用于細(xì)胞培養(yǎng)的合成粘附培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】一種水性細(xì)胞培養(yǎng)基組合物，所述組合物包含用于支持哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的水性細(xì)胞培養(yǎng)溶液。所述組合物還包含溶解于水性細(xì)胞培養(yǎng)溶液的與多肽偶聯(lián)的合成聚合物。與多肽偶聯(lián)的合成聚合物用于在細(xì)胞培養(yǎng)條件下粘附于細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面。在細(xì)胞培養(yǎng)條件下在細(xì)胞培養(yǎng)表面上孵育水性細(xì)胞培養(yǎng)基組合物導(dǎo)致與多肽偶聯(lián)的合成聚合物對(duì)所述表面的粘附。
【專利說明】用于細(xì)胞培養(yǎng)的合成粘附培養(yǎng)基
[0001] 本申請(qǐng)根據(jù)35U.S.C. § 119要求2012年2月2日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列第 61/594016號(hào)的優(yōu)先權(quán)，本文W該申請(qǐng)的內(nèi)容為基礎(chǔ)并通過參考將其完整地結(jié)合于此。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)，并且更具體地涉及含有合成的、化學(xué)限定聚合物的用于細(xì) 胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，W及用于細(xì)胞培養(yǎng)的方法和用于使用該類培養(yǎng)基的被覆基質(zhì)的方法。 [000引背景
[0004] 治療性細(xì)胞正處于開發(fā)中，該是一種可W被導(dǎo)入人中用于治療疾病的細(xì)胞。治療 性細(xì)胞的示例包括干細(xì)胞，諸如人胚胎干細(xì)胞化ESC)和人間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSC)，其能夠分 化成人體中的各種細(xì)胞類型。干細(xì)胞的該種性質(zhì)為開發(fā)針對(duì)多種嚴(yán)重細(xì)胞退化疾?。ㄖT如 糖尿病、脊髓損傷、也臟病等）的新治療方法提供了潛力。然而，在基于該類細(xì)胞的治療的 開發(fā)中存在障礙。
[0005] 在開發(fā)和控制治療性細(xì)胞培養(yǎng)中，在細(xì)胞和組織培養(yǎng)中得到并維持足夠數(shù)量的治 療性細(xì)胞并且確保該些細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)中不W不需要的方式變化是重要的。例如，干細(xì)胞 培養(yǎng)通常用來自細(xì)胞庫(kù)或細(xì)胞儲(chǔ)物的少數(shù)細(xì)胞接種，然后W未分化或部分分化的狀態(tài)擴(kuò)增 直至給定的治療性應(yīng)用所需要的分化。出于該目的，干細(xì)胞或其分化的細(xì)胞通常在含有動(dòng) 物來源組分的表面或培養(yǎng)基（諸如飼養(yǎng)層、血清或購(gòu)自美國(guó)新澤西州富蘭克林湖市的抓生 物科學(xué)公司炬DBiosciences，RranklinLakesNJ)的Matrigel?)的存在下培養(yǎng)。加至培 養(yǎng)環(huán)境的該些動(dòng)物來源的添加物可能會(huì)使細(xì)胞暴露于潛在有害的病毒或其他感染劑，該些 有害物可能被傳遞至患者或可能危害hESC的一般培養(yǎng)和維持。另外，該類生物產(chǎn)品容易產(chǎn) 生批次差異、免疫應(yīng)答和有限保存期。
