專利名稱：細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)體系及培養(yǎng)基調(diào)整裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用密封的培養(yǎng)容器的細(xì)胞培養(yǎng)，特別涉及調(diào)整追加的培
養(yǎng)基的溶存氣體量及pH使培養(yǎng)環(huán)境保持最佳狀態(tài)的細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞 培養(yǎng)體系及培養(yǎng)基調(diào)整裝置。
背景技術(shù)：
近年，在人工環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞或組織、微生物等的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展， 正積極應(yīng)用于生物醫(yī)藥品的生產(chǎn)、基因治療、再生醫(yī)療、免疫療法等醫(yī)療 領(lǐng)域。
該細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)己經(jīng)實(shí)際應(yīng)用于生產(chǎn)單克隆抗體或再生皮膚等必須 有效培養(yǎng)大量細(xì)胞的多個(gè)方面，成為極重要的技術(shù)。
在上述情況下，為了大量有效地培養(yǎng)細(xì)胞，以往提出了各種細(xì)胞培養(yǎng) 裝置。
例如，專利文獻(xiàn)l記載的細(xì)胞培養(yǎng)用具在容器主體設(shè)置有細(xì)胞培養(yǎng)袋 和用于阻止培養(yǎng)袋中的培養(yǎng)液流通的阻止部件，使用該阻止部件分隔培養(yǎng) 區(qū)域，隨著細(xì)胞增殖能階段地?cái)U(kuò)張培養(yǎng)區(qū)域。
通過使用上述細(xì)胞培養(yǎng)用具，可以從培養(yǎng)起始至其結(jié)束時(shí)刻在同一培 養(yǎng)袋內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
另外，專利文獻(xiàn)2記載的用于生物體外增殖的裝置具有具有培養(yǎng)空間 的細(xì)胞培養(yǎng)亞分區(qū)室的連續(xù)列與能可變地釋放且隔斷亞分區(qū)室間液體連 通的調(diào)整構(gòu)件，隨著細(xì)胞增殖，階段地?cái)U(kuò)張培養(yǎng)區(qū)域。
由此，可以提供適合確保細(xì)胞存活的小規(guī)模的起始環(huán)境與增大規(guī)模的 環(huán)境，可以在沒有轉(zhuǎn)移污染危險(xiǎn)的情況下經(jīng)濟(jì)且省時(shí)地培養(yǎng)高細(xì)胞數(shù)集 團(tuán)。
進(jìn)而，專利文獻(xiàn)3記載的培養(yǎng)容器是培養(yǎng)沿著底面生長(zhǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng) 容器，能對(duì)應(yīng)細(xì)胞生長(zhǎng)擴(kuò)大底面的面積。由此，能在單一容器內(nèi)有效地增殖細(xì)胞。
但是，上述現(xiàn)有的細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，關(guān)于在培養(yǎng)區(qū)域擴(kuò)張時(shí)追加的培 養(yǎng)基并沒有進(jìn)行特別研究。
例如，專利文獻(xiàn)l記載了下述內(nèi)容如果在被第一阻止部件分隔的培 養(yǎng)區(qū)域內(nèi)，細(xì)胞增殖至所希望的程度的話，用第二阻止部件分隔袋，此時(shí)， 與培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力相對(duì)應(yīng)地確定培養(yǎng)基的量，使培養(yǎng)區(qū)域擴(kuò)張時(shí)的細(xì) 胞密度維持在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)。并且記載了通常確定培養(yǎng)基的量使培養(yǎng)開始 時(shí)或培養(yǎng)區(qū)域擴(kuò)張時(shí)的細(xì)胞密度為lxl()S個(gè)/ml左右，并且根據(jù)使用的細(xì)胞 種類和增殖特性或培養(yǎng)目的來適當(dāng)設(shè)定細(xì)胞密度即可。
另一方面，專利文獻(xiàn)1中，并沒有明確記載如何調(diào)整追加的培養(yǎng)基成 分，考慮追加最適合用于最初培養(yǎng)基的培養(yǎng)基。
但是，由于隨著細(xì)胞增殖，培養(yǎng)基環(huán)境慢慢變差，所以追加與最初的 培養(yǎng)基相同條件的培養(yǎng)基時(shí)，剛追加后的培養(yǎng)環(huán)境雖然提高，但無法維持 最初的培養(yǎng)基環(huán)境。
艮P，細(xì)胞增殖的結(jié)果是，培養(yǎng)基的溶存氧量降低，溶存二氧化碳量增 加。另外，因產(chǎn)生乳酸等，培養(yǎng)基的pH慢慢降低。即使在上述培養(yǎng)基中追 加例如相同量的與最初培養(yǎng)基相同條件的培養(yǎng)基，也無法使培養(yǎng)基整體恢 復(fù)到最初的最佳環(huán)境。
上述問題在實(shí)施專利文獻(xiàn)2及3記載的發(fā)明的情況下也同樣發(fā)生。
專利文獻(xiàn)l記載了下述內(nèi)容將袋放入碳酸氣體培養(yǎng)器內(nèi)，在培養(yǎng)所
需的氣體氣氛下靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH、 二氧化碳濃度等條
件根據(jù)使用的細(xì)胞設(shè)定。
另外，專利文獻(xiàn)2記載了下述內(nèi)容當(dāng)在最初的亞分區(qū)室中達(dá)到細(xì)胞 生長(zhǎng)和存活性的界限時(shí)，將內(nèi)容物(細(xì)胞、培養(yǎng)基)轉(zhuǎn)移到后續(xù)連續(xù)的亞分 區(qū)室，在后續(xù)亞分區(qū)室內(nèi)中，利用加入其中的培養(yǎng)基和容量等提供來自最 初的亞分區(qū)室的細(xì)胞集團(tuán)保持存活力同時(shí)進(jìn)一步增加所需的必要條件。
