專利名稱：一種花生四烯酸的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種利用玉米芯酶解處理得到的含有葡萄糖和木糖的水解液進(jìn)
行發(fā)酵生產(chǎn)花生四烯酸技術(shù)，可以根據(jù)微生物在生長(zhǎng)、代謝的不同階段對(duì)氧氣、各種營(yíng)養(yǎng)元 素、各種碳源、氮源的需求差異，進(jìn)行花生四烯酸發(fā)酵。花生四烯酸生產(chǎn)利用玉米芯做發(fā)酵 原料，變廢為寶，降低了環(huán)境污染，對(duì)保證糧食安全具有積極意義。
背景技術(shù)：
花生四烯酸是人體必需但又不能自身合成的二十碳不飽和脂肪酸，主要存在于器 官組織和血液組織中，與磷脂結(jié)合成結(jié)構(gòu)脂類，具有明顯的藥理作用和廣泛的生理活性?；?生四烯酸在生物體內(nèi)經(jīng)過(guò)復(fù)雜的代謝過(guò)程，產(chǎn)生多種次生代謝產(chǎn)物，是許多二十碳烯酸衍 生物的直接前體，如前列腺素E2、前列環(huán)素、血栓素A2和白三烯等，這些衍生物對(duì)細(xì)胞和機(jī) 體的生理和代謝活動(dòng)具有重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，花生四烯酸具有酯化膽固醇、抑制血小板 聚集、增加血管彈性、降低血液黏度、調(diào)節(jié)白細(xì)胞功能、提高免疫力等一系 列生理活性，其保 健功能體現(xiàn)在促進(jìn)嬰胎兒生長(zhǎng)發(fā)育，預(yù)防和治療皮濕疹和皮炎、心腦血管疾病，營(yíng)養(yǎng)毛囊、 促進(jìn)毛發(fā)再生等許多方面，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品等領(lǐng)域。 目前，花生四烯酸已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織等國(guó)際權(quán)威機(jī)構(gòu)推薦，作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充添加 到嬰兒配方奶粉中?；ㄉ南┧岬膫鹘y(tǒng)來(lái)源是動(dòng)物肝臟、豬腎上腺、血液、魚油和蛋黃等。但 動(dòng)物組織中的含量很低，約為0. 2%，并且受來(lái)源和季節(jié)的限制，用這種方法制備價(jià)格昂貴， 不能滿足市場(chǎng)的需要。研究人員發(fā)現(xiàn)，低等真菌特別是被孢霉屬真菌含有大量的花生四烯 酸，因此，利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸是制備花生四烯酸的新途徑。研究表明，微生 物發(fā)酵得到的含花生四烯酸的油脂無(wú)毒性，無(wú)致突變性。生產(chǎn)花生四烯酸的微生物被飽霉 菌本身不產(chǎn)毒素，無(wú)內(nèi)毒素，無(wú)發(fā)育和致突變毒性，體外分析也無(wú)致突變毒性。與傳統(tǒng)制備 方法相比，微生物發(fā)酵法制備花生四烯酸具有很大的優(yōu)勢(shì)①生產(chǎn)周期短，繁殖力強(qiáng)；②不 受氣候、場(chǎng)地、季節(jié)、資源的影響；③可以利用的菌種種類多，而且產(chǎn)量提高空間大； 油脂 成分更接近母乳?，F(xiàn)在英國(guó)、加拿大、美國(guó)和日本已有花生四烯酸的發(fā)酵商品投放市場(chǎng)。盡 管我國(guó)在這方面的起步較晚，但是與國(guó)外相比，在含有花生四烯酸的菌種培養(yǎng)與選育方面 具有一定的優(yōu)勢(shì)。微生物發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的主要流程為菌種培養(yǎng)一一級(jí)發(fā)酵一二 級(jí)發(fā)酵一主發(fā)酵一菌體過(guò)濾一菌體洗滌一菌體干燥一菌體提取一精練一花生四烯酸油脂。 目前，研究的關(guān)鍵是尋找具有商業(yè)價(jià)值的高產(chǎn)菌株，研究的重點(diǎn)是優(yōu)化培養(yǎng)條件和分離提 取工藝。花生四烯酸發(fā)酵仍需從菌種選育、工藝優(yōu)化、裝備改進(jìn)等諸多方面人手，更有效地 降低花生四烯酸的生產(chǎn)成本。在發(fā)酵原料方面，做到"不與人爭(zhēng)糧，不與糧爭(zhēng)地"，應(yīng)盡量利 用非糧作物，利用作物的非食用部分，利用農(nóng)產(chǎn)品加工的廢棄物、大自然中極為豐富的纖維 素資源、各種各樣的工業(yè)下腳料、廢料、生活垃圾等，變"廢"為"寶"，既可得到廉價(jià)原材料， 又利于減少對(duì)環(huán)境的污染。 隨著生活水平的不斷提高，人們的保健意識(shí)逐漸增強(qiáng)，保健功能產(chǎn)品具有十分廣 闊的前景。因此，對(duì)花生四烯酸的研究無(wú)論從科研角度還是經(jīng)濟(jì)角度都具有極為重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種花生四烯酸的制備方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺 陷。 本發(fā)明提供一種花生四烯酸的制備方法，包括如下步驟將花生四烯酸菌種接入
