專利名稱：一種靶向抗前列腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種靶向抗前列腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因，具體涉及一種靶向抗前列 腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的制備方法，屬基因治療技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
前列腺癌是男性生殖系統(tǒng)最常見惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率有逐年上升趨 勢(shì)。大量調(diào)查資料顯示，在我國前列腺癌的發(fā)病率與相關(guān)死亡人數(shù)也呈逐年上升趨勢(shì)，對(duì)前 列腺癌的診斷和治療也成了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的一項(xiàng)重要研究內(nèi)容。目前，有關(guān)前列腺癌基因治療 的治療策略很多。因?yàn)槎鄶?shù)治療方法沒有較好的特異性，不能直接針對(duì)前列腺癌細(xì)胞，所以 其臨床應(yīng)用有限。眾所周知，人體的免疫反應(yīng)具有抗腫瘤作用，它通過細(xì)胞免疫機(jī)能捕獲和 消滅機(jī)體內(nèi)新生的腫瘤細(xì)胞。而引起腫瘤發(fā)生的最終因素都可以歸結(jié)為機(jī)體免疫效應(yīng)細(xì)胞 在數(shù)量和質(zhì)量上不足以激發(fā)起有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答。因此，從治療上講，有效的抗腫瘤策 略(1)增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)，主要是提高腫瘤局部活化的免疫效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)量，其中 主要組織相容性復(fù)合物限制性的細(xì)胞毒T細(xì)胞(即殺傷性T細(xì)胞)是最重要的免疫監(jiān)視和 效應(yīng)細(xì)胞。(2)采取有效手段直接殺死腫瘤細(xì)胞。超抗原是一組細(xì)菌或病毒編碼的蛋白質(zhì)分子，可不需要抗原提呈細(xì)胞提呈作用， 以完整的蛋白質(zhì)分子形式直接與抗原提呈細(xì)胞膜的主要組織相容性復(fù)合物-II類分子抗 原結(jié)合槽外側(cè)結(jié)合并且提呈給T細(xì)胞。超抗原-主要組織相容性復(fù)合物-II類分子復(fù)合物 僅與T細(xì)胞抗原受體β鏈的V區(qū)相結(jié)合，由于人類V0基因有20余種，故超抗原激活的T 細(xì)胞克隆數(shù)可達(dá)普通抗原的數(shù)千倍乃至數(shù)萬倍。超抗原的抗腫瘤作用主要是由SAg依賴的 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用來完成，這是超抗原抗腫瘤的主要作用。再者，超抗原激活的CD4+T 細(xì)胞還可以分泌多種足量的細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α、腫瘤壞死因子-β和腫瘤壞 死因子_ Y、白介素_2、白介素_6等，直接或間接地殺傷腫瘤細(xì)胞。超抗原作為一種新型 的抗腫瘤治療模式，近年來研究進(jìn)展很快，主要集中在超抗原直接抗腫瘤作用、超抗原靶向 抗腫瘤作用、以及超抗原的基因治療等方面。金黃色葡萄球菌腸毒素A(Staphyl0CC0llal enterotoxin, SEA)是目前研究最多的超抗原。但是無論是單用超抗原進(jìn)行抗腫瘤治療還 是目前抗體靶向的超抗原抗腫瘤治療，都還有很多需要克服的困難單用超抗原治療的缺 陷也是非常明顯的，即超抗原介導(dǎo)的殺傷性T細(xì)胞主要?dú)饕M織相容性復(fù)合物-II陽 性的腫瘤細(xì)胞，對(duì)主要組織相容性復(fù)合物-II陰性的腫瘤細(xì)胞殺傷作用較弱，但腫瘤細(xì)胞 主要組織相容性復(fù)合物-II陽性率一般都很低，并具有明顯的異質(zhì)性，因此，單純的超抗原 抗腫瘤的效果不理想，且難以避免對(duì)機(jī)體主要組織相容性復(fù)合物-II陽性的正常細(xì)胞造成 的毒副作用。