專利名稱：修飾的透明質(zhì)酸酶及其在治療透明質(zhì)酸相關(guān)疾病和病癥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了用于治療透明質(zhì)酸相關(guān)病癥、疾病和失調(diào)的含有透明質(zhì)酸降解酶特 別是可溶性透明質(zhì)酸酶的組合、組合物以及試劑盒。在一個(gè)實(shí)施例中，所述產(chǎn)品包括額外藥 劑或治療。這種產(chǎn)品可用于給予所述產(chǎn)品以治療透明質(zhì)酸相關(guān)的疾病或者病癥的方法中， 例如透明質(zhì)酸相關(guān)癌癥，例如富含透明質(zhì)酸腫瘤。所述方法包括單獨(dú)或與其它治療組合給 予透明質(zhì)酸降解酶組合物，如透明質(zhì)酸酶組合物。本發(fā)明還提供了用于提供透明質(zhì)酸相關(guān) 疾病和病癥的延長(zhǎng)的治療效果的方法及組合物。
背景技術(shù)：
透明質(zhì)酸(透明質(zhì)酸；HA)是糖胺聚糖，主要存在于結(jié)締組織、皮膚、軟骨和哺乳動(dòng) 物的滑液中。透明質(zhì)酸是眼玻璃體的主要成分。在結(jié)締組織中，與透明質(zhì)酸相結(jié)合的結(jié)合 水在組織之間產(chǎn)生水合基質(zhì)。HA在許多細(xì)胞的胞外基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)，特別是在軟結(jié)締組織中。 HA在各種生理學(xué)過程中起作用，如在在胞內(nèi)基質(zhì)中水和血漿蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)中(Laurent TC et al (1992) FASEB J 6 =2397-2404) 0 一些疾病與透明質(zhì)酸的表達(dá)和/或產(chǎn)生相關(guān)。包括透明質(zhì)酸酶在內(nèi)的透明質(zhì)酸降解酶是降解透明質(zhì)酸的酶。已治療應(yīng)用各種透 明質(zhì)酸降解酶，典型地作為分散和播散劑(dispersing and spreading agents)與其它治 療劑組合。需要給予透明質(zhì)酸降解酶用于治療特別是透明質(zhì)酸相關(guān)疾病和病癥的改進(jìn)的組 合物和方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了治療透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的方法。所述方法包括給予透明質(zhì)酸 降解酶、如透明質(zhì)酸酶、特別是可溶性透明質(zhì)酸酶、如任何動(dòng)物或細(xì)菌透明質(zhì)酸酶的步驟。 透明質(zhì)酸降解酶用聚合物如PEG化部分修飾。舉例的透明質(zhì)酸降解酶是可溶性人透明質(zhì) 酸酶。這種可溶性透明質(zhì)酸酶及其制備在例如共同在審的公開為US 2004(^68425的美國(guó) 申請(qǐng)系列號(hào)10/795，095，公開為US 20050260186的美國(guó)申請(qǐng)系列號(hào)11/065，716，公開為 US20060104968的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)11/238，171中描述。這種可溶性透明質(zhì)酸酶用聚合 物如PEG化部分修飾。透明質(zhì)酸降解酶如透明質(zhì)酸酶用聚合物修飾以改變性質(zhì)，例如但非 限于半衰期和藥動(dòng)學(xué)。修飾包括直接連接或者經(jīng)接頭間接連接、如共價(jià)或經(jīng)其它穩(wěn)定鍵連 接聚合物，如葡聚糖，PEG化或sialation部分，或者其它這種化合物，如天然或糖聚合物。 在本文舉例性實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸降解酶是PEG化的。本發(fā)明提供了治療其中透明質(zhì)酸酶底物累積的疾病或病癥的方法，及治療透明質(zhì) 酸相關(guān)疾病或病癥的方法。這種方法包括給予通過綴合于聚合物而修飾的可溶性透明質(zhì)酸 酶。本文還提供了含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物，所述可溶性透明質(zhì)酸酶的量為足以保 持血漿中透明質(zhì)酸酶的血漿水平為至少3U/mL達(dá)至少一周，及含有這種組合物的組合。本 發(fā)明提供的組合物和組合中的可溶性透明質(zhì)酸酶綴合于聚合物。本發(fā)明提供了治療其中透明質(zhì)酸酶底物累積的疾病或病癥的方法。所述方法包括 給予對(duì)象每周一次以上、預(yù)定周數(shù)的足以保持血漿中透明質(zhì)酸酶的藥理學(xué)活性水平為至少 大約為或者為3U/mL的量的可溶性透明質(zhì)酸酶，以防止所述底物重新合成為治療前水平。 所述方法中使用的透明質(zhì)酸酶通過綴合于聚合物而修飾，所述預(yù)定周數(shù)為一周以上。在一 些實(shí)施例中，預(yù)定周數(shù)為至少兩周，如兩周、三周或者四周。在被治療病癥或疾病中積累的 舉例性透明質(zhì)酸酶底物包括透明質(zhì)酸。在一個(gè)實(shí)施例中，在來自對(duì)象樣品中的透明質(zhì)酸表 達(dá)是在治療前測(cè)量。在治療其中透明質(zhì)酸酶底物累積的疾病或病癥的方法的一些實(shí)施例中，在預(yù)定周 數(shù)之后，中斷給藥第一段預(yù)定時(shí)間，如至少一周，然后恢復(fù)給藥至少一周。例如，給藥可以中 斷一周、兩周、三周或四周，然后恢復(fù)給藥至少一周。在進(jìn)一步實(shí)施例中，在第一段預(yù)定時(shí)間 后，可溶性透明質(zhì)酸酶進(jìn)一步被給予對(duì)象每周一次以上、預(yù)定周數(shù)，其量為足以保持血漿中 透明質(zhì)酸酶的藥理學(xué)活性水平為至少大約為或者為3U/mL，以防止所述底物重新合成為治 療前水平。在任何這些方法的一些實(shí)施方案中，給藥及給藥中斷的循環(huán)重復(fù)多次。在本發(fā)明提供的方法的一些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸酶的給藥量為足以保持血漿中 透明質(zhì)酸酶的藥理學(xué)活性水平至少為或大約為3U/mL-12U/mL。例如，透明質(zhì)酸酶可以以足 以保持血漿中透明質(zhì)酸酶的藥理學(xué)活性水平至少為或大約5U/mL，6U/mL, 7U/mL, 8U/mL, 9U/ mL, lOU/mL, 15U/mL, 20U/mL, 30U/mL, 40U/mL, 45U/mL, 50U/mL 或更高的量被給予。在所述方 法的特定實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸酶的給藥量為足以保持血漿中透明質(zhì)酸酶的藥理學(xué)活性水 平為至少為或大約10U/mL。在治療其中透明質(zhì)酸酶底物累積的疾病或病癥的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，透明質(zhì) 酸酶一周兩次被給予。給予對(duì)象的透明質(zhì)酸酶的量可以是例如0. 02mg/kg(對(duì)象)，0. 03mg/ kg,0. 04mg/kg,0. 05mg/kg,0. 06mg/kg,0. 07mg/kg,0. 08mg/kg,0.09mg/kg,0. lmg/kg, 0. 15mg/kg,0. 2mg/kg,0. 25mg/kg,0. 30mg/kg,0. 35mg/kg,0. 40mg/kg,0. 45mg/kg,0. 5mg/kg, 0. 55mg. kg, 0. 6mg/kg, 0. 7mg/kg, 0. 8mg/kg, 0. 9mg/kg, 1. Omg/kg, 1. lmg/kg, 1. 2mg/ kg，1. 3mg/kg, 1. 4mg/kg, 1. 5mg/kg或更多。在一個(gè)實(shí)施例中，給予的透明質(zhì)酸酶的量是 0. 05mg/kg-0. 8mg/kg。在進(jìn)一步實(shí)施例中，給予的透明質(zhì)酸酶的量是或者大約是50，000單 位(U) ；60，000U ；70，000U ；80，000U ；90，000U ； 100，000U ；200，000U ；300，000U ；400，000U ； 500，000U；600，000U ；700，000U ；800，000U ；900，000U ；1，000，000U ；1，500，000U ； 2，000，000U ；2，500，000U ；3，000，000U ；3，500，000U ；4，000，000U 或更多。本發(fā)明提供了治療對(duì)象中透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的方法。這種方法包括步驟 (a)測(cè)量來自對(duì)象的樣品中的透明質(zhì)酸表達(dá)或透明質(zhì)酸Oiyaluron)；及(b)如果來自對(duì)象 的樣品中的透明質(zhì)酸表達(dá)或透明質(zhì)酸(hyaluron)升高或者處于指示疾病或病癥的水平， 給予對(duì)象含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物。這些方法中使用的可溶性透明質(zhì)酸酶通過綴合 于聚合物而修飾。在一些實(shí)施例中，來自對(duì)象的樣品是組織或體液，例如血液樣品、腫瘤活 檢、腦脊液、尿、汗、精液或唾液樣品。在治療透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的方法的特定實(shí)施方案中，還將治療所述疾病或 病癥的第二種不同藥劑給予對(duì)象。在一些實(shí)施例中，所述第二種藥劑和含有可溶性透明質(zhì) 酸酶的組合物在單一組合物中被給予。在其它實(shí)施例中，所述第二種藥劑和含有可溶性透 明質(zhì)酸酶的組合物分開給予，如同時(shí)、相繼或以任何順序間歇給予。在一個(gè)實(shí)施方案中，所 述第二種藥劑在給予含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物之后給予。例如，所述第二種藥劑可 以在給藥周期中第一次給予可溶性透明質(zhì)酸酶之后給予，并且任選在一或多次個(gè)后續(xù)可溶 性透明質(zhì)酸酶給予后，如在每一次后續(xù)可溶性透明質(zhì)酸酶給予后，在每?jī)纱魏罄m(xù)可溶性透 明質(zhì)酸酶給予后，或者一周一次，每二周一次，每三周一次或者一月一次。在本發(fā)明提供的治療透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的方法的一些方面中，在給予含有 可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物之后至少0. 5分鐘、至少1分鐘、至少5分鐘、至少15分鐘、至 少30分鐘、至少1小時(shí)或者1小時(shí)以上給予所述第二種藥劑。在一些實(shí)施例中，在一些實(shí) 施例中，在給予含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物之后至少或者2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小 時(shí)、10小時(shí)、12小時(shí)、14小時(shí)、16小時(shí)、18小時(shí)、20小時(shí)、22小時(shí)或M小時(shí)給予所述第二種 藥劑。在一個(gè)實(shí)施例中，在含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物之后至少48小時(shí)給予所述第二 種藥劑。在另一個(gè)實(shí)施例中，在含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物之后至少72小時(shí)給予所述 第二種藥劑。在本發(fā)明提供的治療透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的方法的進(jìn)一步方面中，來自 對(duì)象的樣品中的透明質(zhì)酸表達(dá)與對(duì)照樣品或標(biāo)準(zhǔn)中的表達(dá)相比較。在治療其中透明質(zhì)酸酶底物累積的疾病或病癥的方法及治療透明質(zhì)酸相關(guān)疾病 或病癥的方法中使用的透明質(zhì)酸酶綴合于聚合物。在一些實(shí)施例中，聚合物是sialation 或PEG化部分。