發(fā)明的基本珠載體微粒通常連有核酸組分。核酸組分典型地編碼治療性或抗原 性核酸或蛋白質(zhì)。核酸組分由DNA、RNA或DNA和RNA組成。該組分典型地含有翻譯和/或 轉(zhuǎn)錄所必需的信號(hào)(即其可最終編碼蛋白質(zhì)或RNA產(chǎn)物)。技術(shù)人員立即就會(huì)理解大量的治療性蛋白質(zhì)可被應(yīng)用在本載體體系中。這些治療 性蛋白質(zhì)典型的是抗腫瘤蛋白質(zhì)。雖然治療性蛋白質(zhì)可以是相當(dāng)非特異性的，不過由于它 們會(huì)被主要地定位于腫瘤的最鄰近位置上，所以優(yōu)選的是腫瘤特異性的。合適的治療性蛋 白質(zhì)的實(shí)例包括抗血管生成因子和白介素。在疫苗應(yīng)用方面有用的典型抗原包括過敏原、病毒抗原、細(xì)菌抗原和寄生蟲來源 的抗原。優(yōu)選的抗原包括技術(shù)人員所熟知的腫瘤相關(guān)抗原(如癌胚抗原、前列腺特異 膜抗原、黑素瘤抗原、腺癌抗原、白血病抗原、淋巴瘤抗原、肉瘤抗原、MAGE-1、MAGE-2、 MART-U Melan-A, p53、gplOO、與結(jié)腸癌相關(guān)抗原、與乳癌相關(guān)抗原、MucU Trp_2、端粒末 端轉(zhuǎn)移酶、PSA及與腎癌相關(guān)抗原)。病毒抗原也是優(yōu)選的。合適的病毒抗原包括HIV、 EBV及Herpesvirus。一種實(shí)施方案中，核酸編碼了一個(gè)線性gp41抗原決定部位插入段 (LLELDKffASL)，該插入段被認(rèn)為是有助于增強(qiáng)HIV-I Env的免疫原性的構(gòu)建體(Liang等， Vaccine,16 ；17 (22) :2862_72，1999Jul)。核酸組分被有利地編碼在能表達(dá)核酸組分的RNA和/或蛋白質(zhì)產(chǎn)物的表達(dá)載體 中。該載體典型地進(jìn)一步含有調(diào)節(jié)序列，包括例如可操作地連接到編碼序列的啟動(dòng)子。該 載體可進(jìn)一步含有可選擇的標(biāo)記序列，例如用于體外繁殖細(xì)菌或細(xì)胞培養(yǎng)體系。優(yōu)選的表 達(dá)載體包含復(fù)制起始端、合適的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子、及任何必需的核糖體結(jié)合位點(diǎn)、聚腺苷酸 化位點(diǎn)、剪切供體和受體位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄終止序列、及5’側(cè)翼非轉(zhuǎn)錄序列。來源自SV40或巨細(xì) 胞病毒(CMV)病毒基因組的DNA序列，例如SV40起始端、早期啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、剪切、和聚腺 苷酸化位點(diǎn)可被用于提供必需的非轉(zhuǎn)錄遺傳成分。為有效翻譯插入的靶基因編碼序列，特定起始信號(hào)也可能是必需的。這些信號(hào)包 括ATG起始密碼子和鄰近序列。在將含有其特有起始密碼子和鄰近序列的核酸組分插入適 當(dāng)表達(dá)載體的情況中，不需要任何附加翻譯控制信號(hào)。然而在僅采用一部分開放讀碼框架 (ORF)的情況中，必然需要提供外源翻譯控制信號(hào)，該信號(hào)可能包括ATG起始密碼子。此外， 起始密碼子必須與希望的編碼序列的讀碼框架同相，以確保整個(gè)靶標(biāo)的翻譯。這些外源翻譯控制信號(hào)和起始密碼子可以是多種來源的，既可以是天然的也可 以是合成的。表達(dá)效率可通過包含適當(dāng)轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)元件、轉(zhuǎn)錄終止子等成分來增強(qiáng)(見 Bittner 等，Methods inEnzymol. 153 :516_544 (1987))。Sambrook 等，Molecular Cloning ALaboratory Manual，第2版，冷泉港，紐約(1989)描述了一些合適的表達(dá)載體，該文獻(xiàn)的 公開在此引入作為參考。如果希望增強(qiáng)表達(dá)，并促進(jìn)正確的蛋白質(zhì)折迭，可以如Hatfield
