專利名稱：一種玉米mapk基因的啟動子及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物MAI3K基因的啟動子，尤其涉及玉米MAI3K基因的啟動子及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
玉米是全球最為重要的糧食作物之一。干旱是限制全球玉米生產(chǎn)的主要環(huán)境因 素。據(jù)保守估計，僅在熱帶地區(qū)，由于干旱造成的玉米損失每年至少達2000萬噸，損失率至 少為17%。另據(jù)保守估計，玉米占我國糧食總產(chǎn)量國糧食作物產(chǎn)量構(gòu)成的21. 1%。多年 來，在國家攻關(guān)計劃中，玉米育種目標歷來強調(diào)優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、多抗性，但實際在考核時是以玉 米產(chǎn)量為硬指標，這在客觀上將會誘導(dǎo)育種專家忽視玉米育種的品質(zhì)與適應(yīng)性。此外，玉米 的抗旱性狀是一個多基因控制的數(shù)量性狀，抗旱機制十分復(fù)雜，因此對其了解有限，在客觀 上又導(dǎo)致了玉米抗旱育種的困難。長期以來，國內(nèi)外寄希望于旱脅迫響應(yīng)基因的鑒定及其表達研究作為突破口解析 玉米的抗旱機制。隨著DNA芯片或微陣列技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，已發(fā)現(xiàn)了大量植物旱脅迫響 應(yīng)基因及各種基因表達譜，這些基因的表達具有明顯的時、空特異性、組織特異性和條件特 異性，形成一個復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控系統(tǒng)，但是對于這些響應(yīng)基因表達調(diào)節(jié)機制仍然未做出合 理的解釋。大量研究表明，基因表達的時、空特異性、組織特異性和條件特異性在很大程度上 取決于基因的啟動子。不同基因的啟動子的構(gòu)成變化較大，例如一般認為由核糖核酸(RNA， Ribonucleic Acid)聚合酶II識別的啟動子含一個TATA盒和或一個控制特異性轉(zhuǎn)錄起始 的啟動因子。多年以來，TATA盒被認為是控制基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄機制的主要的核心元件，但是許多 其它基因的啟動子缺乏TATA盒元件而含一個啟動因子，即使是同一啟動子，由于啟動子內(nèi) 部的后生的變化(印igenetic alteration)，例如甲基化或超甲基化會導(dǎo)致不同基因的轉(zhuǎn) 錄效應(yīng)。此外，許多基因，特別是一些家族基因在功能域上沒有明顯差別，但是其轉(zhuǎn)錄過程 卻十分不同，例如人類和鼠類的熱激轉(zhuǎn)錄因子HSF1，HSF2，HSF3和HSF4，其中HSFl和HSF3 與熱激蛋白的表達有關(guān)，HSF2對經(jīng)典的應(yīng)激物無任何反應(yīng)，HSF4雖然與HSFl和HSF2相似， 但是以組織特異性方式進行表達，原因之一是這些熱激轉(zhuǎn)錄因子HSFs各自的啟動子中的 熱激元件不同。此外，由于玉米的許多性狀例如抗逆性狀受多基因控制，依靠轉(zhuǎn)化單一基因很難 實現(xiàn)玉米全株的系統(tǒng)性抗性。研究證明，轉(zhuǎn)化少量的基因很難賦予作物符合生產(chǎn)需要的抗 性性狀，國際上也嘗試同時轉(zhuǎn)化2個以上的基因，此外，由于受限于目前的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，嘗 試同時轉(zhuǎn)化2個以上基因的成功者寥寥無幾。絲裂原活化蛋白激酶(MAPK，Mitogen-Activated Protein Kinase)是存在于所有 真核生物中的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要因子，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)了 至少有4個MAPK亞家族。它們在生物體內(nèi)通過對蛋白質(zhì)磷酸化和去磷酸化而起著信號傳 遞和級聯(lián)放大作用，能夠響應(yīng)多種環(huán)境脅迫信號，例如冷和干旱、鹽和創(chuàng)傷等。