專利名稱：：發(fā)酵方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及將源自植物的材料發(fā)酵成期望的發(fā)酵產(chǎn)物的方法。本發(fā)明還涉及用于發(fā)酵方法中的消泡體系(antifoamingsystem)。
背景技術：
：如今在發(fā)酵方法中生產(chǎn)大量難以用合成方法生產(chǎn)的商業(yè)產(chǎn)品。在這些方法中，可能形成大量泡沫。泡沫使每單位發(fā)酵罐體積的發(fā)酵能力降低，并且可能引起發(fā)酵液從發(fā)酵罐溢出。因此需要克服這樣的問題。所以本發(fā)明的目的是提供一種適用于發(fā)酵方法的消泡體系。
發(fā)明內(nèi)容考慮到前述情況，本發(fā)明人已經(jīng)進行了廣泛的研究。結果，發(fā)現(xiàn)可以通過將脂肪分解酶與金屬鹽組合應用來獲得用于發(fā)酵過程的消泡體系，所述消泡體系有卓越的泡沫破壞效果和/或泡沫抑制效果，并且/或者對發(fā)酵生產(chǎn)沒有負面影響。因此本發(fā)明在第一方面提供產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，所述方法包括使發(fā)酵培養(yǎng)基接觸發(fā)酵生物、脂肪分解酶和金屬鹽。在第二方面，本發(fā)明提供適合作為消泡體系使用的組合物，所述組合物包含脂肪分解酶和金屬鹽。在第三方面，本發(fā)明提供這樣的組合物在發(fā)酵方法中的用途，例如，在用于產(chǎn)生乙醇的方法中的用途。根據(jù)本發(fā)明，脂肪分解酶優(yōu)選選自下組磷脂酶、溶血磷脂酶和脂肪酶。優(yōu)選地，所述金屬鹽選自下組CaCl2、CaC03、Ca(OH)2、NaCl和KC1。發(fā)明詳述用于發(fā)酵的本發(fā)明的消泡體系可以應用于多種物質(zhì)的發(fā)酵。包括在厭氧以及需氧發(fā)酵中的應用。其可以合適地應用于例如氨基酸、羧酸、酶、抗生素、醇等的發(fā)酵。優(yōu)選的氨基酸的實例包括谷氨酸、天冬氨酸、瓜氨酸、組氨酸、谷氨酰胺、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸。消泡體系尤其適用于谷氨酸和賴氨酸的發(fā)酵。優(yōu)選的羧酸的實例包括檸檬酸、乙酸、丙酸、乳酸、延胡索酸、酒石酸、衣康酸、a-酮戊二酸、抗壞血酸、葡糖酸、蘋果酸和曲酸。優(yōu)選的酶的實例包括a-淀粉酶、J3-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶、果膠酶和葡糖淀粉酶。優(yōu)選的抗生素的實例包括P-內(nèi)酰胺類抗生素如青霉素，氨基葡糖苷類抗生素如卡那霉素，氯霉素類抗生素，四環(huán)素類抗生素如金霉素，大環(huán)內(nèi)酯類抗生素如紅霉素，肽類抗生素如短桿菌肽S，抗細菌抗生素如蜜斥計霉素、新生霉素和林可霉素，抗肺瘤抗生素如放線菌素D和色霉素A3，和抗真菌抗生素如阿扎霉素。優(yōu)選的醇的實例包括乙醇、甲醇和丁醇。盡管對于能夠應用本發(fā)明消泡體系的發(fā)酵方法沒有施加特定的限制，但是本發(fā)明可以合適地應用于形成大量泡沫的通氣培養(yǎng)(aeratedculture)、旋動培養(yǎng)(spinnerculture)、振蕩培養(yǎng)(shakingculture)等。優(yōu)選地，所述發(fā)酵方法是用于產(chǎn)生乙醇的方法，并且所述方法優(yōu)選包括使用酵母進行的發(fā)酵。"發(fā)酵培養(yǎng)基"是指進行發(fā)酵的環(huán)境，該環(huán)境包括發(fā)酵底物，即，由發(fā)酵微生物進行代謝的糖源?？梢詫Πòl(fā)酵底物和發(fā)酵方法中使用的其它原料的發(fā)酵培養(yǎng)基在發(fā)酵方法進行之前或在發(fā)酵方法進行的同時進行加工，例如，通過研磨、液化和糖化方法或其它期望的方法進行。因此，發(fā)酵培養(yǎng)基可以指添加發(fā)酵微生物之前的培養(yǎng)基，如，液化或糖化過程中的培養(yǎng)基、或從液化或糖化過程產(chǎn)生的培養(yǎng)基，也可以指包含發(fā)酵微生物的培養(yǎng)基，如，在同時糖化和發(fā)酵方法(SSF)中使用的培養(yǎng)基。糖源可以是淀粉，例如，如由谷物顆粒(cerealgrain)所提供的，或者它可以是纖維素生物質(zhì)，例如，如由玉米秸稈或玉米纖維所提供的，或任何其它合適的纖維素物質(zhì)來源。"發(fā)酵微生物"是指任何適用于期望的發(fā)酵方法中的微生物。根據(jù)本發(fā)明的合適的發(fā)酵微生物能夠發(fā)酵，即，將糖(如葡萄糖或麥芽糖)直接或間接地轉化成期望的發(fā)酵產(chǎn)物。發(fā)酵微生物的實例包括真菌生物，如酵母。優(yōu)選的酵母包括酵母屬菌種OS^cc/zramyc^spp.)的菌抹，且特別是釀酒酵母(5"acc/2rawycescerev/Wafe)。商業(yè)上可4尋到的酵母包4舌，例^口，RedStar/LesaffreEthanolRed(可從RedStar/Lesaffre,USA獲得)FALI(可從Fleischmann，sYeast獲得，其為BurnsPhilpFoodInc.,USA的分支才幾構)，SUPERSTART(可從Alltech獲得)，GERTSTRAND(可從GertStrandAB,Sweden獲得)和FERMIOL(可從DSMSpecialties獲得)。脂肪分解酶在本發(fā)明的消泡體系中使用的優(yōu)選脂肪分解酶是磷脂酶(按照EC3.U.4和/或EC3丄1.32分類)、溶血磷脂酶(按照EC3丄1.5分類)和脂肪酶(^安照EC3.1.1.3、EC3.1.1.23和/或EC3.1.1.26分類)。脂肪分解酶優(yōu)選是微生物來源的，特別是細菌、真菌或酵母來源。使用的脂肪分解酶可以源自任何來源，包括，例如，犁頭霉屬(JfoWa)的菌株，特另'J是jfe/d/a6/fl^as/ee"a和傘斗支舉頭審(/ifo/(i/acwym^i/^ra),無色才干菌屬(Jc/zrcwoZ""er)的菌才朱，凈爭另'J是解毒無色^干菌(」c/wtW7oZwc/er/0/7/2flgM力，氣單胞菌屬(y^raw朋oy)的菌株，鏈格孢屬04/^vwn'a)的菌林，特別是蕓薹生鏈格孑包(J/fer"ar/a6row/c/o/")，曲霉屬(^/7^^///"力的菌斗木，凈爭另'J是黑曲霉(^y/6rp7/wjw'ge。