專利名稱：一種恒化高密度培養(yǎng)趨磁細(xì)菌高產(chǎn)磁小體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及納米生物技術(shù)研究領(lǐng)域，具體地涉及一種恒化高密度培養(yǎng)趨 磁細(xì)菌，高產(chǎn)磁小體的方法。
背景技術(shù)：
趨磁細(xì)菌是一類在胞內(nèi)形成納米磁小體的特殊細(xì)菌，其形成的磁小體具 有晶型穩(wěn)定、體積小、有外膜包被而不易團聚等特點，在免疫檢測、固定化 酶、核酸分離純化等方面顯示出優(yōu)于其它材料的優(yōu)勢，特別是在腫瘤的靶向 和基因治療上具有重要的應(yīng)用前景。
但由于趨磁細(xì)菌培養(yǎng)困難，難以通過大量培養(yǎng)趨磁細(xì)菌獲得足夠的磁小 體用于基礎(chǔ)及應(yīng)用研究，磁小體至今仍未商業(yè)化應(yīng)用。趨磁細(xì)菌大量培養(yǎng)的
問題主要體現(xiàn)在如下三個方面(l)培養(yǎng)周期長，根據(jù)文獻報道的最短培養(yǎng) 時間為50小時，最長的達10天之久；(2)由于所使用培養(yǎng)基中碳、氮源濃度 的限制，致使培養(yǎng)密度不高，磁小體產(chǎn)量很低；(3)細(xì)胞密度和磁小體產(chǎn)量 之間的關(guān)系有待于進一步協(xié)調(diào)，在某些條件下細(xì)胞密度得到了明顯提高，但 磁小體的產(chǎn)量并不隨之增加。
本發(fā)明著眼于上述問題，深入研究了培養(yǎng)基組分、溶解氧等因素對趨磁 細(xì)菌生長和磁小體合成的影響，摸索出最佳培養(yǎng)條件，實現(xiàn)了通過高密度培 養(yǎng)趨磁細(xì)菌來大量生產(chǎn)磁小體的目的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種恒化高密度培養(yǎng)趨磁細(xì)菌、高產(chǎn)磁小體的方法， 以實現(xiàn)趨磁細(xì)菌的高密度培養(yǎng)和磁小體的大量生產(chǎn)。
本發(fā)明提供了一種恒化高密度培養(yǎng)趨磁細(xì)菌、高產(chǎn)磁小體的方法，它釆 用深層發(fā)酵培養(yǎng)法培養(yǎng)趨磁細(xì)菌，發(fā)酵培養(yǎng)基中含有碳源、氮源和鐵源，在 發(fā)酵過程中分階段控制溶解氧在0 2250ppb,并通過補料控制pH值在6.5 ~ 7.5。
其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源是1 30mmol/L的乳酸鈉，氮源是 3 18mmol/L的銨鹽或硝酸鹽，鐵源是20~500pmol/L的檸檬酸鐵。實驗證明， 相對于硝酸鹽，銨鹽更有利于細(xì)胞生長，因此，所述氮源優(yōu)選銨鹽，如氯化 銨。
發(fā)酵前期控制溶解氧為5 2250ppb,以促進細(xì)胞快速生長；然后隨著細(xì) 胞的生長，溶液內(nèi)的溶解氧逐漸消耗至O，此后始終控制溶解氧為O，便于胞 內(nèi)磁小體的積累。
發(fā)酵過程中pH值的控制范圍為6.5 7.5,通過補料調(diào)節(jié)pH可以實現(xiàn)恒
化培養(yǎng)，使發(fā)酵培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)始終處于恒定水平，維持細(xì)胞的快速生 長和磁小體的大量合成，實現(xiàn)磁細(xì)菌的高密度培養(yǎng)和高磁小體產(chǎn)量。
其中，所述補料使用的溶液含有銨鹽、檸檬酸鐵、乳酸鈉和乳酸。銨鹽 優(yōu)選氯化銨，優(yōu)選地，補料溶液中各組分的濃度分別為氯化銨20~100g/L，梓 檬酸鐵l~10g/L，乳酸鈉50 200g/L ，乳酸20 200g/L。更優(yōu)選地，補料溶液 中各組分的濃度分別為氯化銨50 60g/L，檸檬酸鐵4 6g/L,乳酸鈉 100 140g/L ,乳酸40 60g/L。