而單抗與超抗原的融合蛋白活化的T細(xì)胞是金黃色葡萄球菌腸毒素A反應(yīng) 性的，并不是腫瘤特異性的T細(xì)胞。故此類超抗原-單克隆抗體的融合蛋白尚缺乏抗瘤的 廣譜性和特異性，其誘導(dǎo)的靶向抗腫瘤免疫應(yīng)答并不盡如人意。基因治療最關(guān)鍵的措施是選擇一個(gè)合適高效的載體將其導(dǎo)入靶器官內(nèi)。目前在腫瘤基因治療載體的研究中仍以病毒載體為主。溶瘤腺病毒是通過對(duì)已知腺病毒進(jìn)行改造， 得到的能過對(duì)腫瘤基因表型的缺陷產(chǎn)生特異性殺傷作用及起到抗腫瘤藥物的靶向性載體 作用的病毒。因溶瘤腺病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷作用具有特異性和安全性，所以成為被普遍看 好的生物學(xué)治療腫瘤的新技術(shù)。腫瘤細(xì)胞在自我擴(kuò)增時(shí)會(huì)相對(duì)正常細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)一些異常表 達(dá)的產(chǎn)物，這些產(chǎn)物可以刺激一些基因的表達(dá)，從而刺激細(xì)胞或者病毒的擴(kuò)增。這些能夠與 腫瘤表達(dá)的異常分子結(jié)合并啟動(dòng)下游基因表達(dá)的基因片段，稱之為腫瘤特異性啟動(dòng)子。在 構(gòu)建溶瘤腺病毒的過程中，腫瘤特異性啟動(dòng)子對(duì)腺病毒的基因組進(jìn)行改造也是當(dāng)今研究的 熱點(diǎn)之一。通過腫瘤特異性增強(qiáng)子調(diào)控腺病毒復(fù)制，達(dá)到增強(qiáng)病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的感染能力。 端粒酶在大多數(shù)惡性腫瘤細(xì)胞中處于激活狀態(tài)而在正常細(xì)胞中卻沒有活性或活性很低，是 目前所報(bào)道最為廣譜的腫瘤生物分子標(biāo)記。人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶是維持端粒內(nèi)活性所必需的 催化亞單位，它的表達(dá)調(diào)控在轉(zhuǎn)錄水平上。利用端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子來調(diào)控病毒復(fù)制增 殖所必需的基因，理論上可使病毒選擇性在端粒酶陽性的腫瘤細(xì)胞中增殖。如果以端粒酶 逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子取代ElA基因自身的啟動(dòng)子，就能使ElA基因的達(dá)限制在腫瘤細(xì)胞中，而在 正常細(xì)胞中不表達(dá)。近年來，前列腺癌特異性的分子標(biāo)志物一前列腺特異性抗原已成為前列腺癌臨床 研究中的熱點(diǎn)之一。前列腺特異性抗原的表達(dá)與前列腺癌關(guān)系密切，在前列腺癌的早期診 斷、基因治療、預(yù)后評(píng)估中所起的作用變得越來越重要。血清前列腺特異性抗原的測定在前 列腺癌的普查、早期診斷和病情預(yù)測中意義重大，已被廣泛應(yīng)用于臨床，成為我國PCa診療 指南中首選的檢測項(xiàng)目。前列腺特異抗原是人前列腺組織中的特異的由前列腺上皮細(xì)胞分 泌的單鏈蛋白，由于前列腺特異抗原幾乎只在前列腺癌組織中表達(dá)，所以該基因的啟動(dòng)子 具有高度的組織特異性。因此，利用這種蛋白轉(zhuǎn)錄的調(diào)控序列來構(gòu)建組織特異性載體，使治 療基因在前列腺癌中選擇性的表達(dá)，以期達(dá)到專一殺傷前列腺腫瘤細(xì)胞的目的。溶瘤腺病 毒治療腫瘤作為一種腫瘤治療的新方法，雖然有其內(nèi)在的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，但它依然存在一些有 待解決的問題，主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面首先，對(duì)腫瘤的特異性殺傷能力還有待提高。