專利名稱：一種燃油毒性的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種毒性檢測(cè)方法，尤其涉及一種燃油毒性的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
各國(guó)汽車代用燃料的技術(shù)雖有不同，但目標(biāo)都是預(yù)防石油燃料的枯竭和減少汽車 排放對(duì)環(huán)境的污染。目前，在眾多汽車代用燃料中倍受關(guān)注的是甲醇汽油和乙醇汽油。這 類燃料都是在汽油中通過(guò)添加甲醇或乙醇以部分取代價(jià)格正在不斷上升、資源已近枯竭的 汽油。在實(shí)際的應(yīng)用中，甲醇汽油和乙醇汽油都被證明能很好地用于汽車的燃油，但他們?cè)?使用過(guò)程中是否安全呢？對(duì)汽油燃料和甲醇燃料毒性研究已有許多報(bào)道。發(fā)光細(xì)菌的毒性 測(cè)定方法是一個(gè)快速、經(jīng)濟(jì)、有效的環(huán)境毒性物質(zhì)評(píng)價(jià)手段，已成功地應(yīng)用于重金屬污染土 壤的毒性評(píng)價(jià)以及水體污染毒性評(píng)價(jià)等方面。但是，應(yīng)用發(fā)光細(xì)菌直接檢測(cè)汽油、甲醇汽油 和乙醇汽油三者毒性研究還末見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了 一種燃油毒性的檢測(cè)方法，可以方便地對(duì)燃油的毒性進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明的技術(shù)方案為首先，進(jìn)行樣品處理稀釋液一 0. 85% NaCl溶液；稀釋液二 在稀釋液一中加入 吐溫-80 至 0. 1 % (ν/ν)。用稀釋液一分別配制甲醇汽油添加劑(ν/ν)，甲醇10% (ν/ν)，乙醇10% (ν/ ν)，苯酚1000mg/L。用稀釋液二分別配制樣品93#汽油0. (ν/ν)，ElO乙醇汽油0. 1% (ν/ν)，Μ50 甲醇汽油 0. 16% (ν/ν)。然后，進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)基菌液制備青?；【鶹ibrio qinghaiensis sp. Nov. (Q67菌 株)培養(yǎng)基成分為混合鹽12. 49g ；酵母膏5g ；胰胨5g ；甘油3g ；加水至IOOOmI ；pH 9. 0。 混合鹽成分=MgSO4 19. 8% ；MgCO3 6. 3% ；MgBr2 0. 74% ；MgCl2 0. 74% ；CaCO3 0. 22% ；KCl 1. 76% ；NaCI 66. 36% ；Mg(HCO3)2 4. 04% 以上配方中再加瓊脂2%即為固體培養(yǎng)基。將培養(yǎng)12-16小時(shí)的新鮮發(fā)光菌離心分離，加生理鹽水稀釋至適當(dāng)濃度的菌懸 液。測(cè)試樣品配制成系列濃度梯度(93#汽油與ElO乙醇汽油的系列濃度為(v/v，%) 0. 02，0. 04，0. 06，0. 08，0. 10 ；M50 甲醇汽油的系列濃度為(ν/ν, % ) 0. 032，0. 064，0. 096， 0. 128,0. 160)，再向測(cè)試管中依次分別加入1.9mL系列濃度的樣品溶液。接著在裝有樣品 液的測(cè)試管中各加入上述菌液0. ImL, 15min后用毒性測(cè)試儀檢測(cè)其發(fā)光度，并同時(shí)測(cè)定參 比毒物苯酚溶液系列濃度對(duì)發(fā)光菌發(fā)光的抑制曲線。每個(gè)濃度設(shè)三個(gè)平行樣，取平均值。每 種樣品液均配一對(duì)照(CK)管(汽油、乙醇汽油和甲醇汽油的對(duì)照管中為上述稀釋液二；甲 醇、乙醇、M50甲醇汽油添加劑和苯酚的對(duì)照管中為上述稀釋液一)，并重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。用直線內(nèi)插法求出EC5(i。EC5(i是指在一定條件下發(fā)光強(qiáng)度降低50%時(shí)樣品的濃度。 根據(jù)EC5tl值的大小，判斷樣品的毒性及其大小。最有對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，處理公式為
相對(duì)發(fā)光度(％)=樣品管發(fā)光值(脈沖數(shù))xl00 1 ； CX管發(fā)光值(脈沖數(shù))