實驗證明，低濃度碳源有利于磁細(xì)菌細(xì)胞的快速生長和磁小體的合成， 因此發(fā)酵過程中恒定的低濃度乳酸鈉對于細(xì)胞的快速生長、縮短發(fā)酵周期是 必要的，且磁小體的大量合成與細(xì)胞的強生長能力直接相關(guān)。本發(fā)明在發(fā)酵 過程中乳酸鈉的總濃度恒定控制在2 20mmol/L,檸檬酸鐵的總濃度恒定控制 在20~500nmol/L。優(yōu)選地，發(fā)酵過程中乳酸鈉的總濃度恒定控制在2 5 mmol/L,村檬酸鐵的總濃度恒定控制在80~120|imol/L。
本發(fā)明的發(fā)酵過程參數(shù)控制為培養(yǎng)溫度25r 35'C， pH值6.5 7.5，攪 拌轉(zhuǎn)速50 500轉(zhuǎn)/分鐘，通氣量0.1 25L/min。
發(fā)酵培養(yǎng)前，先將菌種活化，制成種子液。釆用的培養(yǎng)基為乳酸鈉固體 和液體培養(yǎng)基，其組分和配比如下
乳酸鈉液體培養(yǎng)基(以1L計)
礦質(zhì)元素混合液 5~10ml
檸檬酸鐵(0.01 mol/L ) 2 10ml
80%乳酸鈉 0.1 6.5g
MgS04 . 7H20
硫代乙醇酸鈉 蒸餾水
K2HPO,
酵母粉
0.2 lg 0.5 5g 0.1~5g 0.1~0.5g
O.O卜O.lg
加蒸餾水至1L。
其中，礦質(zhì)元素混合液(Mineral elixir)是根據(jù)Wolin E.A., Wolin M丄& Wolfe R.S. 1963)， J. Biol. Chem., 238， 2882-2886公開的方法制成。
乳酸鈉固體培養(yǎng)基按0.75 2%的比例在乳酸鈉液體培養(yǎng)基中加入瓊脂 粉，制成乳酸鈉固體培養(yǎng)基。
活化方法如下
1 )用原始菌株在乳酸鈉固體培養(yǎng)基平板上劃線，培養(yǎng)皿用石蠟?zāi)?(parafilm )密封，30°C培養(yǎng)4 7天;
2) 挑單菌落，接種至含10ml乳酸鈉液體培養(yǎng)基試管中，用硅膠塞封住 試管口， 30°C，搖床100轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)24小時。
3) 從乳酸鈉液體培養(yǎng)基試管中取10ml菌液，接種至裝有90 ml乳酸鈉 液體培養(yǎng)基的250ml血清瓶中，用硅膠塞封住瓶口， 30°C,搖床100轉(zhuǎn)/分， 培養(yǎng)24小時。同樣條件下活化1 2次，制成種子液，使種子液最終細(xì)胞密度
為0.8 10D565腦。
釆用本發(fā)明所述的方法，實現(xiàn)了趨磁細(xì)菌的恒化高密度培養(yǎng)和磁小體的
大量生產(chǎn)，培養(yǎng)36~48小時的細(xì)胞密度為120D565nm，磁小體干重為 80 100mg/L,細(xì)胞密度和磁小體產(chǎn)量均超過已有文獻報道的最高值，并縮短 了發(fā)酵周期。不僅如此，恒化培養(yǎng)還有利于簡化操作，便于實現(xiàn)操作的自動 化，同時可避免培養(yǎng)過程中因碳源缺乏而引起的細(xì)胞自溶或生長停止，為細(xì) 菌磁小體的工業(yè)化生產(chǎn)奠定了堅實的基礎(chǔ)。


圖l是搖瓶中不同乳酸鈉濃度對磁螺菌生長的影響; 圖2是不同氮源對磁螺菌生長的影響；
圖3是發(fā)酵罐中不同乳酸鈉濃度對細(xì)胞生長的影響；
圖4是42L發(fā)酵罐上細(xì)胞生長曲線(初始轉(zhuǎn)速100rpm/分，通氣量0.3L/ 分)，國表示細(xì)胞生長曲線，參表示溶解氧變化曲線；
圖5是42L發(fā)酵罐上細(xì)胞生長曲線(初始轉(zhuǎn)速200rpm/分，通氣量2.0L/ 分)，國表示細(xì)胞生長曲線，*表示溶解氧變化曲線；
圖6是42L發(fā)酵罐上細(xì)胞生長曲線(初始轉(zhuǎn)速200rpm/分，通氣量1.0L/ 分)，畫表示細(xì)胞生長曲線，*表示溶解氧變化曲線；
圖7是42L發(fā)酵罐上細(xì)胞生長曲線和碳源和鐵源濃度變化曲線，A表示 乳酸濃度變化曲線，*表示細(xì)胞生長曲線，命表示F^+濃度變化曲線；
