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尖頂羊肚菌顆粒沖劑及其制備方法和用途的制作方法

文檔序號(hào):584142閱讀:528來源:國知局
專利名稱:尖頂羊肚菌顆粒沖劑及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物技術(shù)和藥學(xué)領(lǐng)域,具體涉及一種尖頂羊肚菌(Morchella conica) 顆粒沖劑以及其制備方法;還涉及該產(chǎn)品在延緩衰老方面的新用途。
背景技術(shù)
尖頂羊肚菌多糖是一種重要的抗衰老功能產(chǎn)品素材,但其多糖的生理效應(yīng)不明 確,產(chǎn)品開發(fā)也較遲緩,將多糖制成膠囊產(chǎn)品,有較高的現(xiàn)實(shí)意義和實(shí)踐價(jià)值。宋娟娜等在 顆粒成型工藝研究中加入一定的輔料發(fā)現(xiàn)顆粒的成型性、溶解性及抗?jié)裥远加兴鰪?qiáng)(宋 娟娜等,2008),表明對(duì)多糖添加一定輔料,可提高多糖穩(wěn)定性,降低其吸濕性。尖頂羊肚菌 粗多糖通常具有較強(qiáng)的吸濕性,易吸收空氣中的水分,結(jié)塊、甚至霉變,從而影響藥品的質(zhì) 量和療效,為了降低其吸濕性而便于儲(chǔ)藏,一般加入適量的輔料與之混合。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種制作簡單、成本低且吸濕率小、穩(wěn)定性好的尖頂羊肚菌 顆粒沖劑。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法。本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供上述尖頂羊肚菌顆粒沖劑在延緩衰老藥物或保健 食品中的應(yīng)用。本發(fā)明的上述目的通過以下方案予以實(shí)現(xiàn)—種尖頂羊肚菌顆粒沖劑,以尖頂羊肚菌胞外多糖提取物為主要原料,并添加 定的輔料,其中輔料應(yīng)具有良好的流動(dòng)性,吸濕性低、易成型,有潤濕性,有利于崩解與溶 出,不影響指標(biāo)成分的溶出,不與指標(biāo)成分相互作用,且不影響療效,以可溶性淀粉、糊精等 為輔料效果較好,該顆粒沖劑乳白色,易溶于水。通過測定配方的成型性、吸濕率、休止角和 溶解度等,確定原料的質(zhì)量配比為尖頂羊肚菌胞外多糖提取物β-環(huán)糊精糊精可溶性 淀粉甜蜜素=0.5 0.5 5 0.1 4 0.1 2 0. 01 0. 08。優(yōu)選地,所述原料質(zhì)量配比為,尖頂羊肚菌胞外多糖提取物β-環(huán)糊精糊 精可溶性淀粉甜蜜素=0.5 1 4 1 0.04。在外觀、融化性具有良好的效果,加 入糊精的處方所制顆粒成型性好,溶解后無沉淀產(chǎn)生,單獨(dú)用糊精制得的顆粒成型性一般, 不易完全溶解;可溶性淀粉的粘合性大,在形成顆粒有較大的作用。上述尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法,其步驟如下(1)將尖頂羊肚菌胞外多糖提取物與β -環(huán)糊精、糊精、可溶性淀粉、甜蜜素按質(zhì) 量比0.5 0.5 5 0.1 4 0. 1 2 0. 01 0. 08混合攪勻;(2)用乙醇制成軟材;(3)55 60°C干燥,過篩整粒,制得尖頂羊肚菌顆粒沖劑。優(yōu)選地,步驟(1)所述尖頂羊肚菌胞外多糖提取物β -環(huán)糊精糊精可溶性 淀粉甜蜜素=0.5 1:4: 1 0.04。
優(yōu)選地,步驟(2)所述乙醇的體積分?jǐn)?shù)為75%。優(yōu)選地,步驟(3)所述過篩是過14目篩;所述干燥溫度為55°C。所述尖頂羊肚菌胞外多糖提取物的制備方法,包括如下步驟(1)將尖頂羊肚菌液體發(fā)酵液濃縮至原體積的1/3 1/6,得到濃縮液,濃縮溫度 為 50 70°C ;(2)濃縮液采用Sevage法去蛋白、離心,得到去蛋白后的活性提取液;(3)去蛋白后的活性提取液用1 5倍體積的95%乙醇在0 10°C透析沉降濃縮 液中的多糖12 25小時(shí),pH值為4 8,靜置析出絮狀白色物質(zhì),再離心分離得到白色沉 淀,冷凍干燥,制得尖頂羊肚菌胞外多糖提取物。所述步驟(2)SerVge法去蛋白、離心在濃縮液中加入0. 