專利名稱：預(yù)防與豬環(huán)狀病毒-2相關(guān)的心肌炎、流產(chǎn)和宮內(nèi)感染的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及預(yù)防和/或治療PCV-2引起的心肌炎、和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染、以及病理學(xué)后遺癥(包括但不限于斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征)的方法和/或組合物；并且尤其涉及制備這些組合物的方法和制備這些組合物或?qū)嵤┻@些方法的試劑盒。
背景技術(shù)：
豬環(huán)狀病毒-2(PCV1)是最近確認的一貫與世界幾個地方的豬群斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征(post-weaning multisystemic wastingsyndrome, PMWS)有關(guān)的病因(Allan 等，1998 ；Ellis等，1998)。從幾個國家的受染豬身上獲得的PCV-2分離株實際上在遺傳上是一致的，但與20世紀70年代最初作為豬腎細胞系(PK/15)的非致細胞病變污染物而鑒定的PCV(CCL33，PCV-1)明顯不同(Meehan等，1998 ；Tischer等，1974)?；加刑烊猾@得的或?qū)嶒炚T導(dǎo)的PCV-2感染的豬表現(xiàn)出進行性的體重降低、呼吸急促、呼吸困難和黃疸(Allan 等，1998 ；Allan 等，1999 ；Elllis 等，1998 ；Ellis 等，1999)。直接與 PCV-2 抗原有關(guān)的宏觀病理學(xué)研究結(jié)果包括淋巴結(jié)病、間質(zhì)性肺炎、肝炎和腎炎(Allan等，1998 ；Allan等，1999 ； Elllis 等，1998 ;Ellis 等，1999)。也參見 TO-A-9918214、TO-A-00 01409、TO-A-99 29717 和TO-A-99 298710在此之前，并沒有將PCV-2直接地與流產(chǎn)或胎豬的損傷聯(lián)系起來。因此，迄今還沒有人想解決有關(guān)PCV-2引起的心肌炎、和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染的問題。發(fā)明目的和概述令人驚奇的是我們發(fā)現(xiàn)PCV-2是導(dǎo)致心肌炎、流產(chǎn)和宮內(nèi)感染、以及斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征的原因。關(guān)于定義，正如本文或本文引用或參考的文獻中所公開的，PCV-2免疫原旨在包括減毒活PCV-2或滅活PCV-2、或通過體外表達或通過提取獲得的PCV-2亞單位、或能夠通過化學(xué)合成或體外重組表達獲得的含有至少一個目的表位的片段、以及包含并體內(nèi)表達 PCV-2基因組的序列或片段或表位的重組載體。類似的定義也適用于本文公開的其它豬病原體的免疫原。關(guān)于定義，免疫原性組合物引起-局部的或系統(tǒng)的-免疫原性應(yīng)答(immunogenic response) 0疫苗組合物引起局部的或系統(tǒng)的保護性應(yīng)答。術(shù)語“免疫原性組合物”包括“疫苗組合物”(因為前一術(shù)語可以是保護性組合物)。因此，本發(fā)明的一個目的可以是提供預(yù)防和/或治療PCV-2引起的心肌炎、和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染、以及斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和/或病理學(xué)后遺癥(包括但不限于斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征)的方法和/或組合物；并提供配制這些組合物(該組合物還可以包括豬細小病毒(PPV)免疫原)的方法和PCV-2免疫原在這些組合物的配制中的用途。另一目的是PCV-2免疫原在制備用于預(yù)防和/或治療PCV-2引起的心肌炎、和/ 或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染的組合物中的用途。本發(fā)明的另一目的是分離和表征標(biāo)識為1103(1103/1P.2)和1121(1121/1P. 1) 的新PCV-2毒株，以及它們在制備免疫原、以及用于診斷的抗原和抗體中的用途，該用途與 PCV-2引起的心肌炎、和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染、以及斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和/或相關(guān)的病理學(xué)后遺癥有關(guān)。