專利名稱：：一種發(fā)酵制備丁二酸的方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于生物工程
技術領域：
，涉及一種利用混合堿調節(jié)pH發(fā)酵制備丁二酸的方法。
背景技術：
：丁二酸，又名琥珀酸，是一種二元羧酸，作為重要的C4平臺化合物，廣泛應用于食品、醫(yī)藥、香料、洗滌劑、精細化工產(chǎn)品、表面活性劑生物可降解材料等方面。丁二酸傳統(tǒng)的生產(chǎn)方法是以石油為原料用化學法進行煉制合成。而隨著石油資源日益枯竭，微生物發(fā)酵法生產(chǎn)丁二酸以其環(huán)境友好性、可利用廢棄的生物質資源、能夠固定溫室氣體(A等優(yōu)點，成為研究的熱門課題，正在美國、日本等國家深入地進行著。C02和pH值是影響微生物菌體生長和其丁二酸產(chǎn)量的關鍵因素。C02在菌體的生長代謝過程中作為碳源被菌體利用，合成目的產(chǎn)物丁二酸。而環(huán)境pH值的改變會引起菌體內外部化學環(huán)境和酶活力的變化，從而對細胞代謝產(chǎn)生影響。pH值還可以影響C02的溶解水平，以及HC(V、C032—的解離平衡，進而影響丁二酸的合成。所以在微生物發(fā)酵產(chǎn)丁二酸的過程中，調節(jié)適宜的PH水平并且選擇合適的調節(jié)方式對提高菌體的代謝活性和產(chǎn)酸能力具有重要作用。此外，在發(fā)酵過程中，有機酸的積累會導致pH下降，也需要添加pH調節(jié)劑來維持環(huán)境的中性水平。對于產(chǎn)琥珀酸放線桿菌(Actinobacillussuccinogenes)而言，其發(fā)酵產(chǎn)丁二酸的最適pH在6.67.0之間。US5573931報道，MgC03是較好的中和劑，能呈現(xiàn)出較好的調節(jié)能力，比如在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加MgC03固體，能夠將發(fā)酵體系的pH值維持在適宜的水平，使菌體在發(fā)酵過程中表現(xiàn)出較高的代謝活性；但是，MgC03成本較高，消耗量較大，還會進一步增加了下游產(chǎn)品分離提取的難度，其實際上不利于丁二酸生物法的工業(yè)生產(chǎn)。
發(fā)明內容本發(fā)明的技術目的在于提供一種利用發(fā)酵制備丁二酸的新方法，使得該方法可以通過選擇合適的PH調節(jié)劑、制定合理的調節(jié)策略來優(yōu)化生產(chǎn)工藝，降低生物制備丁二酸的生產(chǎn)成本。本發(fā)明的技術目的是通過下面的技術方案實現(xiàn)的—種發(fā)酵制備丁二酸的方法，包括菌種活化、種子培養(yǎng)、厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸三步驟，其特征在于在厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸的步驟中添加兩種堿性中和劑的混合物，并調節(jié)發(fā)酵體系的pH值為6.67.0。其中，所述的兩種堿性中和劑的混合物是氨水、NaOH、Na2C03、NaHC03、Ca(0H)2、CaC03、Mg(OH)2中的任意兩兩組合的混合物；進一步，這些組合中最佳組合是(1)氨水、Mg(0H)2;(2)Na0H、Mg(OH)2;(3)Na2C03、Mg(0H)2;(4)NaHC03、Mg(0H)2;(5)Ca(0H)2、Mg(0H)2;(6)CaC03、Mg(0H)2。其中，組合的兩種堿性中和劑的質量配比為i:33:i。本發(fā)明的有益效果在于1、本發(fā)明利用現(xiàn)有技術的多種單一的堿性中和劑調節(jié)pH值發(fā)酵制備丁二酸，從而篩選出堿性較強并有利于發(fā)酵的堿性中和劑；將篩選到的堿性中和劑進行了組合用于調節(jié)pH值發(fā)酵制備丁二酸，并確定了混合堿的最佳比例，使得生產(chǎn)的丁二酸在一個較高的水平；2、本發(fā)明不僅利用一些了相對廉價的堿性中和劑，而且可以基本達到利用堿式MgC03作為唯一堿式化合物調節(jié)pH時的丁二酸生產(chǎn)水平。