專利名稱：一種鑒別羅氏沼蝦前無節(jié)幼體期胚胎發(fā)育質(zhì)量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及到一種鑒別羅氏沼蝦胚胎發(fā)育質(zhì)量的方 法。
背景技術(shù)：
在生產(chǎn)實踐中，水生生物胚胎發(fā)育質(zhì)量的好壞直接影響?zhàn)B殖生產(chǎn)效益的高低，因 此，客觀準確評價水生生物胚胎發(fā)育質(zhì)量的好壞具有非常重要的理論意義與應(yīng)用價值。在 評價水生生物胚胎發(fā)育質(zhì)量的好壞時，目前主要有以下幾種方法一、利用顯微鏡直接觀察 在不同發(fā)育時期水生生物胚胎的發(fā)育情況，這種方法需要不間斷地取樣進行拍照觀察；二、 通過體外培養(yǎng)的方法，統(tǒng)計最后的孵化率、出膜率和成活率等，這種方法受外界環(huán)境因子較 多，且隨著不同魚類的早期發(fā)育時間的長短試驗周期會有較大變化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問題是提供一種準確判別羅氏沼蝦前無節(jié)幼體期胚胎發(fā)育質(zhì) 量的方法。本發(fā)明配備試劑盒、紫外分光光度計，其特征是在羅氏沼蝦的繁殖季節(jié)，收集一 定數(shù)量的抱卵蝦，分批采集前無節(jié)幼體期的胚胎，這個時期胚胎的發(fā)育特征如下胚區(qū)似 橋細胞群相繼形成三對附肢原基，包括兩對觸角原基和一對大顎原基，位于各附肢原基的 內(nèi)側(cè)形成神經(jīng)節(jié)原基；用這個時期的胚胎制備組織勻漿，用試劑盒分別測定不同批次胚胎 中總ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶的活性，如果胚胎中總ATP酶的活性高 于1. 322士0. 162U/mgprot，肌酸激酶的活性高于0. 404士0. 015U/mgprot，琥珀酸脫氫酶的 活性高于2. 067士0. 139U/mgprot，乳酸脫氫酶的活性高于352. 225士23. 214U/gprot，為 胚胎質(zhì)量較好；如果胚胎中ATP酶的活性介于0. 087士0. 003U/mgprot和1. 322士0. 162U/ mgprot 之間，肌酸激酶的活性介于 0. 010士0. 002U/mgprot 和 0. 404士0. 015U/mgprot 之 間，琥珀酸脫氫酶的活性介于0. 552士0. 138U/mgprot和2. 067士0. 139U/mgprot之間，乳 酸脫氫酶的活性介于5. 890士0. 658U/gprot和352. 225士23. 214U/gprot之間，為胚胎發(fā) 育質(zhì)量一般；如果胚胎中ATP酶的活性低于0. 087士0. 003U/mgprot，肌酸激酶的活性低于 0. 010士0. 002U/mgprot，琥珀酸脫氫酶的活性低于0. 552士0. 138U/mgprot，乳酸脫氫酶的 活性低于5. 890士0. 658U/gprot，則為胚胎發(fā)育質(zhì)量差。本發(fā)明通過測試胚胎發(fā)育中幾種重要酶活性的高低，結(jié)合本方法提供的區(qū)分胚胎 發(fā)育質(zhì)量的鑒別數(shù)據(jù)來判別胚胎發(fā)育質(zhì)量的好壞，與常用方法相比，減少了通過人為觀察 判斷的主觀因素，并可同時檢測不同批次數(shù)量大的樣本，檢測時間短，具有鑒別準確和客觀 的顯著效果，鑒別準確率可達到98%以上。利用本方法鑒別出的胚胎，質(zhì)量好的胚胎出膜率 可達到90%以上，質(zhì)量一般的胚胎出膜率只有60%左右，質(zhì)量差的胚胎基本不能正常孵化 出膜。本發(fā)明所用儀器設(shè)備簡單，只需一臺普通的分光光度計，成本低廉。