本發(fā)明還提供了在繁殖前；和/或配種前、和/或妊娠(或懷孕)期間；和/或圍生期或產(chǎn)仔前；和/或在一生中反復(fù)地，采用含有(至少一種)PCV-2免疫原的組合物(該組合物還可以包括豬細小病毒的免疫原)接種雌豬(例如母豬(sow)、小母豬(gilt))的方法，以便預(yù)防與PCV-2相關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染、以及與PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥；或，以便引起抵抗PCV-2的免疫原性或保護性應(yīng)答并籍此預(yù)防與豬環(huán)狀病毒-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和/或心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染和/或其它與PCV-2相關(guān)的病理學(xué)后遺癥。有利地，在配種前至少接種一次。而且有利地，隨后在妊娠期間，例如大約妊娠中期(妊娠約6-8周時)和/或妊娠末期(妊娠約11-13周時)進行一次接種。因此，有利的方案是在配種前接種一次然后在妊娠期間作一次加強接種。其后，可以在每次配種前和 /或妊娠期間約妊娠中期(妊娠約6-8周時)和/或妊娠末期(妊娠約11-13周時)，再次接種。優(yōu)選地，可以僅在妊娠期間再次接種。在另一優(yōu)選實施方案中，小豬，例如來自接種過(例如按此處所討論的方式接種) 的雌豬的小豬，在出生后的第頭幾周中接受接種，例如在出生后第一和/或二和/或三和/ 或四和/或五周時接種。更優(yōu)選地，小豬在出生后的第一周內(nèi)或出生后的第三周內(nèi)(例如在斷奶期)接受第一次接種。甚至更有利的是，然后(第一次接種后)二( 至四(4)周后給予這些小豬加強接種。因此，仔豬和雌豬(例如母豬、小母豬)均可以施用本發(fā)明組合物和/或可以是本發(fā)明方法的實施對象。因此，本發(fā)明包括含有PCV-2毒株1103和/或1121來源的免疫原、用于預(yù)防或治療與豬環(huán)狀病毒-2相關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染、以及PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥的免疫原性或疫苗組合物。本發(fā)明還包括PCV-2免疫原在配制用于預(yù)防或治療豬環(huán)狀病毒-2相關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染、以及PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥的免疫原性或疫苗組合物中的用途。再有，本發(fā)明還包括用于預(yù)防和/或治療PCV-2引起的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染和/或斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征、含有藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上可接受載體和/或賦形藥(vehicle)和/或賦形劑(excipient)和/或佐劑、及PCV-2免疫原的免疫原性或疫苗組合物。此外，組合物還可以包括來自至少一種其它豬病原體的至少一種免疫原，例如豬繁殖和呼吸綜合征(Porcine Reproductive andRespiratory Syndrome, PRRS)、豬肺炎支原體(Mycoplasmahyopneumoniae)、大葉性月市炎放線桿菌(Actinobacilluspleuropneumon iae)、大腸桿菌(E. coli)、支氣管炎博德特氏菌(Bordetella bronchis印tica)、多殺巴斯德氏菌(Pasteurellamultocida)、豬紅斑丹毒絲菌(Erysipelothrix rhusiopathiae) >|[χ 狂犬病病毒(Pseudorabies)、豬霍亂病毒(Hog cholera)、豬流感病毒(Swine Influenza)、 和豬細小病毒(Porcine Parvovirus) (PPV)。因此，基于載體的組合物可以包括來自至少一種其它豬病原體的至少一種免疫原，例如表達來自該病原體的序列的載體，其中載體也可以是表達PCV-2免疫原的載體。表達PCV-2序列的載體可以包含PCV-2的序列或片段；并且本發(fā)明包括這些核酸分子、含有它們的載體、含有這些核酸分子或載體的組合物、來自這些核酸分子的表達產(chǎn)物、含有這些表達產(chǎn)物的組合物、針對這些核酸分子的探針或引物、和制備和使用前述任一個或所有的方法。