專利名稱：一種防治水稻細菌性病害的蛭弧菌及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域，特別涉及一種防治水稻細菌性病害的蛭弧菌及 其應用。
背景技術：
農作物細菌性病害是世界性常發(fā)流行性病害，其中很多細菌性病害被列為 植物檢疫性病害，其危害程度比真菌性病害更加嚴重和難以防治。隨著全球氣 候異常和局部變暖，臺風、暴雨和熱氣流逐年發(fā)生，為細菌性病害的加重發(fā)生 創(chuàng)造了外部的氣候條件。隨著耕地減少而導致復種指數在提高和復種面積在增 加，大量的耕地無法得到休耕和輪作，土壤中累積的病原菌和病原菌基數逐步 增加。
水稻細菌性病害是水稻生長過程中主要的一類病害，而其中以水稻白葉枯 病、水稻細菌性條斑病危害最嚴重。目前水稻細菌性病害的防治仍以化學防治 為主，能夠有效防治水稻細菌病害的殺菌劑品種還比較缺乏，且防治藥劑活性 低。而且，由于長期使用導致很多病原菌已產生了非常嚴重的抗藥性，導致藥 效非常差。有些制劑雖不產生抗藥性，但是藥效極其不穩(wěn)定，經常出現防治效 果不理想的狀況。同時農用抗生素在環(huán)境中的殘留和在食物鏈的傳遞中逐步累 積，引起人體疾病的病原菌對抗生素藥物產生抗藥性。
生物農藥一般是指用生物活體或其代謝產物防治病蟲害的藥劑，與化學農 藥相比生物農藥具有以下優(yōu)點無殘留、無公害、不污染環(huán)境、特性強即專一 性作用于靶標有害生物，生物農藥具有化學農藥不可比擬的優(yōu)點。
具有寄生特性的蛭弧菌是一種近年來研究的用于消除環(huán)境病原菌的有效工 具，它以細菌為宿主，能夠裂解消除病原菌，且裂解譜廣泛，定植能力強，繁 殖快，利用它作為環(huán)境中的天然生物改良劑和"活性抗生素"，在防治農作物細 菌性病害中具有廣闊的發(fā)展前景。到目前為止，已經開發(fā)出蛭弧菌應用于水產 養(yǎng)殖中病原菌消除的產品，但尚未見蛭弧菌用于防治農作物細菌性病害的有效 方法。

發(fā)明內容
為了克服現有技術中針對農作物細菌性病害特別是水稻細菌性病害沒有較高防效的生防菌株制劑現狀的不足之處，本發(fā)明的首要目的在于提供一種防治水稻細菌性病害的蛭弧菌。
本發(fā)明的另一 目的在于提供所述蛭弧菌的應用。
本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現 一種防治水稻細菌性病害的蛭弧菌，名稱為蛭弧菌(^fe〃ov/6n'o sp,) BDFM05,于2009年8月7日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M 209172;
對所述蛭弧菌BDFM05進行負染后于電子顯微鏡下形態(tài)觀察(見圖1):BDFM05呈單細胞，橢圓形，大小為1.43x0.53pm，端生鞭毛，鞭毛長度至少2nm;所述蛭弧菌BDFM05以雙層平板法于28。C培養(yǎng)三天可形成直徑2 3mm的透明圓形噬菌斑；
所述蛭弧菌BDFM05最適pH值為7.0、最適鹽度為0.2%、最適溫度為28'C;
所述蛭弧菌BDFM05是由野生型蛭弧菌BDS02經紫外誘變得到；
所述蛭弧菌BDS02自泥樣中分離得到，于2009年8月7日保藏于中國武漢市武漢大學內的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M209170;對其進行負染后于電子顯微鏡下形態(tài)觀察可見BDS02呈單細胞，弧形，大小為0.65x0.2nm，端生鞭毛，鞭毛長度至少1.8^im;將其以雙層平板法于28°C培養(yǎng)四天可形成直徑l-2mm的透明圓形噬菌斑；
所述紫外誘變依據申請?zhí)?2008100220488.3"，名稱為"紫外誘導突變在增強蛭弧菌裂解性能中的應用"的國家發(fā)明專利申請中的方法進行；
蛭弧菌BDFM05的16S-ITS rDNA序列如下(如序列表SEQ ID: No.l所示)TTTTAAGCTACAAAGGGCTTACGGTGGATGCCCTGGCAGTCA
一種防治水稻細菌性病害的微生物菌劑，含有所述的蛭弧菌BDFM05; 所述微生物菌劑還含有寡糖；
所述微生物菌劑優(yōu)選每升溶液中含106 1012pfU (plaque-forming units ，噬 菌斑形成單位)的蛭弧菌和10 30g寡糖；
所述寡糖優(yōu)選為殼寡糖或瓊膠寡糖中的一種或兩種；
所述防治水稻細菌性病害的菌劑的制備方法，包括以下步驟將蛭弧菌菌 液的濃度調整為106 1012pfU/L后加入寡糖，寡糖的加入量為10 30g/L, 混勻，得到防治農作物細菌性病害的菌劑；