進(jìn)而，專利文獻(xiàn)3中記載了下述內(nèi)容通過將混合的間充質(zhì)干細(xì)胞和 培養(yǎng)基維持在規(guī)定的溫度及二氧化碳濃度等的培養(yǎng)條件，經(jīng)規(guī)定時(shí)間，在 一定培養(yǎng)條件下細(xì)胞被二次培養(yǎng)。
認(rèn)為上述現(xiàn)有技術(shù)中，如上所述，沒有考慮追加的培養(yǎng)基的成分條件，追加與最初的培養(yǎng)基相同條件的培養(yǎng)基，隨后調(diào)整溫度和C02濃度等培養(yǎng) 條件。
專利文獻(xiàn)1:日本特開2000-125848號(hào)公報(bào)
專利文獻(xiàn)2:專利第2981684號(hào)公報(bào)
專利文獻(xiàn)3:日本特開2004-89136號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
但是，僅用上述方法事實(shí)上無法適當(dāng)改善因細(xì)胞增殖而變差的環(huán)境， 難以將培養(yǎng)基的pH和溶存二氧化碳量、溶存氧量等的環(huán)境常維持在最佳狀 態(tài)。
另外，即使參照其他現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)，也沒有記載在密封的培養(yǎng)容器下 的細(xì)胞培養(yǎng)中，能將培養(yǎng)環(huán)境保持在最佳狀態(tài)的技術(shù)。
本發(fā)明是鑒于上述情況而得到的，目的在于提供一種細(xì)胞培養(yǎng)方法、 細(xì)胞培養(yǎng)體系及培養(yǎng)基調(diào)整裝置，在被密封的培養(yǎng)容器中的細(xì)胞培養(yǎng)中， 在培養(yǎng)中的培養(yǎng)基中追加并混合新培養(yǎng)基后，預(yù)先調(diào)整追加的培養(yǎng)基的pH
及溶存氣體量使培養(yǎng)環(huán)境為最適合細(xì)胞增殖的條件，由此將培養(yǎng)環(huán)境保持 在最佳狀態(tài)。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)方法是在封入有細(xì)胞和培養(yǎng)基
的培養(yǎng)容器中新追加培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)方法，是下述方法調(diào)
整追加的培養(yǎng)基的pH及溶存氣體量，混合調(diào)整的培養(yǎng)基與培養(yǎng)容器內(nèi)的培 養(yǎng)基，從而將培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基狀態(tài)調(diào)整為最適合細(xì)胞培養(yǎng)的條件，培 養(yǎng)培養(yǎng)容器內(nèi)的細(xì)胞。
如果細(xì)胞培養(yǎng)方法為上述方法，則在培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基中新追加培 養(yǎng)基時(shí)，可以調(diào)整追加的培養(yǎng)基使混合后的培養(yǎng)基狀態(tài)為最佳。
因此，以往存在下述問題，即使新追加培養(yǎng)基，也無法使追加后的培 養(yǎng)基最佳，培養(yǎng)環(huán)境慢慢變差，妨礙細(xì)胞增殖，但根據(jù)本發(fā)明，由于可以 使追加后的培養(yǎng)基最佳化，所以可以使培養(yǎng)環(huán)境常維持最佳狀態(tài)。
需要說明的是，"培養(yǎng)基"作為包括培養(yǎng)液和培養(yǎng)基的情況進(jìn)行使用。
另外，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)方法是下述方法通過將追加的培養(yǎng)基的pH
調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的pH高、和/或?qū)⒆芳拥呐囵B(yǎng)基的溶存二氧化碳
6分壓調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的壓力低、和/或?qū)⒆芳拥呐囵B(yǎng)基的溶存氧分 壓調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的壓力高，混合調(diào)整的培養(yǎng)基與培養(yǎng)容器內(nèi)的 培養(yǎng)基，由此將培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基的至少pH、溶存二氧化碳分壓或溶存 氧分壓的任一個(gè)調(diào)整至最適合細(xì)胞培養(yǎng)的條件，培養(yǎng)培養(yǎng)容器內(nèi)的細(xì)胞。
如果細(xì)胞培養(yǎng)方法為上述方法，則將追加的培養(yǎng)基的pH、溶存二氧化
碳分壓及溶存氧分壓分別調(diào)整至不超過最適合細(xì)胞培養(yǎng)的值的值，即不超 出最適合與因培養(yǎng)而各個(gè)值發(fā)生變化的方向相反的方向的條件，可以與培 養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基混合。
因此，可以使混合后的培養(yǎng)基狀態(tài)回復(fù)到最適合細(xì)胞培養(yǎng)的狀態(tài)，并 能將培養(yǎng)環(huán)境常維持于最佳狀態(tài)。
另外，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)方法是擴(kuò)張培養(yǎng)容器的容積、追加新培養(yǎng)基
的方法。
如果細(xì)胞培養(yǎng)方法為該方法，則用各種方法擴(kuò)張密封的培養(yǎng)容器，增 加培養(yǎng)容積，追加新培養(yǎng)基時(shí)，可以將追加后的培養(yǎng)環(huán)境維持在最佳狀態(tài)。
另外，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)方法是下述方法培養(yǎng)容器由軟包材料形成， 用規(guī)定的部件擠壓培養(yǎng)容器，將該培養(yǎng)容器分隔為包括培養(yǎng)部與能擴(kuò)張部 的二個(gè)室以上，對(duì)應(yīng)培養(yǎng)部的細(xì)胞數(shù)增加使部件與培養(yǎng)容器相對(duì)移動(dòng)，來 擴(kuò)張培養(yǎng)部的容積。