在本發(fā)明提供的一些方法中，給予對(duì)象第二種藥劑，如以上及本文所 述。在一些實(shí)施例中，所述第二種藥劑是抗癌劑或療法，例如化療劑、放療、抗體、肽、基 因治療載體、病毒或核酸。用于本發(fā)明提供的一些方法中的舉例性第二種藥劑包括抗 癌劑，例如阿西維辛；阿柔比星；阿考達(dá)唑；阿克羅寧；阿多來新；阿地白介素；阿侖珠單 抗；阿利維A酸(9-順式視黃酸)；別嘌呤醇；六甲蜜胺；Alvocidibs ；安巴腙；二霉素； 阿美蒽醌；Amifostines ；氨魯米特；安吖啶；阿那曲唑；阿那昔酮；安西他濱；氨茴霉素； Apaziquones ；精美司那；三氧化二砷；天冬酰胺酶；曲林菌素；阿莫司?。话⒃?；阿扎 替派；含氮霉素；Banoxantrones ；Batabulins ；巴馬司他；BCGLive ；貝那昔濱；苯達(dá)莫司??；苯佐替派；貝沙羅?。回惙ブ閱慰?；比卡魯胺；比他舍平；Biricodars ；比生群；比生 群；Bisnafide Dimesylates ；比折來新；博來霉素；硼替佐米；布喹那；溴匹立明；布度 鈦；白消安；放線菌素c ；卡普睪酮；Canertinibs ；卡培他濱；卡醋胺；卡貝替姆；卡鉬；卡 波醌；卡莫氟；含有聚苯丙生的卡莫司?。豢就?；卡柔比星；卡折來新；西地芬戈；塞 來昔布；西馬多丁 ；苯丁酸氮芥；塞奧羅奈；西羅霉素；順鉬；克拉屈濱；克蘭氟脲；氯法拉 濱；Crisnatols ；環(huán)磷酰胺；阿糖胞苷liposomals ；阿糖胞苷；達(dá)卡巴嗪；更生霉素；達(dá)依泊 汀α ；柔紅霉素liposomals ；柔紅霉素/道諾霉素；柔紅霉素；地西他濱；地尼白介素2 ； 右尼古地平；Dexonnaplatins ；右雷佐生；地扎胍寧；地吖醌；Dibrospidiums ；地諾孕素； Dinalins ；Disermolides ；多西他塞；Dofequidars ；去氧氟尿苷；多柔比星脂質(zhì)體；多柔比 星HCL ；Docorubicin HCL脂質(zhì)體注射液；阿霉素；屈洛昔芬；屈他雄酮丙酸酯；偶氮霉素； 依考莫司汀；依達(dá)曲沙；Edotecarins ；依氟鳥氨酸；Elacridars ；依利奈法德；Elliott，s B溶液；依沙蘆星；乙嘧替氟；恩洛鉬；恩普氨酯；Enzastaurins ；依匹哌啶；表柔比星；阿 法依伯汀；依地前列素；厄布洛唑；依索比星；雌莫司??；依他硝唑；依托格魯；磷酸依托泊 苷；依托泊苷VP-16 ；依托泊苷；氯苯乙嘧胺；依西美坦；依昔舒林；法倔唑；法扎拉濱；芬維 A銨；非格司亭；氟尿苷；氟達(dá)拉濱；氟尿嘧啶；5-氟尿嘧啶；氟甲睪酮；氟西他濱；磷喹酮； 福司曲星；福司曲星；福曲他明；氟維司群；Galarubicins ；加洛他濱；吉西他濱；吉妥珠單 抗/Ozogamicins ；吉羅酚；Gimatecans ；Gimeracils ；格洛沙腙；Glufosfamides ；醋酸性 瑞林；羥基脲；Ibritumomabs/Tiuxetans ；伊達(dá)比星；異環(huán)磷酰胺；伊莫福新；Ilomastats ； Imatinib mesylates ；Imexons ；Improsulfans ；Indisulams ；Inproquones ；干擾素 α -2a ； 干擾素α-2b;干擾素α ；干擾素β ；干擾素γ ；干擾素；白介素-2及其它白介素(包括 重組白介素)；Intoplicines ；Iobenguanes[131-1] ；Iproplatins ；Irinotecans ；伊索拉 定；Ixab印ilones ；酮曲沙；L-亞硝基羥基丙氨酸；蘭瑞肽；Lapatinibs ；Ledoxantrones ； 來曲唑；Leucovorins ；Leuprolides ； (Leuprorelides)；左旋咪唑；來沙骨化醇；利阿唑； 洛鉬；洛美曲索；洛莫司汀/CCNUs ；洛莫司??；Lonafarnibs ；洛索蒽醌；勒托替康；馬磷酰 胺；甘露舒凡；馬立馬司他；馬索羅酚；美坦辛；氮芥；Meclorethamines/氮芥；醋酸甲地 孕酮；甲地孕酮；美侖孕酮；美法侖；美法侖IL-PAMs ；美諾立爾；美雄烷；巰基嘌呤；6-巰 基嘌呤；美司鈉；Metesinds ；甲氨蝶呤；甲氧沙林；美托咪酯；M氯苯乙嘧胺；美妥替哌； 米帕；米潑昔芬；米索硝唑；米丁度胺；Mitocarcins ；Mitocromins ；米托拉酮；米托潔林； 米托胍腙；米托馬星；絲裂霉素C ；絲裂霉素；米托萘胺；米托喹酮；米托司培；米托坦；米 托蒽醌；米托唑胺；Mivobulins ；咪唑立賓；莫法羅?。荒哌_(dá)醇；Mubritinibs ；霉酚酸； Nandrolone Phenpropionates ；奈達(dá)鉬；Nelzarabines ；奈莫柔比星；硝氨丙吖啶；諾考達(dá) 唾；Nofetumomabs ；諾力口霄素；Nolatrexeds ；Nortopixantrones ；奧曲月太；奧普瑞白介素； 奧馬鉬；Ortataxels ；Oteracils ；奧沙利鉬；奧昔舒侖；氧芬胂；紫杉醇；Pamidronates ； Patubilones ；培加酶；培門冬酶；培非司亭；Peldesines ；佩里霉素；Pelitrexols ；培美 曲塞；戊氮芥；噴司他丁 ；培洛霉素；培磷酰胺；Perifosines ；Picoplatins ；吡萘非特；哌 泊溴烷；哌泊舒凡；吡非尼酮；吡羅蒽醌；Pixantrones ；Plevitrexeds ；Plicamycid光神 霉素；普卡霉素；普洛美坦；普洛美坦；卟吩姆鈉；Porfimers ；紫菜霉素；潑尼莫司汀；丙 卡巴胼；普羅帕脒；螺丙醇；嘌嘧替派；嘌呤霉素；吡呋菌素；奎納克林；雷莫司?。焕剂?酶；利波腺苷；利曲舒凡；利妥昔單抗；羅谷亞胺；羅喹美克；絳色霉素；Sabarubicins ；沙芬戈；沙格司亭；Mtraplatins ；司鉬；司莫司汀；辛曲秦；西佐喃；索布佐生；索拉非尼； Sparfosates ；Sparfosic Acids ；稀疏霉素；鍺螺胺；螺莫司??；螺鉬；螺鉬；Squalamines ； 鏈黑菌素；鏈伐立星；鏈佐星；磺磷酰胺；磺氯苯脲；Sunitinib Malate ；6-硫代鳥嘌呤 (6-TG) ；Tacedinalines ；滑石；他利霉素；他莫司汀；他莫昔芬；Tariquidars ；?；悄??。籘ecogalans ；替加氟；替洛蒽醌；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷/VM46s ；替尼泊苷； 替羅昔??；睪內(nèi)酯；Thiamiprines ；硫代鳥嘌呤；塞替派；硫米嘌呤；Tiazofurins ；噻氯 咪索；替洛隆；Timcodars ；噻莫西酸；替拉扎明；Topixantrones ；托泊替康；托瑞米芬； Tositumomabs ；曲貝替定(Ecteinascidin 743)；曲妥珠單抗；曲托龍；Tretinoins/ATRA ； 曲西立濱；曲洛司坦；三甲曲沙；Triplatin Tetranitrates ；曲普瑞林；曲磷胺；妥布氯 唑；烏苯美司；烏拉莫司汀；烏瑞替派；戊柔比星；Valspodars ；伐普肽；維替泊芬；長(zhǎng)春 堿；長(zhǎng)春新堿；長(zhǎng)春地辛；長(zhǎng)春匹定；長(zhǎng)春氟寧；長(zhǎng)春米特；長(zhǎng)春甘酯；長(zhǎng)春西醇；長(zhǎng)春羅 新；長(zhǎng)春瑞濱；長(zhǎng)春羅定；長(zhǎng)春曲醇；長(zhǎng)春利定；伏氯唑；黃霉素A(胍甲環(huán)素)；折尼鉬； Zilascorbs[2-H]；凈司他丁 ；Zoledronate ；佐柔比星；禾口 Zosuquidars0在本發(fā)明提供的任何治療其中透明質(zhì)酸酶底物累積的疾病或病癥的方法及治療 透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的方法中，可溶性透明質(zhì)酸酶和/或第二種藥劑可以局部或全身 給予，例如口服、靜脈內(nèi)(IV)、皮下、肌肉內(nèi)、腫瘤內(nèi)、真皮內(nèi)(radermally)、局部、透皮、經(jīng) 直腸或表皮下給予。在本發(fā)明提供的方法的特定實(shí)施例中，可溶性透明質(zhì)酸酶和/或第二 種藥劑靜脈內(nèi)給予。在其它實(shí)施例中，可溶性透明質(zhì)酸酶和/或第二種藥劑腫瘤內(nèi)給予。本發(fā)明提供的是治療其中透明質(zhì)酸酶底物累積的疾病或病癥的方法及治療透明 質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的方法。在一些實(shí)施例中，其中透明質(zhì)酸酶底物累積的疾病或病癥與 高組織間隙液壓相關(guān)。在進(jìn)一步的實(shí)施例中，由本發(fā)明提供的方法治療的疾病或病癥是椎 間盤壓力(disc pressure)、癌癥或水腫。水腫例如可以由器官移植，卒中或腦外傷導(dǎo)致。 在被治療的疾病或病癥是癌癥的情況中，癌癥可以是腫瘤，如實(shí)體腫瘤。在一些實(shí)施例中， 與相同組織類型的非癌組織相比或者與相同腫瘤類型的非轉(zhuǎn)移腫瘤相比，腫瘤具有增加的 透明質(zhì)酸的細(xì)胞和/或基質(zhì)表達(dá)。在特定的實(shí)施例中，待治療的疾病或病癥是晚期癌癥、轉(zhuǎn) 移癌和/或未分化癌。在一個(gè)實(shí)施例中，所述疾病或病癥是卵巢癌、原位癌(ISC)、鱗狀細(xì)胞 癌(SCC)、前列腺癌、胰腺癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、腦癌或結(jié)腸癌。在本發(fā)明提供的方法的 一些實(shí)施例中，治療導(dǎo)致對(duì)象腫瘤大小縮小。在一些實(shí)施方案中，提供的方法中使用的可溶性透明質(zhì)酸酶是可溶性PH20，包括 但非限于綿羊、小鼠、猴、牛、細(xì)菌或人PH20。在一些實(shí)施例中，PH20的可溶形式是已被截短 除去C-末端GPI的可溶性PH20。在本發(fā)明提供的方法的一些方面中，可溶性透明質(zhì)酸酶具 有包括在SEQ ID NO :1中的氨基酸序列或者與包括在SEQ ID NO 1中的氨基酸序列具有至 少大約91%氨基酸序列相同性的序列，由此可溶性透明質(zhì)酸酶是可溶的、N-糖基化的和中 性活性的。在其它實(shí)施例中，可溶性透明質(zhì)酸酶包括SEQ ID NO :1所示氨基酸序列，該序列 在氨基酸殘基467-483之間(包括端點(diǎn))的一個(gè)氨基酸殘基處被截短。例如，可溶性透明 質(zhì)酸酶可以包括SEQ ID NO :1所示氨基酸序列，該序列在選自467，468，469，470，471，472， 473，474，475，476，477，478，479，480，481，482 和 483 的一個(gè)氨基酸殘基處被截短。在一些方面中，本發(fā)明提供的方法中使用的可溶性透明質(zhì)酸酶在CHO細(xì)胞中被分 泌。在其它方面中，可溶性透明質(zhì)酸酶具有SEQ ID NO :1的氨基酸36-467，36-468，36-469，36-470，36-471，36-472，36-473，36-474，36-475，36-476，36-477，36-478，36-479，36-480， 36-481,36-482或36-483所示的氨基酸序列，或者與SEQ ID NO :1的氨基酸36-467， 36-468，36-469，36-470，36-471，36-472，36-473，36-474，36-475，36-476，36-477，36-478， 36-479，36-480，36-481，36-482或36-483所示的氨基酸序列具有至少大約91%氨基酸序 列相同性的序列。在特定實(shí)施例中，可溶性透明質(zhì)酸酶選自含有SEQ ID NO :4-9和46-48 任一所示氨基酸序列的多肽，其等位基因變體、物種變體或其它變體。在一個(gè)實(shí)施方案中， 可溶性透明質(zhì)酸酶是由編碼SEQ ID NO :4所示氨基酸序列的核酸序列編碼的多肽。在另一 個(gè)實(shí)施方案中，可溶性透明質(zhì)酸酶選自由編碼SEQ ID NO :4-9所示氨基酸序列的核酸序列 編碼的多肽。在這種情況中，可溶性透明質(zhì)酸酶可以通過在CHO細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)生。例如，在 一個(gè)實(shí)施方案中，可溶性透明質(zhì)酸酶命名為rHuPH20。另外，在一些方面中，本發(fā)明提供的方 法中使用的可溶性透明質(zhì)酸酶是糖基化的。如以上討論的，在本發(fā)明提供的治療其中透明質(zhì)酸酶底物累積的疾病或病癥及 治療透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的方法中，通過綴合于聚合物修飾的透明質(zhì)酸酶被給予對(duì) 象。