目前通過對(duì)腺病毒ElB的處理可以 對(duì)P53存在缺陷的腫瘤細(xì)胞達(dá)到靶向溶瘤的作用，研究結(jié)果表明對(duì)一部分早期腫瘤細(xì)胞， 他們相對(duì)正常細(xì)胞的異型性小，腺病毒作用很弱，對(duì)于這部分細(xì)胞的處理還只能依賴于聯(lián) 合放、化療的作用來殺傷腫瘤，所以溶瘤腺病毒對(duì)于這部分腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷較弱。其次，由于用于溶瘤的腺病毒作為體外物質(zhì)被引進(jìn)體內(nèi)，機(jī)體必然會(huì)產(chǎn)生針對(duì)病 毒的防御作用，從而出現(xiàn)發(fā)熱、注射局部反應(yīng)、流感樣癥狀、白細(xì)胞下降、血小板下降、肝腎 功能異常、脫發(fā)、惡心嘔吐等不良反應(yīng)，這些不良反應(yīng)的出現(xiàn)說明機(jī)體本身的免疫反應(yīng)對(duì)病 毒產(chǎn)生作用，這樣就會(huì)使病毒滴度有所下降，病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用自然會(huì)減弱。另外，病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞作用的第一步是能夠特異性親嗜腫瘤細(xì)胞表面的一些免疫 分子，但腫瘤細(xì)胞有時(shí)并不表達(dá)這類分子，不能被病毒感染。在腫瘤基因治療中的應(yīng)用卻受 到了 C族腺病毒天然特性的制約，部分原因是由于在惡性腫瘤中C族腺病毒受體的表達(dá)量 較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種靶向抗前列腺腫瘤的
4表達(dá)超抗原基因的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的制備方法，運(yùn)用基因工程技術(shù)，將超抗原SEA基因 克隆入溶瘤腺病毒載體中，限制其只在前列腺腫瘤細(xì)胞內(nèi)增殖、表達(dá)，達(dá)到靶向殺傷前列腺 腫瘤細(xì)胞的目的，以前列腺特異性抗原啟動(dòng)子和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子來調(diào)控腫瘤特異性 增殖腺病毒載體，攜帶超抗原SEA基因片段，并命名為SG504-SEA，其既具有在腫瘤細(xì)胞內(nèi) 特異性增殖能力又具有強(qiáng)大細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞刺激能力。本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種靶向抗前列腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因的雙 調(diào)控溶瘤腺病毒，其特征是它包括溶瘤腺病毒部分和超抗原部分，所述的溶瘤腺病毒部分 包括溶瘤腺病毒穿梭質(zhì)粒SG502與調(diào)控溶瘤腺病毒的端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因啟動(dòng)子和前列 腺特異性抗原啟動(dòng)子，所述的超抗原部分為金黃色葡萄球菌腸毒素A基因片段。所述的金黃色葡萄球菌腸毒素A基因片段，且該基因片段的長度為771bp。所述的調(diào)控溶瘤腺病毒的雙啟動(dòng)子為端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因啟動(dòng)子和前列腺特異 性抗原啟動(dòng)子。所述的雙啟動(dòng)子，其中端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因啟動(dòng)子為病毒載體SG502自帶，前列 腺特異性抗原啟動(dòng)子需從前列腺癌組織中提取，根據(jù)美國NCBI Nucleotide獲得的序列 U37672. 1，設(shè)計(jì)擴(kuò)增前列腺特異性抗原啟動(dòng)子上下游引物，擴(kuò)增出522bp大小的前列腺特 異性抗原啟動(dòng)子片段。一種靶向抗前列腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的制備方法，其特 征是按如下步驟進(jìn)行(1)前列腺特異性抗原啟動(dòng)子的克隆；(2)溶瘤腺病毒載體的構(gòu)建，將前列腺特異性抗原啟動(dòng)子克隆入溶瘤腺病毒穿 梭質(zhì)粒SG502中，得到SG504病毒質(zhì)粒，然后與攜帶金黃色葡萄球菌腸毒素A基因的質(zhì)粒 PPE3-ccdb-SEA 進(jìn)行重組；(3)溶瘤腺病毒的包裝、純化、滴度測定，得到SG504-SEA。