搖瓶進(jìn)行培養(yǎng)，然后接入種子罐放大培養(yǎng)，最后接入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵過(guò)程中，溫度控
制在28 30°C ，用無(wú)菌pH調(diào)節(jié)劑控制發(fā)酵體系pH在6. 2 6. 8 ;所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括碳
源和氮源，其中所述碳源選自玉米芯水解糖，植物秸稈水解糖和甘蔗渣水解糖中的一種或
多種，氮源選自酵母膏，蛋白胨和花生蛋白粉中的一種或多種。 其中，所述花生四烯酸菌種為被孢霉(Mortierella sp. )MIO。 所述搖瓶培養(yǎng)是將花生四烯酸菌種接入搖瓶種子培養(yǎng)基中，在28 3(TC，優(yōu)選
28。C，轉(zhuǎn)速150 180r/min，優(yōu)選180r/min，搖瓶培養(yǎng)1 3d，優(yōu)選2d。 所述種子罐培養(yǎng)是將搖瓶培養(yǎng)得到的菌種接種到種子罐中厭氧培養(yǎng)，接種量為
5 10% (v/v)，在28 30°C ，優(yōu)選30。C培養(yǎng)1 3d，優(yōu)選2d， pH控制在6. 2 6. 8，攪拌
轉(zhuǎn)速100 180rpm，優(yōu)選180rpm。 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)是將種子罐培養(yǎng)的種子按照5 10% (v/v)接種量接入發(fā)酵 罐中，在28 3(TC，優(yōu)選3(TC培養(yǎng)6 8d，優(yōu)選8d， pH控制在6. 2 6. 8，攪拌轉(zhuǎn)速為 150rpm 180rpm，優(yōu)選180rpm。 所述搖瓶培養(yǎng)的培養(yǎng)基按重量百分比包括碳源3 5 % ，酵母膏0. 4 0. 6 % ，蛋 白胨l. 1 1. 3%，花生蛋白粉0. 8 1. 2%，K2HP04 0 . 04 0. 06%，MgS04 0 . 02 0.04%， (NH4)2S04 0. 2 0. 4%，其余為水。 所述種子罐培養(yǎng)的培養(yǎng)基按重量百分比包括碳源3 5 % ，酵母膏0. 4 0. 6 % ， 蛋白胨l. 1 1.3%，花生蛋白粉0.8 1.2%，其余為水。 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)的培養(yǎng)基按重量百分比包括碳源6 8 % ，酵母膏0. 4 0. 6 % ， 蛋白胨l. 1 1. 3%，花生蛋白粉0. 8 1. 2%，K2HP040 . 04 0. 06%，MgS04 0 . 04 0. 06%， (NH4)2S04 0. 2 0. 4%，其余為水。 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)的培養(yǎng)基按重量百分比還包括1_3%，優(yōu)選1% (m/m)玉米油。
所述pH調(diào)節(jié)劑選自碳酸鈣、氧化鈣、碳酸鎂、碳酸鋅和氫氧化鈣中的一種或多種； pH調(diào)節(jié)劑采用流加方式。 其中將培養(yǎng)的花生四烯酸菌種接種到發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)基
由發(fā)酵微生物培養(yǎng)所需的碳源、氮源配制而成，根據(jù)該菌株在生長(zhǎng)、代謝的不同階段對(duì)氧氣
及不同碳源需求量的差異，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵過(guò)程中，流加無(wú)菌中和劑將發(fā)酵體系pH控制在
6. 2 6. 8，花生四烯酸產(chǎn)率達(dá)到2. 5 5. 2% 。 本發(fā)明花生四烯酸的制備方法具有以下有益效果 針對(duì)水解糖液中醋酸根、硫酸根、糠醛及酚類等抑制物的阻礙作用，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程 中利用在線控制手段，建立花生四烯酸菌種生長(zhǎng)代謝過(guò)程與發(fā)酵過(guò)程模型化及控制技術(shù)， 提高了糖酸代謝速率，縮短了發(fā)酵周期，發(fā)酵液中五六碳糖混合發(fā)酵花生四烯酸產(chǎn)率達(dá)到 2. 5% 5. 2%，發(fā)酵周期6 8天，糖酸轉(zhuǎn)化率大于65%。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。 下述實(shí)施例所用的花生四烯酸生產(chǎn)菌株為被孢霉(Mortierellasp.)M10，市購(gòu)獲 得； 玉米芯水解糖中，含葡萄糖6 8(g/dl)、木糖2 3(g/dl)和少量阿拉伯糖；