如果細(xì)胞培養(yǎng)方法為上述方法，則用軟包材料構(gòu)成培養(yǎng)容器，例如使 用輥部件將培養(yǎng)容器分隔為培養(yǎng)部與能擴(kuò)張部，由此可以對(duì)應(yīng)培養(yǎng)細(xì)胞數(shù) 的增加擴(kuò)張培養(yǎng)部，同時(shí)在培養(yǎng)部擴(kuò)張時(shí)追加培養(yǎng)基時(shí)，可以追加培養(yǎng)基 使混合后的培養(yǎng)基為最佳。
因此，即使培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)增加，也能在不使培養(yǎng)基變差的情況下使培養(yǎng) 環(huán)境常處于最佳狀態(tài)。
另外，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)方法是混合后培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基的pH為
6.5 7.5的方法。
另外，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)方法是混合后培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基的溶存二 氧化碳分壓為20mmHg 50mmHg的方法。
另外，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)方法是混合后培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基的溶存氧 分壓為115mmHg 170mmHg的方法。
7如果細(xì)胞培養(yǎng)方法為上述方法，則可以使追加新培養(yǎng)基后的培養(yǎng)基的 pH、溶存二氧化碳分壓、溶存氧分壓分別最佳化，從而能將培養(yǎng)環(huán)境常維 持在最佳狀態(tài)。
另外，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)方法是混合后培養(yǎng)容器內(nèi)的細(xì)胞密度為
5 x 103個(gè)/011 3 x 1 ()6個(gè)/ml的方法。
如果細(xì)胞培養(yǎng)方法為上述方法，則可以處于追加新培養(yǎng)基后的細(xì)胞密 度不過低且不過高的最佳狀態(tài)。
因此，能將細(xì)胞增殖效率維持在最佳狀態(tài)。
另外，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)體系是在封入有細(xì)胞和培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中
新追加培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)體系，為具有下述構(gòu)件的構(gòu)成調(diào)整 追加的培養(yǎng)基pH及溶存氣體量的培養(yǎng)基調(diào)整裝置；封入有培養(yǎng)基與細(xì)胞的 培養(yǎng)容器；和將追加的培養(yǎng)基從培養(yǎng)基調(diào)整裝置輸送至培養(yǎng)容器的管。
如果細(xì)胞培養(yǎng)體系為上述構(gòu)成，則可以調(diào)整在封入有培養(yǎng)基與細(xì)胞的 培養(yǎng)容器中新追加的培養(yǎng)基，使混合后的培養(yǎng)基狀態(tài)為最佳。
因此，能將培養(yǎng)環(huán)境常維持于最佳狀態(tài)。
另外，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)體系為還具有下述構(gòu)件的構(gòu)成使用規(guī)定的 部件擠壓由軟包材料形成的培養(yǎng)容器，將該培養(yǎng)容器分隔成包括培養(yǎng)部與 能擴(kuò)張部的二個(gè)室以上，對(duì)應(yīng)培養(yǎng)部的細(xì)胞數(shù)增加使部件與培養(yǎng)容器相對(duì) 移動(dòng)來擴(kuò)張培養(yǎng)部容積的細(xì)胞培養(yǎng)裝置。
該細(xì)胞培養(yǎng)體系具有將培養(yǎng)容器分隔成培養(yǎng)部與能擴(kuò)張部，對(duì)應(yīng)細(xì)胞 數(shù)增加來擴(kuò)張培養(yǎng)部容積的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，培養(yǎng)部的容積被擴(kuò)張時(shí)，必須 新追加培養(yǎng)基。
此時(shí)，根據(jù)本發(fā)明，可以調(diào)整追加的培養(yǎng)基狀態(tài)使混合后培養(yǎng)基的狀 態(tài)處于最佳，從而可以將培養(yǎng)環(huán)境常維持在最佳狀態(tài)。
另外，本發(fā)明的培養(yǎng)基調(diào)整裝置是在封入有細(xì)胞和培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器 中新追加培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基調(diào)整裝置，為下述構(gòu)成將追加的培 養(yǎng)基pH調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的pH高、和/或?qū)⒆芳拥呐囵B(yǎng)基的溶存二 氧化碳分壓調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的壓力低、和/或?qū)⒆芳拥呐囵B(yǎng)基的溶 存氧分壓調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的壓力高。
如果培養(yǎng)基調(diào)整裝置為上述構(gòu)成，則在封入細(xì)胞和培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中新追加培養(yǎng)基時(shí)，能將該追加的培養(yǎng)基調(diào)整至使追加后的培養(yǎng)基狀態(tài)處 于最佳。
根據(jù)本發(fā)明，在培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基中新追加培養(yǎng)基時(shí)，可以調(diào)整追 加的培養(yǎng)基使混合后培養(yǎng)基狀態(tài)處于最佳。