和黃曲霉(^p^^'〃^yZav附)，無色桿菌屬的菌抹，特別是解毒無色桿菌，《豆梗霉屬(^weo6aszWMm)的菌才朱，凈爭另ll是出芽4豆梗霉(^w/^o6os7Www/7M〃w/am)、芽孢桿菌屬(Bac/〃w力的菌抹，特別是短小芽孢桿菌(J5a"7/wpwm7us)、嗜熱脂肪芽孑包4干菌(5ac/〃wsWm3ra決em7o//H7us)和枯草芽孑包牙干菌(5ac/〃wssw6/Z/s)、白僵菌屬(&aMvm'a)的菌抹，索絲菌屬(Brac/20/^x)的菌抹，特別是熱殺索絲菌C8rac/zc^rix:Aem7oso/wta)、假絲酵母屬(Ca"&Wa)的菌林，特別是柱狀假絲酵母(Ow^iaqy//Wracea)(皺落假絲酵母(Omc//(^ragosa))、近解脂假絲酵母(Ca"fi/(ia/flra/z)o(v"ca)和南才及*支絲酵母(Ca"c/Zt/a，色才干菌屬(C77ramokcter)的菌才朱，特另'j是粘稠色4干菌(C7ramo6acterv/scosiw),鬼傘屬(Co/n'"w力的菌才朱,4爭另'J是灰蓋鬼傘(Co/r/"wsc/"en'附)，嫌孑包屬(Fw犯n'wm)的菌才朱,對爭另ll是尖鐮孑包(Fwsar/wwaxy5porw附)，腐皮鐮孑包(Fwj"Ww附S苑豆腐皮鐮孑包(Fwsan'Mmso/aw'/&z')和大刀4分纟工鐮孑包CFwsaWww/-asewmcw/moram),i也霉屬(Geo的'cmw)的菌抹，特別是帚狀地霉(GeoWraw/em."7/afwm)，漢遜酵母屬(//arae"w/a)的菌4朱，特別是異常漢遜酵母(//<3""""/"a"oma/"),腐質(zhì)霉屬(//m/w'co/")的菌才朱，凈爭另'J是-豆孑包腐質(zhì)霉(i/;w/w'co/fl6rev/5/ora)、//wm/co/flZ)廠ev/svar.thermoidea和特異腐質(zhì)霉(/Z畫/co/"/rao/my),/^7/zog/wa的菌抹,乳桿菌屬(丄acto6"c/〃^)的菌才朱，特別是彎曲乳桿菌(Z"cto6"c7'〃wcwrv"似》，綠僵菌屬(Afetor/n"z/wm)的菌斗朱，毛霉屬(Afwcor)的菌才朱，擬青霉屬(尸ae"7o附y(tǒng)cey)的菌沖朱，青霉屬CPe"〖c說/ww)的菌才朱，凈爭另'J是圓歹瓜青霉(尸e"z'c/〃/wwc少c/o//ww)、皮落青霉(尸em'"'〃/wmdrwWoyww)禾口才廣展青霉(尸e"/c/〃/wwex/a"sww),f支單月包菌屬(/^ez^/cw7owos)的菌才朱,凈爭另l)是4同纟錄々i單月包菌(尸化wdomo/ms1orerag/wwa)、產(chǎn)石咸布i單月包菌(/^eMcfomowosa/ca//gewas)、洋蔥々I單月包菌(/^ewcfowo"awcepac/a)(同物異名洋蔥伯克霍爾德氏菌(syn.Bw狄oWen'ac卬ac/a))、焚光Wi單胞菌(尸seM(ibmo"asy7woresce"s)、莓實，支單月包菌(尸sew(iow20"as戶ag/)、p耆麥芽f殳單月包菌(尸seMfifewo"oswa/to//7///a)、門多薩々支單月包菌(尸sew(iomo"asme/Woc/"a)、解月旨臭p木假單胞菌(尸化w^w7W2^we;/z/"ca/&o/>^c")、產(chǎn)堿假單胞菌、植物假單月包菌(i^ewcfcwo"ay//a"ton')、類產(chǎn)石成々支單月包菌(尸sewtfo附o"osp化wfifoa/ca,/ge"as)、惡臭々支單月包菌(i^ewdcww"os、施氏寸叚單月包菌(尸化wdo柳o"oyW"teer/)矛口威斯康星，支單月包菌(尸化W(iomo"ayw/scora/"era&)，絲#亥菌屬(i/^zocto"z'")的菌才朱,特別是立枯絲核菌(A/^octow'"so/朋0，根毛霉屬(i/^cwwcor)的菌抹，特別是曼赫才艮毛審(i/2/zcwMc0r柳Wze/),根霉屬(i/H^p^)的菌株，特別是日本根霉(7/n'zc^usj'a/o"/c附)，小孑包才艮零(Z/z/zcipMSw/c7-os/orws)考口節(jié)瘤才艮審(i^/zo/uy"OcfosMS),紅冬孢酵母屬(i^O^W/70n'^/W)的菌才朱，特別是紅冬孢酵母CR/zo^wpcWc^wtora/oz'cfes)，紅酵母屬(i/20cfotorw/a)的菌抹，特別是粘紅酵母(i/wcfotora/ag/wrim》，擲孢酵母屬(Spora6o/omyce力的菌抹，特別是5^ora6o/om_ycess/2仏atowus，嗜熱霉屬(772ermowyces)的菌才朱,特另ll是纟田毛嗜熱霉(772ermom;;ces1/a"wgfwosus)(以前-爾為^L沖帛^犬腐質(zhì)霉(7/i/m/co/a/a"wg/"osa)),77z^wnspore〃a的菌才朱,對爭另l]是TTH-arospo/^/ap/w^eo//"",木霉屬(7h.c/zoaferma)的菌才朱，特另ll是哈茨木霉(7Hc/zcxiemw/z"C""M附)和里氏木霉(7h'c/2cwferw"reese/)，和/或輪枝孑包屬(^mW/〃MW)的菌才朱。在優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明使用的脂肪分解酶源自曲霉屬的菌抹、無色桿菌屬的菌抹、芽孢桿菌屬的菌林、假絲酵母屬的菌株、色桿菌屬的菌株、鐮孢屬的菌抹、腐質(zhì)霉屬的菌林，//;;//zozjw"的菌株、假單胞菌屬的菌林、根毛霉屬的菌林、根霉屬的菌抹，或嗜熱霉屬的菌株。在優(yōu)選的實施方案中，至少一種脂肪分解酶是磷脂酶。磷脂酶是具有針對磷脂的活性的酶。磷脂，如卵磷脂(lecithin)或磷脂酰膽堿(phosphatidylcholine),由在外部(sn-l)和中部(sn-2)位置用兩個脂肪酸酯化并且在第三位置用磷酸酯化的甘油組成；而所述磷酸又可酯化為氨基醇。磷脂酶是參與磷脂水解的酶。能夠區(qū)分幾種類型的磷脂酶活性，包括磷脂酶A,和八2，其水解一個脂肪?；?分別在sn-l和sn-2位置)以形成溶血磷脂；而溶血磷脂酶(磷脂酶B)能夠水解溶血磷脂中剩余的脂肪酰基。磷脂酶C和磷脂酶D(磷酸二酯酶)分別釋放二?；视突蛄字?。術語磷脂酶包括具有磷脂酶活性的酶，例如磷脂酶A(A,或A2)、磷脂酶B活性、磷脂酶C活性或磷脂酶D活性。術語"磷脂酶A"用于本文與本發(fā)明的酶相關意圖包含具有磷脂酶A！和/或磷脂酶A2活性的酶。磷脂酶活性可以由還具有其它活性的酶提供，例如，具有磷脂酶活性的脂肪酶。磷脂酶活性可以例如來自具有磷脂酶副活性的脂肪酶。在本發(fā)明另外的實施方案中，磷脂酶酶活性是由基本上僅有磷脂酶活性的酶提供的，并且其中所述磷脂酶酶活性不是副活性。