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。本實(shí)施例中用到的材料為下表中的。 所用的試劑及儀器為吐溫-80，化學(xué)純。苯酚，分析純。乙醇，分析純，乙醇含量彡99. 7%，密度P (20°C) g/ml :0. 79。甲醇，分析純，甲醇含量彡99. 5%，密度P (20°C ) g/ml 0. 79。測(cè)試方法為首先，進(jìn)行樣品處理稀釋液一 0. 85% NaCl溶液；稀釋液二 在稀釋液一中加入 吐溫-80 至 0. 1 % (ν/ν)。用稀釋液一分別配制甲醇汽油添加劑1% (ν/ν)，甲醇10% (ν/ν)，乙醇10% (ν/ ν)，苯酚1000mg/L。用稀釋液二分別配制樣品93#汽油0. (ν/ν)，ElO乙醇汽油0. 1% (ν/ν)，Μ50 甲醇汽油 0. 16% (ν/ν)。然后，進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)基菌液制備青?；【鶹ibrio qinghaiensis sp. Nov. (Q67菌 株)培養(yǎng)基成分為混合鹽12. 49g ；酵母膏5g ；胰胨5g ；甘油3g ；加水至IOOOmI ；pH 9. 0。 混合鹽成分=MgSO4 19. 8% ；MgCO3 6. 3% ；MgBr2 0. 74% ；MgCl2 0. 74% ；CaCO3 0. 22% ；KCl 1. 76% ；NaCI 66. 36% ；Mg(HCO3)2 4. 04% 以上配方中再加瓊脂2%即為固體培養(yǎng)基。將培養(yǎng)12-16小時(shí)的新鮮發(fā)光菌離心分離，加生理鹽水稀釋至適當(dāng)濃度的菌懸 液。測(cè)試樣品配制成系列濃度梯度(93#汽油與ElO乙醇汽油的系列濃度為(v/v，%) 0. 02，0. 04，0. 06，0. 08，0. 10 ；M50 甲醇汽油的系列濃度為(ν/ν, % ) 0. 032，0. 064，0. 096， 0. 128,0. 160)，再向測(cè)試管中依次分別加入1.9mL系列濃度的樣品溶液。接著在裝有樣品 液的測(cè)試管中各加入上述菌液0. ImL, 15min后用毒性測(cè)試儀檢測(cè)其發(fā)光度，并同時(shí)測(cè)定參 比毒物苯酚溶液系列濃度對(duì)發(fā)光菌發(fā)光的抑制曲線。每個(gè)濃度設(shè)三個(gè)平行樣，取平均值。每 種樣品液均配一對(duì)照(CK)管(汽油、乙醇汽油和甲醇汽油的對(duì)照管中為上述稀釋液二；甲醇、乙醇、M50甲醇汽油添加劑和苯酚的對(duì)照管中為上述稀釋液一)，并重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。用直線內(nèi)插法求出EC5(i。EC5(i是指在一定條件下發(fā)光強(qiáng)度降低50%時(shí)樣品的濃度。 根據(jù)EC5tl值的大小，判斷樣品的毒性及其大小。最有對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，處理公式為
樣品管發(fā)光值(脈沖數(shù)、1() 賺峋/。) - crt發(fā)光值(脈沖數(shù))通過(guò)對(duì)上述測(cè)試結(jié)果進(jìn)行分析，四批93#汽油樣品的EC5tl平均值為528. 82mg/L ； 四批ElO乙醇汽油樣品的EC5tl平均值為583. 30mg/L ；六批M50甲醇汽油樣品的EC5tl平均值 為904. 99mg/L。甲醇汽油添加劑的EC50為4924. 39mg/L，甲醇的EC50為4. 74X 104mg/L。乙 醇的EC5tl為3. 79X 104mg/L。由EC5tl的大小可知各樣品的毒性由大到小順序?yàn)?3#汽油> ElO乙醇汽油>1150甲醇汽油> 甲醇汽油添加劑> 乙醇> 甲醇。因此我們認(rèn)為，M50甲醇汽 油和ElO乙醇汽油的毒性主要是由汽油毒性引起的；M50甲醇汽油的毒性比93#汽油和ElO 乙醇汽油小，生物安全性比較好。
權(quán)利要求