2倍體積的氯仿正丁醇混 合液(氯仿、正丁醇體積比為5 1),在恒溫磁力攪拌器上劇烈攪拌30分鐘,溫度25°C,用 Sigma臺(tái)式冷凍離心機(jī),溫度4°C,以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘,回收上清液,棄去蛋白層 及有機(jī)溶液。所述步驟(3)離心條件為轉(zhuǎn)速4000-5000rpm、時(shí)間20-30min,其中優(yōu)選轉(zhuǎn)速 4000rpm、時(shí)間 20min。最佳醇提條件發(fā)酵液濃縮至原體積的1/5,濃縮溫度為60°C,用4倍體積的95% 乙醇進(jìn)行醇析,醇析時(shí)間25小時(shí),pH值為6。所述尖頂羊肚菌液體發(fā)酵液是經(jīng)過尖頂羊肚菌(Morchella conica)液體發(fā)酵培 養(yǎng),得到發(fā)酵物,再通過離心和真空抽濾分離菌絲體,獲得的發(fā)酵液。所述離心條件優(yōu)選轉(zhuǎn) 速 4000rpm、時(shí)間 IOmin。所述尖頂羊肚菌(Morchella conica)液體發(fā)酵培養(yǎng)是將尖頂羊肚菌(Morchella conica)接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng),其液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖150g,硝酸 銨 6g,ΚΗ2Ρ043· 0g, MgSO4 · 7Η20 3. 0g,維生素 B10. 3g,加蒸餾水定容至 3000ml。所述發(fā)酵培養(yǎng)的步驟是(1)取100ml所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基,經(jīng)滅菌后,在其中接 入3個(gè)直徑約為4mm的尖頂羊肚菌菌絲塊,在25 28°C,轉(zhuǎn)速130 160rpm,避光恒溫振 蕩培養(yǎng)6 8天,得到液體菌種;(2)將上述液體菌種接入3L滅菌后的所述液體發(fā)酵培養(yǎng) 基中,培養(yǎng)溫度為25 28°C,轉(zhuǎn)速為130 160rpm,培養(yǎng)5 9天,得到發(fā)酵物,備用。由上述方法制備得到的尖頂羊肚菌胞外多糖提取物,經(jīng)苯酚硫酸法測定含總糖 84. 0%左右,經(jīng)DNS比色法測定含還原糖25. 7%左右,經(jīng)考馬斯亮蘭法測定含蛋白507%左 右ο上述尖頂羊肚菌顆粒沖劑可以用于延緩衰老方面,其使用劑量為1962mg/ kg · d (含150mg/kg · d尖頂羊肚菌胞外多糖提取物)。本發(fā)明對(duì)上述制備所得尖頂羊肚菌顆粒沖劑進(jìn)行小鼠延緩衰老功效測試。用該提 取物對(duì)D-半乳糖所致衰老模型小鼠進(jìn)行灌胃,觀察其對(duì)小鼠大腦超氧化物歧化酶(SOD)活 性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)含量的影響。結(jié)果表明654mg/kg*d的 顆粒沖劑使雄性小鼠血清中的S0D、GSH-Px含量分別提高了 60. 71% (P < 0. 01)和66. 62% (P < 0.01),使雌性衰老小鼠腦組織中的MDA含量降低了 32.67% (P < 0.01) ; 1962mg/ kg · d的多糖顆粒沖劑使雌性衰老小鼠血清中的SOD和GSH-Px含量增加了 99.66% (P < 0. 01)和89. 99% (P < 0. 01) ; 165mg/kg · d和55mg/kg · d的多糖膠囊可顯著增加雄性小鼠血清中的SOD、GSH-Px含量(P < 0.01),使雌性衰老小鼠腦組織中的MDA含量分別降 低了 27. 58% (P < 0. 01)和 34. 29% (P < 0. 01)。與現(xiàn)有的技術(shù)相比,本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果本發(fā)明的尖頂羊肚菌胞外多糖顆粒沖劑,通過多糖提取物與各輔料按適當(dāng)比例制 得,此法制得的多糖沖劑為無糖型沖劑,它以多糖為功能成分,以可溶性淀粉為稀釋劑,以 甜蜜素為甜味劑。甜蜜素具有高甜度、低熱能、無毒性以及無副作用等特點(diǎn),且熱量僅為蔗 糖的1/1000,甜度為蔗糖的40倍。制備過程簡單,條件易控制。此多糖顆粒的儲(chǔ)存時(shí)間明顯 延長,且易溶于水;本發(fā)明制成無糖顆粒劑與含糖沖劑相比,具有溶解性好、防潮、無異味、 高療效等特點(diǎn),可適用于糖尿病人和肥胖患者,擴(kuò)大了使用范圍,且具有良好的延緩衰老作 用。