所述蛭弧菌菌液為蛭弧菌蛭質體菌液或蛭弧菌游泳體菌液中的至少一種；所述蛭弧菌菌液優(yōu)選為蛭弧菌蛭質體菌液和蛭弧菌游泳體菌液按細菌數
1:1混合；
所述的蛭弧菌蛭質體為蛭弧菌存在于宿主菌內的狀態(tài)；所述的蛭弧菌游泳體為蛭弧菌游離在宿主菌外部的狀態(tài)；所述的蛭弧菌蛭質體菌液優(yōu)選通過以下方法制備接種嗜水氣單胞菌/^&0/7/ 7"，購于廣東省微生物所菌種保藏中心，編號GIMU72)于LB (Luria-Bertani)液體培養(yǎng)基中，26 30。C培養(yǎng)20h，培養(yǎng)液經5000 8000rpm離心10 20min后，沉淀加入至DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDFM05， 28。C培養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液經6000 8000卬m離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清，沉淀用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0.2md/ L pH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到蛭弧菌蛭質體菌液；
所述蛭弧菌游泳體菌液的制備方法為將蛭弧菌蛭質體制備方法中的含蛭弧菌游泳體的上清經16000 18000rpm離心15 20min后，沉淀用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0.2mol/LpH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到蛭弧菌游泳體菌液；
所述寡糖優(yōu)選為殼寡糖或瓊膠寡糖中的一種或兩種；
所述防治農作物細菌性病害的菌劑的應用，是將所述菌劑噴灑植株的莖、葉或穗。
本發(fā)明的原理本發(fā)明利用蛭弧菌以細菌為宿主，能夠裂解消除病原菌，且裂解譜廣泛，定植能力強，繁殖快、寡糖能夠與農作物植株信號轉導分子結合，是植物獲得性抗病誘導劑，使植株獲得系統(tǒng)、長久、廣譜的抗性的特點，在使用蛭弧菌消除病原菌的同時，添加能夠提高農作物獲得性抗性的寡糖，使防效更加穩(wěn)定持久，解決了過去采用抗菌素防治細菌性病害帶來的藥殘及抗性等問題。
本發(fā)明相對于現有技術具有如下的優(yōu)點及效果
1.本發(fā)明首次將蛭弧菌BDFM05應用于水稻細菌性病害的防治，填補國內外蛭弧菌研究開發(fā)的空白，增加了生物農藥的新種類。蛭弧菌具有裂解譜廣，生長迅速的特點，對多種細菌病原菌具有優(yōu)異的消滅能力。寡糖與之聯用后，增強水稻抗性，藥效大幅提高，從而高效防治水稻細菌性病害。試驗表明，用于防治水稻白葉枯病，施藥21天后防效達到73.9%，優(yōu)于20%噻森銅防效(圖4)。
72.本發(fā)明所制備的制劑無毒，無污染，對農作物病蟲害天敵安全，而且病 原菌基本不對其產生抗性，對人和動物無毒副作用，提高農產品品質和安全性， 符合人民對食品健康綠色的需求和農業(yè)生產可持續(xù)發(fā)展的要求。


圖1是蛭弧菌BDFM05進行負染后于電子顯微鏡下觀察到的形態(tài)圖。 圖2是實施例1制備的防治水稻細菌性病害的微生物菌劑防治水稻細菌性 基腐病效果圖。
圖3是實施例2制備的防治水稻細菌性病害的微生物菌劑防治水稻細菌性 褐斑病效果圖。
圖4是實施例3制備的防治水稻細菌性病害的微生物菌劑防治水稻細菌性 白葉枯病效果圖。
具體實施例方式
下面結合實施例及附圖對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式 不限于此。 實施例1
(1)通過紫外誘變方法得到蛭弧菌BDFM05
出發(fā)菌株為蛭弧菌BDS02， BDS02是本實驗室自泥樣中分離得到的，并于 2009年8月7日保藏于中國武漢市武漢大學內的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保 藏編號為CCTCCNO:M 209170;對其進行負染后于電子顯微鏡下形態(tài)觀察可見 BDS02呈單細胞，弧形，大小為0.65x0.2拜，端生鞭毛，鞭毛長度至少1.8拜；； 將其以雙層平板法于28。C培養(yǎng)四天可形成直徑l-2mm的透明圓形噬菌斑；