磷脂酶可以是任何來源，例如，動物來源的(如，例如哺乳動物的)，例如來自胰(例如?；蜇i的胰)，或蛇毒或蜂毒?；蛘?，磷脂酶可以是微生物來源，例如來自絲狀真菌、酵母或細菌，例如以下菌屬或菌種曲霉屬(v^perg/〃w",例如黑曲霉(Aw'ger);網(wǎng)柄菌屬(/)&^09&//1^),例如盤基網(wǎng)柄菌(D.cfoco/cfeww);毛霉屬(Mwcor)，例如爪唾毛霉(MJavam'cw)、大毛霉(Mmwcedo)、細孢毛霉(Mw&,7^/附附)；脈孑包菌屬(A^wospora)，例如粗糙脈孢菌(TV.cmwa);根毛菌屬(W/z/zomwco",例如微小根毛霉(凡pww'〃w";根霉屬(i/zfeo/m)，例如少根根霉(i.G^r/'zw)、曰本根霉(兄乂apom'cw力、匍枝根霉(T.sto/om/er);核盤菌屬(5Weraf/m'a),例如大豆核盤菌(51.//6eWa"a);毛蘚菌屬(7Hc/zop/^to"),例如紅色毛蘚菌(7:n^raw);維氏核盤菌屬(附etee/,'"^),例如『sc/era〃onwz;芽孢桿菌屬，例如巨大芽孑包桿菌(及wega/en'ww)、枯草芽孢桿菌；檸檬酸桿菌屬(C"rak"e。，例如弗式檸檬S吏桿菌(C./w柳A/);腸桿菌屬(五"/eraZ""er)，例如產(chǎn)氣腸4于菌(五.flgroge"&s)、陰溝腸才干菌(五.c/oac"e);愛德華氏菌屬C^/waWwW/a)，遲鈍愛德華氏菌(五.歐文氏菌屬(五rvWm'a)，例如草生歐文氏(五./2eA/co/a);埃希氏菌屬C&c/7en'c/2/a),例如大腸桿菌(Eco//);克雷伯氏菌屬(《/6&/6/&)，例如肺炎克雷伯氏菌(K/wewmom'ae);變形菌屬(戶ra&w),例如普通變形菌(/!vw/gan'";普羅威登斯菌屬(尸rav/Awc/a)，例如斯氏普羅威登斯菌(/!WwflW//);沙門氏菌屬0Sa/m朋e〃a)，例如鼠傷寒沙門氏菌(51./^;/z/mi/Www);沙雷氏菌屬(Serra"a)，例如液化沙雷氏菌(51./z々z^/osc/era)、粘質(zhì)沙雷氏菌(S.morc"ce"力；志賀氏菌屬(幼/geZ/a)，例如弗氏志賀氏菌(51.yfec"en');《連霉菌屬(5^eptomycas),例如5*.Wo/eceon^w;耶爾森氏菌屬(Jera/"/a)，例如小腸結腸炎耶爾森氏菌(7e"feraco/Z"ca)。由此，石粦月旨酶可以是真菌的，例如源自核菌(/yewom少ce/as)類，例如鐮孢屬(genusFwran^w),例如大刀鐮孢CPcw/woraw)、異孑包鐮孑包(F/zefera^onw7)、腐皮鐮孢的菌林或尖鐮孢的菌4朱。磷脂酶還可以來自曲霉屬內(nèi)的絲狀真菌菌才朱，例如泡盛曲霉(^j^erg/〃wawamoW)、臭曲霉(J^erg/〃w/oe"(iMs)、日本曲霉(/^/erg7'〃wsj.a/o"/cw51)、黑曲霉或米曲霉(^5pe/^/〃wc^y加e)的菌抹。磷脂酶還可以來自嗜熱霉屬內(nèi)的絲狀真菌菌抹，例如細毛嗜熱霉(以前稱為疏棉狀腐質(zhì)霉)。優(yōu)選的商業(yè)磷脂酶包括LECITASE和LECITASEULTRA(也稱作HL1232)(可從NovozymesA/S獲得)。合適的磷脂酶在WO9826057和WO0032758A中記載，將這些磷脂酶通過提述并入本文。磷脂酶優(yōu)選以約0.5至1000LU/gDS,優(yōu)選1至400LU/gDS，更優(yōu)選1至20LU/gDS，例如1-10LU/gDS的量加入發(fā)酵培養(yǎng)基中。在另一優(yōu)選的實施方案中，脂肪分解酶是脂肪酶。用于本發(fā)明的優(yōu)選的脂肪酶包括南極假絲酵母脂肪酶和柱狀假絲酵母脂肪酶。更優(yōu)選的脂肪酶是純化的脂肪酶，例如南極假絲酵母脂肪酶A、南極假絲酵母脂肪酶B、柱狀假絲酵母脂肪酶和沙門柏干酪青霉(尸em'c/〃/wmcamem&W/)脂肪酶。優(yōu)選的商業(yè)脂肪酶包括LIPOLASE和LIPEX(可從NovozymesA/S獲得)和GAMANO50(可從Amano獲得)。脂肪酶優(yōu)選以從約0.5至1000LU/gDS，優(yōu)選l至400LU/gDS，更優(yōu)選1至20LU/gDS，例如1至10LU/gDS和1至5LU/gDS的量加入發(fā)酵培養(yǎng)基中。在另一優(yōu)選的實施方案中，使用了脂肪分解酶的組合，如(l)脂肪酶和磷脂酶，(2)脂肪酶和溶血磷脂酶，(3)磷脂酶和溶血磷脂醅；和(4)脂肪酶、磷脂酶和溶血磷脂酶。額外的酶活性在一個優(yōu)選的實施方案中，額外的一種或多種酶活性可以與本發(fā)明的消泡體系組合(如在本發(fā)明的消泡體系之前、過程中或之后)使用。除了傳統(tǒng)用于淀粉加工的酶，例如，a-淀粉酶和葡糖淀粉酶，優(yōu)選的額外的酶還包括蛋白酶、肌醇六磷酸酶、木聚糖酶、纖維素酶、產(chǎn)麥芽糖a-淀粉酶和(3-淀粉酶。8優(yōu)選的a-淀粉酶是真菌或細菌來源的。更優(yōu)選地，a-淀粉酶是芽孢桿菌屬a-淀粉酶，如，源自地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌和嗜熱脂肪芽孢桿菌的菌林。其它oc-淀粉酶包括源自芽孢桿菌屬菌種NCIB12289、NCIB12512、NCIB12513或DSM9375的菌抹的a-淀粉酶，其全部詳細記載在WO95/26397中，和由Tsukamoto等,BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications,151(1988)，25-31頁描述的a-淀粉酶。另外的a-淀粉酶變體和雜合體在WO96/23874、WO97/41213和WO99/19467中描述。另外的a-淀粉酶包括源自曲霉屬菌抹的a-淀粉酶，如米曲霉和黑曲霉a-淀粉酶。在一個優(yōu)選的實施方案中，a-淀粉酶是酸性a-淀粉酶。術語"酸性a-淀粉酶"是指當以有效量添力。時在pH3.0-7.0,或優(yōu)選pH3.5-6.0,或更優(yōu)選pH4.0-5.0的范圍中有活性的a-淀粉酶(E.C.3.2.1.1)。任何合適的酸性a-淀粉酶可以在本發(fā)明中使用。在一個優(yōu)選的實施方案中，酸性a-淀粉酶是酸性真菌a-淀粉酶或酸性細菌a-淀粉酶。用于本發(fā)明的優(yōu)選的酸性a-淀粉酶可以源自地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌和嗜熱脂肪芽孢桿菌的菌抹。更優(yōu)選地，酸性a-淀粉酶是酸性真菌a-淀粉酶，如，例如源自黑曲霉的酸性a-淀粉酶。