因此，利用混合堿調節(jié)pH值的方法來優(yōu)化生產(chǎn)工藝，降低了生物制備丁二酸的生產(chǎn)成本，減小了下游產(chǎn)品分離提取的難度，提高了經(jīng)濟效益，有利于丁二酸生物法的工業(yè)制備；3、因Mg2+對產(chǎn)琥珀酸放線桿菌代謝途徑中的關鍵酶有促進作用，雖然利用堿式MgC03作為唯一堿性中和劑調節(jié)pH時丁二酸的生產(chǎn)水平最高，但是由于使用堿式MgC03的成本較高，而Mg(0H)2能提供Mg"，但是其堿性較差，因此本發(fā)明確定混合堿中成分之一為Mg(OH^，再選擇其他一種堿性較強的中和劑與之混合，實現(xiàn)了同樣優(yōu)秀的技術效果。圖1為采用氨水調節(jié)pH發(fā)酵制備丁二酸的過程圖圖2為分別采用(a)Ca(0H)2和(b)CaC03調節(jié)pH發(fā)酵制備丁二酸的過程圖圖3為分別采用(a)NaOH(b)Na2C03和(c)NaHC03調節(jié)pH發(fā)酵制備丁二酸的過程圖圖4為采用Mg(OH)2調節(jié)pH發(fā)酵制備丁二酸的過程圖圖5為利用不同比例的Na2C03和Mg(OH)2混合調節(jié)pH對發(fā)酵制備丁二酸結果的影響圖6為利用不同比例的NaOH和Mg(OH)2混合調節(jié)pH對發(fā)酵制備丁二酸結果的影響圖7為采用MgC03調節(jié)pH發(fā)酵制備丁二酸的過程圖具體實施例方式下面的實施例對本發(fā)明作詳細說明，但對本發(fā)明沒有限制。實施例1本發(fā)明所述的制備丁二酸的方法可以使用現(xiàn)有技術中任何厭氧發(fā)酵產(chǎn)丁二酸的微生物菌種。本實施例所采用的產(chǎn)丁二酸的微生物菌種為產(chǎn)琥珀酸放線桿菌NJ113(ActinobacillussuccinogenesNJ113)，該菌已申請專利并獲得授權，專利授權公告號為CN100537744C。本發(fā)明所述的發(fā)酵培養(yǎng)基可以使用現(xiàn)有技術中任何厭氧發(fā)酵產(chǎn)丁二酸的發(fā)酵培養(yǎng)基。本實施例所采用的培養(yǎng)基為每升體積培養(yǎng)基含葡萄糖(分開滅菌)50100g，酵母粉15g，玉米漿15mL，無水乙酸鈉1.36g，NaCllg，K2HP043g，MgCl20.2g，CaCl20.2g。本發(fā)明所述的發(fā)酵微生物菌種制備丁二酸的方法可以是現(xiàn)有技術中任意的厭氧發(fā)酵制備方法，而這些方法一般都包括菌種活化、種子培養(yǎng)、厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸三步驟。本實施的制備步驟為(1)菌種活化菌種活化的斜面培養(yǎng)基為pH6.08.0的含有糖類的能提供碳源、氮源及無機鹽的固體斜面培養(yǎng)基，斜面培養(yǎng)時將菌株在斜面培養(yǎng)基中進行平板劃線后，在厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱含有N2、C02和H2的混合氣體，溫度為3040°C，活化培養(yǎng)2448h，用于種子培養(yǎng)基接種和菌株保存；(2)種子培養(yǎng)向100mL血清瓶中加入種子培養(yǎng)基為2080mL，通入含有N2和C02混合氣，11512rC滅菌1530min，冷卻后接入斜面培養(yǎng)菌株，培養(yǎng)溫度為3040°C，搖床轉速100200r/min，培養(yǎng)時間為1016h，用于發(fā)酵培養(yǎng)基接種；(3)5L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)5L發(fā)酵罐中發(fā)酵培養(yǎng)基體積為24L，接種量為37%(v/v)，溫度為354(TC，發(fā)酵罐通入含有N2和C02混合氣，以保持發(fā)酵體系的厭氧環(huán)境，攪拌轉速在100300rpm，發(fā)酵過程分別采用堿性中和劑包括氨水、NaOH、Na2C03、NaHC03、Ca(OH)2、CaC03、Mg(OH)2控制pH在6.67.0，發(fā)酵時間為3048h，分離提取丁二酸。