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是該方法根據(jù)實(shí)體腫瘤的無限增殖和瘤體內(nèi)缺氧的兩個(gè)主要特 征，由于利用端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子和前列腺特異性抗原啟動(dòng)子分別取代腺病毒載體復(fù)制 所必須的E1A、ElB啟動(dòng)子，能更加高效的控制溶瘤腺病毒載體只在前列腺腫瘤細(xì)胞內(nèi)增 殖，達(dá)到靶向高效載入金黃色葡萄球菌腸毒素A基因的目的；同時(shí)其攜帶金黃色葡萄球菌 腸毒素A基因作為治療基因，具有腫瘤靶向性，能在腫瘤局部高效復(fù)制，激發(fā)強(qiáng)烈的抗腫瘤 免疫應(yīng)答，可顯著提高殺傷腫瘤作用，最大可能的避免超抗原全身應(yīng)用的毒副作用；作為載 體的腫瘤特異性增殖腺病毒，能特異性的感染腫瘤細(xì)胞并在其中復(fù)制、增殖，裂解、殺傷腫 瘤細(xì)胞并釋放出更多病毒，進(jìn)而感染周圍其他腫瘤細(xì)胞并進(jìn)行更大范圍的溶解殺傷，形成 鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。


下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明圖1為本發(fā)明已構(gòu)建的攜帶超抗原SEA基因的雙調(diào)控增殖腺病毒SG504-SEA結(jié)構(gòu) 示意圖
圖2為細(xì)胞培養(yǎng)示意圖 圖3為病毒的擴(kuò)增示意圖圖4為50%組織培養(yǎng)感染劑量法測定病毒滴度示意圖
具體實(shí)施例方式實(shí)施例、1、實(shí)驗(yàn)所需試劑病毒載體pSG502、HEK293細(xì)胞均購自上海肝膽外科醫(yī)院病; 帶SEA基因的病毒骨架質(zhì)粒PPE3-ccdb-SEA由本室保存。
〖與基因治療中心。攜PUC57克隆載體 Sangon公司 Taq酶 申能博彩公司 DNA 連接酶 SolutionI TakaRa公司 蛋白酶K、RNA酶 PR0MEGA 公司 胎牛血清、小牛血清、DMEM GIBCO BRL 公司 瓊脂糖、溴化乙錠 GENE公司瓊脂粉、胰蛋白胨、酵母提取物UNIPATH公司膠回收試劑盒 QIAGEN公司 PCR產(chǎn)物回收試劑盒 QIAGEN公司 質(zhì)粒DNA制備試劑盒 QIAGEN公司 病毒DNA提取試劑盒 QIAGEN公司 LipofectAmine2000 試劑盒 GIBCO BRL 公司2、前列腺特異性啟動(dòng)子的克隆 上游5根據(jù)美國NCBI Nucleotide獲得的序列(U37672. 1)，設(shè)計(jì)擴(kuò)增PSA啟動(dòng)子引物P -atat_gcggccgctttatgatgacagtag-3‘禾P P :5’ -RtRtactaRtccaRRaRccctataa a_3’，分別引入NotI和SpeI酶切位點(diǎn)。從前列腺癌組織中提取基因組DNA，并以此為模板 行PCR擴(kuò)增出522bp大小PSA啟動(dòng)子片段。循環(huán)參數(shù)為94°C預(yù)變性4min，94°C變性30s， 56°C退火lmin，72°C延伸Imin，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1 %瓊脂糖 凝膠電泳鑒定。用EcoRV酶切pUC57質(zhì)粒，將目的基因的PCR產(chǎn)物與pUC57載體酶切產(chǎn)物 進(jìn)行連接，16°C反應(yīng)過夜。轉(zhuǎn)化JM109感受態(tài)細(xì)胞，涂氨芐抗性平板，37°C過夜培養(yǎng)，篩選 克隆，提取質(zhì)粒并測序確認(rèn)插入產(chǎn)物。將鑒定正確的質(zhì)粒命名為pUC57-PSAp。
3、攜帶超抗原SEA基因的hTERT/PSA雙調(diào)控增殖型溶瘤腺病毒SG502-SEA的構(gòu) 建、重組3. 1、酶切回收
