一種用于紅百合組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種紅百合的組織培養(yǎng)中各個(gè)階 段的培養(yǎng)基。本發(fā)明篩選出用于紅百合組織培養(yǎng)中不同時(shí)期的最佳培養(yǎng)基，確定了培養(yǎng)基 中各激素的配比，按照本發(fā)明的配方配制的培養(yǎng)基可滿足了紅百合各個(gè)時(shí)期的營(yíng)養(yǎng)需要和 生長(zhǎng)發(fā)育。
【背景技術(shù)】
[0002] 紅百合是百合科，多年生草本，為百合之異種?；ò昙t色，花期5-8月。百合屬植 物種類全世界約有100多種，我國(guó)原產(chǎn)約有55種。紅百合就生長(zhǎng)在內(nèi)蒙古干旱、半干旱地 區(qū)，有頑強(qiáng)的生命力，可以在野外順利越冬，在雨水少、無澆灌的情況下也能正常生長(zhǎng)，在性 能和美觀上都能達(dá)到綠化的要求，可以在抗旱綠化景觀中加以利用和推廣。但由于來自人 類或非人類兩方面的威脅，使其種群數(shù)量存在著自然退化問題并且組培擴(kuò)繁中出現(xiàn)玻璃化 現(xiàn)象導(dǎo)致工廠化育苗數(shù)量受限。解決的辦法就是改良現(xiàn)有對(duì)百合的組織培養(yǎng)方法，這是快 速繁殖、脫毒復(fù)壯和降低玻璃化的有效方法。
[0003] 百合的組織培養(yǎng)始于20世紀(jì)50年代，自1957年Robb首次用百合鱗片進(jìn)行組織 培養(yǎng)獲得成功后，百合離體繁殖技術(shù)日益成熟，優(yōu)良品種的快速繁殖、新品種培育以及種質(zhì) 資源保存等方面發(fā)展較快。迄今為止，國(guó)內(nèi)外組織培養(yǎng)成功的百合種及品種已超過數(shù)百個(gè)， 但多見于報(bào)道的是用于鮮切花生產(chǎn)的栽培品種，對(duì)中國(guó)野生百合的組織培養(yǎng)研宄較少?？?結(jié)近20年來的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，僅十余種野生百合組織培養(yǎng)成功，有關(guān)紅百合的更是屈指可數(shù)。 紅百合的人工繁殖仍主要采用種球繁殖、分植小鱗莖及鱗片扦插法，繁殖數(shù)量有限且極易 導(dǎo)致病害感染和品質(zhì)退化。目前可用于解決退化問題和更新復(fù)壯的組織培養(yǎng)法繁殖研宄較 少，因此深入開展紅百合組織培養(yǎng)研宄已成為科研工作者亟待進(jìn)行的工作之一。
[0004] 用我國(guó)豐富的野生資源進(jìn)行品種創(chuàng)新，應(yīng)用多樣化的育種手段，在重視常規(guī)雜交 育種的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代生物技術(shù)手段進(jìn)行新品種選育，同時(shí)以脫毒組培種苗作為生產(chǎn)性 原種來進(jìn)行種球的工廠化開發(fā)，是百合組織培養(yǎng)的發(fā)展方向。組織培養(yǎng)法繁殖取材方便，不 受自然條件的限制，可以不斷進(jìn)行大量繁殖，是紅百合引種栽培、快速繁殖、脫毒復(fù)壯以及 新品種培育的最有效方法，可以在短期內(nèi)獲得大量小苗，解決了栽培中種源較少的問題，為 紅百合今后的研宄以及規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。
[0005] 組織培養(yǎng)在離體培養(yǎng)條件下，不同植物以及同種植物不同部位的組織細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng) 要求不同，只有滿足了它們各自的特殊要求，才能更好地生長(zhǎng)發(fā)育。掌握培養(yǎng)基的配制及篩 選方法是取得組培成功的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。本發(fā)明系統(tǒng)地研宄了紅百合組培中不同階段的最 佳培養(yǎng)基。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 組織培養(yǎng)的完整過程一般分為制定培養(yǎng)方案、外植體選擇與處理、接種、初代培 養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、壯苗與生根培養(yǎng)、試管苗的馴化移栽等幾個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)。組織培養(yǎng)在離體培養(yǎng) 條件下，不同植物以及同種植物不同部位的組織細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不同，只有滿足了它們各 自的特殊要求，才能更好地生長(zhǎng)發(fā)育。而掌握培養(yǎng)基的配制及篩選方法是取得組培成功的 關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。