因此，可以使混合后的培養(yǎng)基最佳化，從而可以將培養(yǎng)環(huán)境常維持于 最佳狀態(tài)。


是表示本發(fā)明第一實(shí)施方案的細(xì)胞培養(yǎng)體系構(gòu)成的框圖。是表示本發(fā)明第一實(shí)施方案的細(xì)胞培養(yǎng)體系的培養(yǎng)液追加前后 的培養(yǎng)部環(huán)境的圖。是表示本發(fā)明第二實(shí)施方案的細(xì)胞培養(yǎng)體系構(gòu)成的框圖。
具體實(shí)施例方式
以下，參見

本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)體系及培養(yǎng)基 調(diào)整裝置的優(yōu)選實(shí)施方案。 [第一實(shí)施方案]
首先，參見圖l說明本發(fā)明第一實(shí)施方案的構(gòu)成。該圖是表示本實(shí)施 方案的細(xì)胞培養(yǎng)體系構(gòu)成的框圖。
如圖1所示，本實(shí)施方案的細(xì)胞培養(yǎng)體系具有細(xì)胞培養(yǎng)裝置IO、培養(yǎng) 庫(kù)20、培養(yǎng)液調(diào)整裝置(培養(yǎng)基調(diào)整裝置)30、培養(yǎng)液貯藏容器(培養(yǎng)基貯藏 容器)40、保管庫(kù)50、回收容器60、管70。
細(xì)胞培養(yǎng)裝置10如該圖所示，具有培養(yǎng)容器ll、容器裝載臺(tái)12和輥13。
培養(yǎng)容器ll是封入有作為培養(yǎng)對(duì)象的細(xì)胞(培養(yǎng)細(xì)胞)和用于培養(yǎng)該細(xì) 胞的培養(yǎng)基(包括培養(yǎng)液和培養(yǎng)基)進(jìn)行培養(yǎng)的容器。在該培養(yǎng)容器ll中， 將能封入培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)基的部分稱為培養(yǎng)部U-1，將由于被輥13分隔而 培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)基不能進(jìn)入的部分稱為能擴(kuò)張部ll-2。
培養(yǎng)容器ll以軟包材料為材料形成為袋狀(袋型)。
所謂軟包材料，是指將可撓性'柔軟性賦予包裝體的包裝材料。由此， 培養(yǎng)容器11可以隨著輥13的擠壓.旋轉(zhuǎn)撓性地改變培養(yǎng)部11-1的容積。關(guān)于軟包材料，例如記載于日本特開2002-255277號(hào)公報(bào)(使用軟包材料膜片的 食品包裝體及食品的取出方法)、日本特開2004-323077號(hào)公報(bào)(加壓擠出形 的袋狀容器)等，是周知技術(shù)。
另外，培養(yǎng)容器ll具有細(xì)胞培養(yǎng)所需的氣體透過性。由此，可以將細(xì) 胞培養(yǎng)體系設(shè)定為封閉體系(密封體系)。并且，為了能確認(rèn)內(nèi)容物，培養(yǎng) 容器l 1的一部分或全部具有透明性。
作為滿足作為上述培養(yǎng)容器ll的條件的包裝材料的具體例，可以舉出 聚烯烴、乙烯-乙酸乙烯基酯共聚物、苯乙烯系彈性體、聚酯系熱塑性彈性 體、硅酮系熱塑性彈性體、硅酮橡膠等。
該培養(yǎng)容器ll的四條邊被密封，但其中一邊連接有2根以上管70。其 中l(wèi)根是用于將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)基從外部注入培養(yǎng)部ll-l的注入用管(管 70-1)，另l根是用于將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)基從培養(yǎng)部ll-l回收的回收用管(管 70-2)。另外，如圖1所示，安裝有3根管70時(shí)，第3根是用于將培養(yǎng)細(xì)胞和 培養(yǎng)基作為樣品從培養(yǎng)部ll-l取出的采樣用管。
作為該管70的材質(zhì)，可以使用例如硅酮橡膠、軟質(zhì)氯乙烯樹脂、聚丁 二烯樹脂、乙烯-乙酸乙烯基酯共聚物、氯化聚乙烯樹脂、聚氨酯系熱塑性 彈性體、聚酯系熱塑性彈性體、硅酮系熱塑性彈性體、苯乙烯系彈性體、 例如，SBS(苯乙烯.丁二烯.苯乙烯)、SIS(苯乙烯'異戊烯.苯乙烯)、SEBS(苯 乙烯.乙烯.丁烯.苯乙烯)、SEPS(苯乙烯'乙烯'丙烯'苯乙烯)等。上述材質(zhì)具 有優(yōu)異的氣體透過性。
容器裝載臺(tái)12是上面載置有培養(yǎng)容器11 、進(jìn)而在該培養(yǎng)容器l l上面配 設(shè)有輥13的平面臺(tái)。
輥13形成圓柱狀，以使軸方向與培養(yǎng)容器ll的幅方向平行的方式配設(shè) 在培養(yǎng)容器ll上面，如圖1所示，可以沿著培養(yǎng)容器ll的長(zhǎng)度方向水平地
旋轉(zhuǎn)移動(dòng)。
該輥13的軸方向的長(zhǎng)度比培養(yǎng)容器11的寬度長(zhǎng)，輥13在自身重量等的 作用下輥13的表面擠壓培養(yǎng)容器11。
因此，培養(yǎng)容器11以輥13的擠壓位置為邊界，分成培養(yǎng)部ll-l與能擴(kuò) 張部ll-2的二個(gè)室。此時(shí)，安裝有管70的室為培養(yǎng)部11-1，于其中封入培 養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)基。需要說明的是，于細(xì)胞培養(yǎng)裝置10安裝2根以上輥13，例如分別以培 養(yǎng)容器11的長(zhǎng)度方向的兩端側(cè)的室為培養(yǎng)部11-1A、培養(yǎng)部11-1B，以形成 于中央的室為能擴(kuò)張部11-2等能設(shè)定二個(gè)室以上的培養(yǎng)部11-1與能擴(kuò)張部 11-2。
然后，輥13與培養(yǎng)容器11的上面連接，同時(shí)邊旋轉(zhuǎn)邊在容器長(zhǎng)度方向 移動(dòng)，由此培養(yǎng)部ll-l的容積連續(xù)變化。
具體而言，在于培養(yǎng)部ll-l內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)下，輥13被控制在增加 培養(yǎng)部ll-l容積的方向移動(dòng)，可以對(duì)應(yīng)培養(yǎng)狀態(tài)將培養(yǎng)部ll-l維持于最佳 容積。