載體可以包含DNA載體質(zhì)粒、細菌如大腸桿菌、病毒如桿狀病毒、皰疹病毒(包括豬皰疹病毒，包含奧耶斯基病病毒(Aujeszky ’ s diseasevirus))、腺病毒(包括豬腺病毒)、痘病毒(包括痘苗病毒、禽痘病毒、金絲雀痘病毒、浣熊痘病毒和豬痘病毒)等?；谳d體的組合物可以包含如下載體，所述載體含有并表達選自PCV-2的0RF1-13的0RF、例如選自O(shè)RF 4、7、10和13的0RF、優(yōu)選ORF 4和/或13，有利地所述PCV-2是本文確定的PCV-2 毒株之任一種、尤其是毒株1103和/或1121。而且，組合物中的免疫原(PCV-2和/或來自其它豬病原體的免疫原)可以通過重組方式產(chǎn)生。質(zhì)粒這個詞旨在包括以含有待表達的PCV序列的多核苷酸序列形式存在的任何 DNA轉(zhuǎn)錄單位。有利地，質(zhì)粒包括對于其表達(例如體內(nèi)表達)必需的元件。超螺旋的或其它形式的環(huán)狀質(zhì)粒形式是有利的；線性形式也包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。質(zhì)粒免疫原性或疫苗組合物可以通過基因槍、借助無針頭注射器(needleless injector)通過皮內(nèi)途徑、通過皮下或肌內(nèi)途徑、或通過粘膜途徑、或通過允許實現(xiàn)體內(nèi)表達以及有利地實現(xiàn)免疫原性或保護性應(yīng)答的任何其它手段，進行給藥。應(yīng)注意，還可以任選地從感染或轉(zhuǎn)染的細胞中分離和/或純化本發(fā)明載體或重組體產(chǎn)生的表達產(chǎn)物；以便，例如，制備給豬施用的組合物；然而，在某些情況下，不從細胞中分離和/或純化表達產(chǎn)物可能是有利的；例如當(dāng)細胞或其部分可以增強該多肽的免疫原性作用時。而且，蛋白質(zhì)分離和/或純化的技術(shù)是已知的，而且無需過多實驗即能夠在本發(fā)明的實施中用于純化和/或分離重組體或載體的表達產(chǎn)物、和/或PCV-2的亞單位和/或其它豬病原體；一般地，這些技術(shù)可以包括利用目的蛋白質(zhì)在變化的鹽濃度下的溶解度進行的沉淀、采用有機溶劑、聚合物和其它物質(zhì)進行的沉淀、親和沉淀和選擇性變性；柱層析， 包括高效液相層析(HPLC)、離子交換層析、親和層析、免疫親和層析或染料-配體層析；免疫沉淀、凝膠過濾、電泳方法、超過濾和等電聚焦，尤其是它們的組合。本發(fā)明還設(shè)想了預(yù)防和/治療豬環(huán)狀病毒-2 (PCV-2)引起的心肌炎和/或流產(chǎn)和 /或?qū)m內(nèi)感染和/或與PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和/或其它病理學(xué)后遺癥的方法，該方法包括通過給豬施用前述或本文公開的組合物在豬身上誘導(dǎo)對抗PCV-2的免疫原性或保護性應(yīng)答。因此，本發(fā)明包括預(yù)防和/或治療豬環(huán)狀病毒-2(PCV_2)引起的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染和/或與PCV-2有關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和/或其它病理學(xué)后遺癥的方法，該方法包括通過給豬施用如下組合物在豬身上誘導(dǎo)對抗PCV-2的免疫原性或保護性應(yīng)答，所述組合物包含藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上可接受載體或賦形劑或賦形藥(優(yōu)選地還包含佐劑)和含有PCV-2免疫原的活性劑。該方法可以用于預(yù)防PCV-2引起的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染，包括施用包含藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上可接受載體和PCV-2免疫原的組合物。PCV-2免疫原可以是活的減毒全PCV-2或滅活PCV-2。該方法可以涉及是亞單位免疫原性或疫苗組合物的組合物。該方法可以涉及此外還包括來自至少一種其它豬病原體的至少一種免疫原(包括表達該免疫原或表位的載體)的組合物；例如，該至少一種其它豬病原體可以選自PRRS、豬肺炎支原體、大葉性肺炎放線桿菌、大腸桿菌、假狂犬病病毒、豬霍亂病毒、支氣管炎博德特氏菌、多殺巴斯德氏菌、豬紅斑丹毒絲菌、豬流感病毒、和PPV、以及它們的組合。該方法可以涉及載體，該載體是DNA載體質(zhì)粒、細菌如大腸桿菌、病毒如桿狀病毒、 皰疹病毒(包括奧耶斯基病病毒)、腺病毒(包括豬腺病毒)、痘病毒(包括痘苗病毒、禽痘病毒、金絲雀痘病毒和豬痘病毒)等。