[0006] 最近，已顯示不含動(dòng)物來源組分的合成表面在化學(xué)限定的培養(yǎng)基中成功培養(yǎng)干細(xì) 胞，解決了在動(dòng)物來源組分存在下培養(yǎng)細(xì)胞中所產(chǎn)生的許多問題。然而，該類合成表面由高 濃度的重組多膚制成，該對(duì)于制造而言可能是昂貴的。在一些情況下，由于水溶性被覆材料 在細(xì)胞培養(yǎng)條件下通常不能充分保持與表面的結(jié)合，因此合成表面需要使用有機(jī)溶劑來達(dá) 到被覆目的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 其中，本發(fā)明描述了能夠支持干細(xì)胞在化學(xué)限定的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)和粘附的膚-聚 合物，其中可W向細(xì)胞培養(yǎng)基中加入作為補(bǔ)充劑的膚-聚合物W增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)未被覆表面的 粘附。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)作為補(bǔ)充劑引入細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)，膚聚合物在細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)表面上形成穩(wěn) 定的被覆層。
[0008] 在本文所述的各種實(shí)施方式中，水性細(xì)胞培養(yǎng)基組合物包含（i)用于支持哺乳動(dòng) 物細(xì)胞培養(yǎng)的水性細(xì)胞培養(yǎng)溶液；（ii)與溶于水性細(xì)胞培養(yǎng)溶液的多膚偶聯(lián)的合成聚合 物，其中與多膚偶聯(lián)的合成聚合物用于在細(xì)胞培養(yǎng)的條件下粘附到細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面， 并且其中在細(xì)胞培養(yǎng)的條件下在細(xì)胞培養(yǎng)表面上賠育水性細(xì)胞培養(yǎng)基組合物導(dǎo)致對(duì)偶聯(lián) 有多膚的合成聚合物的表面的粘附。細(xì)胞培養(yǎng)基可w是化學(xué)限定的組合物或可w基本不含 有機(jī)溶劑。在實(shí)施方式中，所述聚合物具有線性主鏈并且沒有交聯(lián)，其中在2(TC或更低溫度 下，偶聯(lián)有多膚的合成聚合物可溶于水。在實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)基包含葡萄糖和一種 或多種氨基酸。
[0009] 在實(shí)施方式中，本文所述的方法包括（i)向水性細(xì)胞培養(yǎng)基引入含有共價(jià)連接的 多膚的合成聚合物W產(chǎn)生含有聚合物的細(xì)胞培養(yǎng)基，其中與多膚偶聯(lián)的合成聚合物用于在 細(xì)胞培養(yǎng)條件下粘附到細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面；（ii)在細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面上配置含有所 述聚合物的細(xì)胞培養(yǎng)基，W獲得經(jīng)被覆的制品；W及（iii)在細(xì)胞培養(yǎng)條件（例如，37C) 下在所述培養(yǎng)基中賠育所述經(jīng)被覆的制品W使所述偶聯(lián)有多膚的合成聚合物粘附到所述 細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面。所述基質(zhì)的表面可W具有0°和50°之間的水接觸角。在實(shí)施方式 中，所述基質(zhì)的表面是等離子體處理的聚苯己帰表面。該方法還可W包括在細(xì)胞培養(yǎng)條件 下在培養(yǎng)基中于經(jīng)被覆的制品上賠育細(xì)胞（諸如干細(xì)胞；例如，人間充質(zhì)干細(xì)胞或人胚胎 干細(xì)胞）。該方法還可包括在使含有所述聚合物的細(xì)胞培養(yǎng)基與所述細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面 接觸之前向含有所述聚合物的細(xì)胞培養(yǎng)基引入細(xì)胞。
[0010] 本文所述的細(xì)胞培養(yǎng)制品、組合物或方法的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式提供了優(yōu)于現(xiàn)有 的細(xì)胞培養(yǎng)制品、組合物或用于產(chǎn)生經(jīng)被覆的細(xì)胞培養(yǎng)制品的方法的一個(gè)或多個(gè)優(yōu)勢(shì)。例 女口，因?yàn)楸桓矊邮峭耆铣傻模錄]有如下問題：批次差異、免疫應(yīng)答、有限的保存期和使細(xì) 胞暴露于可能傳遞給患者的潛在有害的病毒或其他感染劑的風(fēng)險(xiǎn)。在各種實(shí)施方式中，在 一般的細(xì)胞培養(yǎng)條件下，所述覆層由細(xì)胞培養(yǎng)基中存在的膚聚合物原位形成。結(jié)合W下附 圖，對(duì)W下詳述部分進(jìn)行閱讀，可W很容易地理解該些優(yōu)點(diǎn)W及其它的優(yōu)點(diǎn)。