圖1為尖頂羊肚菌顆粒沖劑對(duì)小鼠SOD、GSH-Px和MDA生化指標(biāo)的影響圖(注Y 軸表示各組與模型組比較,SOD、GSH-Px增加的百分比以及MDA減少的百分比)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步具體詳細(xì)描述,但本發(fā)明的實(shí)施方 式不限于此,對(duì)于未特別注明的工藝參數(shù),可參照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。尖頂羊肚菌胞外多糖提取物的制備方法如下(1)尖頂羊肚菌GIM5. 70 (Morchella conica)(廣東省微生物菌種保藏中心購 買),經(jīng)斜面或平板菌種培養(yǎng)、液體振蕩培養(yǎng)和液體發(fā)酵培養(yǎng),得到發(fā)酵液。具體的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件如下①斜面或平板菌種培養(yǎng)培養(yǎng)基配方為,馬鈴薯200g,葡萄糖20g,蛋白胨lg, (NH4) 2S042g,MgSO4 · 7H20 lg, KH2PO4Ig,瓊脂 20g,加蒸餾水定容至 1000ml, pH 調(diào)至 6. 5 ;然 后接入1個(gè)直徑約為4mm的尖頂羊肚菌菌絲塊,26°C培養(yǎng)14天,置于4°C保存?zhèn)溆?。②液體振蕩培養(yǎng)以NH4NO3作為氮源,葡萄糖或可溶性淀粉作為碳源,以及初始PH 和接種量作為考察因素最終確定合成培養(yǎng)基配方為葡萄糖50g,硝酸銨2g,KH2PO4L Og, MgSO4 ·7Η20 l.Og,維生素B 10. lg,加蒸餾水定容至lOOOmL,自然pH值;培養(yǎng)條件為取 IOOmL上述合成培養(yǎng)基裝入250mL三角瓶,在121°C滅菌30分鐘,并接入3個(gè)直徑約為4mm 的尖頂羊肚菌菌絲塊在25°C,轉(zhuǎn)速160rpm,避光恒溫振蕩培養(yǎng)7天,得到液體菌種。③液體發(fā)酵培養(yǎng)將液體培養(yǎng)基3L (葡萄糖150g,硝酸銨6g,KH2P043. 0g, MgSO4 · 7H20 3. 0g,維生素B 10. 3g,加蒸餾水定容至3000ml)轉(zhuǎn)入5L發(fā)酵罐培養(yǎng),再接入 IOOmL上述液體菌種,培養(yǎng)溫度為25°C,轉(zhuǎn)速為130rpm,培養(yǎng)7天,即可得到菌絲體豐富,菌 球豐富、均勻,顏色微黃的發(fā)酵物,備用。(2)將發(fā)酵物通過離心和真空抽濾分離菌絲體,獲得澄清的發(fā)酵液。①離心Sigma臺(tái)式冷凍離心機(jī),以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘。②真空抽濾真空抽濾,使菌絲體與發(fā)酵液分離,得發(fā)酵液,備用。(3)濃縮發(fā)酵液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將發(fā)酵液在60°C的恒溫水浴鍋中減壓濃縮至原體 積的1/5。
(4)去蛋白、離心=Sevage法去蛋白,加入0. 2倍體積的氯仿正丁醇混合液(氯仿、 正丁醇體積比為5 1),在恒溫磁力攪拌器上劇烈攪拌30分鐘,溫度25°C ;用Sigma臺(tái)式 冷凍離心機(jī),溫度4°C,以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘,回收上清液,棄去蛋白層及有機(jī)溶
液,重復(fù)多次。(5)將去蛋白后的活性提取液加入其4倍體積的95%乙醇在4°C透析沉降25h,調(diào) PH值為6,靜置過夜,析出絮狀白色物質(zhì),以4000rpm、20分鐘離心分離得到白色沉淀,冷凍 干燥,即制得目標(biāo)產(chǎn)物尖頂羊肚菌胞外多糖提取物。尖頂羊肚菌胞外多糖提取物,經(jīng)苯酚硫酸法測定含總糖84. 0 %,經(jīng)DNS比色法測 定含還原糖25.7%,經(jīng)考馬斯亮蘭法測定含蛋白5. 07 %。實(shí)施例1一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法,取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精lg、糊精4g、可溶性淀粉2g、甜蜜素0. 