在一些實(shí)施例中，綴合于可溶性透明質(zhì)酸酶的聚合物含有PEG化部分(PEG)，例如甲氧 基-聚(乙二醇)_琥珀酰亞氨基丁酸酯(mPEG-SBA) (5kDa)；甲氧基-聚(乙二醇)-琥 珀酰亞氨基丁酸酯(mPEG-SBA) (20kDa)；甲氧基-聚(乙二醇)_琥珀酰亞氨基丁酸酯 (mPEG-SBA) (30kDa)；甲氧基-聚(乙二醇)_琥珀酰亞氨基α -甲基丁酸酯(mPEG_SMB) (20kDa)；甲氧基-聚(乙二醇)_琥珀酰亞氨基α -甲基丁酸酯(mPEG_SMB) (30kDa)；甲 氧基-聚(乙二醇)_ 丁醛(mPEG-丁醛)(30kDa)，甲氧基-聚(乙二醇)-琥珀酰亞氨 基丙酸酯(mPEG-SPA) (20kDa)；甲氧基-聚(乙二醇)_琥珀酰亞氨基丙酸酯(mPEG_SPA) (30kDa)；(甲氧基-聚(乙二醇))2-N-琥珀酰亞胺酯(mPEG2-NHS) (IOkDa分支的)；(甲 氧基-聚(乙二醇))2-N-琥珀酰亞胺酯(mPEG2-NHS) (20kDa分支的)；(甲氧基-聚(乙 二醇))2-N-琥珀酰亞胺酯(mPEG2-NHS) (40kDa分支的)；(甲氧基-聚(乙二醇))2_N_琥 珀酰亞胺酯(mPEG2-MB) (60kDa分支的)；生物素-聚(乙二醇)-N-琥珀酰亞胺酯(生物 素-PEG-MB) (5kDa生物素化的)；聚(乙二醇)_p_硝基苯基碳酸酯(PEG-p-硝基苯基-碳 酸酯)(30kDa)；或聚(乙二醇)_丙醛(PEG-丙醛)(30kDa)。在一些方面中，PEG是分支或 線性PEG。在特定實(shí)施例中，PEG是甲氧基-PEG(mPEG)，例如，甲氧基聚(乙二醇)丁酸的 線性N-羥基琥珀酰亞氨基酯。這種PEG可以具有30或者大約30千道爾頓的分子量。本發(fā)明提供了含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物，所述可溶性透明質(zhì)酸酶的量為足 以保持血漿中透明質(zhì)酸酶的血漿水平為至少3U/mL達(dá)至少一周，其中可溶性透明質(zhì)酸酶綴 合于聚合物。在一些方面中，血漿中透明質(zhì)酸酶水平至少是或大約3U/mL-12U/mL。綴合于 透明質(zhì)酸酶的舉例性聚合物包括但非限于sialation或PEG化部分。組合物可以一周至少 兩次給予至少一周以上。在一些實(shí)施例中，組合物含有至少或大約2. 0mg-60mg的綴合于 聚合物的可溶性透明質(zhì)酸酶，綴合于聚合物的可溶性透明質(zhì)酸酶具有至少或大約20，000U/ mg,25，000U/mg,30，000U/mg,31，000U/mg,32，000U/mg,33，OOOU/mg,34，OOOU/mg,35，000U/ mg, 36，OOOU/mg,37，OOOU/mg,38，OOOU/mg,39，OOOU/mg,40，OOOU/mg,45，OOOU/mg,50，OOOU/mg, 55，OOOU/mg, 60, OOOU/mg或更高的比活性。另外，在一些方面中，組合物每次給予至少10mL。本發(fā)明提供的組合物可以配制為用于口服、靜脈內(nèi)(IV)、皮下、肌肉內(nèi)、腫瘤內(nèi)、真 皮內(nèi)、局部、透皮、經(jīng)直腸或表皮下給藥。在一個(gè)實(shí)施例中，組合物被配制為用于靜脈內(nèi)給藥。本發(fā)明提供的組合物還可以含有組氨酸和/或NaCl。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物 用是或大約IOmM組氨酸和/或130mM NaCl配制。組合物可以具有是或大約是6. 0,6. 1.， 6. 2,6. 3,6. 4,6. 5,6. 6,6. 7,6. 8,6. 9,7. 0,7. 1 或 7. 2 的 pH。在一個(gè)實(shí)施例中，組合物具有 是或大約6. 5的pH。本發(fā)明提供了含有一種含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物及含有治療透明質(zhì)酸相 關(guān)疾病或病癥的藥劑的第二種組合物的組合，所述可溶性透明質(zhì)酸酶的量為足以保持血 漿中透明質(zhì)酸酶的血漿水平在至少3U/mL水平至少一周，其中可溶性透明質(zhì)酸酶綴合于聚 合物。在一些實(shí)施例中，含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物一周給予至少二次至少一周以 上。在進(jìn)一步的方面中，含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物含有至少或大約2. 0mg-60mg的 綴合于聚合物的可溶性透明質(zhì)酸酶；綴合于聚合物的可溶性透明質(zhì)酸酶具有至少或大約 20，000U/mg,25，000U/mg,30，000U/mg,31，000U/mg,32，OOOU/mg,33，OOOU/mg,34，OOOU/mg, 35，OOOU/mg,36，OOOU/mg,37，OOOU/mg,38，OOOU/mg,39，OOOU/mg,40，OOOU/mg,45，OOOU/mg, 50，OOOU/mg, 55, OOOU/mg, 60, OOOU/mg 或更高的比活性。本發(fā)明提供的組合的第一種和第二種組合物共配制或分別提供。在一些實(shí)施例 中，本發(fā)明提供的組合中的綴合于透明質(zhì)酸酶的聚合物是sialation或PEG化部分。在 進(jìn)一步實(shí)施方案中，組合中的第二種藥劑是抗癌劑或療法，例如化療劑、放療、抗體、肽、基 因治療載體、病毒或核酸。在特定實(shí)施例中，第二種藥劑是抗癌劑，選自阿西維辛；阿柔比 星；阿考達(dá)唑；阿克羅寧；阿多來新；阿地白介素；阿侖珠單抗；阿利維A酸(9-順式視黃 酸)；別嘌呤醇；六甲蜜胺；Alvocidibs ；安巴腙；二霉素；阿美蒽醌；Amifostines ；氨魯米 特；安吖啶；阿那曲唑；阿那昔酮；安西他濱；氨茴霉素；Apaziquones ；精美司那；三氧化 二砷；天冬酰胺酶；曲林菌素；阿莫司?。话⒃?；阿扎替派；含氮霉素；Banoxantrones ； Batabulins ；巴馬司他；BCG Live ；貝那昔濱；苯達(dá)莫司汀；苯佐替派；貝沙羅??；貝伐珠 單抗；比卡魯胺；比他舍平；Biricodars ；比生群；比生群；Bisnafide Dimesylates ；比折 來新；博來霉素；硼替佐米；布喹那；溴匹立明；布度鈦；白消安；放線菌素c ；卡普睪酮； Canertinibs ；卡培他濱；卡醋胺；卡貝替姆；卡鉬；卡波醌；卡莫氟；含有聚苯丙生的卡莫 司汀；卡莫司?。豢ㄈ岜刃?；卡折來新；西地芬戈；塞來昔布；西馬多丁 ；苯丁酸氮芥；塞奧 羅奈；西羅霉素；順鉬；克拉屈濱；克蘭氟脲；氯法拉濱；Crisnatols ；環(huán)磷酰胺；阿糖胞苷 liposomals ；阿糖胞苷；達(dá)卡巴嗪；更生霉素；達(dá)依泊汀α ；柔紅霉素liposomals ；柔紅 霉素s/道諾霉素；柔紅霉素s ；地西他濱；地尼白介素2 ；右尼古地平；Dexormaplatins ； 右雷佐生；地扎胍寧；地吖醌；Dibrospidiums ；地諾孕素；Dinalins ；Disermolides ；多 HftkS ；Dofequidars ； Μ^ Ρ ;M9M liposomals -,MMM HCL ；Docorubicin HCL liposome injection ；阿霉素；屈洛昔芬；屈他雄酮丙酸酯s ；偶氮霉素；依考莫司??；依 達(dá)曲沙；Edotecarins ；依氟鳥氨酸；Elacridars ；依利奈法德；Elliott，s B溶液；依沙 蘆星；乙嘧替氟；恩洛鉬；恩普氨酯；Enzastaurins ；依匹哌啶；表柔比星；阿法依伯?。灰?地前列素；厄布洛唑；依索比星；雌莫司??；依他硝唑；依托格魯；磷酸依托泊苷；依托泊 苷VP-16 ；依托泊苷；氯苯乙嘧胺；依西美坦；依昔舒林；法倔唑；法扎拉濱；芬維A銨；非 格司亭；氟尿苷；氟達(dá)拉濱；氟尿嘧啶；5-氟尿嘧啶；氟甲睪酮；氟西他濱；磷喹酮；福司 曲星；福司曲星；福曲他明；氟維司群；Galarubicins ；加洛他濱；吉西他濱；吉妥珠單抗 /Ozogamicins ；吉羅酚；Gimatecans ；Gimeracils ；格洛沙腙；Glufosfamides ；醋酸性瑞林；羥基尿；Ibritumomabs/Tiuxetans ；伊達(dá)比星；異環(huán)磷酰胺；伊莫福新；IIomastats ； Imatinib mesylates ；Imexons ；Improsulfans ；Indisulams ；Inproquones ；干擾素 α -2a ； 干擾素α-2b;干擾素α ；干擾素β ；干擾素γ ；干擾素；白介素-2及其它白介素(包括 重組白介素)；Intoplicines ；Iobenguanes[131-1] ；Iproplatins ；Irinotecans ；伊索拉 定；Ixab印ilones ；酮曲沙；L-亞硝基羥基丙氨酸；蘭瑞肽；Lapatinibs ；Ledoxantrones ； JfeffiP坐；Leucovorins ；Leuprolides(Leuprorelides) ；；；
利阿唑；洛鉬；洛美曲索；洛莫司汀/CCNUs ；洛莫司?。籐onafarnibs ；洛索蒽醌；勒托替康； 馬磷酰胺；甘露舒凡；馬立馬司他；馬索羅酚；美坦辛；氮芥；Meclorethamines/氮芥；醋酸 甲地孕酮；甲地孕酮；美侖孕酮；美法侖；美法侖IL-PAMs ；美諾立爾；美雄烷；巰基嘌呤； 6-巰基嘌呤；美司鈉；Metesinds ；甲氨蝶呤；甲氧沙林；美托咪酯；M氯苯乙嘧胺；美妥替 哌；米帕；米潑昔芬；米索硝唑；米丁度胺；Mitocarcins ；Mitocromins ；米托拉酮；米托潔 林；米托胍腙；米托馬星；絲裂霉素C ；絲裂霉素；米托萘胺；米托喹酮；米托司培；米托坦； 米托蒽醌；米托唑胺；Mivobulins ；咪唑立賓；莫法羅?。荒哌_(dá)醇；Mubritinibs ；霉酚酸； Nandrolone Phenpropionatess ；奈達(dá)怕；Nelzarabines ；奈莫柔比星；銷氛丙口丫 ；諾考達(dá) 唾；Nofetumomabs ；諾力口霄素；Nolatrexeds ；Nortopixantrones ；奧曲月太；奧普瑞白介素； 奧馬鉬；Ortataxels ；Oteracils ；奧沙利鉬；奧昔舒侖；氧芬胂；紫杉醇；Pamidronates ； Patubilones ；培加酶；培門冬酶；培非司亭；Peldesines ；佩里霉素；Pelitrexols ；培美 曲塞；戊氮芥；噴司他丁 ；培洛霉素；培磷酰胺；Perifosines ；Picoplatins ；吡萘非特；哌 泊溴烷；哌泊舒凡；吡非尼酮；吡羅蒽醌；Pixantrones ；Plevitrexeds ；Plicamycid光神 霉素；普卡霉素；普洛美坦；普洛美坦；卟吩姆鈉；Porfimers ；紫菜霉素；潑尼莫司??；丙 卡巴胼；普羅帕脒；螺丙醇；嘌嘧替派；嘌呤霉素；吡呋菌素；奎納克林；雷莫司?。焕剂?酶；利波腺苷；利曲舒凡；利妥昔單抗；羅谷亞胺；羅喹美克；絳色霉素；Sabarubicins ；沙 芬戈；沙格司亭；Mtraplatins ；司鉬；司莫司??；辛曲秦；西佐喃；索布佐生；索拉非尼； Sparfosates ；Sparfosic Acids ；稀疏霉素；鍺螺胺；螺莫司??；螺鉬；螺鉬；Squalamines ； 鏈黑菌素；鏈伐立星；鏈佐星；磺磷酰胺；磺氯苯脲；Sunitinib Malate ；6-硫代鳥嘌呤 (6-TG) ；Tacedinalines ；滑石；他利霉素；他莫司?。凰舴?；Tariquidars ；牛磺莫司 ?。籘ecogalans ；替加氟；替洛蒽醌；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷/VM46s ；替尼泊苷； 替羅昔??；睪內(nèi)酯；Thiamiprines ；硫代鳥嘌呤；塞替派；硫米嘌呤；Tiazofurins ；噻氯 咪索；替洛??；Timcodars ；噻莫西酸；替拉扎明；Topixantrones ；托泊替康；托瑞米芬； Tositumomabs ；曲貝替定(Ecteinascidin 743)；曲妥珠單抗；曲托龍；Tretinoins/ATRA ； 曲西立濱；曲洛司坦；三甲曲沙；Triplatin Tetranitrates ；曲普瑞林；曲磷胺；妥布氯 唑；烏苯美司；烏拉莫司??；烏瑞替派；戊柔比星；Valspodars ；伐普肽；維替泊芬；長(zhǎng)春 堿；長(zhǎng)春新堿；長(zhǎng)春地辛；長(zhǎng)春匹定；長(zhǎng)春氟寧；長(zhǎng)春米特；長(zhǎng)春甘酯；長(zhǎng)春西醇；長(zhǎng)春羅 新；長(zhǎng)春瑞濱；長(zhǎng)春羅定；長(zhǎng)春曲醇；長(zhǎng)春利定；伏氯唑；黃霉素A(胍甲環(huán)素)；折尼鉬； Zilascorbs[2-H]；凈司他丁 ；Zoledronate ；佐柔比星；禾口 Zosuquidars.