[0011] 附圖簡(jiǎn)要說明
[0012] 圖1是制備偶聯(lián)有細(xì)胞粘附多膚的聚（MA-PEG4-VN)均聚物的反應(yīng)方案。
[001引圖2是制備偶聯(lián)有細(xì)胞粘附多膚的聚（HEM-共聚-MA-PEG4-VN)共聚物的反應(yīng) 方案。
[0014] 圖3A-B是經(jīng)被覆制品的側(cè)視示意圖。
[0015] 圖4A-C是有孔的細(xì)胞培養(yǎng)制品的截面示意圖。未被覆（4A);被覆的表面（4B) 及被覆的表面和側(cè)壁（4C)。
[0016] 圖5a-c是在含有或不含粘附補(bǔ)充劑的化學(xué)限定的培養(yǎng)基中不同表面上培養(yǎng)的人 間充質(zhì)干細(xì)胞OiMSC)的圖像；（a)在用Mesen化It-XF粘附基質(zhì)（MC-ASB)預(yù)被覆的TCT 表面上；化）在用0. 037mg/mlMC-ASB補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的TCT表面上；在用0. 0074mg/ml MC-ASB補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的TCT表面上。
[0017] 圖6a-f是在含有或不含粘附補(bǔ)充劑的化學(xué)限定的培養(yǎng)基中不同表面上培養(yǎng)的 hMSC的圖像；（a)在聚肥MA-共聚-VN預(yù)被覆的Cel舊ind飯表面上；化）在不含粘附補(bǔ)充劑 的CeUBind?表面上；（C)在用0. 006mg/ml聚肥MA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的CeUBind?. 表面上；（d)在用0.012mg/ml聚肥MA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的Cel舊ind?表面上；（e)在 用0. 025mg/ml聚肥MA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的Cel舊ind?表面上；（f)在用0. 050mg/ml 聚HEMA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的CenBind⑥表面上。
[0018]圖7a-i是在含有或不含粘附補(bǔ)充劑的化學(xué)限定的培養(yǎng)基中不同表面上培養(yǎng)的 結(jié)晶紫染色的hMSC的圖像；(a)在用MC-ASB預(yù)被覆的TCT表面上；化）在用0. 037mg/ mlMC-ASB補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的TCT表面上；（c)在用0. 0074mg/mlMC-ASB補(bǔ)充的培養(yǎng)基 中的TCT表面上；（d)在聚肥M-共-VN預(yù)被覆的Cel舊ind坂表面上；（e)在不含補(bǔ)充劑的 Cel舊ind?表面上；訊在用0. 006mg/ml聚肥MA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的CenBind?表 面上；（g)在用〇.〇12mg/ml聚肥MA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的Cel舊ind飯衰面上；化）在用 0. 025mg/ml聚肥MA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的Cel舊ind飯表面上；a) (C)在用0. 050mg/ ml聚HEMA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的CeUBind?表面上。
[0019] 圖8是顯示在化學(xué)限定的培養(yǎng)基中各種表面上培養(yǎng)的活hMSC的百分比的柱形圖。
[0020] 圖9是顯示在化學(xué)限定的培養(yǎng)基中各種基質(zhì)上培養(yǎng)的hMSC的細(xì)胞密度（細(xì)胞/ cm2)的柱形圖。