優(yōu)選的包含a-淀粉酶的商業(yè)組合物包括MYCOLASE(GistBrocades)、BAN、TERMAMYLSC、FUNGAMYLTM、LIQUOZYMETMX和SANTMSUPER、SANEXTRAL、NOVOZYM50033(NovozymesA/S)和CLARASEL-40，000、DEX-LOTM、SPEYMEFRED、SPEZYMEAA和SPEZYMEDELTAAA(Ge畫corInt.)。a-淀粉酶可以按本領域公知的量加入。當以AAU單位測量時，a-淀粉酶活性優(yōu)選以5-500000AAU/kgDS的量，500-50000AAU/kgDS的量，或更優(yōu)選100-10000AAU/kgDS,如500-1000AAU/kgDS的量存在。真菌酸性a-淀粉酶優(yōu)選以10-10000AFAU/kgDS的量，500-2500AFAU/kgDS的量，或更優(yōu)選以100-1000AFAU/kgDS，如大約500AFAU/kgDS的量加入。葡糖淀粉酶可以源自任何合適的來源，例如，源自微生物或植物。優(yōu)選的葡糖淀粉酶是真菌或細菌來源的，選自下組曲霉屬葡糖淀粉酶，特別是黑曲霉Gl或G2葡糖淀粉酶(Boel等(1984)，EMBOJ.3(5),p.1097-1102),或其變體，如WO92/00381和WO00/04136中公開的；泡盛曲霉葡糖淀粉酶(WO84/02921)、米曲霉(Agric.Biol.Chem.(1991)，55(4),941-949頁)，或它9們的變體或片段。另外的曲霉屬葡糖淀粉酶變體包括增強熱穩(wěn)定性的變體，例如，G137A和G139A(Chen等(1996)，尸ro/.9，499-505);D257E和D293E/Q(Chen等(1995)，戶raf.8,575-582);N182(Chen等(1994),所oc/em.J301,275-281);增加二硫鍵的變體，A246C(Fierobe等(996)，說》c/^w,:y/^,35,8698-8704);和在位置A435和S436引入Pro殘基的變體(Li等(1997)，Protein10，U"-l204)。其它葡糖淀粉酶包括踝節(jié)菌屬(ra/aram少ces)葡糖淀粉酶，特別是源自埃默森踝節(jié)菌(ra/aram_ycesememm7〕(WO99/28448)、7^/aromycas1/e_yce"a"ws(美國專利號Re.32,153)、杜邦棵節(jié)菌(7^/aramycas1d，o"")、嗜熱踝節(jié)菌(ra/arawyc&sAemw;/H7w力(US4,587,215)的葡糖淀粉酶。期望的細菌葡糖淀粉酶包括來自梭菌屬(genusC7a^Wwm)的葡糖淀粉酶，特別是熱解淀粉梭菌(C.Aemwaw少/o/少ricwm)(EP135,138)和熱硫化氫梭菌(C^zermo/zydrasw^n'CMm)(WO86/01831)。商業(yè)上可得到的包含葡糖淀粉酶的組合物包括AMG200L;AMG300L;SANTMSUPER、SANEXTRAL、SPIRIZYMEPLUS、SPIRIZYMEFUEL和AMGTME(來自NovozymesA/S);AMIGASEtm和AMIGASEPLUS(來自DSM);OPTIDEX300、G-ZYMETMG900、G-ZYMEtm和G990ZR沐自GenencorInt.)。在一個實施方案中葡萄淀粉酶可以按0.02-2AGU/gDS,優(yōu)選0.1-1AGU/gDS，濁口0.2AGU/gDS的量力口人。在一個優(yōu)選的實施方案中，將消泡體系與肌醇六磷酸酶組合使用。按照這個實施方案，可以使用肌醇六磷酸酶從而例如促進無機磷酸從植酸(phyticacid)(肌醇六磷酸(myo-inositolhexakisphosphate))或培養(yǎng)基中存在的它的任何鹽(植酸鹽(phytates))的釋放。肌醇六磷酸酶可以在發(fā)酵過程中加入，或在發(fā)酵之前加入，如在增殖過程中或在發(fā)酵之前的步驟(例如液化和/或糖化步驟)中力口入。例如，可添加肌醇六磷酸酶從而例如改進對于酵母必需的礦物的生物利用度，如PCT申請WO01/62947中所述，將該申請通過提述并入本文。在一個優(yōu)選的實施方案中，將消泡體系與蛋白酶組合使用。蛋白酶為本領域所公知，指催化肽鍵斷裂的酶。合適的蛋白酶包括真菌和細菌蛋白酶。優(yōu)選的蛋白酶是酸性蛋白酶，即，其特征在于能夠在pH7以下的酸性條件下水解蛋白質(zhì)的蛋白酶。合適的酸性真菌蛋白酶包括源自曲霉屬、毛霉屬、根霉屬、假絲酵母屬、革蓋菌屬(Con'o/w力、內(nèi)座殼屬(五瓜fo決/")、蟲霉屬(五"f/zowo//z/ra)、誄巴菌屬(7rpex)、青霉屬(戶em'c/〃/ww7)、小核菌屬(Sc/e/x^/w附)和球擬酵母屬(7^M/o;7w》的真菌蛋白酶。特別期望的是源自黑曲霉(參見，例如,等，(79<5力，所o/.CTzew.Ja/aw'2S'276)、齋藤曲霉(As/7erg/〃us似/to/)(參見，例如，Kw力/d"，(7^50/^^:C77e附.5bc2&66)、泡盛曲霉(Hayashida等，(1977)Agric.Biol.Chem.，42(5),927-933)、棘孢曲霉0^perg/〃w"c"/ea^"(WO95/02044)或米曲霉的蛋白酶；和來自微小毛霉(Afwcor/ms7'〃M力或米黑毛霉(A/wcormzWze/)的酉吏性蛋白酶。優(yōu)選地，所述蛋白酶是天冬氨酸蛋白酶，例如，如由A丄Barrett,N.D.Rawlings和J.F.Woessner編輯的T/a"必ooA:o/iVo加(y"c五"2ymes,AcademicPress,SanDiego,1998，第270章中所述。天冬氨酸蛋白酶的合適實例包括，例如，R.M.Berka等Ge"e，96,313(1990);R.M.Berka等125,195-198(1993);和Gomi等所wc/.歷otec/2.A'oc/zew.57,1095-1100(1993)中公開的那些，將上述文獻通過提述并入本文。合適的細菌蛋白酶包括商業(yè)上可得到的產(chǎn)品Alcalase⑧和Neutrase(可從NovozymesA/S獲得)和GC106和SPEZYMEFAN(可從Genencor獲得)。蛋白酶可以優(yōu)選以10義10^g活性蛋白酶蛋白/gDS，特別是l(T7-5xlO-6g活性蛋白酶蛋白/gDS的量加入。在另一個優(yōu)選的實施方案中，將消泡體系與產(chǎn)麥芽糖a-淀粉酶組合使用。"