分析方法HPLC系統(tǒng)高效液相色譜儀WatersHPLC2010工作站；色譜柱Prevailorganicacidcol醫(yī)250mmX4.6mm;紫外檢測波長215nm;流速lmL/min，進量20iiL，流動相25mmol/LKH2P04，pH2.5;柱溫室溫。重蒸水配制不同濃度的有機酸(丁二酸(Fluka)、乙酸(Sigma)、甲酸(Fluka)、乳酸(Fluka))標準溶液，根據(jù)峰面積與有機酸標準溶液的濃度關系制作標準曲線。發(fā)酵樣品經(jīng)離心稀釋后根據(jù)峰面積計算各有機酸含量。本實施例中，在產(chǎn)丁二酸的步驟中單獨添加堿性中和劑的方法為添加氨水作為堿性中和劑調節(jié)pH值的方法。在發(fā)酵罐發(fā)酵過程中通過補加氨水，調節(jié)發(fā)酵體系的pH在6.67.0之間，發(fā)酵結果如圖1所示。發(fā)酵液中NH/對細胞生長的抑制作用較為強烈，菌體對糖的利用能力較低，導致大量的葡萄糖剩余。至發(fā)酵結束，丁二酸質量濃度僅23.5g/L。細胞膜對NH/有較高的通透性，NH/的滲入會造成胞內pH水平發(fā)生變化，細胞需要更多的能量將NH/泵出，可見，環(huán)境中較高NH/濃度會降低細胞對能量的利用效率。當能量供給不足時，受胞內NH/的影響，胞內的pH發(fā)生較大變化，影響細胞無法正常的生長代謝，最終導致死亡。實施例2本實施例采用與實施例1完全相同的發(fā)酵條件和方法，僅改變產(chǎn)丁二酸步驟中的單獨添加堿性中和劑的方法為分別添加Ca(OH)2和CaC03作為堿性中和劑調節(jié)pH值的方法。在發(fā)酵罐中分別采用Ca(0H)2、CaC03分別調節(jié)pH進行發(fā)酵，結果見圖2所示。采用Ca(OH)2調節(jié)，菌體幾乎不生長，丁二酸質量濃度小于5g/L(圖2-a)。采用事先添加CaC03固體調節(jié)pH發(fā)酵，菌體的生長比Ca(0H)2調節(jié)發(fā)酵時稍好，但仍受到明顯的抑制。CaC(^的溶解能力較差，不能將PH維持在適合菌體生長的水平，發(fā)酵過程中pH不斷降低，至發(fā)酵結束，pH為5.6(圖2-b)，丁二酸產(chǎn)量僅為17.5g/L。較高濃度的Ca2+可以改變細胞膜正常的流動性和通透性，導致菌體不能進行正常的胞內外物質能量傳遞，以致無法正常生長代謝。實施例3本實施例采用與實施例1完全相同的發(fā)酵條件和方法，僅改變產(chǎn)丁二酸步驟中的單獨添加堿性中和劑的方法為分別添加NaOH、Na2C03、NaHC03作為堿性中和劑調節(jié)pH值的方法。在發(fā)酵罐中分別采用流加NaOH、Na2C03、NaHC03的方式調節(jié)pH，發(fā)酵結果如圖3所示。隨著Na+在發(fā)酵液中的不斷積累，發(fā)酵中后期菌體絮凝現(xiàn)象嚴重，菌體0D66。呈明顯下降趨勢，耗糖速率也逐漸變緩。NaOH與Na2C03、NaHC03相比，至發(fā)酵結束，葡萄糖剩余量較多，丁二酸質量濃度為43.5g/L(圖3-a)。Na2C03、NaHC03能夠提供額外的C032—、HC03—，有利于菌體合成丁二酸，但是溶解性和堿性較低，流加過程對發(fā)酵液的稀釋作用較大，以NaHC03尤為嚴重，雖然無葡萄糖剩余，但是丁二酸質量濃度只有37.8g/L(圖3-b)。采用Na2C03調節(jié)，有少量殘?zhí)牵《豳|量濃度為39.9g/L(圖3-c)。