專(zhuān)利名稱(chēng)：一種dcc基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法和應(yīng)用的制作方法
一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種試劑盒，具體地說(shuō)關(guān)于一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒及其 檢測(cè)方法和應(yīng)用
背景技術(shù)：
胰腺癌已成為我國(guó)人口死亡的十大惡性腫瘤之一。年輕的胰腺癌病人也較10年 前有明顯增加的趨勢(shì)，而且惡性度更高，預(yù)后更差。就胰腺癌的發(fā)生部位而言，仍以胰頭部 位最多見(jiàn)，約占70%左右，胰體次之，胰尾部更次之，有的頭體尾部均有，屬于彌漫性病變或 多中心性病變。目前，胰腺癌的發(fā)病原因尚不清楚，已發(fā)現(xiàn)一些環(huán)境因素與胰腺癌的發(fā)生有 關(guān)。其中已定的首要危險(xiǎn)因素為吸煙。吸煙者發(fā)生胰腺癌相對(duì)危險(xiǎn)度是非吸煙者的1. 5倍， 而且隨著吸煙數(shù)量增加而增加。其他高危險(xiǎn)因素還有糖尿病、膽石病、飲酒(包括啤酒)以 及慢性胰腺炎等。進(jìn)食高脂肪、高蛋白飲食和精制的面粉食品，胃切除術(shù)后20年者，也是發(fā) 生胰腺癌的危險(xiǎn)因素。胰腺癌致死性特高，可能由于它發(fā)病詭秘隱匿，確診時(shí)多已進(jìn)入晚期 之故。胃癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)其發(fā)病率居各類(lèi)腫瘤的首位。中國(guó)的胃 癌發(fā)病率以西北最高東北及內(nèi)蒙古次之華東及沿海又次之中南及西南最低每年約有17萬(wàn) 人死于胃癌，幾乎接近全部惡性腫瘤死亡人數(shù)的1/4，且每年還有2萬(wàn)以上新的胃癌病人產(chǎn) 生出來(lái)，胃癌確實(shí)是一種嚴(yán)重威脅人民身體健康的疾病。DCC 基因(deleted in colorectal cancer)位于染色體 18q21. 3，它存在于大多 數(shù)正常組織中，其產(chǎn)物為一組糖蛋白，具有表面受體的作用，其結(jié)構(gòu)與細(xì)胞黏著分子相似， 可能是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受體，它的缺失可使腫瘤細(xì)胞迅速增值，有人認(rèn)為它是癌癥抑制基因。 DCC基因的異常大多數(shù)發(fā)生在腫瘤的較晚階段，DCC基因缺失可能通過(guò)影響細(xì)胞間黏著機(jī) 制導(dǎo)致腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。在胃癌的研究中，Bamias等發(fā)現(xiàn)DCC基因缺失缺失多見(jiàn)于分化 差異及印戒細(xì)胞癌者，認(rèn)為DCC基因缺失是胃癌的獨(dú)立侵襲轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)因子。Hohne等研究表 明在低分化或未分化胰腺癌中DCC表達(dá)極度減少或缺失隨著分子生物技術(shù)日益完善，功能基因組學(xué)，癌癥基因組學(xué)等研究的深入展開(kāi)，至 今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細(xì)胞形成(單克隆 時(shí))就能做到基因水平的早期預(yù)測(cè)診斷。本發(fā)明采用核酸原位雜交技術(shù)檢測(cè)DCC基因，對(duì)胰 腺癌和胃癌等早期基因水平的診斷有非常重要的臨床意義。DCC基因序列號(hào)NM_005215， 5690bp, mRNA,18q21. 3"，cds :588…4931bp。本發(fā)明的原位雜交技術(shù)(in situ hybridization)是將分子生物學(xué)與細(xì)胞化學(xué)技 術(shù)結(jié)合起來(lái)，以標(biāo)記的核酸分子為探針，在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異性核酸分子的技術(shù)。其原 理是使含有特異序列、經(jīng)過(guò)標(biāo)記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ) 核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交，再以放射自顯影或免疫細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè)， 從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)試劑 盒的用途。本發(fā)明的再一的目的是，提供一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明的另一的目的是，提供一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒在制備檢測(cè)胃癌或胰腺癌疾病藥物中的應(yīng) 用，所述的試劑盒包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示。