5等，U. S. Patent No. 5，082，767所解釋的方法優(yōu)化序列的密碼子范圍(context)和密碼子 配對(duì)。啟動(dòng)子包括CMV即刻早期啟動(dòng)子、HSV胸腺嘧啶核苷激酶啟動(dòng)子、早期和晚期SV40 啟動(dòng)子、來自逆轉(zhuǎn)錄病毒的LTRs、及小鼠的金屬硫蛋白I啟動(dòng)子。優(yōu)選的啟動(dòng)子是CMV。 典型的載體包括 pWLneo、pSV2cat、pOG44、pXTl、pSG (Stratagene)、pSVK3、pBPV、pMSG、及 PSVL(Pharmacia)。可選擇的標(biāo)記包括CAT (氯霉素轉(zhuǎn)移酶)。優(yōu)選的載體也包括胞質(zhì)載體， 如 T7 載體體系。參見 Wagner 等，U. S. Patent No. 5，591，601 (January 7，1997)。溶酶體逃避組分除核酸組分外，本發(fā)明的基本珠載體微粒通常也連有溶酶體逃避組分。珠載體中 的溶酶體逃避組分的任務(wù)是輔助載體逃離溶酶體的苛刻環(huán)境。除了此處公開的內(nèi)容，熟練 的技術(shù)人員知道這種分子的大量實(shí)例。當(dāng)單核細(xì)胞攝取大抗原時(shí)，便形成了吞食抗原的吞噬囊泡(吞噬體 (phagasome))。接著，包含在單核細(xì)胞中的特化溶酶體與新形成的吞噬體融合。融合時(shí)，被 吞噬的大抗原便被暴露給一些高活性分子及各種溶酶體水解酶的濃縮混合物。這些高活性 分子和溶酶體水解酶消化了吞噬體的內(nèi)含物。因此，將溶酶體逃避組分附著到微粒上，便可 使也附著于微粒上的核酸逃脫溶酶體中的物質(zhì)對(duì)其的消化，并進(jìn)入單核細(xì)胞整體的細(xì)胞質(zhì) 中?，F(xiàn)有體系無法識(shí)別這些重要特征的重要性，因而獲得比本發(fā)明體系低的多的表達(dá)水平。 見Falo等，W097/11605 (1997)。應(yīng)當(dāng)指出術(shù)語“溶酶體逃避組分”包括上述融合的溶酶體 /吞噬體。溶酶體逃避組分是任何可逃避或裂解溶酶體的組分。例如，溶酶體逃避組分可以 包括蛋白質(zhì)、碳水化合物、類脂、脂肪酸、仿生聚合物、微生物及其組合。應(yīng)當(dāng)指出術(shù)語“蛋 白質(zhì)”包括含有任意數(shù)量氨基酸的聚合分子。所以，本領(lǐng)域普通熟練的技術(shù)人員便會(huì)知道 “蛋白質(zhì)”包括通常被認(rèn)為是“短”蛋白質(zhì)的肽。優(yōu)選的溶酶體逃避組分包括蛋白質(zhì)、病毒或 病毒的部分。例如，腺病毒五鄰體蛋白質(zhì)是眾所周知的可使病毒逃避/裂解溶酶體/吞噬 體的復(fù)合體。因而完整腺病毒或分離的五鄰體蛋白質(zhì)，或其一部分(例如見Bal等，Eur J Biochem267 :6074_81 (2000))，均可被利用作為溶酶體逃避組分。來自流感病毒血細(xì)胞凝集 素亞單位HA-2的N末端序列的Fusogenic肽也可被用作溶酶體逃避組分(Wagner等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA,89 :7934_7938，1992)。其它優(yōu)選的溶酶體逃避組分包括仿生聚合物，如聚(2-丙基丙烯酸)(PPAAc)，由 于含有感興趣質(zhì)粒的結(jié)合物的內(nèi)涵體釋放作用的增強(qiáng)，使其顯示出可以增強(qiáng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效 率(見 Lackey 等，Abstractsof Scientific Presentations 美國(guó)基因治療協(xié)會(huì)第 3 屆年 會(huì)，摘要No. 33，May 31,2000-June 4，2000，丹佛，科羅拉多)。本發(fā)明展望的其它溶酶體逃 避組分的實(shí)例由 Stayton 等 J. Control Release, 1 ；65 (1-2) :203_20，2000 論述。核酸保護(hù)組分除上述通常以直接或通過彼此之間的附著而被連結(jié)在基本珠載體微粒上的組分 以外(如編碼核酸的重組腺病毒)，其它組分也可被附著在微粒上，或附著在微粒連結(jié)的組 分上。例如，DNA保護(hù)組分可被任意添加到上述基本珠載體上，尤其是在核酸組分不與病毒 或其部分相連的位置上。通常，DNA保護(hù)組分不會(huì)被直接附著到珠體上。核酸保護(hù)組分包 括任意一種可以保護(hù)珠體結(jié)合的DNA或RNA在溶酶體裂解之前或之中被短暫暴露給分解酶