植物體內(nèi)已 發(fā)現(xiàn)多個能夠同時響應(yīng)包括干旱在內(nèi)的多種脅迫的MAH(類激酶，例如在紫花苜蓿細胞中MAPK，煙草細胞中類似SIMK的SII3K和擬南芥的MAPK和MAPKKK?？梢灶A(yù)測的是，該類基因 的啟動子與其它基因的結(jié)合可以改變基因?qū)Νh(huán)境的表達響應(yīng)方式或者能夠使基因?qū)δ撤N 環(huán)境的特異性反應(yīng)。國內(nèi)外對玉米基因的啟動子的研究已取得了一定的進展。2009年1月7日，啟 動子專用數(shù)據(jù)庫中(The Eukaryotic Promoter Database)中收錄的植物啟動子共有198 個，其中玉米的啟動子有21個。已報道的21個玉米啟動子包括了 11個醇溶蛋白基因啟動 子，2個集光蛋白基因的啟動子，1個蔗糖合酶基因啟動子，1個尿苷二磷酸(UDP，Uridine Diphosphate)-葡萄糖-淀粉葡糖基轉(zhuǎn)移酶基因啟動子，3個花青素合成相關(guān)基因啟動子，2 個醇脫氫酶基因啟動子和1個熱激蛋白記憶啟動子。目前，國內(nèi)外對于旱脅迫響應(yīng)的植物MAI3K基因的啟動子研究尚未予以重視，沒有 關(guān)于MAH(基因的啟動子的研究報道。在早期的研究中，本實驗室對旱脅迫下玉米表達基因 的EST進行了大規(guī)模測序分析、制作了 11855基因的cDNA微陣列，用該微陣列大規(guī)模分析 了旱脅迫下苗期玉米的基因表達，發(fā)現(xiàn)了旱脅迫下具有顯著上調(diào)表達特征的MAHi基因(數(shù) 據(jù)未顯示)。因此，該MAPK基因啟動子的克隆為進一步闡明玉米旱脅迫下的基因表達網(wǎng)絡(luò) 調(diào)節(jié)和抗旱機制提供理論依據(jù)，在轉(zhuǎn)基因玉米抗旱育種研究中的表達載體的構(gòu)建中也具有 潛在的應(yīng)用價值。參考文獻李晚忱，榮廷昭Q000)我國21世紀玉米遺傳育種工程技術(shù)展望，玉米科學(xué)8 10-14.徐亞維，柴曉杰，王丕武，左艷亭，呂品Q006)玉米淀粉分支酶sbe II b基因啟動 子的克隆和表達載體構(gòu)建，玉米科學(xué)，14 :84-87.張世煌，胡瑞法Q000)玉米育種目標的誘導(dǎo)創(chuàng)新因素，玉米科學(xué)，8 3-7.Becker A, Theissen G(2003)The major clades of MADS-box genes and theirrole in the development and evolution of flowering plants. Mol Phyl Evol 29,464-489.Bray EA, Bailey-Serres J, Weret i Inyk E (2000) Responses to abioticstresses. Chapter 22. In W Gruissem, B Buchannan, R Jones, eds, Responses toAbiotic Stresses. American Society of Plant Physiologists, Rockville, MD, ppll58-1249.Bruce WB, Edmeades GO, Barker TC (2002) Molecular and physiologicalapproaches to maize improvement for drought tolerance. J Exp Bot 53 :13-25.Comelli RN, Viola IL, Gonzalez DH (2009) Characterization of promoterelements required for expression and induction by sucrose of the ArabidopsisC0X5b-1 nuclear gene,encoding the zinc-binding subunit of cytochrome c oxidase. Plant Mol Biol. Jan 1.Durieux AC,Bonnefoy R,Freyssenet D (2005)Kinetic of transgeneexpression after electrotransfer into skeletal muscle importance of promoterorigin/ strength. Biochim Biophys Acta. 1725(3) :403-409.