04g混合攪勻,用75%乙醇制成軟材,用 14目篩粒,55°C干燥,得顆粒,再過14目篩整粒,分裝每袋5g,即得到尖頂羊肚菌顆粒沖劑, 該顆粒沖劑乳白色,易溶于水。實(shí)施例2一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法,取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精lg、糊精4g、可溶性淀粉lg、甜蜜素0. 04g混合攪勻,用75%乙醇制成軟材,用 14目篩粒,55°C干燥,得顆粒,再過14目篩整粒,分裝每袋5g,即得到尖頂羊肚菌顆粒沖劑。 該顆粒沖劑為乳白色,易溶于水,總糖含量為7. 65% (折算成多糖含量為3. 81 % ),與多糖 提取物相比,能明顯降低多糖的吸濕性。同時(shí)在溶解性和流動(dòng)性方面也具有良好的效果。實(shí)施例1、2的對(duì)照試驗(yàn)如下,對(duì)照1、2及實(shí)施例1、2的原料配方參見表1。表1原料配方 (1)顆粒沖劑的溶解性、粒度(成型性)、外觀及口感試驗(yàn)顆粒劑的質(zhì)量檢查標(biāo)準(zhǔn)(應(yīng)符合《中國藥典》2005版I部附錄IC顆粒劑頂下規(guī) 定)。顆粒粒度不能通過一號(hào)篩(10目)與能通過五號(hào)篩(80目)的總和不得超過供試量 的15%。實(shí)驗(yàn)得到的顆粒在15-28目之間的顆粒多于50%者,為成型性好;顆粒80%在 15-60目之間者,為成型性一般。溶解性標(biāo)準(zhǔn)好是指易溶于水;較好是指可溶于水;較差是 指較難溶于水。表1中四種配方配制的顆粒沖劑的試驗(yàn)結(jié)果參見表2。表2尖頂羊肚菌顆粒沖劑的外觀、成型性、溶解性及口感
由表2可見,多糖提取物、β _環(huán)糊精、糊精、可溶性淀粉、甜蜜素按照 0.5 1 4 1 0.04的比例混合攪勻后,在外觀、粒度(成型性)、溶解性和口感方面 都具有良好的效果,實(shí)施例2的效果最好,性質(zhì)穩(wěn)定,口感適中,服用攜帶方便。實(shí)施例1的 效果較好,能達(dá)到要求的標(biāo)準(zhǔn)。而對(duì)照1和2中分別缺少糊精和可溶性淀粉,效果均較差, 不符合標(biāo)準(zhǔn)。(2)休止角的測定休止角用固定漏斗法來測定。將3只漏斗自下而上串聯(lián)固定于水平放置的坐標(biāo)紙 上方,使最下面的漏斗的下口距坐標(biāo)紙的距離控制在0. 5 1. 5cm。小心將顆粒沖劑沿漏斗 壁倒入最上面的漏斗,直到漏斗下形成的圓錐體的尖端接觸到漏斗的出口為止。由直尺測 出高度,坐標(biāo)紙測出圓錐底部的直徑,按此法反復(fù)定測定3次,計(jì)算出休止角tana = h/r。 表1中四種配方配制的顆粒沖劑的休止角參見表3。表3顆粒沖劑的休止角
休止角 休止角越小,摩擦力越小,流動(dòng)性越好。由表3可見,實(shí)施例2的休止角 在四個(gè)處方中平均值最小,說明按照多糖、環(huán)糊精、糊精、可溶性淀粉、甜蜜素= 0.5 1 4 1 0.04的比例混合攪勻后,其流動(dòng)性相對(duì)較大,對(duì)照2不加入淀粉,休止 角最大,說明可溶性淀粉會(huì)一定程度的增大休止角,反而使流動(dòng)性變差。(3)吸濕百分率的測定將燒杯烘至恒重,冷卻后準(zhǔn)確稱重,加入混勻后的顆粒,使燒杯底部勻攤厚2mm的顆粒沖劑,105°C烘約5h,使其至恒重,取出,干燥器冷卻,準(zhǔn)確稱量。將烘至恒重的藥粉瓶放 在相對(duì)濕度為78%,溫度為22°C的人工氣候箱內(nèi),于1、2、3、5、15h定時(shí)稱量。按下式計(jì)算 吸濕百分率,每個(gè)處方平行做2份,吸濕率(%)=(吸濕后藥粉重量-吸濕前藥粉重量)/ 吸濕前藥粉重量X 100%。表1中四種配方配制的顆粒沖劑及純多糖的吸濕百分率參見表4。表4顆粒沖劑的吸濕百分率