6時(shí)，不被消化的組分。優(yōu)選的核酸保護(hù)組分包括精蛋白、聚精氨酸、聚賴氨酸、組蛋白、組蛋 白樣蛋白質(zhì)、合成聚陽離子聚合物及具有合適包裝序列的逆轉(zhuǎn)錄病毒核心蛋白，該包裝序 列包含于RNA序列中。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，珠載體包括(1)重組體，任意的非復(fù)制性和/或非傳染 性形態(tài)的病毒，該病毒含有編碼抗原或治療性基因的核酸，及(2)可被吞噬的微粒。病毒可 以是RNA病毒，如逆轉(zhuǎn)錄病毒，或DNA病毒，如腺病毒。該實(shí)施方案中，可優(yōu)選的病毒本身是 具有裂解溶酶體能力的。換言之，核酸和溶酶體逃避組分均為病毒的必需組成部分?？蛇x 的，病毒可以不具有裂解溶酶體的能力。當(dāng)然在這種情況中，應(yīng)該添加單獨(dú)的溶酶體逃避組 分。優(yōu)選的病毒包括HIV，腺病毒、Sindbis病毒、及這些病毒的雜交體和重組體。特別優(yōu) 選的病毒是HIV腺病毒雜交體，該病毒是基本上已被工程改造表達(dá)HIV抗原的重組腺病毒。 可采用常規(guī)方法將病毒直接附著于珠體。見Hammond等，Virology 254 37-49 (1999)。本發(fā)明中，因?yàn)閷?duì)于核苷組分到達(dá)單核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)這一過程而言，病毒感染并 非必不可少，因此病毒也可以是復(fù)制/感染缺陷型。產(chǎn)生本發(fā)明展望的復(fù)制/感染缺陷型 腺病毒的一種方法是改變病毒纖維蛋白質(zhì)。例如，本發(fā)明可應(yīng)用具有如下特征的病毒，該病 毒中的纖維蛋白質(zhì)經(jīng)特定突變工程化后，可結(jié)合到抗體而非其同源細(xì)胞受體上。另一種產(chǎn)生本發(fā)明展望的復(fù)制/感染缺陷型病毒的方法是有意造成對(duì)負(fù)責(zé)傳染 性的病毒組分的變性。例如，在腺病毒的情況中，纖維蛋白質(zhì)可能在病毒制備過程中被破 碎；對(duì)HIV而言，破碎的可能是包膜(env)蛋白。產(chǎn)生本發(fā)明展望的復(fù)制/感染缺陷型逆轉(zhuǎn) 錄病毒的方法必須將逆轉(zhuǎn)錄病毒的外膜除去，使其僅保留逆轉(zhuǎn)錄病毒的核心顆粒。如果通 過上述方法制備的復(fù)制/感染缺陷型病毒被附著到珠載體微粒上，則上述的RNA保護(hù)組分 也可被附著到微粒上。一些治療性實(shí)施方案中，穩(wěn)定地整合進(jìn)靶細(xì)胞染色體中對(duì)載體是有利的。例如，一 種達(dá)到穩(wěn)定整合的模式是通過采用腺病毒雜交體。這種腺病毒雜交體包括例如，一種腺病 毒載體，該載體攜帶逆轉(zhuǎn)錄病毒5’和3’長(zhǎng)末端重復(fù)(LTR)序列，該序列位于編碼治療性或 抗原性核酸或蛋白質(zhì)及逆轉(zhuǎn)錄病毒整合酶基因的DNA組分的側(cè)翼。(見Zheng等，Nature Biotechnology, 18 176-180，2000)。其它實(shí)施方案中，短暫表達(dá)是優(yōu)選的，并且象Sindbis 病毒的細(xì)胞質(zhì)病毒可被應(yīng)用。這種情況下沒有溶酶體逃避組分自然存在于該病毒上，則可 以添加一個(gè)該組分。在Sindbis或其它這種病毒的情況中，為了這一目的，可以將病毒設(shè)計(jì) 成表達(dá)所有或部分腺病毒五鄰體蛋白質(zhì)。用于將組分附著到微粒的方法將上文論述的組分附著到珠載體微?？赏ㄟ^任意方式實(shí)現(xiàn)。如上述，多種“組分” 包括核酸、溶酶體逃避組分，這兩種組分均可出現(xiàn)在病毒中。優(yōu)選的附著方法包括抗體結(jié) 合、生物素與抗生物素蛋白之間的相互作用、及化學(xué)交聯(lián)?？梢灾苽涑鼍哂谢瘜W(xué)附著抗體、 抗生物素蛋白或其它選擇性附著位點(diǎn)的珠載體微粒。抗體結(jié)合可通過任何抗體之間的相互作用而發(fā)生。抗體包括但不限于多克隆抗 體、單克隆抗體(mAbs)、人源化或嵌合抗體、單鏈抗體包括單鏈Fv(ScFv)片段、Fab片段、 F(ab' )2片段、通過Fab表達(dá)基因庫產(chǎn)生的片段、抗獨(dú)特型(抗Id)抗體、抗原決定部位結(jié) 合片段、及上述任一物質(zhì)的人源化形式。通常，制備多克隆和單克隆抗體，及可產(chǎn)生預(yù)期抗體的雜交瘤的技術(shù)已為本領(lǐng)域所熟知(Campbell，Α. Μ.，單克隆抗體技術(shù)生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室技 術(shù)(Monoclonal Antibody Technology Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, ElsevierScience Publishers),阿姆斯特丹，荷蘭(1984)； St. Groth φ, J. Immunol. Methods 35:1—21(1980) ；Kohler and Milstein, Nature 256 495-497(1975))，trioma 技術(shù)、人類 B 細(xì)胞雜交瘤技術(shù)(Kozbor 等，Immunology Today 4:72(1983) ；Cole 等，Monoclonal Antibodies andCancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985)，pp.77-96)。