該方法可以涉及基于載體的組合物，該組合物此外還包括來自至少一種其它豬病原體的至少一個序列、片段或表位，或表達該序列、片段或表位的載體，其中該載體也可以是表達PCV-2序列、片段或表位的載體。該方法可以涉及如下載體，該載體含有并表達選自O(shè)RF 1-13的0RF，例如選自O(shè)RF 4,7,10和13的ORF ；優(yōu)選ORF 4和/或13。該方法還可以涉及基于免疫原的組合物，其中一或多個免疫原是通過重組方式產(chǎn)生的。在此方法中，優(yōu)選地按上述方式接種雌豬和/或小豬。在另一實施方案中，本發(fā)明涉及制備上述或本文所公開任一種組合物的方法，包括將藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上可接受載體和可能的佐劑，與PCV-2免疫原混合。該方法還可以包括采用含有編碼PCV-2免疫原的DNA并表達該免疫原的重組載體轉(zhuǎn)染或感染細胞或宿主； 以及任選地包括從該細胞純化和/或分離該免疫原。類似地，該方法可以包括從PCV-2分離和/或純化PCV-2免疫原、或從樣品中分離PCV-2。本發(fā)明還提供用于制備上述或本文所公開任一種組合物、或?qū)嵤┥鲜龌虮疚乃_任一種方法的試劑盒，其包含置于第一容器中的藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上可接受載體或賦形藥或賦形劑和置于第二容器中的含有PCV-2免疫原的活性劑，其中任選地可以將該第一和第二容器包裝在一起，并且任選地該試劑盒可以包括有關(guān)該組合物成分的混合和/或該組合物的施用方式的說明書。在再一實施方案中，本發(fā)明涉及給雄性和/或雌性豬施用上述或本文所公開任一種組合物；以便預(yù)防PCV-2的傳播、和預(yù)防或治療或控制與豬環(huán)狀病毒-2相關(guān)的心肌炎和 /或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染、以及與PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥。施用優(yōu)選按上述方式進行。術(shù)語“包含”在本公開中可以指“包括”或可以具有美國專利法中術(shù)語“包含”所通常被賦予的意義。通過以下公開，本發(fā)明的其它方面得到了描述或是明顯的(并且屬于本發(fā)明范圍內(nèi))。發(fā)明詳述豬環(huán)狀病毒-2(PCV_2)是與豬群中斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征(PMWS)有關(guān)的病因。 正如實施例1和2中所顯示的，PCV-2相關(guān)疾病的可能范圍由于垂直傳播得以擴大并與繁殖失敗相關(guān)。具體地，實施例1顯示，從來自經(jīng)歷后期流產(chǎn)和死產(chǎn)的農(nóng)場的一窩流產(chǎn)小豬中分離出PCV-2。在一頭出現(xiàn)PCV-2抗原的廣泛免疫組織化學(xué)染色的小豬中，有嚴重的彌散性心肌炎。并且在多頭胎豬的肝、肺和腎中也有不同數(shù)量的PCV-2抗原。與胎豬損傷和豬的流產(chǎn)有關(guān)的其它因素，包括豬細小病毒、豬繁殖呼吸綜合征病毒、腦心肌炎病毒和腸道病毒， 的存在沒能得到證實。更具體地，實施例2顯示，四年內(nèi)從30個高度健康豬群獲得的、并在流產(chǎn)或繁殖失敗的常規(guī)病案中測試過的組織，在兩個涉及幾頭出現(xiàn)彌散性心肌炎、心臟肥大和慢性被動充血跡象的死產(chǎn)小豬和不能存活新生豬的提交物中為PCV-2陽性。這兩個陽性提交物來自同一農(nóng)場，但發(fā)生在兩個不同的時間。通過免疫組織化學(xué)和病毒的分離證實了染病小豬的心臟和其它組織中存在PCV-2。1999年之前在出現(xiàn)地方性感染的區(qū)域的繁殖失敗病案中沒有檢測到豬環(huán)狀病毒，這支持了繁殖性疾病是PCV-2感染的新臨床表現(xiàn)，而且還提示性交和垂直模式的傳遞負責(zé)病毒在豬群中的傳播。因此，給豬，例如雌豬(如母豬或小母豬)接種包括至少一種PCV-2免疫原(例如來自至少一個選自病毒株 Impl008、ImplOlO、Imp999、ImplOll-48285, ImplOll-48121、 1003和1121的病毒株)的組合物(尤其是，該組合物還可以包括來自至少一種其它豬病原體(例如至少一種豬細小病毒)的至少一種免疫原，其中當(dāng)采用載體時，載體可以共同表達 PCV-2免疫原和至少一種其它豬病毒體的至少一種免疫原(例如PPV的免疫原)，尤其是當(dāng)按上述的免疫進度進行接種時，可以預(yù)防與PCV-2相關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染、以及與PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥。因此，本發(fā)明涉及采用PCV-2免疫原預(yù)防與PCV-2相關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/ 或?qū)m內(nèi)感染、以及與PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥的方法和組合物。尤其是，對于采用PCV-2免疫原預(yù)防與PCV-2相關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染、以及與PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥的方法和組合物，來自1103株和/或1121株的免疫原是有用的。本發(fā)明還涉及任何已知PCV-2株或來自它們的免疫原在配制如下免疫原性或疫苗組合物中的用途，所述組合物被用于預(yù)防或治療與PCV-2有關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/ 或?qū)m內(nèi)感染、以及與PCV-2有關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥(這些病毒株包括病毒株 Impl008、ImplOlO、Imp999、ImplOll-48285, ImplOll-48121、1103 和 1121)，尤其是當(dāng)該組合物旨在被施用給小豬例如來自經(jīng)過接種的雌豬的小豬，更具體地施用給雌豬，尤其是懷孕雌豬或?qū)⒁邮芘浞N的雌豬時；更特別地是根據(jù)以上定義的接種方案進行施用時。更具體地，該用途是配制如下組合物，該組合物旨在預(yù)防或治療與PCV-2有關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染，尤其是當(dāng)該組合物旨在施用給小豬例如來自經(jīng)過接種的雌豬的小豬，更特別地施用給雌豬，尤其是懷孕雌豬或?qū)⒁邮芘浞N的雌豬時；更特別地是根據(jù)以上定義的接種方案進行施用時。所述來自至少一種其它豬病原體的至少一種免疫原可以是在已知豬疫苗或免疫原性組合物中使用的、或在WO 98/03658中描述的那些。在本發(fā)明中使用的組合物可以根據(jù)獸醫(yī)或制藥領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來制備。這些組合物可由獸醫(yī)領(lǐng)域的技術(shù)人員在考慮了如豬的年齡、性別、體重、身體狀況和具體治療方案以及給藥途徑這些因素之后，按其熟知的劑量和技術(shù)給藥。這些組合物可單獨給藥，或可以與本發(fā)明的其它組合物(例如含有PCV-2免疫原的其它組合物)或與其它預(yù)防或治療性組合物(例如其它豬免疫原性或疫苗組合物)共同給藥或順序給藥。由此， 本發(fā)明還提供多價或“雞尾酒式”或聯(lián)合的組合物和使用它們的方法。在這一方面，請參考涉及狂犬病毒組合物和聯(lián)合組合物及其使用的美國專利5，843，456。本發(fā)明的組合物可以用于腸胃外或粘膜給藥，優(yōu)選通過皮內(nèi)或肌內(nèi)途徑給藥。具體地，對于皮內(nèi)途徑，可以采用無針頭注射器進行注射。當(dāng)采用粘膜給藥時，可以使用口、鼻或眼途徑。在這些組合物中，可以將免疫原與適合的載體、稀釋劑、或賦形劑如無菌水、生理鹽水、葡萄糖等，和/或優(yōu)選地與佐劑混合。這些組合物也可被凍干或冷凍。這些組合物根據(jù)給藥途徑和預(yù)期的制品可以含有輔助物質(zhì)如PH緩沖劑、佐劑、防腐劑、用于粘膜途徑的聚合物賦形劑等。可參考標(biāo)準(zhǔn)文獻如“REMINGTON，SPHARMACEUTICAL SCICNCE”第 17 版，1985，來制備適當(dāng)?shù)闹破?，而無需過多實驗。合適的劑量也可以以本文和本文引用的文獻作為基礎(chǔ)。佐劑是增強針對免疫原的免疫應(yīng)答的物質(zhì)。佐劑可以包括氫氧化鋁和磷酸鋁、皂角苷如QuilA、油包水型乳劑、水包油型乳劑、水包油包水型(water-in-oil-in-water)乳劑。乳劑可以基于尤其是輕液體石蠟油(歐洲藥典類型)；類異戊二烯油如角鯊?fù)榛蚪酋徬?；鏈烯，尤其是異丁烯或癸烯，低聚化產(chǎn)生的油；含有直鏈烷基的酸或醇的酯，更具體地是植物油、油酸乙酯、丙二醇二(辛酸酯/癸酸酯)、甘油基三(辛酸酯/癸酸酯)或丙二醇二油酸脂；分枝脂肪酸或醇的酯，尤其是異硬脂酸酯。油與乳化劑聯(lián)合使用以形成乳劑。 