圖8是發(fā)酵培養(yǎng)的不同階段磁螺菌的電鏡觀察照片，a表示溶解氧下降為 0%時，b表示溶解氧下降為0%后的1-2小時，c表示溶解氧下降為0%后 的3-4小時，d表示溶解氧下降為0%后的15-16小時，e表示溶解氧下降為 0%后的24小時，f表示發(fā)酵結(jié)束時的磁小體整體照片。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的保護范圍。
以下實施例中所使用的藥品均為分析純。 實施例l趨磁細(xì)菌的活化
將原始菌株MSR-1 (購自德國微生物菌種保藏中心(DSMZ))活化，使 用的乳酸鈉液體培養(yǎng)基的成分如下所示
礦質(zhì)元素混合液5 ml
檸檬酸鐵(0.01mol/L)6ml
K2HP040.5 g
酵母粉(Oxoid )0.1 g
MgS04 . 7H200.1 g
NH4C10.6 g
硫代乙醇酸鈉0.05 g
80%乳酸鈉2.25 g
蒸餾水1000 ml
PH7.0
乳酸鈉固體培養(yǎng)基按0.75%的比例在乳酸鈉液體培養(yǎng)基中加入瓊脂粉， 制成乳酸鈉固體培養(yǎng)基。
活化和培養(yǎng)方法如下
用原始菌株在乳酸鈉固體培養(yǎng)基平板上劃線，培養(yǎng)皿用石蠟?zāi)?parafilm ) 密封，30'C培養(yǎng)5天。
挑單菌落，接種至含10ml乳酸鈉液體培養(yǎng)基試管中，用硅膠塞封住試管 口， 30°C，搖床100轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)24小時。
從乳酸鈉液體培養(yǎng)基試管中取10ml菌液，接種至裝有90 ml乳酸鈉液體 培養(yǎng)基的250ml血清瓶中，用硅膠塞封住瓶口， 30°C，搖床100轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng) 24小時。同樣條件下活化2次，制成種子液。 實施例2碳、氮源濃度對趨磁螺菌搖瓶及深層培養(yǎng)的影響
取種子液進行以下實驗
1) 搖瓶碳源濃度試驗
在250ml血清瓶中分別加入含10、 20、 30、 40、 5Ommol/L的乳酸鈉培 養(yǎng)基90ml，接入活化好的種子液，于30。C搖床100轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)24小時，測定 OD565nm，結(jié)果如圖l所示。顯然，含有1 3Ommol/L乳酸鈉的培養(yǎng)基都有促 進趨磁螺菌生長的作用，最適合的乳酸鈉濃度為20mmol/L,當(dāng)濃度超過 30mmol/L時則明顯抑制菌體生長。
2) 搖瓶氮源試驗
在兩只250ml血清瓶中分別加入乳酸鈉液體培養(yǎng)基90ml， 一組的培養(yǎng)基 成分如上所述，另一組是上述乳酸鈉培養(yǎng)基中的銨鹽被相同氮摩爾濃度的硝 酸鈉取代的乳酸鈉液體培養(yǎng)基，接入活化好的種子液，于3(TC搖床100轉(zhuǎn)/ 分培養(yǎng)，不同時間取樣測定OD565皿，結(jié)果如圖2所示。顯然，在培養(yǎng)前期， 銨鹽和硝酸鈉中的氮作為趨磁螺菌的氮源，具有相同的作用，但在細(xì)菌培養(yǎng) 后期，硝酸鹽對細(xì)菌的增長有一支作用。
3) 發(fā)酵罐中碳源濃度對菌體生長的影響
將600ml種子液加入7.5升自動發(fā)酵罐中，進行碳源濃度試驗，選用乳 酸鈉液體培養(yǎng)基，碳源乳酸鈉濃度分別為2.3mmol/L、 20mmol/L,其它成分
不變，培養(yǎng)條件如下溫度3(TC，通氣量為0.6升/分，攪拌轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分， 通過補料液(氯化銨50g/L，檸檬酸鐵10g/L,乳酸鈉100g/L,乳酸200g/L。) 調(diào)pH, pH控制在6.5 7.0之間，發(fā)酵過程中始終維持發(fā)酵罐中的乳酸鈉濃度 保持恒定，分別在接種后0、 4、 8、 12、 16、 20、 24、 26小時取樣，測定其 濃度，比較趨磁螺菌在不同濃度碳源條件下的生長情況。結(jié)果如圖3所示， 說明在恒定碳源濃度的情況下，培養(yǎng)基中低濃度的乳酸鈉(2.3mmol/L)比高 濃度的乳酸鈉(20mmol/L)生長快。