在一種方法中，含有修飾的透明質(zhì)酸降解酶的組合物被給予患有透明質(zhì)酸相關(guān)疾 病或病癥或者可能患有這種疾病或病癥的對(duì)象，隨后給予用于治療實(shí)施疾病或病癥的第二 種不同藥劑。在給予透明質(zhì)酸降解酶之后M小時(shí)以上給予第二種藥劑或治療。給予可以 全身或局部進(jìn)行或者通過任何合適途徑進(jìn)行，如靜脈內(nèi)、口服、皮下或肌肉內(nèi)。
在治療對(duì)象中的透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的另一種方法中，含有修飾的透明質(zhì)酸 降解酶的組合物被全身給予患有透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥或者可能患有這種疾病或病癥 的對(duì)象。修飾的透明質(zhì)酸降解酶以至少有效降低組織間隙液壓M小時(shí)以上的量給予。給 予透明質(zhì)酸降解酶可以治療疾病或病癥或者可以后跟第二種藥劑或療法或者與第二種藥 劑或療法一起給予。可以靜脈內(nèi)、口服、皮下或肌肉內(nèi)、包括例如腫瘤內(nèi)實(shí)現(xiàn)給予。還提供了在對(duì)象中降低組織間隙液壓的方法，其是給予對(duì)象含有有效量的修飾的 透明質(zhì)酸降解酶的組合物。透明質(zhì)酸降解酶的量降低組織間隙液壓對(duì)小時(shí)以上；透明質(zhì)酸 降解酶的量功能等價(jià)于在或大約10至1，000, 000透明質(zhì)酸酶單位之間，如在或大約10至 50，000，000 單位，10 至 40，000，000 單位，10 至 36，000，000 單位，10 至 12，000，000 單位， 10 至 1，200，000 單位，10 至 1，000，000 單位，10 至 500，000 單位，100 至 100，000 單位，500 至50，000單位，1000至10，000單位，5000至7500單位，5000單位至50，000單位，或1，000 至10，000單位。單位通常參照未修飾的透明質(zhì)酸酶測(cè)量。降低組織間隙液壓可以在對(duì)象 中實(shí)現(xiàn)透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的治療。在實(shí)施本發(fā)明任何方法中，來自對(duì)象的樣品中透明質(zhì)酸表達(dá)可以在治療之前、期 間或之后進(jìn)行測(cè)量(或評(píng)估或監(jiān)測(cè))。如果需要，來自對(duì)象的樣品中透明質(zhì)酸表達(dá)可以與 對(duì)照樣品中的表達(dá)或者與標(biāo)準(zhǔn)比較。因此提供了治療對(duì)象中的透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的 方法，首先測(cè)量來自對(duì)象的樣品中透明質(zhì)酸表達(dá)；然后給予對(duì)象含有修飾的透明質(zhì)酸降解 酶的組合物。給予包括局部和全身給予，例如但不限于口服、靜脈內(nèi)(IV)、皮下、肌肉內(nèi)、腫 瘤內(nèi)、真皮內(nèi)、局部、透皮、口服、經(jīng)直腸或表皮下。樣品例如是組織或體液，例如但不限于血 樣、腫瘤活檢、腦脊液、尿、汗、精液或唾液樣品。所述方法可以提供給予非透明質(zhì)酸降解酶的用于治療特定疾病的第二種藥劑或 療法而實(shí)施。例如，如果疾病是腫瘤，則第二種藥劑可以是化療劑和/或放療方案/治療。 舉例性的第二種藥劑是抗癌劑。當(dāng)?shù)诙N藥劑是藥物或組合物時(shí)，第二種藥劑和透明質(zhì)酸酶可以分開、在一個(gè)組 合物中一起或者在兩種組合物中同時(shí)、或者間歇或相繼或其任何組合方式給予。典型地，含 有透明質(zhì)酸降解酶的組合物在給予第二種藥劑之前給予。在一些實(shí)施方案中，第二種藥劑 或療法可以在含透明質(zhì)酸酶組合物之前實(shí)現(xiàn)或給予。在其中時(shí)間不需要M小時(shí)以上的方 法中，含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物的給予與第二種藥劑或療法之間的時(shí)間可以是之前 (或之后)30秒或60秒內(nèi)、至少1分鐘、至少5分鐘、至少15分鐘、至少30分鐘、至少1小 時(shí)或1小時(shí)以上。時(shí)間差可以是給予第二種藥劑或療法之前最短或2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、 8小時(shí)、10小時(shí)、12小時(shí)、14小時(shí)、16小時(shí)、18小時(shí)、20小時(shí)、22小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)或72 小時(shí)。舉例性第二種藥劑和療法包括例如抗癌劑，其是化療劑、放療、抗體、肽、基因治療 載體、病毒如溶瘤病毒以及核酸如輸送抗癌蛋白或其它治療蛋白的基因治療載體。其它舉 例性第二種藥劑或療法包括但非限于鎮(zhèn)痛藥、抗炎藥、抗微生物劑、殺阿米巴劑、殺毛滴蟲 劑、抗帕金森氏病藥、抗瘧藥、抗驚厥藥、抗抑郁藥、抗關(guān)節(jié)炎藥、抗真菌劑、抗高血壓藥、解 熱藥、抗寄生蟲藥、抗組胺藥、α腎上腺素能激動(dòng)劑、α阻斷劑、麻醉劑、支氣管擴(kuò)張劑、殺 生物劑、殺細(xì)菌劑、抑菌劑、β腎上腺素能阻斷劑、鈣通道阻斷劑、心血管藥、避孕藥、化妝或 美容制劑、減充血?jiǎng)?、利尿藥、?zhèn)靜劑、診斷劑、治療性抗體、電解質(zhì)、催眠藥、激素制劑、高血糖藥、肌肉松弛劑、肌肉緊張劑、眼科制劑、擬副交感神經(jīng)藥、psychic energizer agent、鎮(zhèn) 靜劑(sedative agent)、睡眠誘導(dǎo)劑、擬交感神經(jīng)藥、安定藥、尿道制劑(urinary agent), 陰道制劑(vaginal agent)、殺病毒劑、維生素制劑、非留類抗炎藥及血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑 制藥。舉例性的這種藥劑為阿西維辛；阿柔比星；阿考達(dá)唑；阿克羅寧；阿多來新；阿地 白介素；阿侖珠單抗；阿利維A酸(9-順式視黃酸)；別嘌呤醇；六甲蜜胺；Alvocidibs ；安 巴腙；二霉素；阿美蒽醌；Amifostines ；氨魯米特；安吖啶；阿那曲唑；阿那昔酮；安西他 濱；氨茴霉素；Apaziquones ；精美司那；三氧化二砷；天冬酰胺酶；曲林菌素；阿莫司汀；阿 扎胞苷；阿扎替派；含氮霉素；Banoxantrones ；Batabulins ；巴馬司他；BCG Live ；貝那昔 濱；苯達(dá)莫司??；苯佐替派；貝沙羅??；貝伐珠單抗；比卡魯胺；比他舍平；Biricodars ；比 生群；Bisnafide Dimesylates ；比折來新；博來霉素；硼替佐米；布喹那；溴匹立明；布度 鈦；白消安；放線菌素c ；卡普睪酮；Canertinibs ；卡培他濱；卡醋胺；卡貝替姆；卡鉬；卡 波醌；卡莫氟；含有聚苯丙生的卡莫司汀；卡莫司汀；卡柔比星；卡折來新；西地芬戈；塞來 昔布；西馬多丁 ；苯丁酸氮芥；塞奧羅奈；西羅霉素；順鉬；克拉屈濱；克蘭氟脲；氯法拉濱； Crisnatols ；環(huán)磷酰胺；阿糖胞苷liposomal ；阿糖胞苷；達(dá)卡巴嗪；更生霉素；達(dá)依泊汀 α ；柔紅霉素liposomals ；柔紅霉素s/道諾霉素；柔紅霉素s ；地西他濱；地尼白介素2 ； 右尼古地平；Dexonnaplatins ；右雷佐生；地扎胍寧；地吖醌；Dibrospidiums ；地諾孕素； Dinalins ；Disermolides ；多西他塞；Dofequidars ；去氧氟尿苷；阿霉素 liposomal ；阿霉 素HCL ；Docorubicin HCL脂質(zhì)體注射液；阿霉素；屈洛昔芬；屈他雄酮丙酸酯s ；偶氮霉素； 依考莫司?。灰肋_(dá)曲沙；Edotecarins ；依氟鳥氨酸；Elacridars ；依利奈法德；Elliott，s B溶液；依沙蘆星；乙嘧替氟；恩洛鉬；恩普氨酯；Enzastaurins ；依匹哌啶；表柔比星；阿 法依伯??；依地前列素；厄布洛唑；依索比星；雌莫司??；依他硝唑；依托格魯；磷酸依托泊 苷；依托泊苷VP-16 ；依托泊苷；氯苯乙嘧胺；依西美坦；依昔舒林；法倔唑；法扎拉濱；芬維 A銨；非格司亭；氟尿苷；氟達(dá)拉濱；氟尿嘧啶；5-氟尿嘧啶；氟甲睪酮；氟西他濱；磷喹酮； 福司曲星；福司曲星；福曲他明；氟維司群；Galarubicins ；加洛他濱；吉西他濱；吉妥珠單 抗/Ozogamicins ；吉羅酚；Gimatecans ；Gimeracils ；格洛沙腙；Glufosfamides ；醋酸性 瑞林；羥基脲；Ibritumomabs/Tiuxetans ；伊達(dá)比星；異環(huán)磷酰胺；伊莫福新；Ilomastats ； Imatinib mesylates ；Imexons ；Improsulfans ；Indisulams ；Inproquones ；干擾素 α -2a ； 干擾素α-2b;干擾素α ；干擾素β ；干擾素γ ；干擾素；白介素-2及其它白介素(包括 重組白介素)；Intoplicines ；Iobenguanes[131-1] ；Iproplatins ；Irinotecans ；伊索拉 定；Ixab印ilones ；酮曲沙；L-亞硝基羥基丙氨酸；蘭瑞肽；Lapatinibs ；Ledoxantrones ； JfeffiP坐；Leucovorins ；Leuprolides(Leuprorelides) ；￡^ ；；