將蛭弧菌BDS02依據申請?zhí)?2008100220488.3"，名稱為"紫外誘導突變 在增強蛭弧菌裂解性能中的應用"的國家發(fā)明專利申請中的方法，在紫外燈功 率15W，輔助紅外光源的功率為20W，照射距離為15cm，誘變時間4min的條 件下，六次累加誘變后，篩選得到誘變株BDFM05。
對蛭弧菌BDFM05進行負染后于電子顯微鏡下形態(tài)觀察(見圖1): BDFM05 呈單細胞，橢圓形，大小為1.43x0.53Mm，端生鞭毛，鞭毛長度至少所述 蛭弧菌(^^//0討^/0 sp.)BDFM05以雙層平板法于28'C培養(yǎng)三天可形成直徑2 3mm的透明圓形噬菌斑；
蛭弧菌BDFM05于2009年8月7日在位于中國武漢市武漢大學內的中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCCNO: M 209172。
相對于野生株BDS02，誘變株BDFM05可以裂解更多的革蘭氏陰性和陽性菌，其中包括嗜水氣單胞菌Ueramowas/^Jrap/w'/^GIM 1.172)、大腸桿菌(五.co//, GIM 1.137)、歐文氏菌(五rw/m'asp.,CGMCC 1.1215)、沙門氏菌(5^/膨we〃a sp., GIM 1.244)、李斯特菌(丄&fer/a膨騰,ge腦，GIM 1.298)、金黃色葡萄球菌(S啤/^/ococcw51 awm/s， GIM 1.143 )、停孚L鏈球菌(5^ptococc"s咖ga/ac"'ae， ATCC35666)、 密執(zhí)安棍狀桿菌(C7av/6ac/er脂'c/z/ga"ew喊CGMCC 1.1909)、谷氣酸棒桿菌(Coo^ekzcter/Mwg/"to m'c"附，GIM 1.297)、珊瑚色諾卡氏菌(M cwy^ cora〃/we, GIM 4.78)和生孢梭菌(C/oWnV//wm，ragewes， ATCC11437)等。
(2) 防治農作物細菌性病害的菌劑的制備
接種嗜水氣單胞菌"eramo"w /^&op/n7a，購于廣東省微生物所菌種保藏中心，編號GIM1.172)于LB液體培養(yǎng)基中，28t培養(yǎng)20h，培養(yǎng)液經6000rpm，15min離心濃縮后，將沉淀加入至DNB液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg， NaCl 30g，溶于1000mL蒸餾水中，pH值為7.2 7.6)中，接入蛭弧菌BDFM05， 28。C培養(yǎng)36h，培養(yǎng)液經6000rpm， 15min離心后，去除含蛭弧菌游泳體的上清，沉淀用適量DNB液體培養(yǎng)基懸浮，制成濃度為106pfii / L的蛭弧菌蛭質體菌液。
在所得的蛭弧菌蛭質體菌液中加入殼寡糖使之濃度為15g/L，混勻，得到
防治水稻細菌性病害的菌劑。
(3) 將菌劑用于防治水稻細菌性基腐病試驗田位于廣州市天河區(qū)岑村水稻田，肥力中等，試驗所用水稻品種為晚
稻協(xié)優(yōu)85。水稻處于拔節(jié)期，試驗田塊為常發(fā)病田塊。試驗期間日平均氣溫22.1 29.5°C，相對濕度90 95%。隨機選擇小區(qū)，每個小區(qū)2m2，每小區(qū)種植水稻20穴。清水設三個小區(qū)，作為空白對照，對照藥劑為20%噻森銅稀釋500倍液。
在基腐病發(fā)病初期，即水稻近土表莖基部或葉鞘上產生水浸狀橢圓形零星斑時按小區(qū)施用實施例1中制備的防治水稻細菌性病害的制劑，用量為200mL/m2，使用手壓噴霧器噴霧莖葉，重復2個小區(qū)。以后每隔10d噴灑l次，連續(xù)3次。第3次施藥后第21d査防治效果。
防效檢査時均采用五點取樣，每個取樣點選取2株水稻，每株選取旗葉及旗葉以下兩片葉，參照農藥田間藥效試驗準則進行試驗調査和計算防效。
9試驗顯示，使用蛭弧菌防治水稻細菌性病害效果顯著，施用蛭弧菌-寡糖菌
劑后僅在第一天出現少量病斑，2d后，病情不再擴大，病情得到控制，以后病 害幾乎不再發(fā)展。蛭弧菌BDFM05與寡糖聯用所制得的制劑防效均優(yōu)于20%噻 森銅稀釋500倍液的防效，防治效果如圖2所示。用菌劑處理后的水稻不見藥 害產生，植株挺拔健壯，葉子舒展，長勢良好，生長狀況優(yōu)于噴灑20%噻森銅 500倍液。
實施例2
(1) 防治農作物細菌性病害的菌劑的制備