另一方面，培養(yǎng)結(jié)束回收培養(yǎng)基和培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，輥13向減少培養(yǎng)部11-1 容積的方向移動(dòng)，被輥13擠壓的培養(yǎng)基和培養(yǎng)細(xì)胞通過管70被擠出到外部 (例如，下述回收容器60)，所以可以將它們自動(dòng)回收。
培養(yǎng)庫(kù)20將細(xì)胞培養(yǎng)裝置10收納于其內(nèi)部，可以控制培養(yǎng)部ll-l的溫 度、氧濃度、二氧化碳濃度，從而可以確保穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境。
培養(yǎng)液調(diào)整裝置30是將用保管庫(kù)50冷藏的培養(yǎng)液貯藏容器40中的培 養(yǎng)液通過管70-l加熱至適合培養(yǎng)細(xì)胞的溫度，同時(shí)控制培養(yǎng)液的pH、溶存
二氧化碳分壓及溶存氧分壓。
此時(shí)，培養(yǎng)液調(diào)整裝置30在與培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)液混合后將培養(yǎng)液的 pH調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的pH高的值，使其達(dá)到最佳的pH。
另外，培養(yǎng)液調(diào)整裝置30是在與培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)液混合后將培養(yǎng)液 的溶存二氧化碳分壓調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的溶存二氧化碳分壓低的
值，使其達(dá)到最佳的溶存二氧化碳分壓。
另外，培養(yǎng)液調(diào)整裝置30是在與培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)液混合后將培養(yǎng)液
的溶存氧分壓調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的溶存氧分壓高的值，使其達(dá)到最 佳的溶存氧分壓。
利用上述培養(yǎng)液調(diào)整裝置30的機(jī)構(gòu)，能將培養(yǎng)液貯藏容器40中的培養(yǎng) 液在與培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)液混合后，防止培養(yǎng)部11-l的培養(yǎng)液的溫度降低。
另外，能將培養(yǎng)部ll-l中的培養(yǎng)液的pH、溶存二氧化碳分壓及溶存氧 分壓維持在最佳狀態(tài)。
需要說明的是，也能限定該培養(yǎng)液調(diào)整裝置30的機(jī)構(gòu)，使其調(diào)整至少
iipH、溶存二氧化碳分壓及溶存氧分壓的任一種。
培養(yǎng)液貯藏容器(培養(yǎng)液罐)40是預(yù)先保持用于注入培養(yǎng)容器11的追加 的培養(yǎng)液的容器。該培養(yǎng)液貯藏容器40被收納于保管庫(kù)(保冷庫(kù))50。
該培養(yǎng)液貯藏容器40與培養(yǎng)容器11(載置于培養(yǎng)裝載臺(tái)12的器具)通過 具有柔軟性的管70-l連結(jié)，在培養(yǎng)容積擴(kuò)張時(shí)從培養(yǎng)液貯藏容器40向培養(yǎng) 容器ll輸送培養(yǎng)液。
回收容器(離心用瓶)60是預(yù)存放從培養(yǎng)容器11回收的培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng) 基的容器。
該回收容器60能安裝于離心分離機(jī)，通過進(jìn)行離心分離，可以從培養(yǎng) 基回收培養(yǎng)細(xì)胞。
需要說明的是，回收容器60與培養(yǎng)容器11(載置于培養(yǎng)裝載臺(tái)12的器具) 可以通過具有柔軟性的管70-2連結(jié)。通過該管70-2，培養(yǎng)基及培養(yǎng)細(xì)胞從 培養(yǎng)容器11回收到回收容器60 。
然后，參見圖l說明本實(shí)施方案的細(xì)胞培養(yǎng)體系的動(dòng)作(細(xì)胞培養(yǎng)方 法)。但是，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)方法并不限定于以下的具體動(dòng)作。
首先，在細(xì)胞培養(yǎng)裝置10中，通過使輥旋轉(zhuǎn)移動(dòng)，將培養(yǎng)容器ll的培 養(yǎng)部ll-l的容積調(diào)節(jié)至適合目標(biāo)培養(yǎng)的尺寸，于該培養(yǎng)部ll-l封入具有適 合培養(yǎng)的一定以上的細(xì)胞密度的細(xì)胞群和培養(yǎng)該細(xì)胞群的最佳培養(yǎng)基。
然后，將培養(yǎng)庫(kù)20內(nèi)的溫度及二氧化碳濃度與氧濃度調(diào)節(jié)至適合培養(yǎng) 的值。
另外,將用于向培養(yǎng)器11追加的培養(yǎng)基注入培養(yǎng)液貯藏容器40，將該 培養(yǎng)液貯藏容器40冷藏于保管庫(kù)50。
然后，培養(yǎng)容器H內(nèi)的細(xì)胞增殖時(shí)，由于擴(kuò)張培養(yǎng)部ll-l的容積，對(duì) 應(yīng)增加的細(xì)胞量和細(xì)胞密度使輥13移動(dòng)，在適當(dāng)?shù)奈恢门湓O(shè)輥13。
另外，將用于追加于培養(yǎng)容器11的培養(yǎng)液通過管70-1從培養(yǎng)液貯藏容 器40輸入培養(yǎng)液調(diào)整裝置30。此時(shí)，利用輥13的移動(dòng)，將適合培養(yǎng)容器ll 擴(kuò)張的容積的量的培養(yǎng)液輸入培養(yǎng)液調(diào)整裝置30。
然后，利用培養(yǎng)液調(diào)整裝置30，在培養(yǎng)容器ll內(nèi)的培養(yǎng)液中混合該管 70-1內(nèi)的培養(yǎng)液后，將管70-l內(nèi)的培養(yǎng)液pH調(diào)整至最適合細(xì)胞培養(yǎng)的pH。 該最佳的pH因作為培養(yǎng)對(duì)象的細(xì)胞而不同，但人類的大多組織細(xì)胞的情況
12下優(yōu)選為6.5 7.5。