濕率(%) 由表4可見,隨著時(shí)間的延長,吸濕率增大。結(jié)果表明15小時(shí)期間里,實(shí)施例2 的吸濕率最低;實(shí)施例1的吸濕率在前四組顆粒沖劑中最大,15小時(shí)期間內(nèi)吸濕率達(dá)到 14. 32%。多糖提取物放置在相同外界條件下,15小時(shí)的吸濕率為20. 08%,明顯高于前四 組顆粒沖劑的吸濕率,從而說明加入輔料后能有效降低多糖的吸濕率,有利于多糖的儲(chǔ)存。實(shí)施例3一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法,取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精4g、糊精0. lg、可溶性淀粉0. 3g、甜蜜素0. 04g混合攪勻,用75%乙醇制成軟材, 用14目篩粒,55°C干燥,得顆粒,再過14目篩整粒,分裝每袋5g,即得到尖頂羊肚菌顆粒沖 劑,該顆粒沖劑乳白色,易溶于水。實(shí)施例4—種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法,取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精lg、糊精0. Sg、可溶性淀粉0. lg、甜蜜素0. 04g混合攪勻,用75%乙醇制成軟材, 用14目篩粒,55°C干燥,得顆粒,再過14目篩整粒,分裝每袋5g,即得到尖頂羊肚菌顆粒沖 劑,該顆粒沖劑乳白色,易溶于水。實(shí)施例5一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法,取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精0. 5g、糊精2g、可溶性淀粉lg、甜蜜素0. Olg混合攪勻,用75%乙醇制成軟材,用 14目篩粒,55°C干燥,得顆粒,再過14目篩整粒,分裝每袋5g,即得到尖頂羊肚菌顆粒沖劑, 該顆粒沖劑乳白色,易溶于水。該顆粒沖劑在成型性、溶解性、流動(dòng)性、外觀及口感方面均較 好,吸濕率與實(shí)施例3相近。實(shí)施例6一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法,取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精5g、可溶性淀粉0. 5g、甜蜜素0. 08g混合攪勻,用75 %乙醇制成軟材,用14目篩粒,55°C干燥,得顆粒,再過14目篩整粒,分裝每袋5g,即得到尖頂羊肚菌顆粒沖劑,該顆粒 沖劑乳白色,易溶于水。該顆粒沖劑在成型性、溶解性、流動(dòng)性、外觀及口感方面均較好,吸 濕率與實(shí)施例2相近。實(shí)施例7尖頂羊肚菌顆粒沖劑延緩衰老作用的實(shí)驗(yàn)(所用尖頂羊肚菌顆粒沖劑是由實(shí)施 例2制備的)尖頂羊肚菌顆粒沖劑延緩衰老作用的實(shí)驗(yàn)(高劑量)(1)昆明種小鼠,SPF級(jí),體重20士2克,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購買,合 格證號(hào)SCXK (粵)2008-0020。將小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、造模組、陽性對(duì)照組、尖頂羊肚 菌多糖提取物高劑量組,每組10只,雌雄各半,自由進(jìn)食和飲水,造模組、陽性對(duì)照組、高劑 量組每天腹腔注射劑量為120mg/kg. d的D-半乳糖溶液0. 2mL,空白對(duì)照組注射等量的生理 鹽水,連續(xù)注射42天。高劑量組分別灌胃尖頂羊肚菌多糖提取物濃度為1962mg/kg · d的 顆粒沖劑(含150mg/kg · d多糖提取物),陽性對(duì)照組灌胃濃度為800mg/kg · d的維生素 E,空白對(duì)照組和造模組分別灌胃生理鹽水,各組小鼠的灌胃量均為0. 2mL。(2)實(shí)驗(yàn)周期42天,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,用黃嘌呤氧化酶法測定小鼠腦的SOD活性,硫代 巴比妥酸法測定小鼠腦MDA含量,谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)法測GSH-Px活力。尖頂羊肚菌顆粒沖劑延緩衰老作用的實(shí)驗(yàn)(低劑量)(1)昆明種小鼠,SPF級(jí),體重20士2克,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購買,合 格證號(hào)SCXK (粵)2008-0020。將小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、造模組、陽性對(duì)照組、尖頂羊肚 菌多糖提取物高劑量組,每組10只,雌雄各半,自由進(jìn)食和飲水,造模組、陽性對(duì)照組、高劑 量組每天腹腔注射劑量為120mg/kg · d的D-半乳糖溶液0. 