PUC57-PSAp10. OulSG5022.OulSpe I3. OulSpe I3.OulNot I3. OulNot I3.OulNEB 210. OulNEB 28.Oul10*BSA10.Oul10*BSA8.OulH2O64. OulH2O56.Oul總體系100.Oul總體系80. Oul37℃水浴6h后，1. 2 %瓊脂糖凝膠電泳，用膠回收試劑盒(Q1AquickGelExtraction)回收 PUC57_PSAp 522bp, SG502 回收 10087bp。3. 2、連接PUC57-PSAp/Spe I+Not I 8ul12°C連接12h，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5a大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，鋪瓊脂板(含AMP) 后，37°C生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)10-12h。挑取生長的細(xì)菌單克隆，在含AMP的LB溶液中，37°C 搖床擴(kuò)增12h。抽提陽性克隆的質(zhì)粒DNA，酶切鑒定正確后命名為SG504。3. 3重組及鑒定將質(zhì)粒PPE3-ccdb-SEA 與 SG504 用 Lipofectamine2000 共轉(zhuǎn)染至 293 細(xì)胞。共轉(zhuǎn)染 后9-14天出現(xiàn)病毒空斑，經(jīng)過三次病毒空斑純化，應(yīng)用QIAGEN DNA BloodMini Kit(QIAGEN 公司)提取腺病毒DNA，應(yīng)用PCR進(jìn)行鑒定。經(jīng)鑒定正確的腺病毒命名為SG504-SEA，即攜 帶SEA基因調(diào)控的腫瘤特異性增殖型腺病毒(見圖2)。3. 31 293細(xì)胞培養(yǎng)(如圖2所示)3. 32、病毒的擴(kuò)增(如圖3所示)3. 33、50%組織培養(yǎng)感染劑量法測定病毒滴度(如圖4所示)

SG502/Spe I+Not ISolution I_
2ul IOul 總體系
20.Oul
7




4、攜帶超抗原SEA基因的hTERT/PSA雙調(diào)控增殖型溶瘤腺病毒SG504-SEA的擴(kuò)增和滴度測定20ml 10% FBS/DMEM 培養(yǎng) 75cm2 培養(yǎng)瓶中長至 80% 90% 293 細(xì)胞，換成 15ml 2% FBS/DMEM，取0. 5ul首次擴(kuò)增的病毒保存液(病毒空斑感染24孔獲得)，小心加入病毒 混合液，十字形慢慢晃動(dòng)3次，370C 5% C02孵箱中培養(yǎng)48小時(shí)后收集病毒上清或細(xì)胞沉 淀，沉淀細(xì)胞加AD buffer保存液，-80°C至37°C凍融3次，600g離心20分鐘后去沉淀取上 清，收上清和細(xì)胞的混合液，-80°C至37°C凍融3次，600Xg離心20分鐘去除細(xì)胞碎片，收 集上清。反復(fù)擴(kuò)增至需要病毒量，50%組織培養(yǎng)感染劑量法測定病毒滴度。tttatgatgacagtagcaatgtatctgtggagctggattctgggttgggagtgcaaggaaaagaatgtactaaatgccaagacatctatttcaggagcatgaggaataaaagttctagtttctggtctcagagtggtgcagggatcagggagtctcacaatctcctgagtgctggtgtcttagggcacactgggtcttggagtgcaaaggatctaggcacgtgaggctttgtatgaagaatcggggatcgtacccaccccctgtttctgtttcatcctgggcatgtctcctctgcctttgtcccctagatgaagtctccatgagctacaagggcctggtgcatccagggtgatctagtaattgcagaacagcaagtgctagctctccctccccttccacagctctgggtgtgggagggggttgtccagcctccagcagcatggggagggccttggtcagcctctgggtgccagcagggcaggggcggagtcctggggaatgaaggttttatagggctcctgg
權(quán)利要求