產(chǎn)麥芽糖a-淀粉酶"(葡聚糖1，4-a-麥芽糖水解酶(glucanl，4-a-maltohydrolase)，E.C.3.2丄133)能夠將直鏈淀粉和支鏈淀粉水解成a-構型的麥芽糖。產(chǎn)麥芽糖a-淀粉酶的實例包括來自嗜熱脂肪芽孢桿菌菌抹NCIB11837的產(chǎn)麥芽糖a-淀粉酶。產(chǎn)麥芽糖a-淀粉酶在US4,598,048、US4,604,355和US6,162,628中描述，將它們通過提述并入本文。商業(yè)上可得到的產(chǎn)麥芽糖淀粉酶是MALTOGENASE(可從NovozymesA/S獲得)。優(yōu)選地，在生淀粉(rawstarch)水解過程中使用產(chǎn)麥芽糖a-淀粉酶以輔助老化淀粉(retrogradedstarch)的形成。優(yōu)選地，在液化過程中將脂肪分解酶與產(chǎn)麥芽糖a-淀粉酶組合。優(yōu)選地，將產(chǎn)麥芽糖a-淀粉酶以0.02-1.0g/DS的量加入。在另一個優(yōu)選的實施方案中，將消泡體系與P-淀粉酶組合使用。(3-淀粉酶(E.C3.2丄2)是傳統(tǒng)上給予外切作用的產(chǎn)麥芽糖淀粉酶的名稱，其催化直鏈淀粉、支鏈淀粉和相關葡萄糖聚合物中1，4-a-糖苷鍵的水解。麥芽糖單位以逐步的方式從非還原性鏈末端連續(xù)地被移除，直到分子降解，或在支鏈淀粉的情況下，直到達到分支點。釋放的麥芽糖具有卩異頭構型，因此名為卩-淀粉酶。已經(jīng)從多種植物和微生物分離了(3-淀粉酶(W.M.Fogarty和CT.Kelly,ProgressinIndustrialMicrobiology,巻15,第112-115頁，1979)。這些(3-淀粉酶的特征在于具有范圍在40。C-65。C的最適溫度和范圍從4.5到7的最適pH。卩-淀粉酶的其它實例包括美國專利No.5,688,684中所述的p-淀粉酶。商業(yè)上可得到的(3-淀粉酶包括NOVOZYMWBA(來自NovozymesA/S)和SPEZYMETMBBA1500和OPTIMALT(來自GenencorInt.,USA)。在另一個優(yōu)選的實施方案中，將消泡體系與木聚糖酶組合使用。木聚糖酶(E.C.3.2.1.8)活性可以源自任何合適的來源，包括真菌和細菌生物，如曲霉屬、Ife;ora的'c/zww、青霉屬、脈孢菌屬、鐮孢屬和木霉屬。在另一個優(yōu)選的實施方案中，將消泡體系與纖維素酶組合使用。根據(jù)本發(fā)明使用的纖維素酶活性可以源自任何合適的來源，優(yōu)選地，所述纖維素酶是微生物來源的，例如源自絲狀真菌的菌林(例如，曲霉屬、木霉屬、腐質(zhì)霉屬、鐮孢屬)。纖維素酶優(yōu)選應用在包括對纖維素生物質(zhì)進行酶促水解的實施方案中。術語"纖維素酶"如用于本文應理解為包括纖維二糖水解酶(EC3.2丄91),例如，纖維二糖水解酶I和纖維二糖水解酶II,以及內(nèi)切葡聚糖酶(EC3.2.1.4)。為了有效，消化纖維素需要幾種類型的酶的共同作用。至少三類酶是將纖維素轉化為葡萄糖所必需的內(nèi)切葡聚糖酶(EC3.2丄4),其隨機切割纖維素鏈；纖維二糖水解酶(EC3.2.1.91)，其從纖維素鏈末端切割纖維二糖基單位(cellobiosylunit);和(3-葡糖苷酶(EC3.2丄21),其將纖維二糖和可溶性纖維糊精轉化成葡萄糖。在纖維素的生物降解涉及的這三類酶中，纖維二糖水解酶是用于天然晶態(tài)纖維素降解的關鍵酶。術語"纖維二糖水解酶I"在本文定義為纖維素1,4-(3-纖維二糖苷酶(cellulose1,4-p-cellobiosidase)(也稱作外切葡聚糖酶、外切纖維二糖水解酶或1，4-(3-纖維二糖水解酶)活性，如酶類別EC3.2丄91中所限定，其通過從鏈的非還原端釋放纖維二糖來催化纖維素和纖維四糖中1，4-(3-D-糖苷鍵的水解。術語"纖維二糖水解酶II活性"的定義是相同的，不過纖維二糖水解酶II從鏈的還原端進行攻擊。內(nèi)切葡聚糖酶(ECNo.3.2丄4)催化纖維素、纖維素衍生物(如羧甲基纖維素和羥乙基纖維素)、地衣淀粉(lichenin)中的1,4-(3-D-糖苷鍵、混合的卩-1，3葡聚糖如谷類p-D-葡聚糖或木葡聚糖中的(3-l，4鍵和其它含有纖維素部分的植物材料的內(nèi)水解。經(jīng)認可的名稱是內(nèi)切-l，4-(3-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶，但是在本說明書中使用縮略語內(nèi)切葡聚糖酶。在一個優(yōu)選的實施方案中，纖維素水解活性可以源自真菌來源，如木霉屬的菌抹，優(yōu)選里氏木霉菌林；或腐質(zhì)霉屬的菌抹，如特異腐質(zhì)霉菌林?？梢允褂玫哪軌蛲ㄟ^商業(yè)途徑獲得的包含纖維素酶的制備物包括CELLUCLAST⑧、CELLUZYME⑧、CEREFLO⑧和ULTRAFLO(No雨ymesA/S)、LAMINEXtm和SPEZYMECP(GenencorInt.)和ROHAMENT7069W沐自腿mGmbH)。本發(fā)明的消泡體系中應用的酶可以源自或獲得自任何合適的來源，包括，細菌、真菌、酵母或哺乳動物來源。在本文的上下文中術語"源自"或指酶已經(jīng)從其天然存在的生物中分離，即所述酶的氨基酸序列的特征(identity)與天然酶相同。術語"源自"還指酶可能已經(jīng)在宿主生物中重組產(chǎn)生，所述重組產(chǎn)生的酶或者與天然酶具有相同的特征，或者具有經(jīng)修飾的氨基酸序列，例如缺失、插入和/或取代一個或多個氨基酸，即，重組產(chǎn)生的酶是天然氨基酸序列的突變體和/或片段，或是通過本領域已知的核酸改組方法產(chǎn)生的酶。天然酶的含義中包括天然變體。此外，術語"源自"包括例如通過肽合成等以合成方法產(chǎn)生的酶。術語"源自"還包括經(jīng)過體內(nèi)或體外修飾的酶，例如通過糖基化、磷酸化或通過其它化學修飾進行。術語"獲得自"在本文上下文中是指所述酶與天然酶具有相同的氨基酸序列。該術語包含已經(jīng)從天然存在該酶的生物分離的酶，或從已經(jīng)重組表達該酶的相同類型的生物或另一種生物中分離的酶，或以合成方法例如通過肽合成產(chǎn)生的酶。關于重組產(chǎn)生的酶，術語"獲得自"和"源自"是指酶的特征而非重組產(chǎn)生該酶的宿主生物的特征。酶也可以是純化的。術語"純化的"如用于本文包括去除了來自該酶所源自的生物的其它組分的酶。術語"純化的"還包括去除了來自從中獲得該酶的天然生物的組分的酶。酶可以是純化的，僅有小量其它蛋白質(zhì)存在。表述"其它蛋白質(zhì)"特指其它酶。術語"純化的"如用于本文還指去除其它組分，特別是其它蛋白質(zhì)，并且最特別是存在于本發(fā)明的酶所來源的細胞中的其它酶。