實施例3溶解氧(DO)與磁螺菌生長和磁小體合成之間的關(guān)系
在42L自動發(fā)酵罐中，裝入27L發(fā)酵培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的成分如下
礦質(zhì)元素混合液5 ml
檸檬酸鐵(0.01 mol/L)6ml
NH4C10.6g
80%乳酸鈉2.25g
K2HP040.5 g
酵母粉0.5g
MgS04 . 7H200.2 g
硫代乙醇酸鈉0.05 g
蒸僧水1000 ml
接種10%，通空氣培養(yǎng)，設(shè)定起始0.3L/分的通氣量和100轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速以維持溶氧濃度在較低水平，并將此時的溶解氧(DO)設(shè)置為100%( 500ppb)。 在此培養(yǎng)條件下，溶氧在發(fā)酵4小時后下降為0%,此時的細(xì)胞密度為 0.26OD565nm，為促進細(xì)胞生長，在培養(yǎng)14小時、20小時、28小時和40小時 時分別提高轉(zhuǎn)速40轉(zhuǎn)，以提高溶氧，但DO始終維持在0。/。;為了實現(xiàn)細(xì)胞的 快速生長和磁小體的大量合成，利用將含有氯化銨25g/L，檸檬酸鐵2g/L,乳 酸鈉50g/L ，乳酸20g/L的酸性溶液調(diào)節(jié)pH，將其控制在6.5-7.5，并補充營 養(yǎng)物質(zhì)，實現(xiàn)恒化培養(yǎng)，乳酸鈉的總濃度恒定控制在2~15 mmol/L,檸檬酸 鐵的總濃度恒定控制在20 100nmol/L,經(jīng)過54小時的發(fā)酵培養(yǎng)細(xì)胞密度可 達6.50D565nm，整個培養(yǎng)過程中生長曲線及溶氧曲線如圖4所示，最終磁小
體的產(chǎn)量為40.0mg/L (干重)，生產(chǎn)強度為17.5mg'"'day人在該條件下，由 于前期溶氧過低，細(xì)胞生長緩慢，延滯期較長(約20小時)。
為提高前期溶氧濃度以縮短生長延滯期，在上述條件基礎(chǔ)上，將初始轉(zhuǎn)速 和通氣提升為200轉(zhuǎn)/分和2.0L/分，并將此時的溶解氧(DO)設(shè)置為100%
(2250ppb)。在這一培養(yǎng)條件下，20小時后溶氧才下降為0%,此時的細(xì)胞 密度達到2.4 OD565nm，為使細(xì)胞獲得足夠的溶氧，在24小時，32小時和42 小時分別將通氣量提升為4L/分，8L/分和16L/分，但DO始終維持在0%;為
了實現(xiàn)細(xì)胞的快速生長和磁小體的大量合成，利用將含有氯化銨80g/L,檸檬 酸鐵85g/L,乳酸鈉200g/L,乳酸150g/L的酸性溶液調(diào)節(jié)pH,將其控制在 6.5-7.5,并補充營養(yǎng)物質(zhì)，實現(xiàn)恒化培養(yǎng)，當(dāng)乳酸鈉的總濃度恒定控制在10 20 mmol/L，杼檬酸鐵的總濃度恒定控制在400~500|imol/L,經(jīng)過48小時的發(fā)酵 培養(yǎng)，細(xì)胞密度可達12 OD565nm，磁小體干重為60.0mg/L,產(chǎn)物的生產(chǎn)強度 為30.0 mg.l+day—1。如圖5所示，細(xì)胞前期的生長速率明顯加快，延滯期大 大縮短。