本發(fā)明的一個(gè)抗體結(jié)合的實(shí)例包括被化學(xué)添加到珠載體微粒上的單一抗體?？?體對(duì)于附著到微粒上的組分具有特異性?？蛇x的是采用兩個(gè)抗體。在這種情況中，附著到 珠體上的第一抗體對(duì)第二抗體具有特異性。第二抗體對(duì)附著到珠體上的組分具有特異性。 這樣，組分特異性抗體結(jié)合組分，該抗體依次又被珠結(jié)合抗體結(jié)合。例如，山羊或兔抗小鼠 抗體可以被結(jié)合到珠體，小鼠單克隆抗體被用于結(jié)合特異性組分?？贵w結(jié)合的其它實(shí)例中，應(yīng)用到蛋白質(zhì)A，或任何對(duì)抗體具有親和力的類似分子。 該實(shí)例中，珠體用結(jié)合抗體的蛋白質(zhì)A包被，而抗體則依次與附著珠體的組分結(jié)合。通過生物素與抗生物素蛋白之間的相互作用進(jìn)行的附著可通過諸如如下方法實(shí) 現(xiàn)，即將抗生物素蛋白附著到珠載體，并將生物素結(jié)合到待附著組分上?；瘜W(xué)交聯(lián)可通過技 術(shù)人員熟知的常規(guī)方法實(shí)現(xiàn)。另一種附著機(jī)制涉及充當(dāng)多重結(jié)合載體的核酸。合成的夾子蛋白核酸(PNA)寡聚 核苷酸酸被設(shè)計(jì)為特異性結(jié)合到不同核酸序列上。PNA是多聚核酸類似物，具有肽主鏈而 不是脫氧核糖磷酸主鏈。它可被直接附著于珠體，或被衍生化以方便的附著，從而提供了結(jié) 合核酸的序列特異性方法。每一個(gè)夾子寡聚核苷酸可以被衍生化或附著到不同配體或分 子上，并被設(shè)計(jì)為可結(jié)合不同核酸序列。相信PNA是通過Hoogsteen堿基配對(duì)相互作用與 DNA相互作用，并形成穩(wěn)定的PNA-DNA-PNA三重夾鉗結(jié)構(gòu)(Zelphati等，BioTechniques，28 304-316，2000)。這樣，在一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用了一個(gè)夾子(gripper)將核酸組分結(jié)合到珠體，而 另一個(gè)夾子則被用于將溶酶體逃避組分結(jié)合到核酸組分上。可以進(jìn)行很多這樣的重復(fù)。 例如含有生物素的“夾子”可順序特異性地被結(jié)合在核酸的一個(gè)位點(diǎn)上。抗生物素蛋白包 被的微粒上的附著是通過生物素與抗生物素蛋白之間的相互作用實(shí)現(xiàn)的。在核酸的另一 個(gè)位點(diǎn)上，另一個(gè)具有溶酶體/吞噬體逃避組分的“夾子”可以順序特異性地被結(jié)合。具 有DNA保護(hù)組分的“夾子”可任意地順序特異性被結(jié)合到核酸的另一個(gè)位點(diǎn)。在http:// www. Renetherapysystems. com/02pReneRrip. htm 禾口 http://www. Renetherapysystems. com/02pna0. htm中對(duì)典型的夾子寡聚核苷酸有所描述。在病毒附著到珠體的情況中，附著也可通過將病毒設(shè)計(jì)成于其表面表達(dá)某種蛋白 質(zhì)而實(shí)現(xiàn)。例如，HIV外膜蛋白質(zhì)可被腺病毒五鄰體蛋白質(zhì)或其一部分取代。接著重組病 毒可通過抗五鄰體抗體被附著到已經(jīng)由諸如另一個(gè)抗體或蛋白質(zhì)A介導(dǎo)包被過的珠體上。 該實(shí)施方案中，五鄰體蛋白質(zhì)也可作為溶酶體逃避組分。制劑珠載體可被配制為用于非腸道給藥，例如，通過靜脈、肌肉或皮下注射。用于注射 的制劑可以單位劑量形式出現(xiàn)，如于安瓿瓶或多劑量容器中，可任意添加防腐劑。組合物可以采用如懸液、溶液或油狀乳液或水性媒介物形式，并且可以含有諸如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/ 或分散劑的制劑。珠載體也可采用藥物可接受賦形劑配制獲得。這樣的賦形劑在本領(lǐng)域中 已眾所周知，不過，典型的是生理學(xué)可耐受水溶液。生理學(xué)可耐受溶液是基本上無毒性的。 優(yōu)選的賦形劑可以是惰性或促進(jìn)性的。