2mL,空白對(duì)照組注射等量的生 理鹽水,連續(xù)注射42天。高劑量組分別灌胃尖頂羊肚菌多糖提取物濃度為654mg/kg-d的 顆粒沖劑(含50mg/kg · d多糖提取物),陽性對(duì)照組灌胃濃度為800mg/kg · d的維生素E, 空白對(duì)照組和造模組分別灌胃生理鹽水,各組小鼠的灌胃量均為0. 2mL。(2)實(shí)驗(yàn)周期42天,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,用黃嘌呤氧化酶法測定小鼠腦的SOD活性,硫代 巴比妥酸法測定小鼠腦MDA含量,谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)法測GSH-Px活力。上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如表5和圖1所示。表5尖頂羊肚菌顆粒沖劑對(duì)小鼠SOD、GSH-Px, MDA等生化指標(biāo)的影響 與模型組比較*=P < 0. 05 ;** =P < 0. 01 ;與空白組比較,Δ =P < 0. 05 ;ΔΔ =P < 0. 01 (P是指幾組數(shù)據(jù)之間的差異性)。從表5可知,1962mg/kg · d的顆粒沖劑可增加雌、雄衰老小鼠血清的SOD、GSH-Px 的含量,雄性小鼠血清SOD,GSH-Px的含量的增加率分別為52. 24% (P < 0. 05)和29. 37% (P < 0. 01),雌性小鼠血清SOD、GSH-Px的含量的增加率分別為99. 66% (P < 0. 01)和 89. 99% (P< 0. 01) ;654mg/kg'd的顆粒沖劑可增加雌、雄衰老小鼠S0D、GSH_Px的含量,使 雄性衰老小鼠SOD,GSH-Px的含量分別提高了 60. 71% (P < 0. 01)和66. 62% (P < 0. 01), 使雌性衰老小鼠腦組織中的MDA含量降低了 32. 67% (P < 0. 01)。由圖1可見,尖頂羊肚菌顆粒沖劑能增加衰老小鼠血清中的SOD和GSH-Px活力, 能起到延緩小鼠衰老的作用。試驗(yàn)組對(duì)小鼠血清中SOD的活力影響較為顯著??傮w上分 析,高顆粒組的抗衰老能力強(qiáng)于低顆粒組,發(fā)現(xiàn)具有性別的差異,就血清中的抗氧化效果而 言,尖頂羊肚菌顆粒沖劑對(duì)雄性小鼠的延緩衰老作用較強(qiáng);腦組織中MDA含量的影響而言, 則雌性優(yōu)于雄性。實(shí)施例8尖頂羊肚菌顆粒沖劑急性毒理試驗(yàn),所用尖頂羊肚菌顆粒沖劑是由實(shí)施例2制備 的。(1)給藥途徑使用灌胃方式(2)根據(jù)多糖提取物的小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果和給藥最大濃度,最大體積的具體量及分組, 每只灌胃量為為0.4ml/只,分兩次灌胃。尖頂羊肚菌顆粒沖劑的濃度為0.5g/mL,即每只 小鼠的灌胃劑量為20g/kg · d0(3)昆明種小鼠,SPF級(jí),體重20士2克,由中山醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購買,合格 證號(hào)SCXK (粵)2009-0011。小鼠20只,(5\早各半,以最大濃度,最大體積,一日二次灌胃, 灌胃前禁食不禁水12h,分兩次灌胃給藥,中間間隔4h,給藥組分別灌胃多糖溶液,空白對(duì)照組灌胃蒸餾水,體積皆為0. 4ml/只,觀察兩周。(4)配制藥液溶劑生理鹽水。(5)詳細(xì)記錄動(dòng)物異常反應(yīng),寫出動(dòng)物死亡原因,病理變化。每次試驗(yàn)灌胃給藥后,詳細(xì)記錄小鼠行為、活動(dòng)、攝食、飲水、體重、死亡等客觀反 應(yīng),給藥14日后結(jié)束實(shí)驗(yàn),進(jìn)行小鼠解剖,病理檢查重要臟器(心、肝、脾、肺、腎),觀察臟器 組織變化,如有死亡和解剖發(fā)現(xiàn)異常病變需作組織形態(tài)學(xué)檢查。20g/kg · d進(jìn)行小鼠最大耐受量實(shí)驗(yàn),灌胃尖頂羊肚菌顆粒沖劑后,小鼠活動(dòng)、行 為未見異常,攝食量無明顯差異。從表6可見,各項(xiàng)指數(shù)無異常,各鼠14日內(nèi)無死亡及其他 異常發(fā)生。