作為如上所述調(diào)整pH的具體構(gòu)件，培養(yǎng)液調(diào)整裝置30具有可以調(diào)整裝 置內(nèi)部的氧分壓、二氧化碳分壓及溫度的形態(tài)，可以采取在該裝置內(nèi)部收 納管70-l的形態(tài)。
此處，通過改變調(diào)整裝置30內(nèi)的溶存二氧化碳分壓，能調(diào)整管70-l內(nèi) 的培養(yǎng)液的pH。作為其他方法，能通過在培養(yǎng)液中添加碳酸鹽等來調(diào)整。
另外，利用培養(yǎng)液調(diào)整裝置30，在培養(yǎng)容器ll內(nèi)的培養(yǎng)液中混合該管 70-1內(nèi)的培養(yǎng)液后，將管70-l內(nèi)的培養(yǎng)液的溶存二氧化碳ih壓調(diào)整至最適 合細(xì)胞培養(yǎng)的溶存二氧化碳分壓。該混合后最適合細(xì)胞培養(yǎng)的溶存二氧化 碳分壓因作為培養(yǎng)對(duì)象的細(xì)胞而不同，但在人類的大部分組織細(xì)胞的情況 下優(yōu)選為20mmHg 5 OmmHg 。
作為如上所述調(diào)整溶存二氧化碳分壓的具體構(gòu)件，例如，使用與上述 pH調(diào)整構(gòu)件相同的裝置，調(diào)整裝置內(nèi)部的二氧化碳分壓，可以將管70-l內(nèi) 的培養(yǎng)液調(diào)整至規(guī)定的溶存二氧化碳分壓。
進(jìn)而，利用培養(yǎng)液調(diào)整裝置30，在培養(yǎng)容器ll內(nèi)的培養(yǎng)液中混合該管 70-1內(nèi)的培養(yǎng)液后，將管70-l內(nèi)的培養(yǎng)液的溶存氧分壓調(diào)整至最適合細(xì)胞 培養(yǎng)的溶存氧分壓。在該混合后，最適合細(xì)胞培養(yǎng)的溶存氧分壓因作為培 養(yǎng)對(duì)象的細(xì)胞而不同，但在人類的大部分組織細(xì)胞的情況下優(yōu)選為 115mmHg 170mmHg 。
如上所述，作為用于調(diào)整溶存氧分壓的具體方法，例如在上述培養(yǎng)液 調(diào)整裝置30中，通過調(diào)整裝置內(nèi)的氧分壓，可以將管70-l內(nèi)的培養(yǎng)液調(diào)整 至規(guī)定的溶存氧分壓。
如上所述地操作，用培養(yǎng)液調(diào)整裝置30調(diào)整的培養(yǎng)液通過管70-l注入 培養(yǎng)容器l 1的培養(yǎng)部11-1 ，與培養(yǎng)部ll-l內(nèi)的培養(yǎng)液混合。
該結(jié)果是，混合后的培養(yǎng)液的pH、溶存二氧化碳分壓、溶存氧分壓能 恢復(fù)至最適合細(xì)胞培養(yǎng)的值。
同樣地，與增加的細(xì)胞量和時(shí)間經(jīng)過對(duì)應(yīng)地使輥13移動(dòng)，使輥13移動(dòng) 最終以大致整個(gè)培養(yǎng)容器11為培養(yǎng)部11-1。
在該過程中，培養(yǎng)部ll-l的培養(yǎng)液的pH、溶存二氧化碳分壓、溶存氧 分壓可以維持在最適合培養(yǎng)的狀態(tài)?；厥张囵B(yǎng)容器ll的培養(yǎng)基和培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，使輥13朝向連接有管70-2的
邊旋轉(zhuǎn)移動(dòng)。
由此，培養(yǎng)部ll-l的容積逐漸減小，培養(yǎng)基等通過管70-2回收到回收 容器60。
需要說明的是，本實(shí)施方案中，在細(xì)胞培養(yǎng)裝置10中，使用輥13改變 培養(yǎng)容器ll的培養(yǎng)部ll-l的容積，但本發(fā)明并不限定于此，此外，也可以 適用于用各種方法改變培養(yǎng)部ll-l容積的情況。
例如，如專利文獻(xiàn)l所記載，使用阻止培養(yǎng)液流通的阻止部件階段地 改變培養(yǎng)袋內(nèi)的培養(yǎng)部的容積的情況，或如專利文獻(xiàn)2所記載使具有培養(yǎng) 空間的培養(yǎng)亞分區(qū)室連續(xù)來階段地改變培養(yǎng)空間的容積的情況也能適用 本發(fā)明。另外，如專利文獻(xiàn)3所記載，也能適用于使用能擴(kuò)大底面面積的 培養(yǎng)容器進(jìn)行培養(yǎng)的情況。
如以上所說明，根據(jù)本實(shí)施方案的細(xì)胞培養(yǎng)體系，在培養(yǎng)容器內(nèi)的培 養(yǎng)液中新追加培養(yǎng)液時(shí)，可以調(diào)整追加的培養(yǎng)液，使混合后的培養(yǎng)液pH、 溶存二氧化碳分壓、溶存氧分壓達(dá)到最佳。
因此，可以使混合后的培養(yǎng)液最佳化，從而可以將培養(yǎng)環(huán)境常維持于 最佳狀態(tài)。
下面，參見圖3說明本發(fā)明的第二實(shí)施方案。該圖是表示第二實(shí)施方 案的細(xì)胞培養(yǎng)體系的構(gòu)成的框圖。
本實(shí)施方案在將追加的培養(yǎng)液的pH、溶存二氧化碳分壓、溶存氧分壓 在培養(yǎng)液貯藏容器40中調(diào)整的方面與第一實(shí)施方案不同。關(guān)于其他方面， 與第一實(shí)施方案相同。
如圖3所示，本實(shí)施方案中，在培養(yǎng)液調(diào)整裝置30內(nèi)設(shè)置培養(yǎng)液貯藏 容器40，能調(diào)整該培養(yǎng)液貯藏容器40的培養(yǎng)液的pH、溶存二氧化碳分壓、 溶存氧分壓。
另外，優(yōu)選在該培養(yǎng)液調(diào)整裝置30設(shè)置冷卻機(jī)能，能與第一實(shí)施方案 的保管庫(kù)50相同的保冷。
如果細(xì)胞培養(yǎng)體系如上設(shè)置，則能進(jìn)一步簡(jiǎn)化整體構(gòu)成。 實(shí)施例(實(shí)施例l)
將容積為1L的培養(yǎng)容器配設(shè)在容器裝載臺(tái)，使輥移動(dòng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)容器 的培養(yǎng)部的容積為0.1L。
然后，在該培養(yǎng)部注入0.1LRPMIMedium 1640(GIBCO公司制)作為培 養(yǎng)液，同時(shí)注入1000萬個(gè)人白血病T淋巴瘤jurkat作為培養(yǎng)細(xì)胞。 使用i-STAT(Abbott公司帝ij)測(cè)定該培養(yǎng)液的pH，結(jié)果為7.17。 另外，使用i-STAT(Abbott公司制)測(cè)定該培養(yǎng)液的溶存二氧化碳分壓， 結(jié)果為39mmHg。