優(yōu)選地，乳化劑是非離子表面活性劑，尤其是山梨聚糖、二縮甘露醇(例如脫水甘露醇油酸酯)、甘油、聚甘油、丙二醇和油酸、異硬脂酸、蓖麻油酸或羥基硬脂酸的酯(任選地該酯可以乙氧基化)，和聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物，尤其是Pluronic 產(chǎn)品、特別是L121。 見Hunter等，有關(guān)佐劑的理論和實際應(yīng)用(The Theory andPractical Application of Adjuvants) (Stewart-Tull, D. E. S.編)，John Wiley and Sons，NY，第 51-94 頁(1995)和 Todd 等，疫苗(Vaccine) 15 :564-570 (1997)。例如，可以使用“疫苗設(shè)計，亞單位和佐劑方法”(Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach) ,M. Powell 禾口 Μ· Newman 編，Plenum Press, 1995,第 147 頁上描述的SPT乳劑，和同一本書第183頁上描述的MF59乳劑。例如，含有佐劑的疫苗可以按以下方式制備借助乳化渦輪混合器，將67% ν/ν含有免疫原的水相在2，3%W/v脫水甘露醇油酸酯、2，6%W/vllE0(環(huán)氧乙烷)乙氧基化的油酸和28，1% ν/ν輕液體石蠟油(歐洲藥典類型)中乳化。制備乳劑的另一種方法是將5% w/v角鯊?fù)椤?. 5% w/v Pluronic L12U0. 2% w/v 20 EO乙氧基化的油酸和脫水山梨糖醇的酯、92. 3% ν/ν含有免疫原的水相混合，然后使之通過一個高壓勻漿器來乳化。尤其是，還可以與合成聚合物(例如乳酸和乙醇酸的同聚物和共聚物，它們已經(jīng)被用于制備包被免疫原的微球，見Eldridge等，Mol. Immunol. 28 :觀7_四4(1993)，例如生物可降解微球)、與細胞因子如IL-2和IL-12(見例如美國專利5，334，379)和GMCSF， 有利的是豬的GMCSF(粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子；一般參見美國專利4，999，291和 5，461，663，也參見 Clark 等，科學(xué)(Science) 1987,230 :1229 ；Grant 等，藥物(Drugs), 1992,53 :516)，一起配制。某些佐劑可以和免疫原和/或表位一起在體內(nèi)表達；例如細胞因子、GMCSF(見例如，有關(guān)編碼和表達豬GM-CSF的質(zhì)粒的文獻Inumaru和Takamatsu， Immunol. Cell. Biol.，1995，73 :474-76)。佐劑的再一實例是選自丙烯酸或甲基丙烯酸聚合物和順丁烯二酸酐與鏈烯基衍生物的共聚物的化合物。有利的佐劑化合物是交聯(lián)的丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物，尤其與糖或多元醇的多聚鏈烯基醚交聯(lián)。這些化合物稱為術(shù)語carbomer (Phameuropa第8卷第二期，1996年6月)。本領(lǐng)域技術(shù)人員也可參考美國專利號四09462，該專利描述了與多羥基化合物交聯(lián)的這類丙烯酸聚合物，該多羥基化合物含有至少3個羥基，優(yōu)選不超過8個羥基、其中至少3個羥基的氫原子被具有至少2個碳原子的不飽和脂肪族基團所取代。優(yōu)選基團是那些含有2-4個碳原子的基團，如乙烯基、烯丙基和其它烯鍵式不飽和基團。這些不飽和基團本身可以含有其它取代基，如甲基。以名稱Carbopol (BF Goodrich，俄亥俄州， 美國)出售的產(chǎn)品特別適合。它們與烯丙基蔗糖或烯丙基季戊四醇交聯(lián)。其中可以提及的有Carbopol 974P、934P和971P。在順丁烯二酸酐和鏈烯基衍生物的共聚物中，優(yōu)選順
丁烯二酸酐和乙烯的線性或交聯(lián)的共聚物EMA (Monsanto)，例如與二乙烯基醚交聯(lián)的共聚物?？蓞⒖嘉墨I J. Fields 等，自然(Nature)，186 =778-780,1960. 6. 4。從其結(jié)構(gòu)來看，丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物和共聚物EMA 優(yōu)選由下式的基本
單位形成
權(quán)利要求