酶可以是"基本上純的"，即，不含來自產(chǎn)生該酶的生物的其它組分，所述生物即，例如，用于重組產(chǎn)生酶的宿主細胞。在優(yōu)選的實施方案中，酶是至少75%(w/w)純的，更優(yōu)選至少80%,至少85%,至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，或至少99%純的。在另一個優(yōu)選的實施方案中，酶是100%純的。金屬鹽任何合適的金屬鹽可以應用在本發(fā)明的消泡體系中。優(yōu)選的金屬鹽包括選自Ca、Mg、Na、K的金屬的鹽。更優(yōu)選的金屬鹽包括選自下組的鹽CaCl2、CaC03、Ca(OH)2、NaCl和KC1。最優(yōu)選的金屬鹽是二價金屬離子的鹽，例如CaCl2、CaC03和Ca(OH)2。方法本文描述的消泡體系優(yōu)選與發(fā)酵方法組合使用。發(fā)酵方法是本領域公知的。發(fā)酵方法通常包括液化或糖化包含淀粉的原料(例如來自谷物)。任何液化或糖化可以與本發(fā)明的發(fā)酵方法組合使用。根據(jù)本發(fā)明，糖化和液化可以與發(fā)酵方法同時或分開進行。在一個本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，液化、糖化和發(fā)酵方法同時進4亍。用于發(fā)酵方法的原料可以具體獲得自塊莖、才艮、莖、穗軸、豆類(legumes)、谷類或整谷粒。更具體而言，粒狀淀粉可以獲得自玉米、穗軸、小麥、大麥、黑麥、買羅高粱(milo)、西米(sago)、木薯(cassava)、木薯淀粉(tapioca)、高粱(sorghum)、稻、豌豆、豆類(bean)、香蕉或馬鈴薯。優(yōu)選的是糯型和非糯型(waxyandnon-waxytypes)的玉米和大麥。在發(fā)酵產(chǎn)物例如乙醇和其它基于淀粉的產(chǎn)物等的生產(chǎn)中，將原料研磨從而將結構打開并允許進一步的加工，所述原料如整谷粒，優(yōu)選玉米。根據(jù)本發(fā)明兩種方法是優(yōu)選的濕磨和干磨。優(yōu)選干磨，其中將整谷粒研磨并用于方法的剩余部分中。也可以使用濕磨，并提供胚(germ)和粗粉(meal)(淀粉顆粒和蛋白質(zhì))的良好分離，而在存在平行生產(chǎn)糖漿的場所應用有少數(shù)例外。濕磨和干磨方法都是本領域熟知的。本文描述的消泡體系適合應用在包括對經(jīng)研磨的谷粒進行熱糊化的發(fā)酵方法("傳統(tǒng)發(fā)酵方法")中以及在不包括這樣的熱糊化的發(fā)酵方法("生淀粉水解和發(fā)酵方法，，或"RSH，，)中?？梢詰帽景l(fā)明的消泡體系的傳統(tǒng)發(fā)酵方法在WO199628567和WO200238787中描述，將它們?nèi)客ㄟ^提述并入本文?？梢詰帽景l(fā)明的消泡體系的RSH方法在US4,316,956、WO200366816、WO200366826和WO2004080923中描述，將它們?nèi)客ㄟ^提述并入本文。此外，本文描述的消泡體系適合應用在包括對生物質(zhì)進行酶促水解和/或酸水解，優(yōu)選還包括發(fā)酵成例如乙醇的發(fā)酵方法中，例如US2006110891、US2006110900、WO2005100582、WO2006125068和WO2006101832中所描述的，將它們?nèi)客ㄟ^提述并入本文。任何包括植物細胞壁多糖的材料，例如木材、農(nóng)業(yè)殘余物、草本作物和城市固體廢物可以用作生物質(zhì)的來源。傳統(tǒng)發(fā)酵方法通常包括對粒狀淀粉的熱糊化作為液化步驟的一部分。"液化"是將經(jīng)研磨的(整)谷粒原料分解(水解)成麥芽糊精(糊精)的步驟。液化步驟通常使用a-淀粉酶進行。液化常常作為三步熱漿法(three-stephotslurryprocess)進行。將漿料加熱至60-95°C,優(yōu)選80-85。C，并加入酶以起始液化(稀化)。然后將漿料在95-140°C，優(yōu)選105-125。C的溫度噴射蒸煮至所述漿料完全糊化。然后將漿料冷卻至60-95°C，并加入更多的酶以完成水解(二次液化)。所述液化方法通常在pH4.5-6.5,特別是在pH5-6進行。"糖化，，是將麥芽糖糊精(如，產(chǎn)自液化方法)轉化成能夠由發(fā)酵生物如酵母代謝的低分子糖DPi.3(即，糖源)的步驟。糖化方法是本領域公知的，并且通常使用葡糖淀粉酶以酶促方法進行。代替地或額外地，可使用a-葡糖苷酶或酸性a-淀粉酶。完整糖化步驟可持續(xù)到約24至約72小時，并且通常在大約30到65攝氏度的溫度，和pH4-5，一般在大約pH4.5進行。然而，通常更優(yōu)選進行預糖化步驟，其在30-65°C、通常為大約60。C的溫度持續(xù)約40-90分鐘，其后在同步糖化和發(fā)酵方法(SSF)中的發(fā)酵過程中進行完全糖化。在包括對粒狀淀粉進行熱糊化的發(fā)酵方法中，消泡體系的組分，即脂肪分解酶和/或金屬鹽，優(yōu)選在熱糊化步驟之后加入，并且可優(yōu)選大約在向發(fā)酵培養(yǎng)基加入酵母的同時加入。如果應用了熱穩(wěn)定的脂肪分解酶，那么消泡體系的組分，即脂肪分解酶和/或金屬鹽可以在熱糊化步驟之前加入。本文描述的消泡體系的一種優(yōu)選的應用是在生淀粉的水解和發(fā)酵方法中，如在涉及用葡糖淀粉酶和/或(X-淀粉酶、和發(fā)酵生物例如酵母在低于粒狀淀粉初始糊化溫度的溫度下處理粒狀淀粉漿料的方法中。優(yōu)選地，所述酵母是乙醇紅酵母(EthanolRedyeast)。所述淀粉酶優(yōu)選是酸性a-淀粉酶，更優(yōu)選酸性真菌a-淀粉酶，如源自黑曲霉的酸性真菌a-淀粉酶?？梢院线m地應用所述消泡體系的RSH方法在WO200366816、WO200366826、WO2004080923和WO2004081193中描述，將它們?nèi)客ㄟ^提述并入本文。在一個更優(yōu)選的實施方案中，生淀粉水解方法要求(entail)用葡糖淀粉酶和/或a-淀粉酶在低于粒狀淀粉初始糊化溫度0。C-20。C的溫度(例如在55°C-60。C)下處理粒狀淀粉漿，然后用葡糖淀粉酶和/或a-淀粉酶、酵母在30°C-35。C的溫度處理所述漿料。在另一個優(yōu)選的實施方案中，生淀粉水解方法要求如下連續(xù)步驟(a)用酸性a-淀粉酶和葡糖淀粉酶在低于粒狀淀粉初始糊化溫度0。C-20。C的溫度(例如在55。C-60。C)下處理粒狀淀粉漿，優(yōu)選處理5分鐘至12小時，如5分鐘到60分鐘，或5分鐘到30分鐘的時間，(b)在酸性a-淀粉酶、葡糖淀粉酶、酵母和至少一種酯酶存在下，在35。