進(jìn)而，使用i-STAT(Abbott公司制)測(cè)定該培養(yǎng)液的溶存氧分壓，結(jié)果 為140mmHg。
另外，培養(yǎng)液的溫度為37'C。
然后，將該細(xì)胞培養(yǎng)3天。另外，調(diào)節(jié)培養(yǎng)庫(kù)的溫度，將培養(yǎng)液的溫 度維持在37。C。
接著，與上述相同地測(cè)定培養(yǎng)液的pH、溶存二氧化碳分壓、溶存氧分 壓。其結(jié)果是，它們分別為6.8、 55mmHg、 135mmHg。
然后，在容器裝載臺(tái)上，使輥相對(duì)于培養(yǎng)容器移動(dòng)，將培養(yǎng)部的容積 擴(kuò)張0.2L，在該擴(kuò)張的培養(yǎng)部從培養(yǎng)液貯藏容器40經(jīng)由培養(yǎng)液調(diào)整裝置30 注入0.1L培養(yǎng)液。
此時(shí)，在培養(yǎng)液調(diào)整裝置30中，調(diào)整追加的培養(yǎng)液的pH、溶存二氧化 碳分壓、溶存氧分壓，分別為7.4、 21mmHg、 180mmHg。
接著，與上述相同地測(cè)定追加培養(yǎng)液混合后的培養(yǎng)部的培養(yǎng)部的pH、 溶存二氧化碳分壓、溶存氧分壓。
其結(jié)果分別為7.1、 38mmHg、 150mmHg。
(比較例l)
與實(shí)施例1相同地將容積為1L的培養(yǎng)容器配設(shè)在容器裝載臺(tái)，使輥移 動(dòng)，將培養(yǎng)容器的培養(yǎng)部的容積調(diào)節(jié)為0.1L。
然后，準(zhǔn)備0.5LRPMI Medium 1640(GIBCO公司制)作為培養(yǎng)液，在該 培養(yǎng)部注入其中的0.1L，同時(shí)注入1000萬個(gè)人白血病T淋巴瘤jurkat作為培
養(yǎng)細(xì)胞。
使用i-STAT(Abbott公司制)測(cè)定該培養(yǎng)液的pH，結(jié)果為7.17。
15另夕卜，使用i-STAT(Abbott公司制)測(cè)定該培養(yǎng)液的溶存二氧化碳分壓， 結(jié)果為39mmHg。
進(jìn)而，使用i-STAT(Abbott公司制)測(cè)定該培養(yǎng)液的溶存氧分壓，結(jié)果 為1401nmHg。
另外，培養(yǎng)液的溫度為37"C。
然后，將該培養(yǎng)液培養(yǎng)3天。另外，通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)庫(kù)的溫度，將培養(yǎng) 液的溫度維持在37"C。
接著，與上述相同地測(cè)定培養(yǎng)液的pH、溶存二氧化碳分壓、溶存氧分 壓。其結(jié)果是，它們分別為6.87、 55mmHg、 134mmHg。
然后，在容器裝載臺(tái)上使輥相對(duì)于培養(yǎng)容器移動(dòng)，將培養(yǎng)部的容積擴(kuò) 張為0.2L，在該擴(kuò)張的培養(yǎng)部中注入0.1L與最初注入的培養(yǎng)液相同的培養(yǎng) 液(7.17、 39mmHg、 140mmHg)。
然后，與上述相同地測(cè)定追加培養(yǎng)液混合后的培養(yǎng)部的培養(yǎng)部的pH、
溶存二氧化碳分壓、溶存氧分壓。
其結(jié)果分別為7.03、 46mmHg、 136mmHg。
如上所述，使用本發(fā)明的培養(yǎng)方法追加培養(yǎng)液的實(shí)施例l中，擴(kuò)張培 養(yǎng)部追加培養(yǎng)液后的培養(yǎng)液的pH、溶存二氧化碳分壓、溶存氧分壓與培養(yǎng) 開始時(shí)刻基本相同，可以維持最適合培養(yǎng)的環(huán)境。
另一方面，確認(rèn)了使用現(xiàn)有的培養(yǎng)方法追加培養(yǎng)液的比較例l中，擴(kuò) 張培養(yǎng)部追加培養(yǎng)液后的培養(yǎng)液的pH、溶存二氧化碳分壓、溶存氧分壓與 剛追加前的值相比，雖然改善成適合培養(yǎng)的數(shù)值，但比培養(yǎng)開始時(shí)刻差， 即使追加培養(yǎng)液，培養(yǎng)環(huán)境也慢慢變差。
當(dāng)然本發(fā)明不限定于以上的實(shí)施方案，可以在本發(fā)明的范圍中能進(jìn)行 各種變更實(shí)施。
例如，在上述各實(shí)施方案中，僅對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)條件中的pH、溶存二氧化 碳分壓、溶存氧分壓進(jìn)行了調(diào)整，但也可以適用其他條件進(jìn)行適當(dāng)變更來 維持最佳狀態(tài)等。
產(chǎn)業(yè)上的可利用性
本發(fā)明能優(yōu)選用于需要大量培養(yǎng)細(xì)胞的生物醫(yī)藥或再生醫(yī)療、免疫療
16法等領(lǐng)域中。
權(quán)利要求
1、一種細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于，其是在封入有細(xì)胞和培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中新追加培養(yǎng)基來培養(yǎng)所述細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其中，調(diào)整所述追加的培養(yǎng)基的pH及溶存氣體量，并將調(diào)整后的培養(yǎng)基和所述培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基混合從而將培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基狀態(tài)調(diào)整至最適合所述細(xì)胞培養(yǎng)的條件，由此來培養(yǎng)所述培養(yǎng)容器內(nèi)的所述細(xì)胞。
2、 如權(quán)利要求l所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于， 將所述追加的培養(yǎng)基的pH調(diào)整至比最適合所述細(xì)胞培養(yǎng)的pH高，和/或?qū)⑺鲎芳拥呐囵B(yǎng)基的溶存二氧化碳分壓調(diào)整至比最適合所述細(xì)胞培 養(yǎng)的壓力低，和/或?qū)⑺鲎芳拥呐囵B(yǎng)基的溶存氧分壓調(diào)整至比最適合所述 細(xì)胞培養(yǎng)的壓力高，并將調(diào)整后的培養(yǎng)基與所述培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基混合從而將培養(yǎng)容 器內(nèi)的培養(yǎng)基的至少pH、溶存二氧化碳分壓或溶存氧分壓的任一個(gè)調(diào)整至 最適合所述細(xì)胞培養(yǎng)的條件，由此來培養(yǎng)所述培養(yǎng)容器內(nèi)的所述細(xì)胞。