Hoagland DR, Arnon DA (1938)The water-culture method of growing plantswithout soil.California Agricultural Experiment Station Circular. 347 1-32.Hoisington D(2001)Application of biotechnology to maize improvement Past， Present and Future Prospects. Seventh Eastern and Southern Africa RegionalConference，pp.7-11.Jefferson RA(1987)Assaying chimeric genes in plants :the GUS gene fusionsystem. Plant Mol Biol Rep，5 :387-405.Kim K N， Fisher DK(1998)Molecular cloning and characterization of theAmyIose-Extender gene encoding starch branching enzyme II B in maize. Plant MolBiol，38 :945-956.Liu YGiMitsukawa N，Oosumi T，et al. (1995)Efficient isolation andmapping of Arabidopsis thaliana T-DNA insert junctions by thermal asymmetricinterlaced PCR. Plant J. 8 (3) :457-462.Pirkkala L， Nykanen P，Sistonen L (2001) Roles of the heat shock transcriptionfactors in regulation of the heat shock response and beyond. FASEB J. 15(7) :1118-1131.Wang W, Vinocur B， Altman A(2003)Plant responses to drought, salinity andextreme temperatures towards genetic engineering for stress tolerance. Planta218 :1-14Welchen E, Viola IL, Kim HJ, Prendes LP, Comelli RN, Chan Hong J, Gonzalez DH(2008)A segment containing a G_box and an ACGT motif confersdifferential expression characteristics and responses to the Arabidopsis Cytc-2 gene， encoding an isoform of cytochrome c. J Exp Bot. Dec 19Wong J, Liang V CT, Sachs L Μ. , and Shi YB (1998) Transcription from thethyroid hormone-dependent promoter of the Xenopus laevis thyroid hormonereceptor bA gene requires a novel upstream element and the initiator，but not aTATA box. Journal of Biological Chemistry, 273 :14186-14193.Zare M, Jazii FR, Alivand MR, Nasseri NK, Malekzadeh R, Yazdanbod M(2009) Qualitative analysis of Adenomatous Polyposis Coli promoter :hypermethylation， engagement and effects on survival of patients with esophagealcancer in a high risk region of the world,a potential molecular marker. BMC Cancer. 9 :24.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種玉米MAH(基因的啟動子及其應(yīng)用，能夠 響應(yīng)多種環(huán)境脅迫信號，以構(gòu)建多種環(huán)境脅迫信號誘導(dǎo)響應(yīng)的基因表達載體。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種玉米MAH(基因啟動子是下列核苷酸 序列之一(1)序列表中序列1的DNA序列；