所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示的RNA序列。所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。所述的放射性核素選自3H、35S、125I或32P中的一種。所述的非放射性標(biāo)記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過(guò)氧化酶或熒光素 中的一種。所述的非放射性標(biāo)記物優(yōu)選自地高辛。所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物，其中所述的雜交探 針序列如SEQ ID NO. 1所示，所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。為實(shí)現(xiàn)上述第三個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)方法，該方法包括以下步驟a、將試劑盒中的雜交探針與底物中待測(cè)RNA接觸，形成雜交復(fù)合體；b、檢測(cè)a步驟得到的雜交復(fù)合體。所述的a步驟中形成雜交復(fù)合體的條件為核酸雜交的溫度為42°C ；核酸雜交的 時(shí)間為16-24小時(shí)，所述的底物選用血液細(xì)胞標(biāo)本或組織細(xì)胞標(biāo)本。本發(fā)明的診斷試劑盒的組份是由雜交探針，雜交液，顯色劑，增效劑等組成。本試 劑盒的核酸雜交原理是分子生物學(xué)業(yè)內(nèi)人士均熟知，具體操作步驟是標(biāo)本處理、預(yù)雜交、雜 交、免疫組化染色、鏡下進(jìn)行定量分析、結(jié)果報(bào)告，其中雜交的具體步驟包括儀器操作
1).將待測(cè)標(biāo)本放入反應(yīng)槽中；
2).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)加消化液；
3).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)后固定；
4).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)預(yù)雜交(42°C )；
5).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)清洗；
6).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)雜交(420C )；
7).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)清洗；
8).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)與DIG抗體培養(yǎng)(室溫)
9).儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)清洗，顯色；
10).取出封片鏡檢。
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于
1、本發(fā)明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。2、本發(fā)明的檢測(cè)方法操作方便、簡(jiǎn)單，能在區(qū)級(jí)以上醫(yī)院普遍使用和推廣。3、本發(fā)明的臨床意義是更早期跟蹤檢測(cè)胃癌或胰腺癌發(fā)生動(dòng)態(tài)過(guò)程，以及用于胃 癌或胰腺癌預(yù)防醫(yī)學(xué)的檢測(cè)和篩選工具。本發(fā)明的診斷試劑盒與臨床上其它檢測(cè)癌胚蛋白 標(biāo)志物，以及影像醫(yī)學(xué)檢查有顯著不同。本發(fā)明可以在基因水平上檢測(cè)DCC異常表達(dá)，在影 像醫(yī)學(xué)檢查及其它檢查未發(fā)現(xiàn)占位性胃癌或胰腺癌病灶之前，癌癥生化指標(biāo)未產(chǎn)生異常之 前，亦未形成腫塊之前，能及早做到以上基因表達(dá)異常的信息采集，給臨床胃癌或胰腺癌病 患一個(gè)真正的預(yù)后早期診斷。這樣才有可能實(shí)施胃癌或胰腺癌的早期診斷、早期預(yù)防、早期 治療，有可能從源頭上徹底根治胃癌或胰腺癌惡疾。

圖1是本發(fā)明實(shí)施例中胰腺癌病人DCC基因表達(dá)圖片。圖2是本發(fā)明實(shí)施例中胃癌病人DCC基因表達(dá)圖片。圖3是本發(fā)明實(shí)施例中正常人DCC基因表達(dá)圖片。
具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1—種DCC基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物、增效劑，其中，所述 的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示。雜交探針用地高辛標(biāo)記。試劑盒中的其它液體和標(biāo) 本組成如下消化液100 μ 1/管1管/盒無(wú)色透明液體
保護(hù)液100 μ 1/管1管/盒無(wú)色透明液體
預(yù)雜交液1300 μ 1/ 管2管/盒無(wú)色透明液體
正義雜交液10μ 1/管1管/盒無(wú)色透明液體
反義雜交液10μ 1/管1管/盒無(wú)色透明液體
封閉液1000 μ 1/ 管1管/盒無(wú)色透明液體