治療方法本發(fā)明的珠載體對(duì)于如單核細(xì)胞的細(xì)胞具有高度選擇性。因此該載體對(duì)于任何涉 及選擇性地將核酸組分導(dǎo)入單核細(xì)胞的應(yīng)用是有用的，這些應(yīng)用包括基因接種、癌癥治療 和基因治療。典型方法需要使單核細(xì)胞接觸珠載體。珠載體可于體內(nèi)或體外(in vitro)接觸單核細(xì)胞。因此，體內(nèi)和體外(ex vivo) 方法都是被預(yù)期的。至于體內(nèi)方法，珠載體通常為非腸道方式給藥，常為靜脈、肌肉、皮下、 真皮下。可通過例如集合藥團(tuán)注射或連續(xù)輸液進(jìn)行給藥。在體外(ex vivo)方法中，單核 細(xì)胞于肌體外被接觸，隨后將被接觸細(xì)胞施用給患者。細(xì)胞也是非腸道使用，典型的是通過 輸液。在疫苗接種領(lǐng)域，包括樹突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的單核細(xì)胞被認(rèn)為是“專業(yè)的”抗原呈 遞細(xì)胞(APCs)，因而是用于基因疫苗表達(dá)的理想位點(diǎn)。眾所周知，在產(chǎn)生強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫應(yīng) 答方面，APC中的抗原表達(dá)遠(yuǎn)比在任何其它細(xì)胞類型中的相同抗原表達(dá)有效。因此，本發(fā)明 的珠載體將接種抗原的表達(dá)定向到“專業(yè)的”抗原呈遞細(xì)胞(單核細(xì)胞)的能力顯著地增 強(qiáng)了基因疫苗的功效。由于本發(fā)明的珠載體可被直接注射進(jìn)患者體內(nèi)，因此本發(fā)明提供了超越目前疫苗 技術(shù)的重要改進(jìn)，而且該珠載體可直接將抗原運(yùn)送給肌體的最有效的抗原呈遞細(xì)胞，單核 細(xì)胞源細(xì)胞，象巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞。以前的以這些細(xì)胞為目標(biāo)的方法主要依靠分離患者 的單核細(xì)胞，并將其于體外處理后，再輸回給患者。雖然這樣的方案也是本發(fā)明所設(shè)想到 的，然而重要的改進(jìn)是無須實(shí)施上述步驟。換言之，珠載體正如傳統(tǒng)疫苗那樣被給藥，這樣 由于要求的技能水平較低，從而基本上降低了成本。此外，本發(fā)明設(shè)想給藥途徑的改變可以 變更被靶定的單核細(xì)胞。例如在靜脈注射的情況中，應(yīng)該靶定巨噬細(xì)胞；在皮下注射的情況 中，應(yīng)該靶定樹突細(xì)胞。涉及本發(fā)明珠載體的基因疫苗的典型接種方法包括通常的皮下或靜脈方式將含 有編碼抗原的核酸的珠載體給患者用藥。可選地，單核細(xì)胞可以于體外接觸載體后，將單核 細(xì)胞本身通過非腸道給患者用藥。另外，這種體外方法可通過分離的T淋巴細(xì)胞進(jìn)行修飾， 即采用被接觸的單核細(xì)胞于體外產(chǎn)生抗原特異性細(xì)胞毒T細(xì)胞，然后將該T細(xì)胞給患者用 藥。熟練的技術(shù)人員會(huì)熟悉該方案。除了被改進(jìn)的疫苗接種方案，采用本發(fā)明的珠載體將基因表達(dá)定位于單核細(xì)胞譜 系對(duì)癌癥治療也是有效的。本發(fā)明包括的一類癌癥治療方案涉及將治療基因靶定腫瘤。已 知就腫瘤而言，原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤在生長(zhǎng)到直徑大于幾個(gè)毫米后氧氣供應(yīng)缺乏，它們分泌 信號(hào)蛋白質(zhì)以引出一些使腫瘤存活所必需的作用。這些作用包括分泌誘導(dǎo)血管生成的信 號(hào)。作為血管生成誘導(dǎo)機(jī)制的一部分，缺氧腫瘤分泌可將單核細(xì)胞吸引到腫瘤的信號(hào)趨化 因子蛋白質(zhì)。這樣被吸引到生長(zhǎng)中腫瘤位點(diǎn)上的單核細(xì)胞隨后變?yōu)榫奘杉?xì)胞，并輔助誘導(dǎo) 腫瘤血管生成。因此，治療基因靶定腫瘤的有效方法包括將有效量的含有抗腫瘤基因的珠 載體，直接或通過體外接觸細(xì)胞的方式給癌癥患者用藥。含有被吞噬珠載體的單核細(xì)胞應(yīng)