同時(shí)在實(shí)驗(yàn)室條件下，降低其玻璃化是一項(xiàng)需實(shí)踐去摸索和探討的新課題。 在制定本項(xiàng)方案時(shí)可以參考的資料不多，都必須通過試驗(yàn)來逐一解決，關(guān)鍵要解決外植體 取材部位、時(shí)期，各培養(yǎng)時(shí)期培養(yǎng)基的選擇，培養(yǎng)條件以及成苗后快繁技術(shù)等。本發(fā)明以開 發(fā)利用，降低成本為目標(biāo)，以形成工廠化、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)為目的，制定相應(yīng)的工作計(jì)劃和實(shí)施 辦法。
[0007] 本發(fā)明的目的是篩選出用于紅百合組織培養(yǎng)中不同時(shí)期的最佳培養(yǎng)基，確定了培 養(yǎng)基中各激素的配比，按照本發(fā)明的配方配制的培養(yǎng)基可滿足了紅百合各個(gè)時(shí)期的營(yíng)養(yǎng)需 要和生長(zhǎng)發(fā)育。
[0008] 這是一項(xiàng)新穎而富于創(chuàng)造性的應(yīng)用研宄，在進(jìn)行了信息搜集、匯總與分析的基礎(chǔ) 上制定了實(shí)施方案，全面、多方位的進(jìn)行組培實(shí)驗(yàn)，在此主要介紹與本申請(qǐng)有關(guān)的篩選初代 誘導(dǎo)一繼代增值一生根培養(yǎng)等不同時(shí)期的培養(yǎng)基。使初代、增殖、生根各個(gè)時(shí)期的培養(yǎng)達(dá)到 最佳效果。
[0009] 本發(fā)明的實(shí)施方案包含紅百合整個(gè)組織培養(yǎng)過程中各生育期的最佳培養(yǎng)基，它們 是經(jīng)過周密、反復(fù)多次試驗(yàn)得出的，是在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上根據(jù)紅百合各生育期的需要 添加了不同類型的植物生長(zhǎng)劑和不同的配比。
[0010] 在本發(fā)明的實(shí)施方案中，提供了一種紅百合組織培養(yǎng)過程各階段所需的培養(yǎng)基， 其特征在于，該培養(yǎng)基由初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基、結(jié)球培養(yǎng)基組成。這些 紅百合組培各個(gè)階段最佳培養(yǎng)基是經(jīng)過比較試驗(yàn)篩選出的。
[0011] 本發(fā)明的實(shí)施方案之一是提供了一種紅百合的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BAI.Omg/ L+NAA0.lmg/L，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基不但誘導(dǎo)率高，而且每個(gè)外植體新增芽數(shù)多，分化率最高，其 分化率可達(dá)82. 6%。
[0012] 本發(fā)明的實(shí)施方案之一是提供了一種紅百合的增殖培養(yǎng)基MS+6-BA2. 5mg/ L+NAAO. 06mg/L。
[0013] 本發(fā)明的實(shí)施方案之一是提供了一種紅百合生根培養(yǎng)基：1/2MS+IBA0.05mg/ L+ACO. 5g/L。該生根培養(yǎng)基生根效果較好，生根率達(dá)92. 9%。生根基部可新增帶根的叢生 芽，平均可達(dá)3-4個(gè)?？梢姷望}濃度對(duì)紅百合根的生長(zhǎng)有利。
[0014] 在本發(fā)明實(shí)施方案中，在本領(lǐng)域技術(shù)人員公知范圍內(nèi)，NAA、6-BA、IBA分別是萘乙 酸、6-芐氨基嘌呤、吲哚丁酸的簡(jiǎn)稱。
[0015] 本發(fā)明選出的紅百合整個(gè)組織培養(yǎng)過程中各生育期的最佳培養(yǎng)基能充分滿足了 紅百合各個(gè)時(shí)期的營(yíng)養(yǎng)需要和生長(zhǎng)發(fā)育，是保證紅百合組織培養(yǎng)成功實(shí)施，達(dá)到流程化生 產(chǎn)的關(guān)鍵和核心，為紅百合再生體系的建立和規(guī)?；a(chǎn)提供了強(qiáng)有力的支持。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 實(shí)施例1.紅百合的材料和篩選統(tǒng)計(jì)方法
[0017] 1. 1、材料
[0018] 實(shí)驗(yàn)用的紅百合采自呼和浩特市近郊區(qū)大青山，將采集到的鱗莖種植于本公司的 試驗(yàn)苗圃，根據(jù)試驗(yàn)進(jìn)展、不同時(shí)期取樣并隨時(shí)取樣補(bǔ)充。采用紅百合鱗片，沖洗去掉泥土， 在超凈臺(tái)上放入無菌容器中，在每升滴加2-3滴"吐溫-20"的洗滌劑溶液中浸泡60s，轉(zhuǎn) 入75 %的酒精中浸泡30s，再用0. 2 %的升汞溶液處理25min，無菌水淋洗3-4次，無菌濾紙 上吸干水分，直接接入預(yù)先配制好的培養(yǎng)基中。