利阿唑；洛鉬；洛美曲索；洛莫司汀/CCNUs ；洛莫司??；Lonafarnibs ；洛索蒽醌；勒托替康； 馬磷酰胺；甘露舒凡；馬立馬司他；馬索羅酚；美坦辛；氮芥；Meclorethamines/氮芥；醋酸 甲地孕酮；甲地孕酮；美侖孕酮；美法侖；美法侖IL-PAMs ；美諾立爾；美雄烷；巰基嘌呤； 6-巰基嘌呤；美司鈉；Metesinds ；甲氨蝶呤；甲氧沙林；美托咪酯；M氯苯乙嘧胺；美妥替 哌；米帕；米潑昔芬；米索硝唑；米丁度胺；Mitocarcins ；Mitocromins ；米托拉酮；米托潔 林；米托胍腙；米托馬星；絲裂霉素C ；絲裂霉素；米托萘胺；米托喹酮；米托司培；米托坦； 米托蒽醌；米托唑胺；Mivobulins ；咪唑立賓；莫法羅?。荒哌_(dá)醇；Mubritinibs ；霉酚酸； Nandrolone Phenpropionatess ；奈達(dá)怕；Nelzarabines ；奈莫柔比星；銷氛丙口丫 ；諾考達(dá)唾；Nofetumomabs ；諾力口霄素；Nolatrexeds ；Nortopixantrones ；奧曲月太；奧普瑞白介素； 奧馬鉬；Ortataxels ；Oteracils ；奧沙利鉬；奧昔舒侖；氧芬胂；紫杉醇；Pamidronates ； Patubilones ；培加酶；培門冬酶；培非司亭；Peldesines ；佩里霉素；Pelitrexols ；培美 曲塞；戊氮芥；噴司他丁 ；培洛霉素；培磷酰胺；Perifosines ；Picoplatins ；吡萘非特；哌 泊溴烷；哌泊舒凡；吡非尼酮；吡羅蒽醌；Pixantrones ；Plevitrexeds ；Plicamycid光神 霉素；普卡霉素；普洛美坦；普洛美坦；卟吩姆鈉；Porfimers ；紫菜霉素；潑尼莫司汀；丙 卡巴胼；普羅帕脒；螺丙醇；嘌嘧替派；嘌呤霉素；吡呋菌素；奎納克林；雷莫司??；拉布立 酶；利波腺苷；利曲舒凡；利妥昔單抗；羅谷亞胺；羅喹美克；絳色霉素；Sabarubicins ；沙 芬戈；沙格司亭；Mtraplatins ；司鉬；司莫司汀；辛曲秦；西佐喃；索布佐生；索拉非尼； Sparfosates ；Sparfosic Acids ；稀疏霉素；鍺螺胺；螺莫司??；螺鉬；螺鉬；Squalamines ； 鏈黑菌素；鏈伐立星；鏈佐星；磺磷酰胺；磺氯苯脲；Sunitinib Malate ；6-硫代鳥嘌呤 (6-TG) ；Tacedinalines ；滑石；他利霉素；他莫司?。凰舴?；Tariquidars ；?；悄?汀；Tecogalans ；替加氟；替洛蒽醌；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷/VM_26s ；替尼泊苷； 替羅昔??；睪內(nèi)酯；Thiamiprines ；硫代鳥嘌呤；塞替派；硫米嘌呤；Tiazofurins ；噻氯 咪索；替洛隆；Timcodars ；噻莫西酸；替拉扎明；Topixantrones ；托泊替康；托瑞米芬； Tositumomabs ；曲貝替定(Ecteinascidin 743)；曲妥珠單抗；曲托龍；Tretinoins/ATRA ； 曲西立濱；曲洛司坦；三甲曲沙；Triplatin Tetranitrates ；曲普瑞林；曲磷胺；妥布氯 唑；烏苯美司；烏拉莫司??；烏瑞替派；戊柔比星；Valspodars ；伐普肽；維替泊芬；長(zhǎng)春 堿；長(zhǎng)春新堿；長(zhǎng)春地辛；長(zhǎng)春匹定；長(zhǎng)春氟寧；長(zhǎng)春米特；長(zhǎng)春甘酯；長(zhǎng)春西醇；長(zhǎng)春羅 新；長(zhǎng)春瑞濱；長(zhǎng)春羅定；長(zhǎng)春曲醇；長(zhǎng)春利定；伏氯唑；黃霉素A(胍甲環(huán)素)；折尼鉬； Zilascorbs[2-H]；凈司他丁 ；Zoledronate ；佐柔比星；禾口 Zosuquidars0透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥包括例如與高組織間隙液壓相關(guān)或包括高組織間隙液 壓的疾病或病癥，如椎間盤壓力、癌癥和水腫。水腫可以產(chǎn)生自或表現(xiàn)在例如器官移植、卒 中或腦外傷。癌癥包括實(shí)體和淋巴/血液腫瘤和轉(zhuǎn)移性疾病，及未分化腫瘤。適于治療的腫 瘤典型顯示與相同組織類型的非癌組織相比或與相同腫瘤類型的非轉(zhuǎn)移腫瘤相比透明質(zhì) 酸的細(xì)胞和/域間質(zhì)表達(dá)。癌癥包括卵巢癌、原位癌(ISC)、鱗狀細(xì)胞癌(SCC)、前列腺癌、 胰腺癌、其它胃癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、腦癌和結(jié)腸癌之一或多種。如所述的，液壓本文方法、組合物和組合中的透明質(zhì)酸降解酶包括可溶性透明質(zhì) 酸酶，包括非人動(dòng)物透明質(zhì)酸酶、細(xì)菌透明質(zhì)酸酶和人透明質(zhì)酸酶。可溶性透明質(zhì)酸酶的例 子是PH20的可溶性活性部分，如綿羊、牛和人PH20。為使PH20可溶，如人PH20，PH20被截 短以除去C末端GPI錨附著信號(hào)序列。參照人PH20，截短終止于殘基467-482之任一殘基 或者在人等位基因或物種變體或其它變體中相應(yīng)于SEQ ID NO :1的殘基467-482之任一殘 基。例如，透明質(zhì)酸降解酶可以選自含有SEQ ID NO :4-9和47-48任一氨基酸序列的多肽 及其等位基因變體、物種變體和其它變體。透明質(zhì)酸降解酶可以是由編碼SEQ ID N0:3或 SEQ ID NO :4-9和47-48任一氨基酸序列的核酸序列如SEQ ID NO :49的核酸序列編碼的。 它們可以是具有這種氨基酸序列的透明質(zhì)酸降解酶。透明質(zhì)酸降解酶選自其其它變體。其 它變體選自在其全長(zhǎng)與來自SEQ ID NO 1,4-9和47-48的連續(xù)氨基酸序列具有至少60%， 65，70，75，80，85，88%，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99% 或更高序列相同性的多肽，只 要所述多肽是可溶的并顯示透明質(zhì)酸酶活性(即可以降解透明質(zhì)酸)，這可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法包括本文所述方法評(píng)估。特別是，透明質(zhì)酸降解酶可以是通過表達(dá)編碼人PH20可溶性透明質(zhì)酸酶或其等 位基因或物種或其它變體的氨基酸1-482或36-482(即如SEQ IDNO 1所示)的核酸分子 而產(chǎn)生。表達(dá)可以包括在細(xì)胞如CHO細(xì)胞中的表達(dá)和分泌。例如，組合物被命名為重組人 PH20 (rHuPH20)，其通過在CHO細(xì)胞中表達(dá)與編碼分泌用信號(hào)序列如氨基酸1_35的核酸連 接的編碼氨基酸36-482的核酸而產(chǎn)生。rHuPH20分離自培養(yǎng)基。分離后，其被修飾，如通過 與一或多個(gè)PEG化部分(PEG)或其它聚合物反應(yīng)而修飾。其它透明質(zhì)酸降解酶可以類似修 飾并且可以通過重組表達(dá)產(chǎn)生或分離自天然來源。這種方法和產(chǎn)物是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知 的。用于修飾透明質(zhì)酸降解酶的舉例性聚合物包括但非限于甲氧基-聚(乙二 醇)_琥珀酰亞氨基丁酸酯(mPEG-SBA) (5kDa)；甲氧基-聚(乙二醇)_琥珀酰亞氨基丁酸 酯(mPEG-SBA) (20kDa)；甲氧基-聚(乙二醇)_琥珀酰亞氨基丁酸酯(mPEG-SBA) (30kDa)； 甲氧基-聚(乙二醇)-琥珀酰亞氨基α-甲基丁酸酯(mPEG-SMB) (20kDa)；甲氧基-聚(乙 二醇)-琥珀酰亞氨基α -甲基丁酸酯(mPEG-SMB) (30kDa)；甲氧基-聚(乙二醇)-丁醛 (mPEG- 丁醛)(30kDa)，甲氧基-聚(乙二醇)_琥珀酰亞氨基丙酸酯(mPEG_SPA) (20kDa)； 甲氧基-聚(乙二醇)_琥珀酰亞氨基丙酸酯(mPEG-SPA) (30kDa)；(甲氧基-聚(乙二 醇))2-N-琥珀酰亞胺酯(mPEG2-NHS) (IOkDa分支的)；(甲氧基-聚(乙二醇))2_N_琥 珀酰亞胺酯(mPEG2-NHS) (20kDa分支的)；(甲氧基-聚(乙二醇))2_N_琥珀酰亞胺酯 (mPEG2-NHS) (40kDa分支的)；(甲氧基-聚(乙二醇))2_N_琥珀酰亞胺酯(mPEG2_NHS) (60kDa分支的)；生物素-聚(乙二醇)-N-琥珀酰亞胺酯(生物素-PEG-NHS) (5kDa生物 素化)；聚(乙二醇)-P-硝基苯基碳酸酯(PEG-p-硝基苯基-碳酸酯)(30kDa)；和聚(乙 二醇)-丙醛(PEG-丙醛)(30kDa)。PEG部分是熟知的，包括商業(yè)可能的那些或可以合成的那些。PEG部分可以是分支 的或線性PEG，如甲氧基-PEG (mPEG)，包括例如甲氧基聚(乙二醇)丁酸的線性N-羥基琥 珀酰亞胺基酯。PEG的分子量可以是任何合適值，如30或大約30千道爾頓。當(dāng)透明質(zhì)酸降解酶被修飾時(shí)，比活性可能降低。為補(bǔ)償，采用更大量(重量)的修 飾品種。例如，PEG化rHuPH20的比活性可以比天然rHuPH20的比活性低2、3或4倍或低大 約2、3或4倍。劑量相應(yīng)被調(diào)整以輸送希望的單位。劑量依賴于疾病或病癥及特定透明質(zhì) 酸降解酶，如特定透明質(zhì)酸酶，及其修飾。典型劑量是或大約是10至50，000, 000單位，10 至 40，000，000 單位，10 至 36，000，000 單位，10 至 12，000，000 單位，10 至 1，200，000 單位， 10 至 1，000，000 單位，10 至 500，000 單位，100 至 100，000 單位，500 至 50，000 單位，1000 至10，000單位，5000至7500單位，5000單位至50，000單位，或者1，000至10，000單位可 溶性透明質(zhì)酸酶。在透明質(zhì)酸降解酶不是透明質(zhì)酸酶情況中，典型劑量功能等價(jià)于是或者 大約是10至50，000，000透明質(zhì)酸酶單位，10至40，000，000單位，10至36，000，000單位， 10 至 12，000，000 單位，10 至 1，200，000 單位，10 至 1，000，000 單位，10 至 500，000 單位， 100 至 100，000 單位，500 至 50，000 單位，1000 至 10，000 單位，5000 至 7500 單位，5000 單 位至50，000單位，或者1，000至10，000透明質(zhì)酸酶單位。這種劑量被選擇以實(shí)現(xiàn)或可以 用于實(shí)現(xiàn)給藥后對(duì)象組織中組織間隙液壓降低至少25%、大約25%、50%或大約50%，其 可以被保持大約或1或2小時(shí)以上，或者至少8或至少大約8小時(shí)，至少M(fèi)或至少大約M小時(shí)，至少48或至少大約48小時(shí)，或者至少72或至少大約72小時(shí)。給予修飾的透明質(zhì)酸降解酶組合物如修飾的透明質(zhì)酸酶組合物可以實(shí)現(xiàn)血管體 積改變，如在腫瘤中。這種改變可以是對(duì)象組織的血管體積增加至少2倍或大約2倍或者 至少3倍或大約3倍。給予含有透明質(zhì)酸降解酶的組合物可以實(shí)現(xiàn)對(duì)象組織中的水含量降 低至少25%或大約25%或者至少50%或大約50%。在給予含有透明質(zhì)酸降解酶的組合物 后這些改變可以保持或表現(xiàn)至少8或大約8小時(shí)、至少M(fèi)或大約M小時(shí)、至少48或大約 48小時(shí)或者至少72或大約72小時(shí)。給予含有透明質(zhì)酸降解酶的組合可以實(shí)現(xiàn)對(duì)象組織中透明質(zhì)酸陽性細(xì)胞百分比 的降低。透明質(zhì)酸陽性細(xì)胞可以發(fā)生在腫瘤如實(shí)體腫瘤中。治療可以實(shí)現(xiàn)對(duì)象中的腫瘤大 小的降低。給予含有透明質(zhì)酸降解酶的組合物可以表現(xiàn)為和/或觀察為對(duì)象血液中的透明 質(zhì)酸酶活性。