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)小鼠進(jìn)行檢測,小鼠心、肝、脾、肺、腎等器官經(jīng)肉眼觀察未見異常 改變。因此尖頂羊肚菌顆粒沖劑在20g/kg · d和10g/kg · d的劑量下對(duì)小鼠無毒或毒性很 低,小鼠經(jīng)口給藥的最大安全劑量在20g/kg*d以上,折算為人的口服劑量為11.08g,小鼠 的最大耐受量為人口服劑量的126倍。尖頂羊肚菌顆粒沖劑在小鼠實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮良好的抗衰 老效果,此研究說明該功能食品具有很好的開發(fā)生產(chǎn)價(jià)值。表6尖頂羊肚菌顆粒沖劑對(duì)小鼠脾指數(shù)、腦指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響
上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式,但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制,其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化, 均應(yīng)為等效的置換方式,都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑,其特征在于,所述尖頂羊肚菌顆粒沖劑的原料質(zhì)量配比為,尖頂羊肚菌胞外多糖提取物β 環(huán)糊精∶糊精∶可溶性淀粉∶甜蜜素=0.5∶0.5~5∶0.1~4∶0.1~2∶0.01~0.08。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尖頂羊肚菌顆粒沖劑,其特征在于,所述尖頂羊肚菌顆粒沖 劑的原料質(zhì)量配比為,尖頂羊肚菌胞外多糖提取物環(huán)糊精糊精可溶性淀粉甜 蜜素=0. 5 1 4 1 0. 04。
3.一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法,其特征在于,其包括如下步驟將尖頂羊肚菌胞外多糖提取物與環(huán)糊精、糊精、可溶性淀粉、甜蜜素按質(zhì)量比 0.5 0.5 5 0.1 4 0. 1 2 0. 01 0. 08混合攪勻;用乙醇制成軟材;55 60°C干燥,過篩整粒,制得尖頂羊肚菌顆粒沖劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于,所述乙醇的體積分?jǐn)?shù)為75%。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于,所述過篩是過14目篩。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于,所述干燥溫度為55°C。
7.權(quán)利要求1或2所述的尖頂羊肚菌顆粒沖劑在延緩衰老藥物或保健食品中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,所述尖頂羊肚菌顆粒沖劑的使用劑量為 1962mg/kg · d。
全文摘要
本發(fā)明公開一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑及其制備方法和用途。該顆粒沖劑以尖頂羊肚菌胞外多糖提取物為主要原料,再添加適量的輔料制成。其制備方法為將尖頂羊肚菌胞外多糖提取物與β-環(huán)糊精、糊精、可溶性淀粉、甜蜜素按質(zhì)量比0.5∶0.5~5∶0.1~4∶0.1~2∶0.01~0.08混合攪勻,用75%乙醇制成軟材,用14目篩粒55℃干燥,得顆粒,過篩整粒。本發(fā)明的顆粒沖劑制備過程簡單,條件易控制,其儲(chǔ)存時(shí)間明顯延長,且易溶于水;制成顆粒沖劑與含糖沖劑相比,具有溶解性好、防潮、去其味和提高療效等特點(diǎn),可適用于糖尿病人和肥胖患者,擴(kuò)大了使用范圍,且具有良好的延緩衰老作用。
文檔編號(hào)A23L1/30GK101926834SQ20101020251
公開日2010年12月29日 申請日期2010年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月13日
發(fā)明者蘭瑛, 張松, 潘志福 申請人:華南師范大學(xué)
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