9該被吸引到腫瘤發(fā)育位點(diǎn)，并將治療腫瘤基因選擇性地運(yùn)送給腫瘤。一種實(shí)施方案中，抗腫瘤基因是抗血管生成因子，象血管內(nèi)皮抑素或血管抑制素。 因?yàn)槔昧送ǔ＿\(yùn)送前血管生成因子到腫瘤的單核細(xì)胞，作為抗血管生成因子的運(yùn)送工 具，所以可預(yù)見這種治療方法是高效的。另一個(gè)實(shí)施方案中，抗腫瘤基因可以是免疫調(diào)節(jié)劑或抗炎因子。預(yù)見的是象IL-2 和IL-12的免疫調(diào)節(jié)劑。此外，抗炎因子不僅有助于治療腫瘤，還有助于治療象關(guān)節(jié)炎的慢 性發(fā)炎紊亂。發(fā)明的抗炎效果，象抗腫瘤效果，依賴于單核細(xì)胞引導(dǎo)到特定組織中的能力。 眾所周知單核細(xì)胞被吸引到發(fā)炎響應(yīng)位點(diǎn)，象關(guān)節(jié)炎中的那些響應(yīng)位點(diǎn)。其它典型的免疫 調(diào)節(jié)劑和抗炎因子包括GM-CSF和可溶性TNF- α受體。本發(fā)明包括的珠載體的另一種用途是在常規(guī)基因治療方面。涉及本發(fā)明珠載體的 基因治療的典型方法包括將含有編碼治療基因的核酸的珠載體，或含有該載體的細(xì)胞給患 者用藥。該核酸可編碼任何治療基因。下文僅通過例證方式給出非限制實(shí)施例，并且這些實(shí)施例不被認(rèn)為是本發(fā)明的限 制。在本發(fā)明范圍內(nèi)有許多明顯的變化。實(shí)施例1本實(shí)施例說明了典型珠載體的構(gòu)建。典型的珠載體包括被附著在Dynabead，并已被工程化為含有編碼綠色熒光蛋 白(GFP)的基因的腺病毒(Ad-GFP-珠)。為制備AD-GFP-珠，首先將Dynabeads (Dynal, prod. No. 115. 19)徹底地重新懸浮，并將所需數(shù)量的珠體轉(zhuǎn)移到適于磁力設(shè)備的試管中。 采用1 2ml緩沖液(含的FCS的RPMI)在磁力輔助下將珠體洗滌3次。將珠體重新 懸浮到最初緩沖液體積中。接著，為了用抗腺病毒纖維蛋白質(zhì)抗體AB-4(Ne0marker，cat. No. MS-1027)覆蓋珠體，每IO7個(gè)珠體中加入2微克的小鼠IgG。于室溫轉(zhuǎn)動(dòng)珠體/抗體 混合物30分鐘后，在磁力輔助下用緩沖液(PBS加BSA)洗滌珠體三次。然后將被覆蓋 的珠體用緩沖液(PBS加BSA)重新懸浮到最初體積。為將腺病毒顆粒(Quantum，Ad5. CMV5-GFP)結(jié)合到珠體上，每IO7個(gè)珠體中加入0. 5 X IO8個(gè)病毒顆粒。于4°C轉(zhuǎn)動(dòng)混合物30 分鐘后，在磁力輔助下用緩沖液(PBS加BSA)洗滌珠體3 4次。最后，將珠體用緩沖 液(PBS加BSA, PH7. 4)重新懸浮到合適的體積，以滿足體外或體內(nèi)的用途。實(shí)施例2本實(shí)施例說明了單核細(xì)胞在體外特異性地?cái)z取本發(fā)明的珠載體。在本實(shí)驗(yàn)中，將 實(shí)施例1的Ad-GFP載體和含有單核細(xì)胞的混合培養(yǎng)物進(jìn)行培養(yǎng)。通過顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)僅 在單核細(xì)胞中存在GFP的高水平表達(dá)。在本實(shí)施例中，將獲得自人類供體的50 IOOml血液置于肝素鈉試管中。 用IXPBS以1 1稀釋血液。在15ml的離心管中將8ml的稀釋血液在4ml的室溫 Ficoll-Paque Plus上進(jìn)行分層。室溫下于400g離心該管30分鐘。用巴氏吸管仔細(xì)地將 PBMC層從Ficoll梯度中吸出，并移入干凈的15ml或50ml的離心管中。在該離心管中加 入4倍體積的1XPBS，顛倒離心管進(jìn)行混合。室溫下于IOOg離心該管10分鐘。在該管中 加入IOml的1XPBS，顛倒離心管以混合細(xì)胞。室溫下于IOOg離心該管10分鐘。室溫下進(jìn) 行5分鐘的AKC裂解，并將細(xì)胞沉淀后，用1 XPBS洗滌。將PBMC’ s懸浮于5ml的完全樹突 細(xì)胞培養(yǎng)基中(RPMI1640+10 % FBS+800U/ml IL-4)。接著把PBMC細(xì)胞置入6孔培養(yǎng)板中。
10然后，將如實(shí)施例1描述制備的AD-GFP-珠加入到不同比例的細(xì)胞與珠體的培養(yǎng)物中。震 蕩培養(yǎng)板，以使載體均勻地分散在培養(yǎng)物中。每天在熒光顯微鏡下監(jiān)測(cè)GFP的表達(dá)。隔天 更換培養(yǎng)基。通過對(duì)樹突細(xì)胞獨(dú)特形態(tài)的觀察監(jiān)測(cè)PBMC分化成樹突細(xì)胞。通過將3ml的IXPBS注射進(jìn)小鼠腹腔內(nèi)，以制備小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。輕輕按摩后， 抽出注射的溶液，將細(xì)胞置入培養(yǎng)板中。