具體實施例方式在羅氏沼蝦的繁殖季節(jié)，購買一定數(shù)量的抱卵蝦，每批次取5尾前無節(jié)幼體期的 胚胎，超聲波離心后制備成10%的組織勻漿，用試劑盒(南京建成生物工程研究所出品的 試劑盒)在分光光度計下分別測定不同批次前無節(jié)幼體期胚胎中總ATP酶、肌酸激酶(CK)、 琥珀酸脫氫酶(SDH)和乳酸脫氫酶(LDH)的活性，每個樣重復三次，結(jié)果取平均值，運用統(tǒng) 計軟件對結(jié)果進行分析處理。如果胚胎中總ATP酶的活性高于1. 322士0. 162U/mgprot, CK 的活性高于 0. 404士0. 015U/mgprot, SDH 的活性高于 2. 067 士0. 139U/mgprot, LDH 的活 性高于352. 225士23. 214U/gprot，判斷為胚胎質(zhì)量較好；如果胚胎中總ATP酶的活性介于 0. 087士0. 003U/mgprot 和 1. 322士0. 162U/mgprot 之間，CK 的活性介于 0. 010士0. 002U/ mgprot 和 0. 404 士 0. 015U/mgprot 之間，SDH 的活性介于 0. 552 士 0. 138U/mgprot 和 2. 067士0. 139U/mgprot 之間，LDH 的活性介于 5. 890士0. 658U/gprot 和 352. 225士23. 214U/ gprot之間，則判斷為胚胎發(fā)育質(zhì)量一般；如果胚胎中總ATP酶的活性低于0. 087士0. 003U/ mgprot, CK 的活性低于 0. 010士0. 002U/mgprot, SDH 的活性低于 0. 552士0. 138U/mgprot, LDH的活性低于5. 890士0. 658U/gpr0t，則判斷為胚胎發(fā)育質(zhì)量差。運用這種方法鑒別羅氏沼蝦前無節(jié)幼體期胚胎質(zhì)量較為準確和客觀，鑒別準確率 可達到98%以上。
權(quán)利要求
一種鑒別羅氏沼蝦前無節(jié)幼體期胚胎發(fā)育質(zhì)量的方法，配備試劑盒、紫外分光光度計，其特征是在羅氏沼蝦的繁殖季節(jié)，收集一定數(shù)量的抱卵蝦，分批采集前無節(jié)幼體期的胚胎，用這個時期的胚胎制備組織勻漿，用試劑盒分別測定不同批次胚胎中總ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶的活性，如果胚胎中總ATP酶的活性高于1.322±0.162U/mgprot，肌酸激酶的活性高于0.404±0.015U/mgprot，琥珀酸脫氫酶的活性高于2.067±0.139U/mgprot，乳酸脫氫酶的活性高于352.225±23.214U/gprot，為胚胎質(zhì)量較好；如果胚胎中ATP酶的活性介于0.087±0.003U/mgprot和1.322±0.162U/mgprot之間，肌酸激酶的活性介于0.010±0.002U/mgprot和0.404±0.015U/mgprot之間，琥珀酸脫氫酶的活性介于0.552±0.138U/mgprot和2.067±0.139U/mgprot之間，乳酸脫氫酶的活性介于5.890±0.658U/gprot和352.225±23.214U/gprot之間，為胚胎發(fā)育質(zhì)量一般；如果胚胎中ATP酶的活性低于0.087±0.003U/mgprot，肌酸激酶的活性低于0.010±0.002U/mgprot，琥珀酸脫氫酶的活性低于0.552±0.138U/mgprot，乳酸脫氫酶的活性低于5.890±0.658U/gprot，則為胚胎發(fā)育質(zhì)量差。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒別羅氏沼蝦前無節(jié)幼體期胚胎發(fā)育質(zhì)量的方法，其特 征是分批采集是每批次取5尾同一發(fā)育時期抱卵蝦的胚胎。
全文摘要
一種鑒別羅氏沼蝦前無節(jié)幼體期胚胎發(fā)育質(zhì)量的方法，涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，需要提供一種準確判別羅氏沼蝦胚胎發(fā)育質(zhì)量的方法，本發(fā)明配備試劑盒、紫外分光光度計，其特征是將收集抱卵蝦分批采集同一發(fā)育時期的胚胎，制備組織勻漿，用試劑盒分別測定不同批次胚胎中總ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶的活性來區(qū)分胚胎質(zhì)量的好壞。本發(fā)明用于鑒別羅氏沼蝦前無節(jié)幼體期胚胎發(fā)育質(zhì)量。
文檔編號C12Q1/50GK101839855SQ20091004765
公開日2010年9月22日 申請日期2009年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月16日
發(fā)明者馮廣朋, 劉鑒毅, 姚志峰, 莊平, 張濤, 江琪, 章龍珍, 趙峰, 閆文罡, 黃曉榮 申請人:中國水產(chǎn)科學研究院東海水產(chǎn)研究所