專利名稱：一種dna釋放劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本項(xiàng)發(fā)明屬醫(yī)學(xué)生物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種提取DNA的釋放劑。
背景技術(shù)：
DNA在細(xì)胞中總是與各種蛋白質(zhì)結(jié)合在一起的。DNA的分離主要是指將DNA與蛋 白質(zhì)、多糖、脂肪等生物大分子物質(zhì)分開。在分離DNA時(shí)應(yīng)遵循以下原則保證DNA分子一 級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性；排除其他分子污染。 目前常用的HBV DNA提取方法有(1)煮沸發(fā)將50 100 的病毒裂解液與 50 ill 100 ill待測(cè)血清振蕩混勻，IO(TC煮沸10min， 4 放置30min 60min，高速離心， 吸取上清液進(jìn)行PCR擴(kuò)增。(2)濃集煮沸法將1001 200 ill的病毒促沉液與50 ill 100 ill待測(cè)血清振蕩混勻，高速離心IOmin，使病毒顆粒沉淀，棄去上清液，收集沉淀病毒， 然后加入病毒裂解液，IO(TC煮沸10min，高速離心5min 10min，吸取上清液進(jìn)行PCR擴(kuò) 增。(3)Trizo1裂解提取法將300iil 500iil Trizol裂解液與1001 50 待測(cè)血 清充分混勻，加入氯仿混勻后離心使分層，取上層液體與異丙醇混勻使DNA沉淀，用75%的 乙醇洗滌1次，65t:烤干10min，加洗脫液溶解，吸取上清液進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
以上3種方法需經(jīng)2 5次的離心、3 7次的開蓋等開放操作，提取30個(gè)標(biāo)本的 DNA約需1 3個(gè)小時(shí)，需嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)要求，不但費(fèi)時(shí)費(fèi)力，易導(dǎo)致操作過程中的污染、并且 導(dǎo)致核酸丟失的因素較多、檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性較差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，而提供一種無污染然、操作 簡(jiǎn)單、檢測(cè)率高的DNA釋放劑。 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案，將liU lOiU的DNA釋放劑和 10iil待測(cè)血清直接加到PCR擴(kuò)增管中，輕輕混勻，加lOiU 40iU無菌石蠟油， 置PCR擴(kuò)增儀60。C 100。C處理5min 15min，然后在3°C l(TC條件置lmin 5min，直 接加入PCR擴(kuò)增液，進(jìn)入PCR擴(kuò)增程序。
本發(fā)明的有益效果 本發(fā)明使HBV DNA完全釋放到液相，而且將待測(cè)血清中的蛋白等物質(zhì)封閉沉淀，消 除其對(duì)PCR擴(kuò)增的干擾，使血清直接從采血管中進(jìn)入PCR擴(kuò)增管，不需離心、不需振蕩、只需 一個(gè)吸頭即可完成DNA的提取過程。整個(gè)處理過程只需15min左右，不但操作快速、簡(jiǎn)便， 更重要的避免了操作過程中的污染問題，并且檢測(cè)結(jié)果具有良好的重復(fù)性，準(zhǔn)確反映血清 中病毒的含量。
具體實(shí)施方式

實(shí)施例1將5iU的DNA釋放劑和5iil待測(cè)血清直接加到PCR擴(kuò)增管中，輕輕混勻，加40ii1無菌石蠟油，置PCR擴(kuò)增儀85t:處理10min，然后在6t:條件置2min，直接加入PCR擴(kuò)增液，進(jìn)入PCR擴(kuò)增程序。
權(quán)利要求
一種DNA釋放劑，其特征在于將1μl～10μl的DNA釋放劑和1μl～10μl待測(cè)血清直接加到PCR擴(kuò)增管中，輕輕混勻，加10μl～40μl無菌石蠟油，置PCR擴(kuò)增儀60℃～100℃處理5min～15min，然后在3℃～10℃條件置1min～5min，直接加入PCR擴(kuò)增液，進(jìn)入PCR擴(kuò)增程序。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種DNA釋放劑，其特征在于將5 ill的DNA釋放劑和5 y 1 待測(cè)血清直接加到PCR擴(kuò)增管中，輕輕混勻，加40iU無菌石蠟油，置PCR擴(kuò)增儀85t:處理 10min，然后在6t:條件置2min，直接加入PCR擴(kuò)增液，進(jìn)入PCR擴(kuò)增程序。
全文摘要
一種DNA釋放劑屬于屬醫(yī)學(xué)生物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種提取DNA的釋放劑。本發(fā)明提供一種無污染然、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)率高的DNA釋放劑。本發(fā)明采用如下技術(shù)方案，將1μl～10μl的DNA釋放劑和1μl～10μl待測(cè)血清直接加到PCR擴(kuò)增管中，輕輕混勻，加10μl～40μl無菌石蠟油，置PCR擴(kuò)增儀60℃～100℃處理5min～15min，然后在3℃～10℃條件置1min～5min，直接加入PCR擴(kuò)增液，進(jìn)入PCR擴(kuò)增程序。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK101736077SQ200810179149
公開日2010年6月16日 申請(qǐng)日期2008年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月27日
發(fā)明者趙雪嬌 申請(qǐng)人:趙雪嬌