在細胞的代謝過程中，Na+有十分重要的作用，它能夠影響跨膜pH梯度、細胞滲透壓以及胞內pH調控水平。采用NaOH、Na2C03調節(jié)，發(fā)酵液中累積的Na+濃度分別達2.lmo1/L、l.9mol/L，采用NaHC03調節(jié)，Na+為1.5mol/L。Na+過度積累造成高滲環(huán)境，對菌體有較大的負面作用，菌體不能正常的代謝產(chǎn)酸，產(chǎn)酸能力驟降。發(fā)酵中后期，Na+的大量積累可能是造成菌體0D66。急劇下降、產(chǎn)酸能力降低的主要原因。實施例4本實施例采用與實施例1完全相同的發(fā)酵條件和方法，僅改變產(chǎn)丁二酸步驟中的單獨添加堿性中和劑的方法為分別添加Mg(OH)2、MgC03作為堿性中和劑調節(jié)pH值的方法。Mg2+是許多酶的激活劑，在丁二酸合成途徑中關鍵酶磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶就需要Mg2+作為輔助因子。圖4和圖7是分別采用Mg(0H)2、MgC03調節(jié)pH的發(fā)酵結果。Mg2+在發(fā)酵液中的積累對菌體生長沒有明顯的抑制作用，發(fā)酵中后期，0D66。下降緩慢，菌體仍有較高的代謝活性。至發(fā)酵結束，葡萄糖能夠充分被菌體利用，丁二酸濃度高達57.4g/L(圖7)，發(fā)酵效果最好。采用Mg(OH)2調節(jié)時，由于Mg(OH)2對發(fā)酵液稀釋作用明顯，丁二酸質量濃度僅有42.9g/L(圖4)。實施例5本實施例采用與實施例1完全相同的發(fā)酵條件和方法，僅改變產(chǎn)丁二酸步驟中的添加混合堿性中和劑的方法為利用氨水和Mg(0H)2作為混合堿性中和齊U，并以不同的混合比例調節(jié)pH值。采用氨水和Mg(0H)2以不同質量比例混合(3:i、2:i、i:i、i:2、i:3)調節(jié)pH，控制混合堿中0H—濃度為6mol/L(按lmol氨水提供lmol0H—計)。發(fā)酵結果如表1所示。表1不同比例的氨水和Mg(OH)2混合調節(jié)pH發(fā)酵結果對比氨水:Mg(OH)2(質量比)細胞干重(g/L)丁二酸(g/L)甲酸(g/L)乙酸(g/L)3:12.926.22.26.52:13.628.53.17.11:13.831.33.37.31:24.333.53.67.81:34.738.63.98.2當混合堿中氨水比例越高，由于微生物耐NH/能力較差，因此發(fā)酵效果也越差。隨著Mg(OH^添加量的不斷增加，殘?zhí)橇恐饾u減少，丁二酸質量濃度逐漸增大。但是由于Mg(0H)2溶解度不高，因此調節(jié)pH補進去的體積較大，使得丁二酸的濃度有所下降。實施例6本實施例采用與實施例1完全相同的發(fā)酵條件和方法，僅改變產(chǎn)丁二酸步驟中的添加混合堿性中和劑的方法為利用NaHC03和Mg(OH)2作為混合堿性中和齊U，并以不同的混合比例調節(jié)pH值。采用NaHC03和Mg(0H)2以不同質量比例混合(3:1、2:1、1:1、1:2、1:3)調節(jié)pH，控制混合堿中OH—濃度為6mol/L(按lmolNaHC03提供2molOH—計)。發(fā)酵結果如表2所示。表2不同比例的NaHC03和Mg(OH)2混合調節(jié)pH發(fā)酵結果對比NaHC03:Mg(OH)2(質量比)細胞干重(g/L)丁二酸(g/L)甲酸(g/L)乙酸(g/L)3:13.538.53.27.82:13.740.13.57.91:13.941.64.08.31:24.844.94.58.81:35.549.74.69.2雖然利用NaHC03調節(jié)微生物發(fā)酵制備丁二酸時效果較好，但是由于NaHC03溶解度不高且易結晶，因此調節(jié)pH時補進去的體積較大，使得丁二酸的濃度有所下降。實施例7本實施例采用與實施例1完全相同的發(fā)酵條件和方法，僅改變產(chǎn)丁二酸步驟中的添加混合堿性中和劑的方法為利用Na2C03和Mg(0H)2作為混合堿性中和齊U，并以不同的混合比例調節(jié)pH值。