甘蔗渣水解糖中，含葡萄糖5 6(g/dl)、木糖2 3(g/dl)和少量阿拉伯糖。
實(shí)施例1 搖瓶培養(yǎng)基按重量百分比包括玉米芯水解糖(含葡萄糖6 8g/dl)3 5%，酵 母膏0. 4 0. 6%，蛋白胨1. 1 1. 3%，花生蛋白粉0. 8 1. 2%，K2HP04 0 . 04 0. 06%， MgS04 0 . 02 0. 04%， (NH4)2S04 0. 2 0. 4%，其余為水。 種子罐培養(yǎng)基按重量百分比包括玉米芯水解糖(含葡萄糖6 8g/dl)3 5%， 酵母膏0. 4 0. 6%，蛋白胨1. 1 1.3%，花生蛋白粉0. 8 1.2%，其余為水。
發(fā)酵罐培養(yǎng)基按重量百分比包括玉米芯水解糖(含葡萄糖6 8g/dl)6 8%， 酵母膏0. 4-0. 6%，蛋白胨1. 1 1. 3%，花生蛋白粉0. 8 1. 2%，K2HP04 0 . 04 0. 06%， MgS04 0 . 04 0. 06%， (NH4)2S04 0. 2 0. 4%，其余為水。 將花生四烯酸菌種在無(wú)菌狀態(tài)下接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖6g/ dl)4X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1.2%，花生蛋白粉1.0%， K2HP040. 05%， MgS04 0 . 03%， (NH4)2S04 0. 3%，pH自然，自來(lái)水配制的搖瓶培養(yǎng)基中。12rC滅菌15min。接種量為10% (v/v) ，28°C、180r/min培養(yǎng)2d。將培養(yǎng)好的液體花生四烯酸搖瓶種子接入到含有玉米芯 水解糖(含葡萄糖6g/dl)4X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1. 2%，花生蛋白粉1. 0%，預(yù)先121°C 滅菌15min的5L種子罐培養(yǎng)基中，接種量為5 % (v/v)，在30°C 、 180rpm條件下培養(yǎng)2d， pH控制在6.5。將種子罐培養(yǎng)好的花生四烯酸種子接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖 6g/dl)6X，酵母膏0. 4%，蛋白胨1. 1%，花生蛋白粉0. 8%，K2HP04 0 . 04%，MgS04 0 . 04%， (NH4)2S04 0.2X，預(yù)先12rC滅菌15min的5L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種量為10% (v/ v)，在30°C 、 180rpm條件下發(fā)酵6d，流加無(wú)菌中和劑將發(fā)酵體系pH控制在6. 5，發(fā)酵結(jié)束花 生四烯酸產(chǎn)率達(dá)到2.5%。
實(shí)施例2 將花生四烯酸菌種在無(wú)菌狀態(tài)下接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖8g/ dl)4X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1.2%，花生蛋白粉1.0%， K2HP040. 05%， MgS04 0 . 03%， (NH4)2S04 0. 3%，pH自然，自來(lái)水配制的搖瓶培養(yǎng)基中。12rC滅菌15min。接種量為10% (v/v)，28t:、180r/min培養(yǎng)2d。將培養(yǎng)好的液體花生四烯酸搖瓶種子接入到含有玉米芯水 解糖(含葡萄糖8g/dl)含葡萄糖5 % ，酵母膏0. 5 % ，蛋白胨1. 2 % ，花生蛋白粉1. 0 % ，預(yù)先 12rC滅菌15min的5L種子罐培養(yǎng)基中，接種量為5% (v/v)，在30°C 、 180rpm條件下培養(yǎng) 2d，pH控制在6. 5。將種子罐培養(yǎng)好的花生四烯酸種子接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖 8g/dl)6X，酵母膏0. 4%，蛋白胨1. 1%，花生蛋白粉0. 8%， K2HP040 . 04%， MgS04 0 . 04%， (NH4)2S04 0.2X，預(yù)先12rC滅菌15min的5L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種量為10% (v/ v)，在30°C 、 180rpm條件下發(fā)酵6d，流加無(wú)菌中和劑將發(fā)酵體系pH控制在6. 5，發(fā)酵結(jié)束花 生四烯酸產(chǎn)率達(dá)到3. 1%。