由于磁騾菌為微好氧菌，前期溶氧過高，細(xì)胞生長同樣會受到限制，在 前面試驗數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，將初始通氣和轉(zhuǎn)速設(shè)定為1L/分和200轉(zhuǎn)/分，以 適當(dāng)降低初始的DO水平，并將此時的溶解氧(DO)設(shè)置為100%( 1200ppb)。 在這一培養(yǎng)條件下，12小時后溶氧才下降為0%,在發(fā)酵過程的20小時調(diào)整 通氣量為2 L/min， 28小時調(diào)整轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分，但DO始終維持在0%;為 了實現(xiàn)細(xì)胞的快速生長和磁小體的大量合成，利用將含有氯化銨50g/L,檸檬 酸鐵6g/L，乳酸鈉100g/L ，乳酸50g/L的酸性溶液調(diào)節(jié)pH，將其控制在 6.5-7.5，并補充營養(yǎng)物質(zhì)，實現(xiàn)恒化培養(yǎng)，當(dāng)乳酸鈉的總濃度恒定控制在2 5 mmol/L，杼檬酸鐵的總濃度恒定控制在80 120pmol/L,經(jīng)過36小時的發(fā)酵 培養(yǎng)，細(xì)胞密度可達12 0D565nm,磁小體干重為80.0mg/L，產(chǎn)物的生產(chǎn)強度 為53.3 mg.l+day-1。圖6是生長過程中細(xì)胞密度與溶解氧含量之間的關(guān)系， 圖7是生長過程乳酸鈉和檸檬酸鐵總濃度的變化和細(xì)胞密度之間的關(guān)系，如 圖6和圖7所示，通過溶解氧含量和營養(yǎng)物質(zhì)總濃度控制，細(xì)胞在前期的生 長速率進一步加快。磁小體產(chǎn)量和生產(chǎn)強度大幅度提高，分別是目前已知報
道最高產(chǎn)量的1.92和3.17倍(Jian-Bo S. et al. 2008， Appl. Microbiol. Biotl" 79(3)， 389-397)。
為了解溶解氧和磁小體合成之間的關(guān)系，在透射電子顯微鏡下觀察了不 同DO條件下培養(yǎng)的趨磁螺菌細(xì)胞，結(jié)果顯示，DO不同，磁螺菌合成磁小體 的情況也有所差異，如圖8所示，在DO下降為0%之前，含有磁小體的細(xì)胞 很少或沒有，極少數(shù)含有磁小體的細(xì)胞中所含磁小體的數(shù)目為5 10個；當(dāng) DO下降為0%后l-2個小時，100%的細(xì)胞內(nèi)含有磁小體，單個細(xì)胞內(nèi)所含磁 性顆粒的數(shù)目超20個；在隨后的發(fā)酵階段，DO始終控制在0。/。，細(xì)胞中磁 小體的個數(shù)隨發(fā)酵時間延長逐漸增多，至發(fā)酵結(jié)束，100%細(xì)胞內(nèi)合成了磁小 體，每個細(xì)胞內(nèi)磁小體數(shù)目為30-50個。 實施例4
取MS-1 (Mag"etos/ zW〃"w wag"etoto"/c)(購自德國微生物菌種保藏中心 (DSMZ))用實施例l的培養(yǎng)基，按實施例l的活化過程活化，制成種子液。
在42L自動發(fā)酵罐中，裝入27L發(fā)酵培養(yǎng)基，接種3L種子液，通空氣培養(yǎng)， 設(shè)定初始轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分，通氣速度2.0L/分，將此時的溶解氧(DO)設(shè)置 為100% (2250ppb)。在這一培養(yǎng)條件下，20小時后溶氧下降為0%，此時的細(xì) 胞密度達到2.40Dw，為使細(xì)胞獲得足夠的溶氧，在24小時，32小時和42 小時分別將通氣量提升為4L/分，8L/分和16L/分，但DO始終維持在0。/。，補料
維持恒化培養(yǎng)，經(jīng)過48小時的發(fā)酵培養(yǎng)，細(xì)胞密度可達120Ds65^，磁小體干
重為60mg/L,產(chǎn)物的生產(chǎn)強度為30 mg'r1 'day"。
權(quán)利要求