對(duì)象血液中透明質(zhì)酸酶的半衰期是至少1或大約1、至少5或大約5、8或大約 8、10或大約10、15或大約15J4或大約M、48或大約48或者72或大約72小時(shí)。例如，當(dāng) 含有透明質(zhì)酸降解酶的組合物的給予導(dǎo)致對(duì)象血液中的透明質(zhì)酸酶活性時(shí)，Iml來自對(duì)象 的血漿具有至少5%或大約5%的給予患者的總透明質(zhì)酸酶活性，持續(xù)至少1或大約1、5或 大約5、8或大約8、10或大約10、15或大約15、24或大約24、48或大約48或者72或大約 72小時(shí)。還提供了組合，其含有第一種組合物，其含有有效量的透明質(zhì)酸降解酶用于降低組織間隙液壓，其中所 述的量降低組織間隙液壓M小時(shí)以上；透明質(zhì)酸降解酶的量功能等價(jià)于是或大約是10至 1，000，000 之間，大約 10 至 50，000，000 單位、10 至 40，000，000 單位、10 至 36，000，000 單 位、10 至 12，000，000 單位、10 至 1，200，000 單位、10 至 1，000，000 單位、10 至 500，000 單 位、100 至 100，000 單位、500 至 50，000 單位、1000 至 10，000 單位、5000 至 7500 單位、5000 單位至50，000單位或1，000至10，000透明質(zhì)酸酶；以及第二種組合物，其含有用于治療透 明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的藥劑。透明質(zhì)酸降解酶通過綴合于聚合物如增加透明質(zhì)酸酶半衰期的聚合物而修飾。舉 例性聚合物包括葡聚糖、sialation或PEG化部分和/或其組合物。透明質(zhì)酸降解酶可以 是可溶性透明質(zhì)酸酶，其可以包括選自上述非人動(dòng)物透明質(zhì)酸酶、人透明質(zhì)酸酶和細(xì)菌透 明質(zhì)酸酶的那些，以及包括是上述用于本發(fā)明方法中的PH20的可溶形式的可溶性透明質(zhì) 酸酶第二種藥劑或療法包括上述用于本發(fā)明方法中的任何物質(zhì)。通過本文方法，治療的癌癥或含有富含蛋白聚糖的細(xì)胞外周基質(zhì)的其它疾病，所 述蛋白聚糖含有透明質(zhì)酸。這種癌癥和其它疾病適于用修飾的可溶性透明質(zhì)酸酶或本文所 述其它藥劑(上述和下述)治療。如本文詳述，與修飾的透明質(zhì)酸降解酶如PEG化rHuPH20 接觸導(dǎo)致細(xì)胞外周外被萎陷。如例舉的，PEG化rHuPH20 (PEGrHuPH20)以劑量依賴方式降 低腫瘤IFP，實(shí)現(xiàn)IV給予后降低85%以上的腫瘤IFP。在單劑PEGrHuPH20后腫瘤外周HA 保持耗竭超過3天。隨著圍繞腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞外周透明質(zhì)酸的組織學(xué)萎陷，腫瘤水含量顯 著降低3天以上，與通過表觀擴(kuò)散系數(shù)(ADC)MRI和IFP監(jiān)測(cè)在腫瘤中檢測(cè)到的改變一致。 另外，如舉例示出的，在給藥后8小時(shí)內(nèi)作為腫瘤內(nèi)血管的血管減壓的結(jié)果實(shí)現(xiàn)了腫瘤血 管體積選擇性增加3. 5倍。這通過組織學(xué)和超聲證實(shí)。腫瘤微環(huán)境中的這種透明質(zhì)酸可以用可溶性修飾的透明質(zhì)酸酶如PEG化rHuPH20(PEGrHuPH20)靶向。如舉例示出的，PEG化 rHuPH20與化療劑如多西他賽或脂質(zhì)體多柔比星共給藥與單獨(dú)給予化療劑時(shí)相比可以增加 化療劑在動(dòng)物模型中的抗腫瘤活性。附圖簡(jiǎn)述

圖1描繪了用人PC3前列腺癌細(xì)胞肌肉內(nèi)接種以建立腫瘤的裸鼠(PC3前列腺癌 模型)中的腫瘤體積。接種后，對(duì)小鼠進(jìn)行如下治療方案，其中給予活性藥物成分(API) 緩沖液、30mg/kg多西他賽、10mg/kg多西他賽、PEG化rHuPH20 (P)或者PEG化rHuPH20加 10mg/kg多西他賽(T+P)。在各種時(shí)間點(diǎn)測(cè)量腫瘤體積以評(píng)估PEG化rHuPH20與多西他賽 共給予對(duì)多西他賽的抗腫瘤活性的作用。圖2描繪了在肌肉內(nèi)注射人PC3前列腺癌細(xì)胞然后用緩沖液(對(duì)照小鼠)、多西他 賽、PEG化rHuPH20或者PEG化rHuPH20/多西他賽治療后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)小鼠在1500mm3腫瘤 體積下的存活百分比。圖3描繪了用人PC3前列腺癌細(xì)胞肌肉內(nèi)接種以建立腫瘤的裸鼠(PC3前列腺 癌模型)中的腫瘤體積。接種后，對(duì)小鼠進(jìn)行如下治療方案，其中給予API緩沖液、PEG化 rHuPH20(P)、脂質(zhì)體多柔比星(D)或者PEG化rHuPH20加脂質(zhì)體多柔比星(D+P)。在各種時(shí) 間點(diǎn)測(cè)量腫瘤體積以評(píng)估PEG化rHuPH20與脂質(zhì)體多柔比星共給予對(duì)脂質(zhì)體多柔比星的抗 腫瘤活性的作用。圖 4 描繪了給予 3000、7000、10000 或 30000 單位的 PEG 化 rHuPH20 (P)后在第 O、 3、7、10、14、17、21、24天的體重變化(百分比)。圖 5 描繪了 10mg/kg 多西他賽與 3000、7000、10000 單位的 PEG 化 rHuPH20(T+P)共 給予裸鼠后在第0、7、14、和21天的體重變化(百分比)。這些小鼠在第3、10、17和M天還 接受了 3000、7000或10000單位的PEG化rHuPH20。還描繪了接受僅API緩沖液或IOmg/ kg doctaxel的小鼠的體重變化。圖6描繪了給予各種劑量的PEG化rHuPH20與10mg/kg Taxotere (多西他賽)、 PEG化rHuPH20單獨(dú)、Taxotere (多西他賽)單獨(dú)或API緩沖液?jiǎn)为?dú)的裸鼠的血液中粒 細(xì)胞數(shù)。組1小鼠在第0、3、7、10、14、17、21、M天接受API緩沖液；組2-5在第0、3、7、10、 14、17、21、24天接受劑量分別為3000、7000、10000或30000單位/小鼠的PEG化rHuPH20 ； 組6-8在第0、7、14、21天被共給予Taxotere (多西他賽)與分別為3000、7000、10000單 位/小鼠的PEG化rHuPH20，；組9和10在第0、7和14天接受10mg/kg Taxotere (多西 他賽)或30mg/kg Taxotere (多西他賽)。然后評(píng)估在各時(shí)間點(diǎn)血液中粒細(xì)胞數(shù)。圖7描繪了給予各種劑量的PEG化rHuPH20與10mg/kg iTaxotere(多西他賽)、 PEG化rHuPH20單獨(dú)、Taxotere (多西他賽)單獨(dú)或API緩沖液?jiǎn)为?dú)的裸鼠血清中白蛋 白水平。組1小鼠在第0、3、7、10、14、17、21、M天接受API緩沖液；組2-5在第0、3、7、10、 14、17、21、24天接受劑量分別為3000,7000,10000或30000單位/小鼠的PEG化rHuPH20 ； 組6-8在第0、7、14、21天被共給予1^ ^6儀@(多西他賽)與分別為3000、7000、10000單 位/小鼠的PEG化rHuPH20 ；組9和10在第0、7和14天接受10mg/kg Taxotere (多西 他賽)或30mg/kg Taxotere (多西他賽)。圖8描繪了在富HA人前列腺腫瘤異種移植物模型PC3中重復(fù)給予單獨(dú)PEG化 rHuPH20的作用。如實(shí)施例16A所述，在第0、3、5、7、10、12、14和17天，小鼠用對(duì)照緩沖液和各種量(酶單位(U))的PEG化HuPH20注射。在第2、4、7、11、14和18天，通過用Visual Sonics 超聲系統(tǒng)捕獲圖像并用超聲成像軟件程序在每組動(dòng)物中測(cè)量研究期間的腫瘤體 積(mm3)。這些結(jié)果也示于表四。圖9描繪了給予API緩沖液或3000U PEG化rHuPH20后，在具有各種程度透明質(zhì) 酸(HA)腫瘤表達(dá)(+++、++和+)的三種不同腫瘤模型(PC3，4Tl-GFP，Mat LyLu)中的腫瘤 體積和存活百分比。結(jié)果描述于實(shí)施例17C，也示于表33-37。如實(shí)施例17所述，通過確 定每組中在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的“存活”動(dòng)物百分比而在每種模型中評(píng)估效果。為此研究，選擇大 于或等于1500mm3的腫瘤體積作為終點(diǎn)，其被認(rèn)為是類似于半死(非存活)狀態(tài)，具有低于 1500mm3的腫瘤體積的動(dòng)物被認(rèn)為是存活的，而具有1500mm3或更大腫瘤體積的動(dòng)物被認(rèn)為 是病態(tài)的(morbid)。圖10描繪了如實(shí)施例18所述，在PC3腦腫瘤模型中用PEG化rHuPH20或?qū)φ站彌_ 液治療后在各時(shí)間點(diǎn)存活的小鼠百分比。通過評(píng)估在指示時(shí)間存活的小鼠數(shù)確定存活率。圖11描繪了如實(shí)施例18所述，在PC3腦腫瘤模型中用對(duì)照緩沖液、輻射或者輻射 與PEG化rHuPH20聯(lián)合治療后在各時(shí)間點(diǎn)存活的小鼠百分比。通過評(píng)估在指示時(shí)間存活的
小鼠數(shù)確定存活率。圖12描繪了小鼠中給予PEG化rHuPH20之后Hi回歸曲線。詳細(xì)描述提綱A.定義B.用于治療透明質(zhì)酸相關(guān)病癥、疾病和失調(diào)的方法和組合物綜覽1.透明質(zhì)酸2.透明質(zhì)酸相關(guān)疾病3.治療方法及組合物4.組合及其治療方法C.含有透明質(zhì)酸降解酶的組合物1.透明質(zhì)酸酶a.哺乳動(dòng)物類型透明質(zhì)酸酶b.細(xì)菌透明質(zhì)酸酶c.來自水蛭、其它寄生蟲和甲殼綱動(dòng)物的透明質(zhì)酸酶2.其它透明質(zhì)酸降解酶3.可溶性透明質(zhì)酸降解酶a.可溶性人PffiOb. rHuPH204.透明質(zhì)酸降解酶的糖基化5.修飾的(聚合物綴合的)透明質(zhì)酸降解酶a. PEG化可溶性透明質(zhì)酸降解酶D.產(chǎn)生編碼透明質(zhì)酸降解酶及其多肽的核酸的方法1.載體和細(xì)胞2.表達(dá)