1.PCV-2免疫原在配制疫苗組合物中的用途，該疫苗組合物含有藥學(xué)可接受載體、賦形劑或賦形藥，用于預(yù)防或治療豬的與PCV-2相關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其特征在于該免疫原是減毒活PCV-2、或滅活PCV-2、或 PCV-2亞單位或其片段、或含有并體內(nèi)表達PCV-2序列、片段或表位的重組載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的用途，其特征在于該PCV-2株是Imp999、ImplOlO、 ImplOll-48121 或 ImplOll-48285。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的用途，其特征在于該PCV-2株是1103或1121株。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之任一項的用途，其特征在于該免疫原與佐劑一起進行配制。
6.保藏在ECACC、編號為V00012710的1103株培養(yǎng)物。
7.保藏在ECACC、編號為V00012709的1121株培養(yǎng)物。
8.含有藥學(xué)可接受載體、賦形劑或賦形藥及PCV-2免疫原的疫苗組合物，其特征在于該PCV-2免疫原是1103株或1121株的免疫原。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的疫苗組合物，其特征在于該PCV-2免疫原是減毒活PCV-2、或滅活 PCV-2、或PCV-2亞單位或其片段、或含有并體內(nèi)表達PCV-2序列、片段或表位的重組載體。
10.包含SEQ ID NO 6 的 DNA 片段。
11.包含SEQ ID NO 7 的 DNA 片段。
12.PCV-2免疫原在配制疫苗組合物中的用途，所述疫苗組合物含有藥學(xué)可接受載體、 賦形劑或賦形藥，用于預(yù)防或治療豬的與PCV-2相關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染和/或與PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥，其中該疫苗組合物旨在給雌豬施用，并在配種前接種至少一次，優(yōu)選地隨后在妊娠期間、優(yōu)選在妊娠約6-8周時接種一次，和/或在妊娠末期、優(yōu)選在妊娠約11-13周時接種一次。
13.為了預(yù)防或治療豬的與PCV-2相關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染和/或與 PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥給豬接種的方法，其中給雌豬施用含有藥學(xué)可接受載體、賦形劑或賦形藥及PCV-2免疫原的疫苗組合物，并在配種前接種至少一次，優(yōu)選地隨后在妊娠期間、優(yōu)選在妊娠約6-8周時接種一次，和/或在妊娠末期、 優(yōu)選在妊娠約11-13周時接種一次。
14.PCV-2免疫原在配制疫苗組合物中的用途，所述疫苗組合物含有藥學(xué)可接受載體、 賦形劑或賦形藥，用于預(yù)防或治療豬的與PCV-2相關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染和/或與PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥，其中旨在于小豬出生后第一周內(nèi)或出生后第三周內(nèi)給小豬施用該疫苗組合物，優(yōu)選地隨后在2-4周后給予一次加強。
15.為了預(yù)防或治療豬的與PCV-2相關(guān)的心肌炎和/或流產(chǎn)和/或?qū)m內(nèi)感染和/或與PCV-2相關(guān)的斷奶后多系統(tǒng)萎縮綜合征和其它病理學(xué)后遺癥給豬接種的方法，其中在小豬出生后第一周內(nèi)或出生后第三周內(nèi)給小豬施用含有藥學(xué)可接受載體、賦形劑或賦形藥及 PCV-2免疫原的疫苗組合物，優(yōu)選地隨后在2-4周后給予一次加強。
全文摘要
本發(fā)明描述了含有來自豬環(huán)狀病毒(2)的外源DNA的重組痘病毒，例如禽痘病毒。也描述了含有該重組痘病毒的免疫組合物，該免疫組合物被用于在施用了該免疫組合物的宿主動物體內(nèi)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。還描述了通過將本發(fā)明的免疫組合物給予需要治療或?qū)ωi環(huán)狀病毒(2)的感染敏感的動物，來治療或預(yù)防豬環(huán)狀病毒(2)引起的疾病的方法。
文檔編號C12N15/09GK102416173SQ20091025232
公開日2012年4月18日 申請日期2000年8月28日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月31日
發(fā)明者B·米翰, C·E·查雷勒, D·海尼斯, E·克拉克, F·麥克奈利, G·E·查普伊斯, G·M·艾倫, G·S·克拉考卡, J·A·埃里斯, J·哈丁, J-C·F·奧東奈特, L·哈薩德 申請人:梅瑞爾公司, 薩斯喀徹溫大學(xué), 貝爾法斯特皇后大學(xué)