3、 如權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于，擴(kuò)張所述培養(yǎng)容器的容積進(jìn)行所述新的培養(yǎng)基的追加。
4、 如權(quán)利要求3所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)容器由軟包材料形成，并使用規(guī)定的部件擠壓所述培養(yǎng)容器 將該培養(yǎng)容器分割為包括培養(yǎng)部和能擴(kuò)張部的二個(gè)室以上，并且與所述培 養(yǎng)部的細(xì)胞數(shù)增加對(duì)應(yīng)地使所述部件與所述培養(yǎng)容器相對(duì)移動(dòng)來擴(kuò)張培 養(yǎng)部的容積。
5、 如權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于， 所述混合后的培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基的pH為6.5 7.5。
6、 如權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于， 所述混合后的培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基的溶存二氧化碳分壓為20mmHg 50mmHg。
7、 如權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于，所述混合后的培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基的溶存氧分壓為115mmHg 170mmHg。
8、 如權(quán)利要求1 7中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于， 所述混合后的培養(yǎng)容器內(nèi)的細(xì)胞密度為5xl()S個(gè)/ml 3xl0S個(gè)/ml。
9、 一種細(xì)胞培養(yǎng)體系，其特征在于，其是在封入有細(xì)胞和培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中新追加培養(yǎng)基來培養(yǎng)所述 細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)體系， 具有調(diào)整所述追加的培養(yǎng)基的pH和溶存氣體量的培養(yǎng)基調(diào)整裝置； 封入培養(yǎng)基和細(xì)胞的培養(yǎng)容器；和將所述追加的培養(yǎng)基從所述培養(yǎng)基調(diào)整裝置輸送至所述培養(yǎng)容器的管。
10、 如權(quán)利要求9所述的細(xì)胞培養(yǎng)體系，其特征在于， 還具有下述細(xì)胞培養(yǎng)裝置，所述細(xì)胞培養(yǎng)裝置使用規(guī)定的部件擠壓由軟包材料形成的所述培養(yǎng)容器將該培養(yǎng)容器分隔為包括培養(yǎng)部和能擴(kuò)張 部的二個(gè)室以上，并與所述培養(yǎng)部的細(xì)胞數(shù)增加相對(duì)應(yīng)地使所述部件與所 述培養(yǎng)容器相對(duì)移動(dòng)來擴(kuò)張所述培養(yǎng)部的容積。
11、 一種培養(yǎng)基調(diào)整裝置，其特征在于，其是用于在封入有細(xì)胞和培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中新追加培養(yǎng)基來培養(yǎng) 所述細(xì)胞的培養(yǎng)基調(diào)整裝置，其中，將所述追加的培養(yǎng)基的pH調(diào)整至比最適合所述細(xì)胞培養(yǎng)的pH高， 和/或?qū)⑺鲎芳拥呐囵B(yǎng)基的溶存二氧化碳分壓調(diào)整至比最適合所述細(xì)胞 培養(yǎng)的壓力低，和/或?qū)⑺鲎芳拥呐囵B(yǎng)基的溶存氧分壓調(diào)整至比最適合所 述細(xì)胞的培養(yǎng)的壓力高。
全文摘要
在密封的培養(yǎng)容器中的細(xì)胞培養(yǎng)中，防止培養(yǎng)環(huán)境慢慢變差。一種方法，其是在封入有細(xì)胞和培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中，新追加培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)方法，是下述方法將追加的培養(yǎng)基的pH調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的pH高，和/或?qū)⒆芳拥呐囵B(yǎng)基的溶存二氧化碳分壓調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的壓力低，和/或?qū)⒆芳拥呐囵B(yǎng)基的溶存氧分壓調(diào)整至比最適合細(xì)胞培養(yǎng)的壓力高，通過混合調(diào)整的培養(yǎng)基與培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基，將培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基的至少pH、溶存二氧化碳分壓或溶存氧分壓的任一個(gè)調(diào)整至最適合細(xì)胞培養(yǎng)的條件，培養(yǎng)培養(yǎng)容器內(nèi)的細(xì)胞。
文檔編號(hào)C12N1/00GK101668844SQ20088001345
公開日2010年3月10日 申請(qǐng)日期2008年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月27日
發(fā)明者小暮正人, 時(shí)田偉子, 末永亮, 田中鄉(xiāng)史, 石崎庸一 申請(qǐng)人:東洋制罐株式會(huì)社