[0021] 圖lOa-c是在含有或不含粘附補(bǔ)充劑的化學(xué)限定的培養(yǎng)基中各種表面上培養(yǎng)2天 的人胚胎干細(xì)胞化ESC)的圖像；（a)在用0. 025mg/ml聚肥MA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的 CenBind?表面上；化）在用0. 006mg/ml聚肥MA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的Cel舊ind坂表 面上；在MatHge曬被覆的對(duì)照表面上。
[0022] 圖lla-c是在含有或不含粘附補(bǔ)充劑的化學(xué)限定的培養(yǎng)基中各種表面上培養(yǎng)4天 的hESC的圖像；(a)在用0.025mg/ml聚肥MA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的Cel舊ind?表面上； 化）在用0. 006mg/ml聚肥MA-共-VN補(bǔ)充的培養(yǎng)基中的CenBind飯表面上；在Matrige瞄 被覆的對(duì)照表面上。
[0023] 圖12是顯示在各種表面上培養(yǎng)的hESC的平均細(xì)胞數(shù)目的柱形圖。
[0024] 附圖不一定是按比例繪制的。圖中使用的相同附圖標(biāo)記表示相同的部分、步驟等。 但應(yīng)理解，在特定的附圖中使用附圖標(biāo)記表示一個(gè)部分并不會(huì)對(duì)另一附圖中用相同附圖標(biāo) 記標(biāo)出的部分構(gòu)成限制。此外，用不同的附圖標(biāo)記表示各部分并不表明附圖標(biāo)記不同的部 分不能相同或相似。
[00幼發(fā)明詳述
[0026] 在W下詳述中，參照構(gòu)成說明書的一部分的附圖，W示意性方式描述本發(fā)明的裝 置、系統(tǒng)和方法的幾種【具體實(shí)施方式】。應(yīng)理解，可W在不偏離本發(fā)明的范圍或精神的前提 下，可構(gòu)思和實(shí)現(xiàn)其它的實(shí)施方式。因此，W下發(fā)明詳述不應(yīng)理解為限制性的。
[0027] 除非另外說明，本文使用的所有科學(xué)和技術(shù)術(shù)語(yǔ)的含義是本領(lǐng)域通用的含義。本 文提供的定義是用來幫助理解本文經(jīng)常用到的某些術(shù)語(yǔ)，不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成限制。
[0028] 在本說明書和權(quán)利要求書中所用的單數(shù)形式"一個(gè)"、"一種"和"該"包括具有多 個(gè)所指對(duì)象的實(shí)施方式，除非文中有明確的相反表示。如本說明書和所附權(quán)利要求書所用， "或"字通常在其包括"和/或"的含義上使用，除非文中有明確的相反表示。
[002引在本文中，"具有"、"含有"、"包括"、"包含"、"含"、"擁有"等在其開放含義上使用， 通常表示"包括但不限于"。應(yīng)當(dāng)理解，"主要由……組成"、"由……組成"等涵蓋在術(shù)語(yǔ)"包 括"等的范圍之內(nèi)。
[0030] 當(dāng)涉及單體或聚合物和多膚時(shí)，本文使用的"偶聯(lián)的"表示多膚與聚合物或單體直 接或間接（例如，通過間隔子）共價(jià)結(jié)合。
[0031] 本文使用的"單體"表示能夠與另一個(gè)單體聚合的化合物，（不論該"單體"與另一 個(gè)單體是相同還是不同的化合物）。
[0032] 在本文中，"（甲基）丙帰酸醋單體"表示甲基丙帰酸醋單體或者丙帰酸醋單體。 在本文中，"（甲基）丙帰醜胺單體"表示甲基丙帰醜胺或者丙帰醜胺單體。（甲基）丙帰 酸醋和（甲基）丙帰醜胺單體包含至少一個(gè)帰鍵式不飽和部分。在本文中，"聚（甲基）丙 帰酸醋"表示由包括至少一種（甲基）丙帰酸醋單體的一種或多種單體形成的聚合物。在 本文中，"聚（甲基）丙帰醜胺"表示由包括至少一種（甲基）丙帰醜胺單體的一種或多種 單體形成的聚合物。
[0033] 本文使用的與偶聯(lián)有多膚的聚合物"基本相似"的不偶聯(lián)多膚的聚合物是W與偶 聯(lián)有多膚的聚合物相同的方式形成的聚合物，除了不包含多膚W外。例如，多膚可W在聚 合物形成之后通過移接與該聚合物偶聯(lián)。在該類情況中，并不偶聯(lián)多膚的基本相似的聚合 物是未經(jīng)移接的聚合物。通過其他實(shí)施例的方式，單體可W由多膚衍生化并且該多膚可W 在單體聚合或共聚合時(shí)被納入該聚合物中。在該類情況中，不偶聯(lián)多膚的基本相似的聚合 物是在與偶聯(lián)有多膚的聚合物相同的條件下形成的聚合物，除了該單體不由多膚衍生化W 外。