采用Na2CO^PMg(OH)2以不同質量比例混合(3:1、2:1、1:1、1:2、1:3)調節(jié)pH，控制混合堿中OH—濃度為6mol/L(按lmolNa2C03提供2molOH—計)。發(fā)酵結果如圖5所示。隨著Mg(OH、添加量的不斷增加，殘?zhí)橇恐饾u減少，丁二酸質量濃度逐漸增大。當Na^03和Mg(0H、質量比達到1:1時，葡萄糖無剩余，丁二酸質量濃度最高，為55.4g/L，發(fā)酵液中Na+濃度0.95mol/L，比采用NaHC03調節(jié)的Na+濃度降低了36.7%。繼續(xù)增加混合堿中Mg(0H)2添加量，葡萄糖仍然能夠消耗完全，但是丁二酸的濃度有所下降。實施例8本實施例采用與實施例1完全相同的發(fā)酵條件和方法，僅改變產(chǎn)丁二酸步驟中的添加混合堿性中和劑的方法為利用NaOH和Mg(OH)2作為混合堿性中和齊U，并以不同的混合比例調節(jié)pH值。采用NaOH和Mg(OH)2混合溶液作為中和劑調節(jié)發(fā)酵過程中pH，NaOH和Mg(OH)2質量比分別為3:1、2:1、1:1、1:2、1:3，控制混合堿中OH—濃度為6mol/L(按lmolMg(OH)2提供2molOH—計)，結果如圖6所示。隨著混合堿液中NaOH添加比例降低，葡萄糖的剩余量逐漸減少。當NaOH和Mg(OHh的質量比為1:1時，無葡萄糖剩余，丁二酸的質量濃度可達69.8g/L，發(fā)酵液中Na+濃度0.86mol/L，與采用NaHC03調節(jié)的Na+濃度相比，降低了42.6%。繼續(xù)減少混合堿中NaOH的添加比例，菌體仍然能夠將葡萄糖全部耗完，但是丁二酸的濃度呈現(xiàn)下降趨勢。含Na+堿性調節(jié)劑與含Mg2+堿性調節(jié)劑混合至適當比例，可以緩解Na+的過量積累，也可以降低Mg(OH)2對發(fā)酵液的稀釋程度。與Na2C03和Mg(OH)2混合調節(jié)pH發(fā)酵的最佳結果相比，采用NaOH和Mg(OH)2以1:1混合調節(jié)pH發(fā)酵的效果更好。實施例9本實施例采用與實施例1完全相同的發(fā)酵條件和方法，僅改變產(chǎn)丁二酸步驟中的添加混合堿性中和劑的方法為利用Ca(OH)2和Mg(OH)2作為混合堿性中和齊U，并以不同的混合比例調節(jié)pH值。采用Ca(0H)2和Mg(0H)2以不同質量比例混合(3:1、2:1、1:1、1:2、1:3)調節(jié)pH，控制混合堿中OH—濃度為6mol/L(按lmolCa(OH)2提供2molOH—計)。發(fā)酵結果如表3所示。表3不同比例的Ca(OH)2和Mg(OH)2混合調節(jié)pH發(fā)酵結果對比<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由于Ca(OH)2溶解度很低，且較高濃度的Ca2+可以改變細胞膜正常的流動性和通透性，導致菌體不能進行正常的胞內外物質能量傳遞，以致無法正常生長代謝。因此利用Ca(OH)2和Mg(OH)2作為混合堿性中和劑調節(jié)pH值時，丁二酸的濃度很低。實施例10本實施例采用與實施例1完全相同的發(fā)酵條件和方法，僅改變產(chǎn)丁二酸步驟中的添加混合堿性中和劑的方法為利用CaC03和Mg(OH)2作為混合堿性中和齊U，并以不同的混合比例調節(jié)pH值。采用CaC03和Mg(0H)2以不同質量比例混合(3:1、2:1、1:1、1:2、1:3)調節(jié)pH，控制混合堿中OH—濃度為6mol/L(按lmolCaC03提供2molOH—計)。發(fā)酵結果如表4所示。表4不同比例的CaC03和Mg(OH)2混合調節(jié)pH發(fā)酵結果對比<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由于CaC03溶解度很低，且較高濃度的C^+可以改變細胞膜正常的流動性和通透性，導致菌體不能進行正常的胞內外物質能量傳遞，以致無法正常生長代謝。