(2)與所述序列1限定的DNA序列具有85%以上一致性的DNA序列。優(yōu)選地，所述基因啟動子含有多種環(huán)境脅迫信號響應(yīng)的DNA序列元件。優(yōu)選地，所述多種環(huán)境脅迫信號響應(yīng)的DNA序列元件包括1個銅響應(yīng)元件(copper -responsive element)；4 個光口向應(yīng)元件(light-responsive element)；1 個缺水 / 光響應(yīng)元件(dehydration/light-responsive element)；2 個鹽或病原菌菌應(yīng)元件(salt/pathogen-responsive element)；2個與轉(zhuǎn)錄速率相關(guān)的TATA盒(TATAAAT或者TAATA)；1個病原菌菌應(yīng)元件(pathogen -responsive element)；1 個甲基茉莉酸(MeJA-responsive element)響應(yīng)元件；1 個倉丨J傷口向應(yīng)元件(wound-responsive element)；1個具有類似于TATA盒作用的CAAT盒(CAAT box)。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如前所述的玉米MAH(基因啟動子在轉(zhuǎn)基 因抗逆植物育種方面的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述基因啟動子用于構(gòu)建包括干旱、冷、鹽、病菌、光、重金屬和創(chuàng)傷中的 一種或多種誘導(dǎo)響應(yīng)的載體，從而應(yīng)用于所述轉(zhuǎn)基因抗逆植物育種。本發(fā)明提供的源于玉米可被缺水誘導(dǎo)表達的MAHi基因的啟動子，該啟動子中含 有干旱(或缺水)、脫落酸(ABA，ABscisic Acid)、K+流入、冷、鹽、病菌、光、糖、重金屬和創(chuàng) 傷響應(yīng)的DNA序列元件，因而可能會在玉米受到干旱(或缺水)、ABA、K+流入、冷、鹽、病菌、 光、糖、重金屬和創(chuàng)傷脅迫條件下誘導(dǎo)啟動基因的表達。該啟動子與現(xiàn)有已報導(dǎo)的玉米基因 啟動子幾乎沒有同源性，故是本發(fā)明新發(fā)現(xiàn)的一種玉米基因的啟動子，它在轉(zhuǎn)基因植物抗 逆育種中具有重要意義。


圖1為本發(fā)明運用染色體步移克隆玉米MAPK基因啟動子的方法實施例流程圖；圖2為染色體步移PCR擴增MAPK基因上游的染色體DNA片段；圖3為本發(fā)明克隆的玉米MAPK基因啟動子(Pro36N)的DNA序列及其預(yù)測性的含 響應(yīng)元件；圖4為檢測玉米MAPK基因啟動子的表達構(gòu)建的方法；圖5為擴增的玉米MAPK基因啟動子(Pro36N)的啟動葡糖苷酸酶(⑶S， glucuronidase)基因表達的組織化學(xué)染色檢測。
具體實施例方式本發(fā)明提供的源于玉米絲裂原活化蛋白激酶(MAPK，Mitogen-ActivatedProtein Kinase)的基因的啟動子，含有干旱、冷、鹽、病菌、光、重金屬和創(chuàng)傷響應(yīng)的DNA序列元件， 能夠在植物受到干旱、冷、鹽、病菌、光、重金屬和創(chuàng)傷脅迫條件下誘導(dǎo)啟動基因的表達，因 而在轉(zhuǎn)基因植物抗逆育種中具有重要意義。該啟動子與現(xiàn)有已報到的基因啟動子幾乎沒有 同源性，因而是一種新發(fā)現(xiàn)的植物基因的啟動子。以下結(jié)合附圖和優(yōu)選實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行詳細地闡述。以下例舉的實施例僅僅用于說明和解釋本發(fā)明，而不構(gòu)成對本發(fā)明技術(shù)方案的限制。在本發(fā)明的實施例中所用到的材料包括MAI3K基因的表達序列標簽(ESTs)序列來自本實驗室玉米EST測序計劃研究課題， 并提交于美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)的基因庫(GenBank，索引號為EC857736)。大腸桿菌(Escherichia coll)株DH5 α為本實驗室保存。