C-35。C的溫度處理所述漿料，優(yōu)選處理20-250小時，例如大約70小時的時間，以產(chǎn)生乙醇。在不要求對粒狀淀粉進行熱糊化的優(yōu)選的發(fā)酵方法中，例如在RSH方法中，消泡體系的組分，即脂肪分解酶和/或金屬鹽可以在方法過程中的任何時間加入，并且最優(yōu)選大約在向發(fā)酵培養(yǎng)基加入酵母的同時。在本公開中術語"漿"和"醪"可以互換使用，意思是水和糖源的混合物，如包含淀粉和/或生物質(zhì)的植物材料。發(fā)酵生物術語"發(fā)酵生物"是指適用于產(chǎn)生期望的發(fā)酵產(chǎn)物的任何生物，包括細菌和真菌生物，包括酵母和絲狀真菌。根據(jù)本發(fā)明特別合適的發(fā)酵生物能夠將糖、葡萄糖和/或麥芽糖直接或間接發(fā)酵，即，轉化成期望的發(fā)酵產(chǎn)物。發(fā)酵生物的實例包括真菌生物，如酵母。優(yōu)選的酵母包括酵母屬的菌林，特別是釀酒酵母或葡萄汁酵母(&cc/^ramyc^wraraw)的菌株；畢赤酵母屬(尸/c/wV7)的菌林，特別是樹干畢赤酵母(尸/c/7/a幼)/fe)，如樹干畢赤酵母CBS5773;或巴斯德畢赤酵母(尸/c/z/ap似ton》的菌林；假絲酵母屬的菌抹，特別是產(chǎn)朊假絲酵母(Caw^/a^'to)、迪丹斯假絲酵母(Cawfeb^^fera/0或博伊丁假絲酵母(Ca^/WaZ)oWm7)的菌抹。其它考慮的酵母包括發(fā)酵單孢菌屬(Z少wowo"ay)的菌林；和漢遜酵母屬(//朋^做/0),特別是異常漢遜酵母的菌抹；克魯維酵16母屬C^yveramycM),特別是脆壁克魯維酵母(^/，^0附^^/^//"的菌抹；和裂歹直酵母屬(iSb/zizosacc/zaramyces),4爭另l1是粟酒裂歹直酵母(5b/7/zasacc/^ra附y(tǒng)cas;cw^e)的菌才朱。在一個實施方案中，向發(fā)酵培養(yǎng)基加入發(fā)酵生物從而使活發(fā)酵生物如酵母在每mL發(fā)酵培養(yǎng)基中的計數(shù)在105-1012，優(yōu)選107-1010，特別是約5xl07的范圍內(nèi)。在乙醇產(chǎn)生中，發(fā)酵生物優(yōu)選是酵母，將其應用于醪。優(yōu)選的酵母源自酵母屬菌種，更優(yōu)選地，源自釀酒酵母。在優(yōu)選的實施方案中，將酵母應用于醪，并且使發(fā)酵持續(xù)進行24-96小時，例如通常為35-60小時。在優(yōu)選的實施方案中，溫度通常為26-34°C，特別是約32。C，且pH通常為pH3-6，優(yōu)選約pH4-5。酵母細胞優(yōu)選以每ml發(fā)酵培養(yǎng)液105-1012、優(yōu)選107-1010、特別是5xl0"舌酵母計數(shù)的量應用。在乙醇產(chǎn)生階段中，酵母細胞計數(shù)應優(yōu)選在107-101()的范圍內(nèi)，特別是大約2x108。有關將酵母用于發(fā)酵的進一步指導可以參見例如"ThealcoholTextbook"(編者K.Jacques,T.RLyons和D.R.Kelsall,NottinghamUniversityPress,UnitedKingdom1999)，將其通過提述并入。商業(yè)上可得到的酵母包括，例如，ETHANOLREDtm酵母(可從Fermentis/Lesaffre,USA獲得)，F(xiàn)ALI(可從Fleischmann，sYeast,USA獲得)，SUPERSTART和THERMOSACCtm新鮮酵母(可從EthanolTechnology,WI，USA獲得)，BIOFERMAFT和XR(可從NABC-NorthAmericanByproductsCorporation,GA,USA獲得)，GERTSTRAND(可從GertStrandAB，Sweden獲得)，和FERMIOL(可從DSMSpecialties獲得)。組合物在一個優(yōu)選的方面本發(fā)明涉及包含脂肪分解酶和金屬鹽的組合物。根據(jù)本發(fā)明所述組合物可以用作發(fā)酵方法中的消泡體系。脂肪分解酶優(yōu)選選自下組磷脂酶、溶血磷脂酶和脂肪酶。金屬鹽優(yōu)選選自下組CaCl2、CaC03、Ca(OH)2、NaCl和KCl?；厥赵诎l(fā)酵之后，可以將發(fā)酵產(chǎn)物從經(jīng)發(fā)酵的漿料分離?？梢詫{料蒸餾以提取期望的發(fā)酵產(chǎn)物或者可以通過微濾或膜過濾技術從經(jīng)發(fā)酵的漿料提取期望的發(fā)酵產(chǎn)物?？蛇x地，可以通過汽提(stripping)回收發(fā)酵產(chǎn)物。用于回收的方法是本領域公知的。當發(fā)酵產(chǎn)物是乙醇時，按照本發(fā)明的方法獲得的所述乙醇可以用作，例如,燃料乙醇;飲用乙醇，即，可飲用的中性酒精(potableneutralspirits);或工業(yè)乙醇。盡管消泡體系特別適用于發(fā)酵方法，但是其可以應用在產(chǎn)生泡沫的有機材料的任何工業(yè)加工中。材料和方法a-淀粉酶活性(KNU)淀粉分解活性可以使用馬鈴薯淀粉作為底物測定。這種方法是基于改性的馬鈴薯淀粉通過酶的分解，并且通過將淀粉/酶溶液樣品與碘溶液混合來跟蹤該反應。起初，形成黑藍色，但是在淀粉分解期間藍色變淡并且逐漸變?yōu)榧t褐色，將其與有色玻璃標準物進行比較。將一千Novoa-淀粉酶單位(KNU)定義為在標準條件下(即，在37°C+/-0.05;0.0003MCa2+;和pH5.6)糊精化5260mg淀粉干物質(zhì)MerckAmylumsolubile的酵量。更詳細描述這種分析方法的文件夾EB-SM-0009.02/01可根據(jù)要求從NovozymesA/S，Denmark獲得，將該文件通過提述并入本文。a-淀粉酶活性(FAU)真菌a-淀粉酶活性可以"真菌a-淀粉酶單位"(FAU)表示。一個(1)FAU是在標準條件下(即在37。C和pH4.7)每小時分解5260mg固體淀粉(Amylumsolubile，Merck)的酶量。更詳細描述這種FAU測定法的文件夾AF9.1/3可根據(jù)要求從NovozymesA/S，Denmark獲得，將該文件通過提述并入本文。酸性a-淀粉酶活性(AFAU)酸性a-淀粉酶活性可以AFAU(酸性真菌a-淀粉酶單位)測量，AFAU是相對于酶標準品測定的。1FAU定義為在下述標準條件下每小時降解5.260mg淀粉干物質(zhì)的酶量。