培養(yǎng)1小時(shí)后，將未貼壁細(xì)胞除去，保留已貼壁細(xì) 胞，并將其在添加有10% FBS的DMEM中培養(yǎng)。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入6孔培養(yǎng)板中，接著將如實(shí) 施例1描述制備的AD-GFP-珠加入到不同比例的細(xì)胞與珠體的培養(yǎng)物中。震蕩培養(yǎng)板，以 使載體均勻地分散在培養(yǎng)物中。每天在熒光顯微鏡下監(jiān)測(cè)GFP的表達(dá)。隔天更換培養(yǎng)基。 通過對(duì)樹突細(xì)胞獨(dú)特形態(tài)的觀察監(jiān)測(cè)PBMC分化成樹突細(xì)胞。實(shí)施例3本實(shí)施例說明了單核細(xì)胞于體內(nèi)特異性地?cái)z取本發(fā)明的珠載體，并且攝取了載體 的細(xì)胞遷移至淋巴結(jié)，該過程模擬了正常的免疫應(yīng)答。這證明了一旦單核細(xì)胞吞噬了載體， 便活躍地遷移到產(chǎn)生免疫應(yīng)答的淋巴系統(tǒng)中這一原則。將實(shí)施例1的載體從腹部中線注射 到小鼠的腹膜腔內(nèi)。24小時(shí)后，除去腋下淋巴結(jié)，并通過顯微鏡檢查。觀察到單核細(xì)胞表達(dá) 高水平的GFP。實(shí)施例4本實(shí)施例說明了發(fā)明的珠載體弓I起特異的免疫應(yīng)答。該實(shí)施例中，發(fā)明的珠載體 被用于基因接種。觀察到珠載體疫苗接種引起異常強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答。通過皮下注射，將 250 μ 1由AD5、CMV-GFP包被的5X IO8個(gè)2. 5微米的微載體分別于第1天、第7天和第14 天接種到兩只C57B16成年雄性小鼠中。第21天將這些小鼠處死，取出其脾臟，并從中制 得淋巴細(xì)胞。將這些淋巴細(xì)胞與來自未免疫的C57B16小鼠的淋巴細(xì)胞一起于微量滴定板 的單獨(dú)孔中和經(jīng)CMV-GFP基因預(yù)先轉(zhuǎn)染并以大約1 1比例表達(dá)GFP的Β16細(xì)胞(C57B16 背景)共同培養(yǎng)7天。接著將來自這些共同培養(yǎng)物的細(xì)胞按效應(yīng)細(xì)胞(共同培養(yǎng)的淋巴細(xì) 胞)與靶細(xì)胞1000 1的比例，用于標(biāo)準(zhǔn)CTL分析。對(duì)CTL分析而言，首先將另外的表達(dá)GFP的Β16細(xì)胞在放射標(biāo)記的鉻酸鈉(51Cr) 中培養(yǎng)，洗滌并用作靶細(xì)胞。然后將這些靶細(xì)胞分別和來自兩只經(jīng)過疫苗接種小鼠的受激 淋巴細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組)，與來自兩只未免疫C57B16小鼠的受激淋巴細(xì)胞(對(duì)照組)，及單獨(dú)的 RPMI培養(yǎng)基(自發(fā)釋放組)和含有2% Triton X 100的RPMI培養(yǎng)基(最大釋放組)培 養(yǎng)4小時(shí)。通過計(jì)算這些培養(yǎng)物經(jīng)適度離心后獲得上清液等分試樣的放射性，測(cè)定這些培 養(yǎng)物各自的放射性，該放射性是由于細(xì)胞釋放內(nèi)部51Cr引起的(測(cè)定細(xì)胞裂解)。最大釋 放組的平均計(jì)數(shù)是5160. 5CPM，自發(fā)釋放組的平均計(jì)數(shù)是2941. 5CPM，對(duì)照組的平均計(jì)數(shù)是 3015. 5CPM，實(shí)驗(yàn)組的平均計(jì)數(shù)是5175. 5CPM。這些結(jié)果明顯地顯示了珠載體疫苗接種的小 鼠產(chǎn)生了強(qiáng)烈的針對(duì)其疫苗接種的細(xì)胞毒T-淋巴細(xì)胞(CTL)響應(yīng)，在該CTL分析中實(shí)現(xiàn)了 100%靶細(xì)胞裂解。當(dāng)按照上述操作，除了用于最終CTL分析中的淋巴細(xì)胞是直接取自接種疫苗的小 鼠脾臟，而未與GFP表達(dá)細(xì)胞共同培養(yǎng)一個(gè)星期以外，準(zhǔn)確重復(fù)該試驗(yàn)時(shí)，CTL分析顯示當(dāng) 效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞的比例僅為100 1時(shí)，這些未受激淋巴細(xì)胞可引起34%靶細(xì)胞的溶解。 這種未通過共同培養(yǎng)預(yù)刺激的CTL活性很不尋常，它表明珠載體疫苗接種引起了異常強(qiáng)烈 的免疫應(yīng)答。