1、一種恒化高密度培養(yǎng)趨磁細(xì)菌的方法，它采用深層發(fā)酵培養(yǎng)法培養(yǎng)趨磁細(xì)菌，發(fā)酵培養(yǎng)基中含有碳源、氮源和鐵源，在發(fā)酵過程中分階段控制溶解氧在0～2250ppb，并通過補料控制pH值在6.5～7.5。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，利用深層發(fā)酵法培養(yǎng)前， 先將菌種活化，活化使用的培養(yǎng)基為乳酸鈉固體和液體培養(yǎng)基，其組分和配 比如下乳酸鈉液體培養(yǎng)基(以1L計)礦質(zhì)元素混合液 5~10ml檸檬酸鐵(0.01 mol/L ) 2 10ml80%乳酸鈉 0.1~6.5gNH4C1 0.2 lgK2HP04 0.5 5g酵母粉 0.1 5gMgS04 7H20 0.1 0.5g硫代乙醇酸鈉 0.01 0.1g蒸餾水 加蒸餾水至1LpH 6.5~7.5;乳酸鈉固體培養(yǎng)基按0.75 2%的比例在乳酸鈉液體培養(yǎng)基中加入瓊脂 粉，制成乳酸鈉固體培養(yǎng)基。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述碳源是l 30mmol/L 的乳酸鈉，氮源是3~18 mmol/L的銨鹽或硝酸鹽，鐵源是20 500|imol/L的檸檬酸鐵。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述氮源是3 18mmol/L 的銨鹽。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，發(fā)酵前期控制溶解氧為 5 2250ppb，當(dāng)溶解氧的濃度被消耗至O，則此后始終控制溶解氧為0。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述用于調(diào)節(jié)pH值的補 料溶液含有氯化銨20 100g/L，檸檬酸鐵l 10g/L,乳酸鈉50~200g/L，乳酸20 200g/L。
7、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述補料溶液中各組分的濃 度分別為氯化銨50~60g/L,檸檬酸鐵4 6g/L，乳酸鈉100~140g/L,乳酸 40~60g/L。
8、 根據(jù)權(quán)利要求l任一所述的方法，其特征在于，發(fā)酵過程中參數(shù)控制 為培養(yǎng)溫度25。C 35"C，攪拌轉(zhuǎn)速50 500轉(zhuǎn)/分鐘，通氣量0.1 ~ 25L/min。
9、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于發(fā)酵過程中乳酸鈉的總濃度 恒定控制在2 20mmol/L，檸檬酸鐵的總濃度恒定控制在20 500|imol/L。
10、 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于發(fā)酵過程中乳酸鈉的總濃 度恒定控制在2 5 mmol/L，檸檬酸鐵的總濃度恒定控制在80 120pmol/L。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種恒化高密度培養(yǎng)趨磁細(xì)菌高產(chǎn)磁小體的方法，它采用深層發(fā)酵培養(yǎng)法培養(yǎng)趨磁細(xì)菌，發(fā)酵培養(yǎng)基中含有碳源、氮源和鐵源，在發(fā)酵過程中分階段控制溶解氧，并通過調(diào)節(jié)pH值進行補料。該方法實現(xiàn)了趨磁細(xì)菌的恒化高密度培養(yǎng)和磁小體的大量生產(chǎn)，培養(yǎng)36～48小時的細(xì)胞密度為12OD_565nm，磁小體干重為80～100mg/L，并縮短了發(fā)酵周期。該方法為細(xì)菌磁小體的工業(yè)化生產(chǎn)奠定了堅實的基礎(chǔ)。
文檔編號C12N1/20GK101376900SQ200810223499
公開日2009年3月4日 申請日期2008年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月28日
發(fā)明者關(guān)國華, 陽 劉, 偉 姜, 揚 張, 穎 李, 李季倫, 田杰生 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)