一種燃油毒性的檢測(cè)方法，其特征在于首先，進(jìn)行樣品處理稀釋液一；0.85％NaCl溶液；稀釋液二在稀釋液一中加入吐溫 80至0.1％(v/v)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種燃油毒性的檢測(cè)方法，其特征在于用稀釋液一分別配 制甲醇汽油添加劑(v/v)，甲醇10% (v/v)，乙醇10% (v/v)，苯酚1000mg/L。用稀釋 液二分別配制樣品93#汽油0. (v/v),E10乙醇汽油0. 1% (v/v)，M50甲醇汽油0. 16% (v/v)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種燃油毒性的檢測(cè)方法，其特征在于然后，進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng) 基菌液制備青?；【鶹ibrio qinghaiensis sp. Nov. (Q67菌株)培養(yǎng)基成分為混合鹽 12. 49g ；酵母膏5g ；胰胨5g ；甘油3g ；加水至1000ml ；pH 9. 0?；旌消}成分:MgS04 19. 8%； MgC036 . 3 % ；MgBr2 0. 74 % ；MgCl2 0. 74 % ；CaC03 0. 22 % ；KC1 1. 76 % ；NaCI 66. 36 % ； Mg(HC03)24. 04%。以上配方中再加瓊脂2%即為固體培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種燃油毒性的檢測(cè)方法，其特征在于將培養(yǎng)12-16小時(shí) 的新鮮發(fā)光菌離心分離，加生理鹽水稀釋至適當(dāng)濃度的菌懸液。測(cè)試樣品配制成系列濃度 梯度(93#汽油與E10乙醇汽油的系列濃度為(v/v, % ) 0. 02,0. 04,0. 06,0. 08,0. 10 ；M50 甲醇汽油的系列濃度為(v/v, % ) :0.032，0.064，0.096，0. 128，0. 160)，再向測(cè)試管中依 次分別加入1.9mL系列濃度的樣品溶液。接著在裝有樣品液的測(cè)試管中各加入上述菌液 0. lmL，15min后用毒性測(cè)試儀檢測(cè)其發(fā)光度，并同時(shí)測(cè)定參比毒物苯酚溶液系列濃度對(duì)發(fā) 光菌發(fā)光的抑制曲線。每個(gè)濃度設(shè)三個(gè)平行樣，取平均值。每種樣品液均配一對(duì)照(CK)管 (汽油、乙醇汽油和甲醇汽油的對(duì)照管中為上述稀釋液二；甲醇、乙醇、M50甲醇汽油添加劑 和苯酚的對(duì)照管中為上述稀釋液一)，并重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種燃油毒性的檢測(cè)方法，其特征在于用直線內(nèi)插法求出 EC5Q。EC5(i是指在一定條件下發(fā)光強(qiáng)度降低50%時(shí)樣品的濃度。根據(jù)EC5(I值的大小，判斷樣 品的毒性及其大小。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種燃油毒性的檢測(cè)方法，其特征在于最有對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn) 行處理，處理公式為相對(duì)發(fā)光度(％ ) J羊纖想(脈沖數(shù))xl0 反 ()CA管發(fā)光值(脈沖數(shù))
全文摘要
本發(fā)明涉及一種毒性檢測(cè)方法，尤其涉及一種燃油毒性的檢測(cè)方法。各國(guó)汽車代用燃料的技術(shù)雖有不同，但目標(biāo)都是預(yù)防石油燃料的枯竭和減少汽車排放對(duì)環(huán)境的污染。目前，在眾多汽車代用燃料中倍受關(guān)注的是甲醇汽油和乙醇汽油。在實(shí)際的應(yīng)用中，甲醇汽油和乙醇汽油都被證明能很好地用于汽車的燃油，但他們?cè)谑褂眠^(guò)程中是否安全呢？對(duì)汽油燃料和甲醇燃料毒性研究已有許多報(bào)道。但是，應(yīng)用發(fā)光細(xì)菌直接檢測(cè)汽油、甲醇汽油和乙醇汽油三者毒性研究還來(lái)見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明提供了一種燃油毒性的檢測(cè)方法，可以方便地對(duì)燃油的毒性進(jìn)行檢測(cè)。
文檔編號(hào)C12Q1/02GK101892284SQ20091005729
公開(kāi)日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2009年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月22日
發(fā)明者張亞旦 申請(qǐng)人:張亞旦