接種嗜水氣單胞菌(^eramow^ /^&o/7/w7a，購于廣東省微生物所菌種保藏 中心，編號GIM1.172)于LB液體培養(yǎng)基中，26。C培養(yǎng)20h，培養(yǎng)液經7000rpm， 10min離心濃縮后，將沉淀加入至DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDFM05， 28。C培養(yǎng)40h，培養(yǎng)液經8000rpm， 18min離心后，取上清液再經16000rpm, 20min離心后，沉淀用適量生理鹽水懸浮，制成濃度為10Spfii/L的蛭弧菌游泳 體菌液。
在所得的蛭弧菌游泳體菌液中加入瓊膠寡糖使之濃度為20g/L,混勻，得 到防治水稻細菌性病害的制劑。
(2) 將菌劑用于防治水稻細菌性褐斑病 試驗田位于廣州市天河區(qū)岑村水稻田，肥力中等，試驗所用水稻品種為晚
稻協(xié)優(yōu)85。水稻處于拔節(jié)期，試驗田塊為常發(fā)病田塊。試驗期間日平均氣溫 22.1 29.5°C，相對濕度90 95%。隨機選擇小區(qū)，每個小區(qū)2m2，每小區(qū)種植 水稻20穴。清水設三個小區(qū)，作為空白對照，對照藥劑為20%噻森銅稀釋500 倍液。
在褐斑病發(fā)病初期，即稻田出現褐色水浸狀零星小斑時按小區(qū)施用實施例 2中制備的防治水稻細菌性病害的制劑，用量為180mL/m2，使用手壓噴霧器 噴霧莖葉，葉面和葉背都均勻噴到，重復2個小區(qū)。以后每隔10d噴灑1次，連 續(xù)3次。第3次施藥后第21d査防治效果。
防效檢查時均采用五點取樣，每個取樣點選取2株水稻，每株選取旗葉及旗 葉以下兩片葉，參照農業(yè)部農藥檢定所，參照農藥田間藥效試驗準則進行試驗 調查和計算防效。
試驗顯示，使用蛭弧菌防治水稻細菌性病害效果顯著，施用蛭弧菌-寡糖菌 劑后僅在第一天出現少量病斑，2d后，病情不再擴大，病情得到控制，以后病害幾乎不再發(fā)展。蛭弧菌BDFM05與寡糖聯用所制得的制劑防效均優(yōu)于20%噻森銅稀釋500倍液的防效，防治效果如圖3所示。用菌劑處理后的水稻不見藥害產生，植株挺拔健壯，葉子舒展，長勢良好，生長狀況優(yōu)于噴灑20%噻森銅500倍液。
實施例3
(1) 防治農作物細菌性病害的菌劑的制備
接種嗜水氣單胞菌(^eramowm /z^ro;^7a，購于廣東省微生物所菌種保藏中心，編號GIM1.172)于LB液體培養(yǎng)基中，30。C培養(yǎng)20h，培養(yǎng)液經5000rpm，20min離心濃縮后，加入至磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L， pH7.2 7.6)中，接入蛭弧菌BDFM05， 28。C培養(yǎng)42h，培養(yǎng)液即為蛭質體、游泳體混合菌液，經檢測其中蛭質體與游泳體濃度比為1:1，菌液濃度為101QpfU/L。
在所得菌液中加入殼寡糖、瓊膠寡糖使之濃度分別為15g/L，混勻，得到防治水稻細菌性病害的制劑。
(2) 將菌劑用于防治水稻細菌性白葉枯病試驗田位于廣州市天河區(qū)寧村水稻田，肥力中等，試驗所用水稻品種為晚
稻協(xié)優(yōu)85。水稻處于拔節(jié)期，試驗田塊為常發(fā)病田塊。試驗期間日平均氣溫22.1 29.5°C，相對濕度90 95%。隨機選擇小區(qū)，每個小區(qū)2m2，每小區(qū)種植水稻20穴。清水設三個小區(qū)，作為空白對照，對照藥劑為20%噻森銅稀釋500倍液。
在白葉枯病發(fā)病初期，即稻田出現暗綠色水浸狀線狀零星斑時按小區(qū)施用實施例3中制備的防治水稻細菌性病害的制劑，用量為250mL/m2，使用手壓噴霧器噴霧莖葉，葉面和葉背都均勻噴到，重復2個小區(qū)。以后每隔10d噴灑l次，連續(xù)3次。第3次施藥后第21d査防治效果。
防效檢査時均采用五點取樣，每個取樣點選取2株水稻，每株選取旗葉及旗葉以下兩片葉，參照農業(yè)部農藥檢定所，參照農藥田間藥效試驗準則進行試驗調査和計算防效。
試驗顯示，使用蛭弧菌防治水稻細菌性病害效果顯著，施用蛭弧菌-寡糖菌劑后僅在第一天出現少量病斑，2d后，病情不再擴大，病情得到控制，以后病害幾乎不再發(fā)展。蛭弧菌BDFM05與寡糖聯用所制得的制劑防效均優(yōu)于20%噻森銅稀釋500倍液的防效，防治效果如圖4所示。用菌劑處理后的水稻不見藥害產生，植株挺拔健壯，葉子舒展，長勢良好，生長狀況優(yōu)于噴灑20%噻森銅500倍液。實施例4
防治農作物細菌性病害的菌劑的制備，具體過程如下