酸性a-淀粉酶、內(nèi)切-a-淀粉酶(l,4-a-D-葡聚糖-葡聚糖水解酶，E.C.183.2丄1)水解淀粉分子內(nèi)部區(qū)域中的a-l，4-糖苷鍵以形成不同鏈長的糊精和寡糖。與碘形成的顏色強度與淀粉濃度成正比。在指定的分析條件下，使用反向比色法測定淀粉濃度的減少作為淀粉酶活性。淀粉+碘/i=590nm^tt/脅a-淀粉酶40。，pH2,:t=23秒糊精+寡糖脫色標準條件/反應條件:底物緩沖液碘(12):CaCl2:pH:溫育溫度反應時間波長酶濃度酶工作范圍可溶淀粉，大約0.17g/L杵檬酸鹽(citrate),大約0.03M0.03g/L1.85mM2.50±0.0540。C23秒590nm0.025AFAU/mL0.01-0.04AFAU/mL更詳細描述這種分析方法的文件夾EB-SM-0259.02/01可根據(jù)要求從NovozymesA/S，Denmark獲得，將該文件通過提述并入本文。葡糖淀粉酶活性(AGU)將葡糖淀粉酶單位(AGU)定義為在標準條件下(37t:，pH4.3,底物麥芽糖23.2mM，緩沖液乙酸鹽(acetate)0.1M,反應時間5分鐘)每分鐘水解l微摩爾麥芽糖的酶量?？梢允褂米詣臃治鰞x系統(tǒng)。將變旋酶(mutarotase)添加至葡萄糖脫氫酶試劑，從而使存在的任何a-D-葡萄糖轉化為(3-D-葡萄糖。在上述反應中，葡萄糖脫氫酶特異性地與P-D-葡萄糖反應，形成NADH，使用光度計在340nm測定NADH作為對初始葡萄糖濃度的量度。19AMG溫育底物麥芽糖23.2mM緩沖液乙酸鹽0.1MpH:4.30±0.05溫育溫度37°C±1反應時間5分鐘酶工作范圍0.5-4.0AGU/mL顏色反應GlucDH:430U/L變旋酶9U/LNAD:0.21mM緩沖液磷酸鹽0.12M;0.15MNaClpH:7.60±0.05溫育溫度37°C±1反應時間5分鐘波長340nm更詳細描述這種分析方法的文件夾(EB-SM-0131.02/01)可根據(jù)要求從NovozymesA/S，Denmark獲得，將該文件通過提述并入本文。脂肪分解活性脂肪分解活性可以^使用三丁酸甘油酯(tributyrine)作為底物來測定。此方法基于酶對三丁酸甘油酯(tributyrin)的水解，并將堿消耗記錄為時間的函數(shù)。一個脂肪酶單位(LU)定義為在標準條件下(即在30°C;pH7.0;阿拉伯樹膠(GumArabic)作為乳化劑而三丁酸甘油酯作為底物)每分鐘釋放1微摩爾可滴定的丁酸的酶量。1KLU等于IOOOLU。更詳細描述這種分析方法的文件夾AF95/5可根據(jù)要求從NovoNordiskA/S，Denmark獲得，將該文件通過提述并入本文。實施例1通過在攪拌下向360升65。C水中加入140kg經(jīng)研磨的小麥或大麥(50%的粒徑<0.2mm，且98%<1.0mm，且干固體約為90%)來獲得漿料。當溫度為55。C時，加入用于液化和糖化的酶，包括黑曲霉AMG(232AGU/kgDS經(jīng)研磨的谷粒)、黑曲霉酸性a-淀粉酶(104AFAU/kgDS經(jīng)研磨的谷粒)、米曲霉a-淀粉酶(58FAU/kgDS經(jīng)研磨的谷粒)、地衣芽孢桿菌a-淀粉酶(279KNU/kgDS經(jīng)研磨的谷粒)。以10KLU/kgDS經(jīng)研磨的谷粒的量加入脂肪分解酶磷脂酶(LECITASEULTRA),并以1.73g/kgDS經(jīng)研磨的谷粒的量加入CaCl2:2H20。糖化(mashing)和發(fā)酵在500升圓柱形不4秀鋼罐(高160cm,直徑90cm)中進行，所述不銹鋼罐配有置于罐底之上200mm的MIG攪拌器和用于加熱/冷卻的罩(mantel)。糖化(mashing-in)在55。C在攪拌條件下進行30分鐘，將罐內(nèi)容物冷卻至30-32°C,然后投入酵母。將已在2500mL水中于30。C再水合、輕輕攪拌并且放置了15-30分鐘的干酵母500g(DanishDistillersA/S.Batch0355d2006.09.ll)投入發(fā)酵罐。在攪拌下進行發(fā)酵并且將溫度保持在32°C。測量泡沫層的厚度，并且計算泡沫體積占糖化開始時的醪體積的百分比。通過HPLC測量乙醇百分比。結果示于表l。表l.消泡體系在基于經(jīng)"<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>權利要求1.用于產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，所述方法包括使發(fā)酵培養(yǎng)基接觸發(fā)酵生物、脂肪分解酶和金屬鹽。2.權利要求1的方法，其中所述脂肪分解酶選自下組磷脂酶、溶血磷脂酶和脂肪酶。3.權利要求1或2的方法，其中所述金屬鹽選自下組CaCl2、CaC03、Ca(OH)2、NaCl和KCl。4.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述發(fā)酵生物是酵母。5.權利要求1-4中任一項的方法，其中所述發(fā)酵產(chǎn)物是乙醇。6.權利要求1-5中任一項的方法，其中所述乙醇是燃料乙醇或飲用乙醇。7.權利要求1-6中任一項的方法，其中發(fā)酵作為同時糖化和發(fā)酵方法的一部分進行。8.權利要求1-7中任一項的方法，其中所述發(fā)酵培養(yǎng)基包含糊化的淀粉。9.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述發(fā)酵培養(yǎng)基包含未糊化的淀粉。10.權利要求1-9中任一項的方法，其中所述發(fā)酵步驟在葡糖淀粉酶和/或淀粉酶存在下進行。11.權利要求1-10中任一項的方法，其中所述發(fā)酵培養(yǎng)基包含源自植物的淀粉物質(zhì)，所述植物選自下組玉米、小麥、大麥和買羅高粱。12.權利要求l-ll中任一項的方法，還包括使發(fā)酵微生物或發(fā)酵培養(yǎng)基與選自下組的酶接觸蛋白酶、肌醇六磷酸酶和纖維素酶。13.包含脂肪分解酶和金屬鹽的組合物。14.包含脂肪分解酶和金屬鹽的消泡體系。15.權利要求13的組合物或權利要求14的消泡體系在生產(chǎn)乙醇的方法中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及將源自植物的材料發(fā)酵成期望的發(fā)酵產(chǎn)物的方法。本發(fā)明還涉及在發(fā)酵方法中使用的消泡體系。文檔編號C12N9/20GK101680006SQ200880015254公開日2010年3月24日申請日期2008年5月5日優(yōu)先權日2007年5月8日發(fā)明者漢斯·S·奧爾森申請人:諾維信公司