a.原核細(xì)胞b.酵母細(xì)胞c.昆蟲細(xì)胞d.哺乳動(dòng)物細(xì)胞e.植物3.純化技術(shù)4.透明質(zhì)酸降解酶多肽的PEG化F.組合物的制備、配制及給予1.配制a.注射劑、溶液和乳液b.凍干的粉末c.局部給予d.用于其它給予途徑的組合物2.劑量和給予3.聯(lián)合療法4.包裝和制造品G.評(píng)估活性、生物利用度和藥動(dòng)學(xué)的方法1.評(píng)估透明質(zhì)酸降解酶的活性的測(cè)定2.藥動(dòng)學(xué)和耐受性3.動(dòng)物模型H.透明質(zhì)酸降解酶在治療透明質(zhì)酸相關(guān)病癥、疾病和失調(diào)中的應(yīng)用1.透明質(zhì)酸相關(guān)病癥和疾病癌癥、包括富透明質(zhì)酸癌癥2.治療透明質(zhì)酸相關(guān)病癥和疾病中的應(yīng)用a.透明質(zhì)酸相關(guān)疾病標(biāo)記物的檢測(cè)(用于治療和評(píng)估治療作用的對(duì)象的選擇)i.用于透明質(zhì)酸相關(guān)疾病標(biāo)記物的測(cè)定ii.相對(duì)于對(duì)照樣品透明質(zhì)酸相關(guān)標(biāo)記物的檢測(cè)b.治療癌癥中的應(yīng)用抗癌劑和其它治療c.治療與升高的組織間隙液壓相關(guān)的其它疾病中的應(yīng)用3.作為播散劑的應(yīng)用4.皮下灌注術(shù)中的應(yīng)用5.玻璃體切割術(shù)和眼科失調(diào)和病癥的應(yīng)用6.基因治療應(yīng)用7.化妝品應(yīng)用8.器官移植中的應(yīng)用9.腦中糖胺聚糖積累的治療中的應(yīng)用10.心血管疾病中糖胺聚糖積累的治療中的應(yīng)用11.肺病中的應(yīng)用
12.其它應(yīng)用I.實(shí)施例A.定義除非特別指出，則本文所用所有技術(shù)和學(xué)術(shù)用語均具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人 員通常理解的含義。除非特別指出，則本文中所有專利、專利申請(qǐng)、公開的應(yīng)用和申請(qǐng)、 Genbank序列、數(shù)據(jù)庫、網(wǎng)站以及其它公開材料均以其全部?jī)?nèi)容并入作參考。在術(shù)語具有多 個(gè)定義的情況中，以在本章節(jié)中所述含義為主。參考URL或其他這樣的標(biāo)示符或地址時(shí)，應(yīng) 理解所述的標(biāo)示符可改變而且網(wǎng)上的具體信息時(shí)有時(shí)無，但通過在網(wǎng)上搜索應(yīng)當(dāng)能獲得相 當(dāng)?shù)男畔?。參考上述?nèi)容可證明所述信息的可用性以及公眾傳播。如本文所用，給藥方案是指給予的藥劑例如含有可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物或其 它藥劑的量和給予頻率。所述給藥方案與所治療的疾病或者病癥相關(guān)，因此是可變的。如本文所用，給予頻率是指連續(xù)給予治療之間的時(shí)間。例如，頻率可以是天、周或 月。例如，頻率可以是每周一次以上，例如，一周二次、一周三次、一周四次、一周五次、一周 六次或每日。頻率也可以是一周、兩周、三周或四周。特定頻率與治療的特定疾病或者病癥 相關(guān)。通常地，頻率是每周一次以上，通常是每周二次。如本文所用，“給藥周期(cycle of administration) ”是指在連續(xù)給予期間重復(fù) 的給予酶和/或第二種藥劑的給藥方案的重復(fù)安排。例如，舉例性的給藥周期是洲天周期， 其中每周給予二次共三周，隨后中斷給予一周。如本文所用，針對(duì)給予或中斷給予周數(shù)的“預(yù)定”是指預(yù)先決定或建立的時(shí)間期 間。時(shí)間期間可以是憑經(jīng)驗(yàn)確定并且與疾病或病癥、病癥嚴(yán)重性、特定患者及治療醫(yī)生技能 水平內(nèi)的其它因素相關(guān)。如本文所用，透明質(zhì)酸降解酶是指催化透明質(zhì)酸聚合物(也稱為透明質(zhì)酸或 HA)裂解為較小分子量片段的酶。透明質(zhì)酸降解酶的例子是透明質(zhì)酸酶，及具有解聚 透明質(zhì)酸能力的特定軟骨素酶(chondroitinase)和裂合酶。是透明質(zhì)酸降解酶的舉 例性軟骨素酶包括但非限于軟骨素ABC裂合酶(也稱為軟骨素酶ABC)，軟骨素AC裂 合酶(也稱為硫酸軟骨素裂合酶或硫酸軟骨素eliminase)和軟骨素C裂合酶。軟骨 素ABC裂合酶包括兩種酶，硫酸軟骨素-ABC內(nèi)裂合酶(endolyase) (EC 4.2.2.20)和 硫酸軟骨素-ABC外裂合酶(EC4. 2. 2. 21)。舉例性硫酸軟骨素-ABC內(nèi)裂合酶和硫 酸軟骨素-ABC外裂合酶包括但非限于來自Proteus vulgaris和Flavobacterium heparinum(Proteus vulgaris 硫酸軟骨素-ABC 內(nèi)裂合酶如 SEQ ID NO :98 所示；Sato et al. (1994) Appl. Microbiol. Biotechnol. 41 (1) :39-46)的那些。來自細(xì)菌的舉例性 軟骨素酶 AC 酶包括但非限于來自 Flavobacterium heparinum Victivallis vadensis, 如 SEQ ID NO :99 所示，禾口 Arthrobacter aurescens (Tkalec et al. (2000) Applied and Environmental Microbiology 66(1) :29-35 ；Ernst et al. (1995)Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology 30(5) :387-444)的那些。來自細(xì)菌的舉例性軟 骨素酶C酶包括但非限于來自Str印tococcus和Flavobacterium(Hibi et al. (1989) FEMS-Microbiol-Lett. 48(2) 121-4 ；Michelacci et al. (1976)J. Biol. Chem. 251 1154-8 ；Tsuda et al. (1999)Eur. J. Biochem. 262 :127-133)的那些。如本文所用，透明質(zhì)酸酶是指一類透明質(zhì)酸降解酶。透明質(zhì)酸酶包括細(xì)菌透明質(zhì)酸酶(EC 4. 2. 2.1或EC 4. 2.99. 1)，來自水蛭、其它寄生蟲和甲殼動(dòng)物(EC 3. 2. 1. 36)的 透明質(zhì)酸酶，以及哺乳動(dòng)物型透明質(zhì)酸酶(EC 3.2.1.35)。透明質(zhì)酸酶包括任何非人源以 及來自水蛭、其它寄生蟲和甲殼動(dòng)物的任何酶，所述非人源包括但不限于鼠、犬、貓、野兔、 禽類、牛、綿羊、豬、馬、魚類、蛙科動(dòng)物、細(xì)菌。舉例的非人透明質(zhì)酸酶包括來自如下動(dòng)物的 透明質(zhì)酸酶牛(SEQ ID而10、11、64和冊(cè)55(美國(guó)專利號(hào)5，747，027和5，827，721))、 黃蜂(SEQ ID N0:12 禾口 13)、蜜蜂(SEQ ID N0:14)、白臉馬蜂(SEQ ID N0:15)、胡蜂(SEQ ID NO :16)、小鼠(SEQ ID NO :17_19、31)、豬(SEQ ID NO :20-21)、大鼠(SEQ ID NO :22-24, 30)、兔(SEQ ID N0:25)、綿羊(SEQ ID NO :26、27、63 和 65)、黑猩猩(SEQ ID NO :101)、獼 猴(Rhesus monkey) (SEQ ID NO :102)、猩猩(SEQ ID NO 丨8)、獼猴(cynomolgus monkey) (SEQ ID NO 29)、豚鼠(SEQ ID NO :32)、Arthrobacter sp.(菌株 FB24) (SEQID NO :67)、 Bdellovibrio bacteriovorus(SEQ ID NO :68)、Propionibacterium acnes(SEQ ID NO: 69), Streptococcus agalactiae((SEQ ID NO :70) ； 18RS21(SEQ ID NO :71)；血清型 Ia (SEQ ID NO :72)；血清型 III(SEQ ID NO 73), Staphylococcus aureus (菌株 COL (SEQ ID NO 74)；菌株 MRSA252(SEQ IDNOS :75 and 76)；菌株 MSSA476 (SEQ ID NO :77)；菌株 NCTC 8325 (SEQ IDNO :78)；菌株 bovine RF122(SEQ ID NOS :79 and 80)；菌株USA300 (SEQ IDNO 81), Streptococcus pneumoniae ((SEQ ID NO :82)；菌株 ATCC BAA-255/R6 (SEQ ID NO :83)；血清型 2、菌株 D39/NCTC 7466 (SEQ ID NO :84)、Sti^ptococcus pyogenes (血 清型 Ml) (SEQ ID NO :85)；血清型 M2、菌株 MGAS10270 (SEQ ID NO :86)；血清型 M4、菌株 MGAS10750(SEQ ID NO :87)；血清型 M6(SEQ ID NO :88)；血清型 M12、菌株 MGAS2096 (SEQ ID NO :89 和 90)；血清型 M12、菌株 MGAS9429(SEQ ID NO :91)；血清型]\C8(SEQ IDNO :92)； Streptococcus suis(SEQ ID NO :93-95) ；Vibrio fischeri (菌株 ATCC700601/ES114 (SEQ ID NO :96))、以及Mi^ptomyces hyaluronolyticus透明質(zhì)酸酶，其特異于透明質(zhì)酸并且 不裂解軟骨素或硫酸軟骨素(Ohya、Τ. and Kaneko, Y. (1970) Biochim. Biophys. Acta 198 607)。透明質(zhì)酸酶還包括人源的那些。舉例的人透明質(zhì)酸酶包括HYALl (SEQ ID NO :36)、 HYAL2 (SEQID NO 37)、HYAL3 (SEQ ID NO 38)、HYAL4 (SEQ ID NO 39)和 PH20 (SEQID NO 1)。透明質(zhì)酸酶還包括可溶性透明質(zhì)酸酶，包括綿羊和牛PH20、可溶性人PH20和可溶性 rHuPH20。商業(yè)可獲得的?；蚓d羊可溶性透明質(zhì)酸酶的例子是Vitrase (綿羊透明質(zhì)酸 酶)和Amphadase (牛透明質(zhì)酸酶)。提及的透明質(zhì)酸降解酶包括前體透明質(zhì)酸降解酶多肽和成熟透明質(zhì)酸降解酶多 肽(如其中已經(jīng)除去信號(hào)序列的那些多肽)、其具有活性的截短形式，以及包括等位基因 變體和物種變體，由剪接變體編碼的變體，以及其它變體，包括與SEQ ID NO 1和10-48、 63-65,67-102 所示前體多肽具有 40 %、45 %、50 %、55 %、60 %、65 %、70 %、75 %、80 %、 85%,90%,95%,96%,97%、98%、99%或者更多序列相同性的多肽，或者其成熟形式。