一種靶向抗前列腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因的雙調(diào)控溶瘤腺病毒，其特征是它包括溶瘤腺病毒部分和超抗原部分，所述的溶瘤腺病毒部分包括溶瘤腺病毒穿梭質(zhì)粒SG502與調(diào)控溶瘤腺病毒的端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因啟動(dòng)子和前列腺特異性抗原啟動(dòng)子，所述的超抗原部分為金黃色葡萄球菌腸毒素A基因片段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靶向抗前列腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因的雙調(diào)控溶瘤腺 病毒，其特征是所述的金黃色葡萄球菌腸毒素A基因片段，且該基因片段的長度為771bp。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靶向抗前列腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因的雙調(diào)控溶瘤腺 病毒，其特征是所述的調(diào)控溶瘤腺病毒的雙啟動(dòng)子為端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因啟動(dòng)子和前列 腺特異性抗原啟動(dòng)子。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種靶向抗前列腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因的雙調(diào)控溶瘤腺 病毒，其特征是所述的雙啟動(dòng)子，其中端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因啟動(dòng)子為病毒載體SG502自 帶，前列腺特異性抗原啟動(dòng)子需從前列腺癌組織中提取，根據(jù)美國NCBI Nucleotide獲得的 序列U37672. 1，設(shè)計(jì)擴(kuò)增前列腺特異性抗原啟動(dòng)子上下游引物，擴(kuò)增出522bp大小的前列 腺特異性抗原啟動(dòng)子片段。
5.一種靶向抗前列腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的制備方法，其特征 是按如下步驟進(jìn)行(1)前列腺特異性抗原啟動(dòng)子的克??；(2)溶瘤腺病毒載體的構(gòu)建，將前列腺特異性抗原啟動(dòng)子克隆入溶瘤腺病毒穿梭 質(zhì)粒SG502中，得到SG504病毒質(zhì)粒，然后與攜帶金黃色葡萄球菌腸毒素A基因的質(zhì)粒 PPE3-ccdb-SEA 進(jìn)行重組；(3)溶瘤腺病毒的包裝、純化、滴度測定，得到SG504-SEA。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種靶向抗前列腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因，具體涉及一種靶向抗前列腺腫瘤的表達(dá)超抗原基因的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的制備方法，屬基因治療技術(shù)領(lǐng)域。該制備方法運(yùn)用基因工程技術(shù)，將金黃色葡萄球菌腸毒素A基因克隆入溶瘤腺病毒載體中，限制其只在前列腺腫瘤細(xì)胞內(nèi)增殖、表達(dá)，達(dá)到靶向殺傷前列腺腫瘤細(xì)胞的目的，以前列腺特異性抗原啟動(dòng)子和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子來調(diào)控腫瘤特異性增殖腺病毒載體，攜帶金黃色葡萄球菌腸毒素A基因片段，并命名為SG504-SEA，其既具有在腫瘤細(xì)胞內(nèi)特異性增殖能力又具有強(qiáng)大細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞刺激能力。
文檔編號(hào)C12N7/01GK101899420SQ20101001814
公開日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2010年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月16日
發(fā)明者韓從輝 申請(qǐng)人:韓從輝