接種嗜水氣單胞菌(J^omo"oy/^dra/^7"，購于廣東省微生物所菌種保藏中心，編號GIM1.172)于LB液體培養(yǎng)基中，28。C培養(yǎng)20h，培養(yǎng)液經5000rpm,20min離心濃縮后，加入至無菌的DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDFM05，28。C培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液即為蛭質體、游泳體混合菌液，經檢測其中蛭質體與游泳體濃度比為3:2，菌液濃度為10"pfb / L。
在所得菌液中加入殼寡糖、瓊膠寡糖使之濃度分別為10g/L， 20g/L，混勻，得到防治水稻細菌性病害的制劑。
上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內。SEQUENCE LISTING
〈110〉華南理工大學
〈120〉 一種防治水稻細菌性病害的蛭弧菌及其應用 <130〉 6 〈160〉 1
〈170〉 Patentln version 3.2 〈210〉 1 〈211> 1835 〈212〉 DNA
〈213〉 蛭弧菌(Bdellovibrio sp.) 〈400〉 1
caggcctaac acatgcaagt cg犯cggggt
60
agc犯taxxt sgtggcgcac gggtgagtaa
cgcgtggata a/tctgccttg gagtggggga taactagtcg a犯gattagc taataccgca 120
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3gaggatgat cagtcacact ggaactgaga cacggtccag actcctacgg gaggcagcag 300
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caaccctgga agtgcatttg atactgcgaa gcttgagtgt cggagaggtt actagaattg 600
ttggtgtagt ggtgaaatac gtagatatca acagg3atac cggaggcg犯ggcgggt犯c GG0
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attgacgggg gcccgcac犯gcggtggagc atgtggttta attcgatgca acgcgaagaa 900
ccttacctag gcttgacatg tactggaaga ttggcagaaa tgtcgtcgcc cgcaagggtc 960
ggtacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc 1020gcaacgagcg caacccctgc gccggtgtta犯ccggagga gggctetcaca cgtgctac犯 atcgcttaaa agctatctaa atcgctagta atcgcggaac cgcccgtcac accatgaaag aggcgcccaa ggtatggtcg cctgcggctg gatcacctcc cttgataetgt taaaatgacc caetaaatcta tctagctgtt ttggttetcag cacacgcttg caagttctac tgtactggaa
ttg3C3tttg 33t€lg￡lttg￡l CtaC犯gLggg Ctt6LCggtgg
atttagttgc cagcattcag ttcggcactc tagatggact 1080
aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc cttatgccta 1140
tggtagtcac agagcgaagc t犯gccgcga ggtagagcaa 1200
gttcagattg atctctgcaa ctcgagatca tgaagttgga 1260
agaatgccgc ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac 1320
tcggctgtac cagaagtcgc tgcgctaacc gtaaggaggc 1380
atgattgggg tgaagtcgta acaaggg鄉(xiāng)cgt郷ggaa 1440
tttctaaggt ttatccggtc aatcttcatc aagacttgtt 1500