因此利用CaC03和Mg(OH)2作為混合堿性中和劑調節(jié)pH值時，丁二酸的濃度較低。實施例11本實施例采用與實施例1完全相同的發(fā)酵條件和方法，發(fā)酵培養(yǎng)基中初始葡萄糖濃度均為100g/L，分別以實施例510的堿性中和劑最佳混合比例調節(jié)pH值，并與單獨使用碳酸鎂調節(jié)PH發(fā)酵結果進行對比，如表5所示。表5利用兩種堿性中和劑混合調節(jié)pH與單獨使用碳酸鎂調節(jié)pH發(fā)酵結果對比<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表5可以得到，只有采用NaOH和Mg(OH)2混合溶液作為中和劑并且質量比為1:1時，調節(jié)發(fā)酵過程中pH，基本無葡萄糖剩余，丁二酸的質量濃度可達69.8g/L，與單獨使用碳酸鎂調節(jié)PH發(fā)酵時丁二酸的生產(chǎn)水平相當，因此利用廉價的NaOH和Mg(OH)2混合中和劑可以完全替代昂貴的碳酸鎂中和劑，從而降低丁二酸的生產(chǎn)成本。權利要求一種發(fā)酵制備丁二酸的方法，包括菌種活化、種子培養(yǎng)、厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸三步驟，其特征在于在微生物發(fā)酵生產(chǎn)丁二酸的步驟中外源添加兩種堿性中和劑的混合物，并調節(jié)發(fā)酵體系的pH值為6.6～7.0。2.根據(jù)權利要求1所述的發(fā)酵制備丁二酸的方法，其特征在于所述的兩種堿性中和劑的混合物是氨水、NaOH、Na2C03、NaHC03、Ca(0H)2、CaC03、Mg(0H)2中的任意兩兩組合的混合物。3.根據(jù)權利要求2所述的發(fā)酵制備丁二酸的方法，其特征在于所述的兩種堿性中和劑的混合物是氨水和Mg(0H)2的混合物。4.根據(jù)權利要求2所述的發(fā)酵制備丁二酸的方法，其特征在于所述的兩種堿性中和劑的混合物是NaOH和Mg(OH)2的混合物。5.根據(jù)權利要求2所述的發(fā)酵制備丁二酸的方法，其特征在于所述的兩種堿性中和劑的混合物是Na2C03和Mg(OH)2的混合物。6.根據(jù)權利要求2所述的發(fā)酵制備丁二酸的方法，其特征在于所述的兩種堿性中和劑的混合物是NaHC03和Mg(OH)2的混合物。7.根據(jù)權利要求2所述的發(fā)酵制備丁二酸的方法，其特征在于所述的兩種堿性中和劑的混合物是Ca(OH)2和Mg(OH)2的混合物。8.根據(jù)權利要求2所述的發(fā)酵制備丁二酸的方法，其特征在于所述的兩種堿性中和劑的混合物是CaC03和Mg(0H)2的混合物。9.根據(jù)權利要求1至8之一所述的發(fā)酵制備丁二酸的方法，其特征在于所述的兩種堿性中和劑的質量配比為l:33:1。全文摘要本發(fā)明涉及一種發(fā)酵制備丁二酸的新方法，主要通過在微生物發(fā)酵生產(chǎn)丁二酸的過程中添加兩種混合的堿性化合物來替代單一的堿性化合物維持發(fā)酵體系在一個合適的pH值；調節(jié)混合堿的比例使得生產(chǎn)的丁二酸在一個較高的水平。這不僅可以利用一些廉價的堿性化合物，而且可以基本達到利用堿式碳酸鎂作為唯一堿式化合物調節(jié)pH時的丁二酸生產(chǎn)水平。因此，利用混合堿調節(jié)pH策略來優(yōu)化生產(chǎn)工藝，降低了生物制備丁二酸的生產(chǎn)成本，減小了下游產(chǎn)品分離提取的難度，提高了經(jīng)濟效益，有利于丁二酸生物法的工業(yè)制備。文檔編號C12P7/46GK101712970SQ20091026405公開日2010年5月26日申請日期2009年12月29日優(yōu)先權日2009年12月29日發(fā)明者姜岷,李建,楊卓娜,歐陽平凱,鄭曉宇,陳可泉,韋萍申請人:南京工業(yè)大學