限制性內(nèi)切酶、Τ4連接酶和PCR擴增DNA克隆載體pGEM-T easy Vector購自 Promega 公司。X-gluc (進口分裝)及凝膠DNA回收試劑盒購自恒因生物公司。DNA Marker、普通 Taq 酶等購自 Fermentas 公司。膠回收試劑盒和PCR產(chǎn)物純化試劑盒購自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefacien)菌株 LBA4404、植物表達載體 pCambial301 和三親本結(jié)合中的用作輔助質(zhì)粒DNA在菌體間轉(zhuǎn)移的輔助質(zhì)粒PRK2073為本實驗室收集保存。染色體步移試劑盒Genome Walking Kit購自TAKARA公司；玉米MAI3K基因的EST 的染色體定位采用植物基因組學(xué)網(wǎng)站(Plant⑶B，其網(wǎng)址為http://WWW. plantgdb. org/) 數(shù)據(jù)庫中的BLASTN-HTG程序。MAH(基因啟動子的DNA測序委托上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進 行?；蜣D(zhuǎn)錄起始位點的預(yù)測采用NNPP version 2. 2程序(http //www. fruitfly. org/seq_tools/promoter. html)進行。植物基因啟動子常規(guī)性順勢調(diào)控元件預(yù)測按照 PlantCARE(http//bioinformatics. psb. ugent. be/webtools/plantcare/html/)禾口PLACE (PlantCis-acting Regulatory DNA Elements,http://www. dna. affrc. go. jp/PLACE/)數(shù) 據(jù)庫中提供的方法進行。植物的培養(yǎng)采用水培法，培養(yǎng)液為Hoagland溶液(Hoagland and Arnonl938)。農(nóng)桿菌和大腸桿菌培養(yǎng)基為普通的LA(蛋白胨10克、酵母粉5克、NaC15克，瓊脂 粉15克，水1000毫升，ρΗ7. 0)和LB (未加瓊脂粉的LA)培養(yǎng)基。第一輪染色體步移PCR擴增中所用的3條特異性引物為SPl :5’ -ACGTACTCCGTCATCATGTCGCTCTC-3，，SP2 :5’ -ACGTTGGCGGAGTGGATGTACTTGAG-3，，SP3 :5’ -TTGGACCGGATGATGTGTGCAG-3，。第二輪步移PCR擴增中所用的3條特異性引物為Pro-SPl :5，-GCGCTGTGCAGGATCAAATTAAGAG-3，，
Pro-SP2 5，-GTCCAACCAATCAATCCATGCCCATC-3，，Pro-SP3 :5， -TGCAGTTCGCGAGAACGTACCAGAC-3’?；虮磉_的組織化學(xué)檢測采用Jefferson(1987)的方法。實施例1如圖1所示，為本發(fā)明的克隆玉米MAHi基因啟動子的方法實施例流程，包括如下 步驟10 將玉米MAPK基因的EST序列定位在玉米的染色體上；根據(jù)PlantGDB (http //www. plantgdb. org/)數(shù)據(jù)庫中的免費 BLASTN-HTG 程序分析，將玉米MAPK基因的EST序列定位在玉米的9號染色體上。20 將定位的染色體步移；染色體步移PCR擴增采用TAIL-PCR(Liu et al.，1995)擴增策略，每次擴增出的 DNA片段見圖2，在T4連接酶作用下克隆到pGEM-T easy Vector質(zhì)粒載體上進行測序。30 將染色體步移產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物與含有報告基因的植物基因表達載體連接；在T4連接酶作用下，對克隆到pGEM-T easy Vector質(zhì)粒載體進行測序，獲得玉米 MAPK基因啟動子(編號為Pro36N)的DNA序列。40 檢測報告基因的表達，并對玉米MAPK基因的啟動子的DNA片段進行鑒定。上述鑒定包括對克隆的玉米MAPK基因啟動子的DNA序列及其所含響應(yīng)元件序列 進行預(yù)測。按照圖1所示方法流程獲得獲得了一段序列特異性PCR擴增的DNA片段(如圖2 所示)，即玉米MAI3K基因啟動子的DNA片段，經(jīng)測序確定其長387bp，如圖3所示。采用神經(jīng) 網(wǎng)絡(luò)啟動子預(yù)測程序版本 2. 2 (Neural Network PromoterPrediction, NNPP version 2. 