實(shí)施例3 將花生四烯酸菌種在無(wú)菌狀態(tài)下接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖7g/ dl)4X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1.2%，花生蛋白粉1.0%， K2HP040. 05%， MgS04 0 . 03%， (NH4)2S04 0. 3%，pH自然，自來(lái)水配制的搖瓶培養(yǎng)基中。12rC滅菌15min。接種量為10% (v/v) ，28°C、180r/min培養(yǎng)2d。將培養(yǎng)好的液體花生四烯酸搖瓶種子接入到含有玉米芯 水解糖(含葡萄糖7g/dl)4X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1. 2%，花生蛋白粉1. 0%，預(yù)先121°C 滅菌15min的5L種子罐培養(yǎng)基中，接種量為5% (v/v)，在30°C、 180rpm條件下培養(yǎng)2d， pH控制在6.5。將種子罐培養(yǎng)好的花生四烯酸種子接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖 7g/dl)6X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1. 2%，花生蛋白粉1. 0%，K2HP04 0 . 03%，MgS04 0 . 03%， (NH4)2S04 0.3X，預(yù)先12rC滅菌15min的5L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種量為10% (v/ v)，在30°C 、 180rpm條件下發(fā)酵8d，流加無(wú)菌中和劑將發(fā)酵體系pH控制在6. 5，發(fā)酵結(jié)束花 生四烯酸產(chǎn)率達(dá)到4.2%。
實(shí)施例4 將花生四烯酸菌種在無(wú)菌狀態(tài)下接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖6g/ dl)5X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1.2%，花生蛋白粉1.0%， K2HP040. 05%， MgS04 0 . 03%， (NH4)2S04 0. 3%，pH自然，自來(lái)水配制的搖瓶培養(yǎng)基中。12rC滅菌15min。接種量為10% (v/v) ，28°C、180r/min培養(yǎng)2d。將培養(yǎng)好的液體花生四烯酸搖瓶種子接入到含有玉米芯 水解糖(含葡萄糖6g/dl)4X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1. 2%，花生蛋白粉1. 0%，預(yù)先121°C 滅菌15min的5L種子罐培養(yǎng)基中，接種量為5 % (v/v)，在30°C 、 180rpm條件下培養(yǎng)2d， pH控制在6.5。將種子罐培養(yǎng)好的花生四烯酸種子接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖 8g/dl)8X，酵母膏0. 4%，蛋白胨1. 1%，花生蛋白粉0. 8%，K2HP04 0 . 04%，MgS04 0 . 04%， (NH4)2S04 0.2X，預(yù)先12rC滅菌15min的5L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種量為10% (v/ v)，在30°C 、 180rpm條件下發(fā)酵8d，流加無(wú)菌中和劑將發(fā)酵體系pH控制在6. 5，發(fā)酵結(jié)束花 生四烯酸產(chǎn)率達(dá)到3.7%。
實(shí)施例5 將花生四烯酸菌種在無(wú)菌狀態(tài)下接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖6g/ dl)4X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1.2%，花生蛋白粉1.0%， K2HP040. 05%， MgS04 0 . 03%， (NH4)2S04 0. 3%，pH自然，自來(lái)水配制的搖瓶培養(yǎng)基中。12rC滅菌15min。接種量為10% (v/v) ，28°C、180r/min培養(yǎng)2d。將培養(yǎng)好的液體花生四烯酸搖瓶種子接入到含有玉米芯 水解糖(含葡萄糖6g/dl)4X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1. 