[0034] 在本文中用單字母氨基酸代碼或H字母氨基酸代碼表示多膚序列。該些代碼可W 互換使用。
[0035] 在本文中，"膚"和"多膚"表示氨基酸序列，它們可W通過化學(xué)方式合成或者可W 重組衍生，但是它們無法W完整蛋白質(zhì)的形式從動(dòng)物來源分離。出于本發(fā)明的目的，膚和多 膚不是完整的蛋白質(zhì)。膚和多膚可W包括作為蛋白質(zhì)片段的氨基酸序列。例如，膚和多膚可 W包括被稱為細(xì)胞粘附序列（如RGD)的序列。多膚可W具有任何合適的長(zhǎng)度，例如長(zhǎng)度為 3-30個(gè)氨基酸。多膚可W進(jìn)行己醜化（如Ac-LysGlyGly)或者醜胺化（如SerLysSer-NHs) W保護(hù)其自身免于被例如外膚酶破壞?？蒞理解，在描述某種序列的時(shí)候，也考慮了該些修 飾形式。
[0036] 在本文中，"化學(xué)限定的培養(yǎng)基"表示不含具有未知組成的組分的細(xì)胞培養(yǎng)基。在 各實(shí)施方式中，化學(xué)限定的培養(yǎng)基可W不含蛋白質(zhì)或水解物。
[0037] 在實(shí)施方式中，本文所述的聚合物和多膚是"合成的"。即它們不含來源于動(dòng)物或 動(dòng)物提取物的成分。聚合物或單體可W與多膚偶聯(lián)（"聚合物-多膚"或"單體-多膚"）。 可W通過重組技術(shù)來合成或得到多膚，從而它們是合成的、非動(dòng)物來源的材料。
[0038] 本發(fā)明描述了用于培養(yǎng)細(xì)胞或用于被覆細(xì)胞培養(yǎng)制品的組合物和方法。該組合物 和方法包括偶聯(lián)有多膚的合成聚合物。合成的聚合物-膚是水溶性的，但是在一般哺乳動(dòng) 物細(xì)胞培養(yǎng)條件下（如約37C下在培養(yǎng)基中賠育）粘附于細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面。會(huì)理解細(xì) 胞培養(yǎng)條件不包括暴露于高于背景或環(huán)境的水平的福射，如UV福射。
[0039] 聚合物-膚可W作為粘附補(bǔ)充劑加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中或作為其部分?？蒞向含有 該聚合物-膚的細(xì)胞培養(yǎng)基中加入細(xì)胞，并且可將所述接種了細(xì)胞的培養(yǎng)基置于細(xì)胞培養(yǎng) 制品上或與細(xì)胞培養(yǎng)制品接觸。在細(xì)胞培養(yǎng)條件下，例如，在約37C下在培養(yǎng)基中賠育，聚 合物-膚粘附于所述細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面，并且細(xì)胞粘附于該聚合物膚的膚。因此，細(xì)胞通 過聚合物-膚粘附于細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面。
[0040] 在本文所述的實(shí)施方式中，相對(duì)于使不含聚合物-膚的培養(yǎng)基中的細(xì)胞與已經(jīng)用 聚合物-膚預(yù)被覆的制品接觸，通過向培養(yǎng)基加入聚合物-膚并且與未被覆的細(xì)胞培養(yǎng)制 品接觸增強(qiáng)了細(xì)胞對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)制品表面的粘附。
[00川合成的聚合物-膚
[0042]任何合適的偶聯(lián)有多膚的水溶性聚合物均可W用作細(xì)胞培養(yǎng)基粘附補(bǔ)充劑，前提 是當(dāng)在一般細(xì)胞培養(yǎng)條件下于培養(yǎng)基中賠育時(shí)，聚合物粘附于細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面。在實(shí) 施方式中，本文所述的合成的聚合物和偶聯(lián)的多膚可溶于低溫（例如，低于2(TC)或室溫 (25C)下的水中但當(dāng)暴露于一般的細(xì)胞培養(yǎng)條件（例如，約37C)時(shí)變得牢固粘附至基 質(zhì)。