caatcttagg tcaacttact cttcccgagt aagtgagtcc 1560
tagttttgag agagtgaagc ct犯cgggcc tgtagctcag 1620
ataagcgtgg ggtcggaagt tcgagtcttc ccaggcccac 1680
tgcggtgtaa gttagagttt tgctgaacgg ttttcgttct 1740
tttagttgat ttttagcgag gttagttcca ttcttttaag 1800
atgccctggc agtca 1835
1權利要求
1、一種防治農作物細菌性病害的蛭弧菌，其特征在于所述蛭弧菌菌株為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，于2009年8月7日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NOM 209172。
2、 一種防治農作物細菌性病害的菌劑，其特征在于所述菌劑含有 權利要求1所述的防治農作物細菌性病害的蛭弧菌BDFM05。
3、 根據權利要求2所述的菌劑，其特征在于所述菌劑含有寡糖。
4、 根據權利要求3所述的菌劑，其特征在于每升所述菌劑中含106 1012pfii的蛭弧菌和10 30g寡糖。
5、 根據權利要求3所述的菌劑，其特征在于所述寡糖為殼寡糖或 瓊膠寡糖中的一種或兩種。
6、 權利要求4或5所述防治農作物細菌性病害的菌劑的制備方法， 其特征在于將蛭弧菌調整為濃度106 1012pfU/L的蛭弧菌菌液后加入 寡糖，寡糖的加入量為10 30g/L，混勻，得到防治農作物細菌性病害的 菌劑。
7、 根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于所述蛭弧菌菌液 為蛭弧菌蛭質體菌液或蛭弧菌游泳體菌液中的一種或兩種。
8、 根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于所述蛭弧菌菌液 為蛭弧菌蛭質體菌液和蛭弧菌游泳體菌液按細菌數1:1混合。
9、 根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于所述的蛭弧菌蛭 質體菌液通過以下方法制備接種嗜水氣單胞菌"erawo"as; >^rap/n7a) 于LB液體培養(yǎng)基中，26 30。C培養(yǎng)20h，培養(yǎng)液經5000 8000rpm離心 10 20min后，沉淀加入至DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDFM05， 28。C培養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液經6000 8000rpm離心15 20min后，去除含 蛭弧菌游泳體的上清，沉淀用溶液懸浮，得到蛭弧菌蛭質體菌液；所述蛭弧菌游泳體菌液的制備是將含蛭弧菌游泳體的上清于經 16000 18000rpm離心15 20min后，沉淀用溶液懸浮，得到蛭弧菌游泳體菌液；所述溶液為DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0.2 mol/LpH值為 7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液。
10、 權利要求2 5任一項所述菌劑的應用，其特征在于將所述菌劑噴灑植株的莖、葉或穗。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種防治農作物細菌性病害的蛭弧菌及其應用。本發(fā)明通過分離、紫外誘變得到蛭弧菌BDFM05。將蛭弧菌BDFM05與寡糖聯用，得到防治農作物細菌性病害的菌劑。本發(fā)明首次將蛭弧菌BDFM05用于防治農作物細菌性病害。利用此蛭弧菌制備的菌劑對水稻的防治農作物細菌性病害的效果優(yōu)于常用的噻森銅，而且無毒，無污染，對農作物病蟲害天敵安全，不產生病原菌抗性，對人和動物無毒副作用，提高農產品品質和安全性，符合人民對食品健康綠色的需求和農業(yè)生產可持續(xù)發(fā)展的要求。
文檔編號C12N1/20GK101638629SQ20091004227
公開日2010年2月3日 申請日期2009年8月28日 優(yōu)先權日2009年8月28日
發(fā)明者蔡俊鵬, 韓曉寧 申請人:華南理工大學