2) 預(yù)測MAPK基因的轉(zhuǎn)錄起始位點，利用PlantCARE和PLACE數(shù)據(jù)庫中提供的方法預(yù)測分析， 發(fā)現(xiàn)該DNA區(qū)段包含以下響應(yīng)的DNA序列元件1 個銅口向應(yīng)兀件(copper-responsive element)；4 個光口向應(yīng)元件(light-responsive element)；1 個缺水 / 光響應(yīng)元件(dehydration/light-responsive element)；2 個鹽或病原菌菌應(yīng)元件(salt/pathogen-responsive element)；2個與轉(zhuǎn)錄速率相關(guān)的TATA盒(TATAAAT或者TAATA)；1 個病原菌菌應(yīng)元件(pathogen-responsive element)；1 個甲基茉莉酸(MeJA-responsive element)響應(yīng)元件；1 個倉丨J傷口向應(yīng)元件(wound-responsive element)；1個具有類似于TATA盒作用的CAAT盒(CAAT box)。玉米MAI3K基因啟動子的DNA序列如序列1所示。實施例2帶有玉米MAPK基因啟動子(Pro36N)的轉(zhuǎn)β -葡糖醛酸酶(⑶S， β -Glucuronidase)基因表達載體的構(gòu)建及其⑶S基因表達檢測克隆在pGEM-T easy Vector質(zhì)粒載體上的擬啟動子DNA片段，通過&ilI/Nco I 雙酶切并回收。pCAmbial301經(jīng)Mll/Nco I雙酶切去除⑶S基因前的35S啟動子DN。在 連接酶作用下將Ml I/Nco I雙酶切的擬啟動子DNA片段和pCAmbial301連接構(gòu)建新的重 組質(zhì)粒。用同樣的辦法構(gòu)建出帶有花生的一段672bp的非啟動子DNA的重組質(zhì)粒作為陰性 對照質(zhì)粒，見圖4。構(gòu)建出的重組質(zhì)粒通過三親結(jié)合(含有輔助質(zhì)粒PRK2073的大腸桿菌DH5 α，含 有重組質(zhì)粒的大腸桿菌DH5 α以及農(nóng)桿菌LBA4404菌體之間)導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA4404菌體。 利用一次性注射器(帶有4#針頭)將培養(yǎng)至0D_ = 0. 6帶有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌LBA4404 菌體注射入三葉期玉米葉脈。l/5H0agland營養(yǎng)液^°C，1 光照/Mh，培養(yǎng)2d后按照 Jefferson (1987)的方法進行組織化學(xué)染色。組織化學(xué)染色具體方法為將浸泡于X-gluc 染色液(IOOmM(pH 7. 0)磷酸緩沖液；0. 1 % (V/V)Triton-X 100 ；IOmM EDTA ；0. 5mg/mlX-Gluc ；1% (V/V) 二甲基亞砜)中，37°C過夜，70%乙醇脫色。組織染色結(jié)果見圖5。構(gòu)建出的重組質(zhì)粒通過三親結(jié)合(含有輔助質(zhì)粒PRK2073的大腸桿菌DH5 α，含 有重組質(zhì)粒的大腸桿菌DH5 α以及農(nóng)桿菌LBA4404菌體之間)導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA4404菌體。 利用一次性注射器(帶有4#針頭)將培養(yǎng)至0D_ = 0. 6帶有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌LBA4404 菌體注射入三葉期玉米葉脈。l/5H0agland營養(yǎng)液，12h光照/Mh，培養(yǎng)2天后按照 Jefferson(1987)的方法進行組織化學(xué)染色。組織化學(xué)染色具體方法為將浸泡于x-gluc染色液(IOOmM (pH 7. 0)磷酸緩沖液； 0. 1% (V/V) Triton-X 100 ； IOmM EDTA ；0. 5mg/ml X-Gluc ；1% (V/V) 二甲基亞砜)中，37°C 過夜，70%乙醇脫色。組織染色結(jié)果見圖5。其中A 陰性對照。利用花生的一段672bp非啟動子DNA取代了 pCambia1301上⑶S基 因的上游CaMV35S啟動子的質(zhì)粒構(gòu)建。B 原始的pCambial301陽性對照。C 將染色體步移PCR擴增出的玉米MAPK基因啟動子(Pro36N)。