專利名稱：利用凝乳酶制備酪蛋白抗氧化肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，利用酶化法生成酪蛋白抗氧化肽，具體的說是利用凝乳酶酶化生成酪蛋白抗氧化肽。
背景技術(shù)：
研究發(fā)現(xiàn)，人類的許多疾病如心肌梗死，動脈硬化，癌癥，骨質(zhì)疏松癥和肥胖等都 與氧化有關(guān)。因此，通過攝入具有抗氧化活性的物質(zhì)可降低體內(nèi)的自由基含量，防止氧化反 應(yīng)的發(fā)生，提高機體對疾病的抵抗能力。抗氧化劑可分為天然抗氧化劑與合成抗氧化劑，丁 基羥基茴香醚和2，6_ 二叔丁基對甲酚等合成的化學(xué)抗氧化劑通常作為食品添加劑用在食 品工業(yè)上，用于防止食品的氧化變色或者因氧導(dǎo)致的品質(zhì)劣變，但由于合成抗氧化劑具有 一定的毒性和致癌作用，對人體健康存在著潛在的危險，因此更安全的天然抗氧化劑成為 近來研究的熱點。生物活性肽由于其特定的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)決定其是蛋白質(zhì)中最有前途的抗氧 化物質(zhì)。目前制備抗氧化肽底物多源自膠原蛋白、玉米蛋白、大豆蛋白。主要方法為酶解和 微生物發(fā)酵，常用的酶包括消化道蛋白酶，微生物和植物來源的酶，如胃蛋白酶和胰蛋白酶 等。制備抗氧化肽的技術(shù)難點為蛋白的限制性水解，特定的氨基酸排列順序與組成決定了 其抗氧化效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是，以酪蛋白為底料，通過酶化法生成高效高產(chǎn)率的酪蛋白抗氧化 肽。本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的，所采用的技術(shù)方案為提供一種制備酪蛋白抗氧化肽的 制備方法方法(1)將酪蛋白溶于蒸餾水中，置電磁攪拌器上，至充分溶解；(2) Imol氫氧化鈉將上述溶液調(diào)節(jié)pH至8. 0(3)將預(yù)熱后的酶制劑加入上述溶液。(4)水解反應(yīng)30min-90min后100°C滅酶15min，生成酪蛋白水解物。(5)調(diào)節(jié)酪蛋白水解物PH值至等電點4. 6，離心分離后采用超濾，得到酪蛋白肽。根據(jù)本發(fā)明所述的一種制備蛋白抗氧化肽一優(yōu)選技術(shù)方案所使用的酶制劑為凝 乳酶。根據(jù)本發(fā)明所述的一種制備蛋白抗氧化肽一優(yōu)選技術(shù)方案所使用的酶制劑按 2% -10%的比例加入。本發(fā)明的有益效果在于1、酪蛋白肽濃度為lOmg/mL時，二苯代苦味?；罡咔宄蕿?0. 94%，酪蛋白肽 濃度為8mg/mL時，羥自由基清除率最高為73. 33%。2、抗氧化效果明顯并且沒有合成抗氧化劑的毒害作用和致癌作用。
3、凝乳酶制備的小分子量抗氧化肽羥自由基清除率明顯高于胃蛋白酶，枯草桿菌酶和木瓜蛋白酶制備的抗氧化肽。4、本發(fā)明凝乳酶制備抗氧化肽經(jīng)濟方便，效果顯著，并且具有較高的自由基清除 能力，易于實現(xiàn)。
具體實施例方式實施例1稱取12. 5g酪蛋白溶于200mL蒸餾水中。置電磁攪拌器上，待充分溶解后用Imol 氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至8.0。將預(yù)熱后的酶制劑-凝乳酶按2. 5%的比例加入。水解反應(yīng)時間 60min后100°C滅酶15min停止酶解反應(yīng)，生成酪蛋白水解物。調(diào)節(jié)酪蛋白水解物pH至4. 6 去除酶解物中大分子物質(zhì)，3500r/min離心15min。采用截留分子量3000，1000超濾膜進行 分級分離，獲得三組抗氧化肽溶液。以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式
，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此， 任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其 發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種制備酪蛋白抗氧化肽的方法，其特征在于制備酪蛋白肽的工藝為(1)將酪蛋白溶于蒸餾水中，置電磁攪拌器上，至充分溶解；(2)1mol氫氧化鈉將上述溶液調(diào)節(jié)pH至8.0(3)將預(yù)熱后的酶制劑加入上述溶液。(4)水解反應(yīng)30min-90min后100℃滅酶15min，生成酪蛋白水解物。(5)調(diào)節(jié)酪蛋白水解物PH值至等電點4.6，離心分離后采用超濾，得到酪蛋白肽。
2.根據(jù)權(quán)利1所述一種制備酪蛋白肽的方法，其特征在于所使用的酶制劑為凝乳酶。
3.根據(jù)權(quán)利1所述一種制備酪蛋白肽的方法，其特征在于所使用的酶制劑按 2% -10%的比例加入。
全文摘要
本發(fā)明采用凝乳酶專一性作用于酪蛋白獲得具有較高自由基清除率的酪蛋白抗氧化肽，具有抗癌，抗誘導(dǎo)和抗衰老等生物活性，在食品工業(yè)、醫(yī)藥等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用而且作為食品和機體的抗氧化劑，為保健食品的開發(fā)提供了一個有前途的基料。研究表明在pH8.0，溫度50℃，E/S＝2.5％，S％＝6％，水解時間為60min時，酪蛋白肽的抗氧化效果即對二苯代苦味?；罡咔宄蕿?0.94％，羥自由基清除率最高為73.33％。
文檔編號C12P21/06GK101824457SQ201010119909
公開日2010年9月8日 申請日期2010年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月3日
發(fā)明者牟光慶, 王際輝, 錢方, 陳東平 申請人:大連工業(yè)大學(xué)