[0019] 1.2、統(tǒng)計(jì)計(jì)算公式
[0020] 成活率=(有生活力的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù)）X100%
[0021] 初代芽誘導(dǎo)率=(出芽的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù)）X100%
[0022] 繼代增殖倍數(shù)=(誘導(dǎo)出的叢生芽數(shù)/接入單株芽的總數(shù)）X100%
[0023] 生根率=(分化根的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù)）X100%
[0024] L3、方法、結(jié)果與分析
[0025] 以MS為基本培養(yǎng)基，用3. 5g/L的卡拉膠作固化劑，3 %的食用白糖代替蔗糖作為 碳源，以自來水代替蒸餾水，分別添加不同配比的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素進(jìn)行培養(yǎng)基的篩選。
[0026] 實(shí)施例2.紅百合組培各個(gè)階段最佳培養(yǎng)基的篩選
[0027] 2. 1誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基的選擇
[0028] 將 6-BA的濃度設(shè) 0? 2mg/L、0. 5mg/L、l. 0mg/L、l. 5mg/L、2.Omg/L五個(gè)濃度梯度， NAA的濃度設(shè)0?lmg/L、0. 2mg/L、0. 3mg/L、0. 5mg/L四個(gè)濃度梯度，進(jìn)行不同組配，接種時(shí)每 瓶接一片鱗莖，觀察鱗片在不同培養(yǎng)基上不定芽的發(fā)生情況。
[0029] 從表1可見，7種激素組合均可誘導(dǎo)紅百合分化小鱗莖，但各個(gè)組合的分化率不 同，3號(hào)MS+6-BAI. 0mg/L+NAA0.lmg/L是紅百合鱗片培養(yǎng)基最佳的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，不但誘導(dǎo) 率高，而且每個(gè)外植體新增芽數(shù)多，分化率最高，其分化率可達(dá)82. 6%。結(jié)果如表1所示。
[0030] 表1激素濃度及其組合對(duì)紅百合鱗片不定芽誘導(dǎo)的影響
[0031]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 紅百合組織培養(yǎng)過程各階段所需的培養(yǎng)基，其特征在于，該培養(yǎng)基由初代誘導(dǎo)培養(yǎng) 基，增殖培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)基組成。
2. 權(quán)利要求1中所述的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其組成為含lmg/L 6-BA，0. lmg/LNAA的MS培 養(yǎng)基。
3. 權(quán)利要求1中所述的增殖培養(yǎng)基，其組成為含2. 5mg/L 6-BA，0. 06mg/LNAA的MS培 養(yǎng)基。
4. 權(quán)利要求1中所述的生根培養(yǎng)基，其組成為含0. 05mg/L IBA，0. 5g/LAC的1/2MS培 養(yǎng)基。
【專利摘要】本發(fā)明篩選出用于紅百合組織培養(yǎng)中不同階段的最佳培養(yǎng)基，確定了培養(yǎng)基中各激素的配比，按照本發(fā)明的配方配制的培養(yǎng)基可滿足了紅百合各個(gè)時(shí)期的營(yíng)養(yǎng)需要和生長(zhǎng)發(fā)育。這些培養(yǎng)基分別為由MS、1.0mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA組成的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基，由MS、2.5mg/L 6-BA、0.06mg/L NAA組成的繼代增殖培養(yǎng)基，由1/2MS、0.05mg/L IBA，0.5g/L AC組成的生根培養(yǎng)基。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號(hào)】CN104604676
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410842988
【發(fā)明人】馬懷林, 王召明, 王林和, 高秀梅, 王君芳, 楊紅艷, 劉亞玲, 鄭麗娜, 苑峰
【申請(qǐng)人】?jī)?nèi)蒙古和信園蒙草抗旱綠化股份有限公司
【公開日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2014年12月30日