在實(shí)施方式中，在室溫左右的溫度（例如，約25C)下，合成的聚合物和偶聯(lián)的多膚變 得牢固粘附至基質(zhì)。可W對(duì)合成的聚合物和偶聯(lián)的多膚進(jìn)行修飾W得到任何需要的溫度下 的基質(zhì)粘附。在實(shí)施方式中，聚合物不含交聯(lián)劑或交聯(lián)，但是當(dāng)與水性培養(yǎng)基（諸如細(xì)胞培 養(yǎng)基）中的基質(zhì)接觸時(shí)，它們粘附于細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)。不需要經(jīng)過高于一般背景福射水平的 福射水平（例如UV福射）就可產(chǎn)生聚合物-多膚與基質(zhì)的粘附。
[0043]本文所述的偶聯(lián)有多膚的聚合物可W在室溫或更低的溫度下溶于水。然而，在實(shí) 施方式中，不偶聯(lián)多膚的基本相似的聚合物在室溫或更低的溫度下不溶于水。在該類實(shí)施 方式中，多膚使偶聯(lián)有多膚的聚合物溶于水。在實(shí)施方式中，不偶聯(lián)多膚的基本相似的聚合 物在細(xì)胞培養(yǎng)溫度（其通常是37C，但可W更低，諸如室溫（25C))下不溶于水。也可希 望聚合物在37C或細(xì)胞培養(yǎng)需要的溫度下可在水中溶脹，W得到合適的細(xì)胞培養(yǎng)模量。
[0044]可W通過使用任何合適的單體的任何合適的方法來形成偶聯(lián)有多膚的聚合物。在 實(shí)施方式中，選擇用于形成聚合物的一種或多種單體和用于形成聚合物的反應(yīng)機(jī)制（例 女口，逐步聚合或縮聚，或鏈?zhǔn)骄酆匣蚣映删酆希﹣硇纬删哂芯€性聚合物主鏈的聚合物。在實(shí) 施方式中，選擇用于形成聚合物的一種或多種單體和用于形成聚合物的反應(yīng)機(jī)制來形成具 有支化聚合物主鏈的聚合物。支化聚合物可W不含交聯(lián)。在實(shí)施方式中，選擇用于形成聚 合物的一種或多種單體和用于形成聚合物的反應(yīng)機(jī)制來形成星狀（star)。為了形成支化 或星狀聚合物，多官能單體可W與單官能單體聯(lián)合使用。形成支化或樹突或星狀聚合物的 合適的反應(yīng)方案見述于，例如Konkolewicz等，Den化iticandhyperbranchedpolymers frommacromolecularunits：ElegantApproachestotheSynthesisofFunctional Polymers,Macromolecules(從大分子單元形成樹突和高分支聚合物：功能性聚合物合成 的極佳方法），2011，44 ;7067-7087。當(dāng)然可W使用任何其他合適的技術(shù)。
[0045]在許多實(shí)施方式中，用于形成聚合物的單體含有帰鍵式不飽和基團(tuán)，諸如（甲基） 丙帰酸醋、（甲基）丙帰醜胺、馬來醜亞胺、富馬酸醋、己帰諷等。所述聚合物可W是均聚物 或共聚物?？蒞選擇單體，從而聚合物與多膚偶聯(lián)時(shí)在37°C、25°C等溫度下不溶或微溶于 水，但是在4°C-25°C、4°C-15C或2(TC等的范圍內(nèi)可溶于水。
[0046]在各種實(shí)施方式中，使用的單體是式（I)的（甲基）丙帰酸醋單體：
[0047]

【權(quán)利要求】
1. 一種水性細(xì)胞培養(yǎng)基組合物，所述組合物包含： 用于支持哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的水性細(xì)胞培養(yǎng)溶液；和 溶解于所述水性細(xì)胞培養(yǎng)溶液的與多肽偶聯(lián)的合成聚合物； 其中所述與多肽偶聯(lián)的合成聚合物用于在細(xì)胞培養(yǎng)條件下粘附于細(xì)胞培養(yǎng)制品的表 面，并且 其中在細(xì)胞培養(yǎng)條件下在細(xì)胞培養(yǎng)表面上孵育所述水性細(xì)胞培養(yǎng)基組合物導(dǎo)致所述 與多肽偶聯(lián)的合成聚合物對(duì)所述表面的粘附。
2. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述細(xì)胞培養(yǎng)基組合物是化學(xué)限定的組 合物。
3. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述聚合物具有線性主鏈并且沒有交聯(lián)， 其中在20°C或更低溫度下，所述與多肽偶聯(lián)的合成聚合物溶于水，并且 其中所述組合物基本不含有機(jī)溶劑。
4. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述聚合物由包含偶聯(lián)的多肽的至少一 種單體形成。
5. 如權(quán)利要求4所述的組合物，其特征在于，所述包含偶聯(lián)的多肽的至少一種單體是 甲基丙烯酸。
6. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述聚合物由（i)與所述多肽偶聯(lián)的甲基 丙烯酸和（ii)甲基丙烯酸羥乙酯的聚合形成。
7. 如權(quán)利要求6所述的組合物，其特征在于，與所述多肽偶聯(lián)的甲基丙烯酸和所述甲 基丙烯酸羥乙酯的摩爾比為1 : 50至1 : 1。
8. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述聚合物由甲基丙烯酸羥乙酯和 MAA-PE04-多肽的聚合形成，其中MMA是甲基丙烯酸，并且PEO是聚環(huán)氧乙烷。
9. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述多肽相對(duì)于所述所述與多肽偶聯(lián)的 聚合物的重量百分比超過10%。
10. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述多肽是細(xì)胞粘附性多肽。
11. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述多肽包含RGD序列。
12. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述多肽是玻連蛋白多肽。
13. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO :27的氨基酸 序列。
14. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述與多肽偶聯(lián)的聚合物的分子量為10 千道爾頓-1000千道爾頓。
15. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物的pH為7-8,并且所述組合 物還包含： 葡萄糖；和 一種或多種氨基酸。
16. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物還包含細(xì)胞。
17. -種方法，所述方法包括： 向水性細(xì)胞培養(yǎng)基中引入具有共價(jià)連接的多肽的合成聚合物以產(chǎn)生含有聚合物的細(xì) 胞培養(yǎng)基， 其中所述與多肽偶聯(lián)的合成聚合物用于在細(xì)胞培養(yǎng)條件下粘附于細(xì)胞培養(yǎng)制品的表 面； 在所述細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面上設(shè)置含有所述聚合物的細(xì)胞培養(yǎng)基以產(chǎn)生經(jīng)被覆的制 品；和 在細(xì)胞培養(yǎng)條件下在所述培養(yǎng)基中孵育所述經(jīng)被覆的制品以使所述與多肽偶聯(lián)的合 成聚合物粘附于所述細(xì)胞培養(yǎng)制品的表面。
18. 如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞培養(yǎng)基組合物是化學(xué)限定的組 合物。
19. 如權(quán)利要求18所述的方法， 其特征在于，所述聚合物具有線性主鏈并且不含交聯(lián)，其中具有所述共價(jià)連接的多肽 的所述聚合物在20°C或更低溫度下溶于水，并且其中所述水性溶液基本不含有機(jī)溶劑。
20. 如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，所述基質(zhì)的表面具有0° -50°的水接觸 角。
【文檔編號(hào)】C12N5/071GK104395457SQ201380016144
【公開日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2013年1月31日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月2日
【發(fā)明者】S·J·卡拉西, D·亨利, J·J·凱利, M·A·劉易斯, 周悅 申請(qǐng)人:康寧股份有限公司