2%，花生蛋白粉1. 0%，預(yù)先121°C 滅菌15min的5L種子罐培養(yǎng)基中，接種量為10 % (v/v)，在30°C 、 180rpm條件下培養(yǎng)3d， pH控制在6.5。將種子罐培養(yǎng)好的花生四烯酸種子接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖 6g/dl)8X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1. 2%，花生蛋白粉1. 0%，K2HP04 0 . 05%，MgS04 0 . 05%， (NH4)2S04 0.3X，預(yù)先12rC滅菌15min的5L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種量為10% (v/ v)，在30°C 、 180rpm條件下發(fā)酵8d，流加無(wú)菌中和劑將發(fā)酵體系pH控制在6. 5，發(fā)酵結(jié)束花 生四烯酸產(chǎn)率達(dá)到4.9%。
實(shí)施例6 將花生四烯酸菌種在無(wú)菌狀態(tài)下接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖7g/ dl)4X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1. 2%，花生蛋白粉1. 0%， K2HP040. 05%， MgS04 0 . 03%，(NH4)2S04 0. 3%，pH自然，自來(lái)水配制的搖瓶培養(yǎng)基中。12rC滅菌15min。接種量為10% (v/v) ，28°C、180r/min培養(yǎng)2d。將培養(yǎng)好的液體花生四烯酸搖瓶種子接入到含有玉米芯 水解糖(含葡萄糖7g/dl)5X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1. 2%，花生蛋白粉1. 0%，預(yù)先121°C 滅菌15min的5L種子罐培養(yǎng)基中，接種量為10 % (v/v)，在30°C 、 180rpm條件下培養(yǎng)2d， pH控制在6.5。將種子罐培養(yǎng)好的花生四烯酸種子接入到含有玉米芯水解糖(含葡萄糖 8g/dl)7X，酵母膏0. 5%，蛋白胨1. 2%，花生蛋白粉1. 0%，K2HP04 0 . 05%，MgS04 0 . 05%， (NH4)2S04 0.3X，預(yù)先12rC滅菌15min的5L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種量為10% (v/ v)，在30°C 、 180rpm條件下發(fā)酵8d，流加無(wú)菌中和劑將發(fā)酵體系pH控制在6. 5，發(fā)酵結(jié)束花 生四烯酸產(chǎn)率達(dá)到5.2%。
實(shí)施例7 將花生四烯酸菌種在無(wú)菌狀態(tài)下接入到含有甘蔗渣水解糖(含葡萄糖5g/ (11)2%，玉米芯水解糖3% (含葡萄糖6g/dl)，酵母膏0.5X，蛋白胨1.2%，花生蛋白粉 1. 0%， K2HP04 0 . 05%， MgS04 0 . 03%， (NH4)2S04 0. 3%， pH自然，自來(lái)水配制的搖瓶培養(yǎng)基 中。12rC滅菌15min。接種量為10% (v/v) ， 28°C、 180r/min培養(yǎng)2d。將培養(yǎng)好的液體花 生四烯酸搖瓶種子接入到含有甘蔗渣水解糖(含葡萄糖5g/dl)2X，玉米芯水解糖3X (含 葡萄糖6g/dl)，酵母膏0. 5 % ，蛋白胨1. 2 % ，花生蛋白粉1. 0 % ，預(yù)先121°C滅菌15min的5L 種子罐培養(yǎng)基中，接種量為10% (v/v)，在3(TC、180rpm條件下培養(yǎng)2d，pH控制在6. 5。將 種子罐培養(yǎng)好的花生四烯酸種子接入到含有甘蔗渣水解糖(含葡萄糖6g/dl)8%，酵母膏 0. 5%，蛋白胨1. 2%，花生蛋白粉1. 0%， K2HP040 . 05%， MgS04 0 . 05%， (NH4)2S04 0.3%，預(yù) 先12rC滅菌15min的5L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種量為10% (v/v)，在30°C 、 180rpm 條件下發(fā)酵8d，流加無(wú)菌中和劑將發(fā)酵體系pH控制在6. 5，發(fā)酵結(jié)束花生四烯酸產(chǎn)率達(dá)到 5. 2%。
權(quán)利要求