擴增的ft~o36N啟 動子(含起始密碼子，總長387bp)取代了植物表達pCambial301上⑶S基因的上游CaMV35S 啟動子的構(gòu)建。檢測采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)侵染玉米葉片的瞬時表達并結(jié)合組織化學(xué)染色的方法。組織 化學(xué)染色的結(jié)果，參見圖5C，表明ftx)36N能夠啟動報告基因gus的表達，是一個真實的啟動子。本實施例的目的是驗證玉米MAPK基因啟動子ftx)36N能夠啟動報告基因gus的表 達，是一個真實的啟動子。基因序列表序列1 玉米MAPK基因的啟動子DNA序列1 TGCAGTTCGCGAGAACGTACCAGACGAGCCCTACCCGCCGTCGGATCCG 4950 AACAGCTTCCCTTCCATCAGATTCAGAGCGCCGTCCCGCTCACTTTCTC 9899 GCTACCTTCCTCAGCCGGAGTCGTGGGCAGAGCAGAGCGATCGAGGCCTG 148149 CTTCAGCAGTTCAGCTGCAGCCGCCGCCCGCCCGTCCCCCAGTCCCCAC 196197 CTTCTTTTATAAATCCCACGCCTGCGCTTCCTCTTTTGACGAATCGGTC 245246 GCGAGAGGAGAAACATAGGAGTCAATTAATTTGCCTGTTCTGCTTGCTG 294295 CTGACCTTGTGAGTGAGCCGCCGGTCTTCCCCTTCCTCGCCGAGGGGAA 343344 ATAATAAGGCAGCCACAGCCAGGGCCGCCCCGAGGAAGAAGATG 38權(quán)利要求
1.一種玉米MAH(基因啟動子是下列核苷酸序列之一(1)序列表中序列1的DNA序列；(2)與所述序列1限定的DNA序列具有85%以上一致性的DNA序列。
2.按照權(quán)利要求1所述的基因啟動子，其特征在于，含有多種環(huán)境脅迫信號響應(yīng)的DNA 序列元件。
3.按照權(quán)利要求2所述的基因啟動子，其特征在于，所述多種環(huán)境脅迫信號響應(yīng)的DNA 序列元件包括1 個銅口向應(yīng)兀件(copper-responsive element)； 4 個光口向應(yīng)元件(light-responsive element)；1個缺水 / 光口向應(yīng)元件(dehydration/light-responsive element)；2個鹽或病原菌菌應(yīng)元件(salt/pathogen-responsive element)； 2個與轉(zhuǎn)錄速率相關(guān)的TATA盒(TATAAAT或者TAATA)；1 個病原菌菌應(yīng)兀件(pathogen-responsive element)； 1個甲基茉莉酸(MeJA-responsive element) 口向應(yīng)元件； 1 個創(chuàng)傷口向應(yīng)兀件(wound-responsive element)； 1個具有類似于TATA盒作用的CAAT盒(CAAT box)。
4.權(quán)利要求1所述的玉米MAH(基因啟動子在轉(zhuǎn)基因抗逆植物育種方面的應(yīng)用。
5.按照權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述基因啟動子用于構(gòu)建含有干旱、冷、 鹽、病菌、光、重金屬和創(chuàng)傷中的一種或多種誘導(dǎo)響應(yīng)的載體，從而應(yīng)用于所述轉(zhuǎn)基因抗逆 植物育種。
全文摘要
本發(fā)明披露了一種玉米MAPK基因的啟動子及其應(yīng)用，其中玉米MAPK基因的啟動子是一種能夠響應(yīng)多種環(huán)境脅迫信號的啟動子，其核苷酸序列如序列表中序列1所示，或者，是與序列1達到85％以上一致性的基因啟動子的DNA序列；該啟動子用于構(gòu)建包括干旱、冷、鹽、病菌、光、重金屬和創(chuàng)傷中的一種或多種誘導(dǎo)響應(yīng)的載體，從而應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因抗逆植物育種。
文檔編號C12N15/82GK102134569SQ20101010048
公開日2011年7月27日 申請日期2010年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月25日
發(fā)明者唐紀良, 李有志, 秦會娟, 范憲偉, 馬慶生 申請人:廣西大學(xué)