堿性磷酸酶抗體ι μ 1/管1管/盒無(wú)色透明液體
顯色劑A175 μ 1/ 管1管/盒黃色液體
顯色劑B320 μ 1/ 管1管/盒無(wú)色透明液體
緩沖液IlOx90ml/ 瓶1瓶/盒淺黃色或無(wú)色透明液體
緩沖液II IOx80ml/ 瓶1瓶/盒淺黃色或無(wú)色透明液體
緩沖液III IOx20m/瓶3瓶/盒淺黃色或無(wú)色透明液體
緩沖液IV IOx90ml/ 瓶1瓶/盒淺黃色或無(wú)色透明液體
固定液90ml/ 瓶1瓶/盒無(wú)色透明液體
陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本6片/盒上述試劑成分說(shuō)明(所有試劑購(gòu)自SIGMA)1、消化液:20mg/ml 蛋白酶 K，IOOmg 蛋白酶 K，加 DEPC-H2O 5ml ；2、保護(hù)液0. 2g的glycine加入Iml的1 X緩沖液I ；
3、預(yù)雜交液1X緩沖液117. 5ml50 X D 3ml10mg/ml yest t-RNA 750ulllmg/ml SALMON TESTES DNA 682ul0. 04M EDTA 3ml50% formamide 15ml4、封閉液0.03g的bloking(購(gòu)買(mǎi)自羅氏公司)加入Iml IX緩沖液III;5、IOx 緩沖液 I (PH7. 1-7. 4)NaCl 80gNa2HPO4. 12H20 360gKCl 2gKH2P042g加三蒸水至11，并高壓滅菌；6、IOx 緩沖液 II (PH7. 0)NaCl 175. 3g檸檬酸鈉88. 2gHCl 幾滴加三蒸水至11，并高壓滅菌；7、緩沖液 III :(PH7. 9)Tris 121. IgNaCl 87. 66gHCl 60ml 左右加三蒸水至11，并高壓滅菌；8、緩沖液 IV:IM Tris-HCl (PH9. 5) =Tirs 121. Ig 加 HCl 3ml 左右，加水 900ml，調(diào) PH 至 9. 5，加 水至11，并高壓滅菌；IM NaCl =NaCl 58. 44 加水至 11，并高壓滅菌；0.5M MgCl2 101. 65g MgCl2. 6H20 加水至 11，并高壓滅菌；9、固定液多聚甲醛40g加IX緩沖液I至11，稍加熱(約50_60度)攪拌至溶 解；10、顯色劑 A =NBT Ig 加 70% DMFl 1. 44ml ；11、顯色劑 B =BCIP Ig 加 100% DMF30ml。本發(fā)明的試劑盒可以多人份使用或一人份使用。實(shí)施例2—種DCC基因原位雜交檢測(cè)方法及其試劑盒應(yīng)用一、標(biāo)本處理1、用IOml的離心管，裝4. 5ml淋巴細(xì)胞分離液，再將3ml抗凝血緩慢加入含有淋 巴細(xì)胞分離液(血淋巴細(xì)胞分離液=1 1.5)的離心管中，2000r/min離心IOmin ；2、吸取中間層白細(xì)胞至另一離心管中，再在此管中加入約兩倍的IX緩沖液I，混勻，1500g/min 離心 IOmin ；3、棄上清.沉淀加入約兩倍的1 X緩沖液I，混勻，1500g/min離心IOmin ；4、棄上清，并把試管口多余的液體用擦手紙吸去。再將沉淀制成懸液，滴在玻片上 推片，自然干燥。(有條件的醫(yī)院可以用制片機(jī)制片。)3ml血，可以做4張片子；5、用40ml 4%固定液，在玻璃缸中，固定30min，再用IX緩沖液I洗5min。每缸 可以放16片；6、標(biāo)本可保存在_20°C，或繼續(xù)做實(shí)驗(yàn)。二、將試劑盒中試劑配制成使用濃度1、將IOX緩沖液I用三蒸水按1 10稀釋成IX緩沖液I ；2、將20X緩沖液II用三蒸水按1 10稀釋成2X緩沖液II ；按1 100稀釋成0. 2X緩沖液II ；按1 200稀釋成0. 1 X緩沖液II ；3、將IOX緩沖液III用三蒸水按1 10稀釋成1 X緩沖液III ；4、10X緩沖液IV用三蒸水按1 10稀釋成X緩沖液IV (取1#，2#，3#各10ml， 加水至IOOml既可)。三、實(shí)驗(yàn)步驟1、取每位待檢者標(biāo)本兩張，(另外兩張留作復(fù)查用)及陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本兩張(每次 實(shí)驗(yàn)做一對(duì)陽(yáng)性對(duì)照)；2、在玻璃缸里加消化液(消化液IOOul加IX緩沖液199.9ml，即為使用濃 度)20ml。37°C水浴預(yù)熱10分鐘。放進(jìn)16張玻片，37°C處理12min，再用1 X緩沖液I洗 5min ；3、用0. 2%的保護(hù)液(保護(hù)液Iml加IX緩沖液I99ml即為使用濃度)洗IOmin, 三蒸水洗5min，以上過(guò)程都在玻璃缸進(jìn)行。玻片自然干燥；4、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加預(yù)雜交液20ul/片.蓋上蓋玻片，蓋緊保濕盒，放在 42°C恒溫水浴箱中3h以上；5、取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內(nèi)，用70%，90%，95%的乙醇各洗 2min,自然干燥；6、將玻片放入保濕盒內(nèi)，每位病人標(biāo)本兩張，一張加正義雜交液20ul/片，另一張 加反義雜交液20ul/片，蓋上蓋玻片，蓋緊保濕盒，放在42°C恒溫水浴箱中16-24h ；7、取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內(nèi)在42°C恒溫水浴箱中用2X緩沖液II洗兩次，每次15min在42°C恒溫水浴箱中用0. 