例 如，提及的透明質(zhì)酸降解酶也包括SEQ ID NO :50-51所示人PH20前體多肽變體。透明質(zhì) 酸降解酶也包括含有化學(xué)或者翻譯后修飾的那些酶，以及不含有化學(xué)或者翻譯后修飾的那 些酶。這種修飾包括但不限于聚乙二醇化、白蛋白化(albumination)、糖基化、法尼基化 (farnesylation)、羧化、羥基化、磷酸化及本領(lǐng)域已知的其它多肽修飾。如本文所用，可溶性透明質(zhì)酸酶是指特征在于其在生理?xiàng)l件下的可溶性的多肽。 例如，通過其在加熱至37°C的Triton X-114溶液中分配至水相而可以區(qū)分可溶性透明質(zhì)酸酶(Bordier et al.，(1981) J. Biol. Chem.，256 :1604-7)。膜錨定的如脂質(zhì)錨定的透明質(zhì) 酸酶將分配在去污劑富集相，但是在用磷脂酶-C處理后將分配至去污劑不足或者水相中。 可溶性透明質(zhì)酸酶包括膜錨定的透明質(zhì)酸酶，其中透明質(zhì)酸酶與膜錨定相關(guān)的一或多個(gè)區(qū) 域已經(jīng)被除去或者修飾，其中所述可溶形式保留透明質(zhì)酸酶活性?？扇苄酝该髻|(zhì)酸酶包括 重組可溶性透明質(zhì)酸酶以及包含于或者純化自天然來源的那些酶，例如綿羊或者牛睪丸提 取物。舉例的這種可溶性透明質(zhì)酸酶是可溶性人PH20。其它可溶性透明質(zhì)酸酶包括綿羊 (SEQ ID NO :27,63,65)和牛(SEQ ID NO :11、64)PH20。如本文所用，可溶性人PH20或者sHuPH20包括缺少所有或者部分C末端糖基磷 脂酰肌醇(GPI)附著位點(diǎn)的成熟多肽，由此在表達(dá)時(shí)所述多肽是可溶的。舉例的sHuPH20 多肽包括具有SEQ ID NO :4-9和47-48之一所示的氨基酸序列的成熟多肽。這種舉例的 sHuPH20多肽的前體多肽包括信號(hào)序列。舉例的前體如SEQ ID NO :3和40-46所示，其在 第1-35位氨基酸均含有一個(gè)具有35個(gè)氨基酸的信號(hào)序列?？扇苄訦uPH20多肽還包括在 本文所述生產(chǎn)和純化方法期間或者之后降解的那些序列。如本文所用，可溶性重組人PH20(rHuPH20)是指在中國(guó)倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞中重 組表達(dá)的可溶形式的人PH20?？扇苄詒HuPH20由包含信號(hào)序列及由SEQ ID N0:49所示的 核酸編碼。還包括是其等位基因變體及其它可溶變體的DNA分子。編碼可溶rHuPH20的核 酸在CHO細(xì)胞中表達(dá)，其分泌成熟多肽。如在培養(yǎng)基中產(chǎn)生，在C末端具有異質(zhì)性，由此產(chǎn) 物是混合物，其可以包括不同豐度的任一或多個(gè)SEQ ID NO :4-9。也包括相應(yīng)的等位基因變 體及其它變體，包括相應(yīng)于SEQ ID NO :50-51所示前體人PH20多肽的那些變體。其它變體 與 SEQ ID NO :4-9 和 47-48 所示任何序列可具有 60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、 93^.94^^95^^96^^97^^98^^991%或者更高的序列相同性，只要其保留透明質(zhì)酸酶活 性且是可溶的即可。如本文所用，透明質(zhì)酸酶底物是指由透明質(zhì)酸酶裂解和/或解聚的底物(例如 蛋白質(zhì)或多糖)。通常，透明質(zhì)酸酶底物是糖胺聚糖。舉例的透明質(zhì)酸酶底物是透明質(zhì)酸 (HA)。如本文所用，透明質(zhì)酸相關(guān)疾病、失調(diào)或病癥是指其中透明質(zhì)酸水平升高作為疾 病或病癥的原因、結(jié)果或在其中觀察到的任何疾病或病癥。透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥與組 織或細(xì)胞中升高的透明質(zhì)酸表達(dá)、增加的組織間隙液壓、降低的血管體積和/或增加的組 織水含量相關(guān)。透明質(zhì)酸相關(guān)疾病、失調(diào)或病癥可以通過給予含有透明質(zhì)酸降解酶如透明 質(zhì)酸酶例如可溶性透明質(zhì)酸酶的組合物單獨(dú)或與另一種療法和/或藥劑聯(lián)合或額外給予 而治療。舉例的疾病和病癥包括但不限于富透明質(zhì)酸癌癥，例如腫瘤，包括實(shí)體腫瘤如晚期 癌癥、轉(zhuǎn)移癌、未分化癌、卵巢癌、原位癌(ISC)、鱗狀細(xì)胞癌(SCC)、前列腺癌、胰腺癌、非小 細(xì)胞肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌和其它癌癥。透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥的例子還包括與升高的 組織間隙液壓相關(guān)的疾病，如與椎間盤壓力相關(guān)的疾病，及水腫，例如由器官移植、卒中、腦 外傷或其它損傷導(dǎo)致的水腫。舉例的透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或病癥包括與升高的組織間隙液 壓、降低的血管體積和/或增加的組織水含量相關(guān)的疾病和病癥，包括癌癥椎間盤壓力和 水腫。在一個(gè)實(shí)施例中，透明質(zhì)酸相關(guān)病癥、疾病或失調(diào)的治療包括升高的組織間隙液壓 (IFP)、降低的血管體積和增加的組織水含量之一或多種的改善、降低或其它有益效果。如本文所用，升高的透明質(zhì)酸水平根據(jù)疾病或病癥是指特定組織、體液或細(xì)胞中透明質(zhì)酸的量。例如，作為存在富透明質(zhì)酸腫瘤的結(jié)果，透明質(zhì)酸(HA)水平可以在體液如 血液、尿、唾液和血清和/或在腫瘤組織或細(xì)胞中升高。所述水平可以與標(biāo)準(zhǔn)或其它合適對(duì) 照比較，如來自未患有HA相關(guān)疾病的對(duì)象的可比樣品。如本文所用，綴合于透明質(zhì)酸降解酶如透明質(zhì)酸酶的聚合物是指直接或經(jīng)接頭共 價(jià)連接于或其它方式穩(wěn)定連接于透明質(zhì)酸降解酶的聚合物。這種聚合物典型增加血清半衰 期，并包括但不限于sialic部分、PEG化部分、葡聚糖以及糖和其它部分如用于糖基化。如本文所用，天然透明質(zhì)酸降解酶例如天然可溶性透明質(zhì)酸酶是未用聚合物例如 PEG化部分(PEG)或sialation部分修飾的透明質(zhì)酸降解酶。因此，天然透明質(zhì)酸降解酶是 未修飾的。典型地，天然透明質(zhì)酸降解酶如天然可溶性透明質(zhì)酸酶與已通過綴合于聚合物 例如PEG而修飾的透明質(zhì)酸降解酶相比在生物學(xué)環(huán)境(例如在對(duì)象中)中具有降低的半衰 期。如本文所用，比活性是指每mg蛋白質(zhì)的活性單位。毫克透明質(zhì)酸酶通過溶液在 280nm的吸收定義，假定摩爾消光系數(shù)大約為1. 7，以Μ^πΓ1單位表示。如本文所用，活性是指與全長(zhǎng)(完整)蛋白質(zhì)相關(guān)的多肽或其部分的功能活性。功 能活性包括但不限于生物學(xué)活性、催化或酶活性、抗原性(結(jié)合或與多肽競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗多肽 抗體的能力)、免疫原性、形成多聚體的能力及特異結(jié)合多肽受體或配體的能力。如本文所用，透明質(zhì)酸酶活性是指酶催化裂解透明質(zhì)酸的能力。美國(guó)藥典(USP) 用于透明質(zhì)酸酶的XXII測(cè)定通過在酶與透明質(zhì)酸(HA)在37°C反應(yīng)30分鐘后測(cè)量高分子 量透明質(zhì)酸(HA)底物的量而間接確定透明質(zhì)酸酶活性(USP XXII-NF XVII (1990) 644-645 United States Pharmacopeia Convention, Inc, Rockville， MD) 。 ￠111 + ! ^ ^^^= 考標(biāo)準(zhǔn)溶液以確定任何透明質(zhì)酸酶的以單位表示的相對(duì)活性。確定透明質(zhì)酸酶如可溶性 rHuPH20的透明質(zhì)酸酶活性的體外測(cè)定是本領(lǐng)域已知的并在本文中描述。舉例的測(cè)定包括 下文描述(見實(shí)施例幻的微濁度(microturbidity)測(cè)定，其通過檢測(cè)當(dāng)未裂解的透明質(zhì) 酸結(jié)合血清白蛋白時(shí)形成的不溶沉淀而間接測(cè)量由透明質(zhì)酸酶對(duì)透明質(zhì)酸的裂解。參考標(biāo) 準(zhǔn)可以用于例如產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線以確定被測(cè)試的透明質(zhì)酸酶的以單位表示的活性。如本文所用，透明質(zhì)酸酶活性單位是指U. S. P. National Formulary (NFXIII)單位 (NFU)，通過與標(biāo)準(zhǔn)透明質(zhì)酸酶樣品(例如USP或WHO標(biāo)準(zhǔn))比較而確定，例如使用實(shí)施例 2所述的基于濁度降低ELISA的測(cè)定，其中濁度降低單位通過經(jīng)U. S. P.標(biāo)準(zhǔn)化的透明質(zhì)酸 酶樣品(例如USP或WHO標(biāo)準(zhǔn))的標(biāo)準(zhǔn)曲線而與NFU和U. S. P.單位相關(guān)聯(lián)。因此，實(shí)施例 2 確定的酶活性是相對(duì) TRU(參見例如 Dorfman et al.，1948，J. Biol. Chem. 172 :367)。透 明質(zhì)酸酶單位標(biāo)準(zhǔn)化為標(biāo)準(zhǔn)活性。因此，例如PEG化透明質(zhì)酸酶可以顯示較低活性/mg。為 本文目的，劑量參照單位。如果需要，特定的修飾的透明質(zhì)酸酶的單位/mg(標(biāo)準(zhǔn)活性)可 以憑經(jīng)驗(yàn)確定。如本文所用，提及透明質(zhì)酸降解酶時(shí)的“功能等價(jià)量”或其語法變體是指實(shí)現(xiàn)與參 照酶如透明質(zhì)酸酶的量所實(shí)現(xiàn)的相同作用的透明質(zhì)酸降解酶量。例如，任何透明質(zhì)酸降解 酶的活性可以與rHuPH20的活性相比以確定實(shí)現(xiàn)與已知量的rHuPH20相同的作用的透明質(zhì) 酸降解酶的功能等價(jià)量。例如，透明質(zhì)酸降解酶作為涂布或擴(kuò)散劑的能力可以通過將其與 臺(tái)盼藍(lán)一起注射進(jìn)小鼠的體側(cè)皮膚而評(píng)估(參見例如美國(guó)專利
發(fā)明者C·B·湯普森, G·I·弗羅斯特, P·江 申請(qǐng)人:哈洛齊梅公司