一種花生四烯酸的制備方法，其特征在于，包括如下步驟將花生四烯酸菌種接入搖瓶進(jìn)行培養(yǎng)，然后接入種子罐放大培養(yǎng)，最后接入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵過(guò)程中，溫度控制在28～30℃，用無(wú)菌pH調(diào)節(jié)劑控制發(fā)酵體系pH在6.2～6.8；所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括碳源和氮源，其中所述碳源選自玉米芯水解糖，植物秸稈水解糖和甘蔗渣水解糖中的一種或多種，氮源選自酵母膏，蛋白胨和花生蛋白粉中的一種或多種。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的花生四烯酸的制備方法，其特征在于，所述花生四烯酸菌種為被孢霉(Mortierella sp.)M10。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的花生四烯酸的制備方法，其特征在于，所述搖瓶培養(yǎng)是將花生四烯酸菌種接入搖瓶種子培養(yǎng)基中，在28 3(TC，轉(zhuǎn)速150 180r/min，搖瓶培養(yǎng)1 3d ;所述種子罐培養(yǎng)是將搖瓶培養(yǎng)得到的菌種接種到種子罐中厭氧培養(yǎng)，接種量為5 10% (v/v)，在28 30。C培養(yǎng)1 3d， pH控制在6. 2 6. 8，攪拌轉(zhuǎn)速100 180rpm ;所述發(fā)酵罐培養(yǎng)是將種子罐培養(yǎng)的種子按照5 10% (v/v)接種量接入發(fā)酵罐中，在28 30。C培養(yǎng)6 8d， pH控制在6. 2 6. 8，攪拌轉(zhuǎn)速為150rpm 180rpm。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的花生四烯酸的制備方法，其特征在于，所述搖瓶培養(yǎng)的培養(yǎng)基按重量百分比包括碳源3 5%，酵母膏0. 4 0. 6%，蛋白胨1. 1 1. 3%，花生蛋白粉0. 8 1. 2%， K2HP040. 04 0. 06%， MgS040. 02 0. 04%， (NH4)2S040. 2 0. 4%，其余為水。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的花生四烯酸的制備方法，其特征在于，所述種子罐培養(yǎng)的培養(yǎng)基按重量百分比包括碳源3 5%，酵母膏0. 4 0. 6%，蛋白胨1. 1 1. 3%，花生蛋白粉0.8 1.2%，其余為水。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的花生四烯酸的制備方法，其特征在于，所述發(fā)酵罐培養(yǎng)的培養(yǎng)基按重量百分比包括碳源6 8%，酵母膏0.4 0.6%，蛋白胨1. 1 1.3%，花生蛋白粉0. 8 1. 2%， K2HP040. 04 0. 06%， MgS040. 04 0. 06%， (NH4)2S040. 2 0. 4%，其余為水。
7. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的花生四烯酸的制備方法，其特征在于，所述發(fā)酵罐培養(yǎng)的培養(yǎng)基按重量百分比還包括1-3%玉米油。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的花生四烯酸的制備方法，其特征在于，所述pH調(diào)節(jié)劑選自碳酸鈣、氧化鈣、碳酸鎂、碳酸鋅和氫氧化鈣中的一種或多種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種花生四烯酸的制備方法，包括如下步驟將花生四烯酸菌種接入搖瓶進(jìn)行培養(yǎng)，然后接入種子罐放大培養(yǎng)，最后接入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵過(guò)程中，溫度控制在28～30℃，用無(wú)菌pH調(diào)節(jié)劑控制發(fā)酵體系pH在6.2～6.8；所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括碳源和氮源，其中所述碳源選自玉米芯水解糖，植物秸稈水解糖和甘蔗渣水解糖中的一種或多種，氮源選自酵母膏，蛋白胨和花生蛋白粉中的一種或多種。本發(fā)明花生四烯酸的制備方法提高了糖酸代謝速率，縮短了發(fā)酵周期，發(fā)酵液中五六碳糖混合發(fā)酵花生四烯酸產(chǎn)率達(dá)到3.5％～5.2％，發(fā)酵周期6～8天，糖酸轉(zhuǎn)化率大于65％。
文檔編號(hào)C12R1/645GK101709312SQ200910260199
公開(kāi)日2010年5月19日 申請(qǐng)日期2009年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月28日
發(fā)明者尚海濤, 李榮杰, 楊玲, 薛培儉, 鄭輝 申請(qǐng)人:安徽豐原發(fā)酵技術(shù)工程研究有限公司