2X緩沖液II洗一次，每次15min在42°C恒溫水浴箱中用0. 1 X緩沖液II洗兩次，每次15min ；8、用IX緩沖液III洗30s，取出玻片，自然干燥；9、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加0.5% 1封閉液(Iml封閉液加5ml IX緩沖液 III) IOOul/片，蓋緊保濕盒，在室溫下作用30min ；10、取出玻片，用IX緩沖液III洗30s，自然干燥；11、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加堿性磷酸酶抗體(加入1.8ml 1 X緩沖液III) IOOul/ 片，蓋緊保濕盒在室溫下作用30min ；12、取出玻片，用IX緩沖液III洗3次，每次15min;
13、IX緩沖液IV洗2min，加顯色劑(顯色劑A73. 3ul，顯色劑B157. 5ul加到30ml 1 X緩沖液IV中，混勻)，室溫避光12h以上；14、用三蒸水洗5min，自然干燥，(用甘油加10%的IX緩沖液I混勻)封片鏡檢。四、結(jié)果判斷在光鏡下計(jì)數(shù)100-300個(gè)細(xì)胞，計(jì)算染上紫色細(xì)胞的百分比。陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本加反義雜交液的應(yīng)該80%以上染上紫色。所有加正義雜交液的陰性?xún)?nèi)對(duì)照應(yīng)無(wú)色。地高辛標(biāo)記的cDNA、RNA和寡核苷酸探針，不但探針的具有生物素標(biāo)記優(yōu)點(diǎn)，還克 服了生物素標(biāo)記的探針在原位雜交過(guò)程中受組織內(nèi)源性生物素干憂(yōu)等缺點(diǎn))，將該雜交探 針與人體血液白細(xì)胞的待測(cè)RNA核酸進(jìn)行雜交，再用免疫組化的方法顯色，在光鏡下觀察 mRNA的存在和定位，根據(jù)染色的細(xì)胞數(shù)，判斷目的基因的表達(dá)量。本發(fā)明方法是目前常用的核酸原位雜交技術(shù)，該方法通過(guò)檢測(cè)底物細(xì)胞中的DCC 基因表達(dá)量，用來(lái)確定癌癥的預(yù)后。臨床研究表明，DCC基因在癌癥中低表達(dá)，因?yàn)镈CC基 因在正常人高表達(dá)，DCC基因的低表達(dá)說(shuō)明癌癥，DCC基因的表達(dá)程度與癌癥的預(yù)后有關(guān)， 屬負(fù)相關(guān)，表達(dá)愈低預(yù)后愈差。從而獲得癌癥的診斷信息。如上所述，當(dāng)檢測(cè)DCC基因表達(dá) 時(shí)，可預(yù)測(cè)受試者為癌癥情況。本發(fā)明實(shí)施例采樣為胃癌病人5名，胰腺癌病人5名，正常對(duì)照組5名。抽所有 待檢人的外周血3-5毫升(分離白細(xì)胞)做原位雜交。結(jié)果表示，所有癌癥患者DCC基因 不表達(dá)，細(xì)胞無(wú)染色。正常對(duì)照組DCC有過(guò)度表達(dá)，細(xì)胞染色。具體結(jié)果請(qǐng)見(jiàn)圖1，圖2和圖 3。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護(hù)范圍。SEQUENCE LISTING<110>芮屈生物技術(shù)(上海)有限公司<120> 一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法和應(yīng)用<130>/<160>1<170>PatentIn version 3. 3<210>1<211>5690<212>DNA<213> 智人(Homo sapiens)<400>1accgctggcg gacaccccag taacaagtga gagcgctcca ccccgcagtc ccccccgcct 60ctcctccctg ggtcccctcg gctctcggaa gaaaaaccaa cagcatctcc agctctcgcg 120cggaattgtc tcttcaactt tacccaaccg acgacaagga accagcctca accttttaat180gcacagcccg gccacaggat tgccttccat ctcctcttgg tccctcctgg atgtggttta 240ttgatgactt gcgagcccct cagagagctg tcttccctcc tctggctccc tccgtttcct 300tgagttagtt ttctaaggtt ttaccggggc tcgggatctc ttggaccgaa tggaactttt 360tgctgcctgc ttttgctgct gattctgtca gtggacaagg aaaaaggctt cgaaggcagc 420agaggcgcag gggaggtgga gaaagaggtg gaggaagagg acgaggagga ggaggaagcc 480gaaggggctc ggcgcgtgtg tgtgcatgtg tgcatgcgtg tgtgagtgca tgtgtgtgag 540tgctgccgct gcccgcgacc cctggccccg aaggtgttgg ctgaaatatg gagaatagtc 600ttagatgtgt ttgggtaccc aagctggctt ttgtactctt cggagcttcc ttgttcagcg 