實(shí)施例5本實(shí)施例說明了從系統(tǒng)中省略溶酶體逃避組分后僅可獲得低水平的表達(dá)。為制得用于本實(shí)施例的珠載體，將來自Gene Therapy System的GeneGrip位點(diǎn)重 復(fù)寡聚核苷酸克隆進(jìn)T7T7/T7GFP載體中。然后采用生物素pGeneGrip PNA標(biāo)記對(duì)上述T7 載體進(jìn)行標(biāo)記，以形成T7T7/T7GFP載體/pGeneGrip PNA構(gòu)建體。接著，將由合適比例的 抗生物素蛋白鏈菌素包被的Dynabeads與T7T7/T7GFP載體/pGeneGripPNA結(jié)構(gòu)接觸。粗 略洗滌后，將珠體與T7RNA聚合酶混合，并于冰中溫育30分鐘，以獲得T7T7/T7GFP載體/ pGeneGrip PNA 珠載體。如實(shí)施例2所述制備巨噬細(xì)胞。然后，按細(xì)胞與珠載體的不同比例，將T7T7/T7GFP 載體/pGeneGrip PNA珠載體添加進(jìn)培養(yǎng)物中。震蕩培養(yǎng)板以使載體均勻分布于培養(yǎng)物中。 每天在熒光顯微鏡下監(jiān)測(cè)GFP的表達(dá)。隔天更換培養(yǎng)基。只檢測(cè)到非常少的細(xì)胞似乎有微 弱的GFP表達(dá)。微弱的綠色熒光可以用肉眼通過顯微鏡看到，在顯微照片中卻很難或不可 能看到，或者在這些顯微照片中難以或不可能從本底熒光中區(qū)分該表達(dá)水平。也采用了抗 GFP抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色以測(cè)定GFP的表達(dá)水平?？梢詸z測(cè)到GFP的表達(dá)水平，但非 常低。實(shí)施例6本實(shí)施例說明了人類單核細(xì)胞于體外特異性地?cái)z取本發(fā)明的珠載體。細(xì)胞分化為 樹突細(xì)胞后，繼續(xù)表達(dá)高水平的GFP。因而說明了珠載體可被單核細(xì)胞吞噬，并且不干擾其 成熟為樹突細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)中，將人類外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞與實(shí)施例1的Ad-GFP載體接觸。然后在含 有 10% FBSU000U/ml IL-4 和 800U/ml GMCSF 的 RPMI1640 中培養(yǎng)該混合物 7 天。7 天后， 50%的細(xì)胞表達(dá)高水平的GFP。分化細(xì)胞具有樹突細(xì)胞特有的形態(tài)。
權(quán)利要求
一種用于定向進(jìn)入單核細(xì)胞的組合物，包括(i)編碼抗原或治療性蛋白質(zhì)的核酸(ii)溶酶體逃避組分及(iii)可被吞噬的微粒，其中所述的溶酶體逃避組分是病毒或病毒的組分。
2.權(quán)利要求1的組合物，進(jìn)一步含有核酸保護(hù)組分。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組分選自精蛋白、聚精氨酸、聚賴氨酸、組蛋白、組蛋 白樣蛋白質(zhì)、合成聚陽離子聚合物或具有合適包裝序列的逆轉(zhuǎn)錄病毒的核心蛋白，所述包 裝序列包括在RNA序列中。
4.一種將生物材料定向運(yùn)送進(jìn)單核細(xì)胞的方法，包括單核細(xì)胞與權(quán)利要求1的組合物 接觸。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述單核細(xì)胞為樹突細(xì)胞或巨噬細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明載體特異性地導(dǎo)向進(jìn)入單核細(xì)胞來源的細(xì)胞。該載體由核酸組分、溶酶體逃避組分及可被吞噬的微粒組成。由于該載體本身，或經(jīng)該載體預(yù)處理過的細(xì)胞對(duì)單核細(xì)胞是特異性的，所以它們可用于所有基因藥物應(yīng)用中。本發(fā)明載體尤其適于疫苗應(yīng)用。由于單核細(xì)胞具有靶定腫瘤的能力，因此本發(fā)明載體也適用在包括常規(guī)基因治療的抗腫瘤應(yīng)用中。
文檔編號(hào)A61P33/00GK101897983SQ201010166979
公開日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2002年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2001年3月30日
發(fā)明者T·E·瓦納, X·于 申請(qǐng)人:格林維爾醫(yī)院系統(tǒng)公司