660cgcatcttca agtaaccggt tttcaaatta aagctttcac agcactgcgc ttcctctcag 720aaccttctga tgccgtcaca atgcggggag gaaatgtcct cctcgactgc tccgcggagt 780ccgaccgagg agttccagtg atcaagtgga agaaagatgg cattcatctg gccttgggaa 840tggatgaaag gaagcagcaa ctttcaaatg ggtctctgct gatacaaaac atacttcatt 900ccagacacca caagccagat gagggacttt accaatgtga ggcatcttta ggagattctg 960gctcaattat tagtcggaca gcaaaagttg cagtagcagg accactgagg ttcctttcac 1020agacagaatc tgtcacagcc ttcatgggag acacagtgct actcaagtgt gaagtcattg 1080gggagcccat gccaacaatc cactggcaga agaaccaaca agacctgact ccaatcccag 1140gtgactcccg agtggtggtc ttgccctctg gagcattgca gatcagccga ctccaaccgg 1200gggacattgg aatttaccga tgctcagctc gaaatccagc cagctcaaga acaggaaatg 1260aagcagaagt cagaatttta tcagatccag gactgcatag acagctgtat tttctgcaaa 1320
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CtgCCagCagCagtaCatttCtggaaagaggatataatatgCaatCttCt
權(quán)利要求
一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒在制備檢測(cè)胃癌或胰腺癌疾病藥物中的應(yīng)用，所述的試劑盒包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所 示的RNA序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非 放射性標(biāo)記物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的放射性核素選自3H、35S、125I或32P 中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的非放射性標(biāo)記物選自生物素、地高 辛、堿性磷酸酶、辣根過(guò)氧化酶或熒光素中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的非放射性標(biāo)記物優(yōu)選自地高辛。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的試劑盒還包括增效劑，所述的 增效劑是堿性磷酸酶抗體。
8.—種DCC基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物，其特征在于，所述的 雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示，所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。
9.一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟a、將權(quán)利要求8所述試劑盒中的雜交探針與底物中待測(cè)RNA接觸，形成雜交復(fù)合體；b、檢測(cè)a步驟得到的雜交復(fù)合體。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測(cè)方法，其特征在于a步驟中形成雜交復(fù)合體的條件為 核酸雜交的溫度為42°C ；核酸雜交的時(shí)間為16-24小時(shí)，所述的底物選用血液細(xì)胞標(biāo)本或 組織細(xì)胞標(biāo)本。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種DCC基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明還提供了一種DCC基因原位雜交檢測(cè)方法。另外，本發(fā)明還提供了試劑盒在制備檢測(cè)胃癌或胰腺癌疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。本發(fā)明的檢測(cè)方法操作方便、簡(jiǎn)單，能在區(qū)級(jí)以上醫(yī)院普遍使用和推廣。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK101988113SQ20091005610
公開(kāi)日2011年3月23日 申請(qǐng)日期2009年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月7日 公開(kāi)號(hào)200910056103.9
發(fā)明者張?jiān)聘? 裘建英 申請(qǐng)人:芮屈生物技術(shù)(上海)有限公司