專利名稱：：用表面等離子共振技術(shù)檢測人血清腫瘤標志物的方法以及其中使用的芯片的制作方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明屬于人血清腫瘤標志物檢測領域。具體的，涉及一種用表面等離子共振技術(shù)(SurfacePlasmonResonance,SPR)檢測人血清肺瘤標志物的方法，具體而言，本發(fā)明涉及將SPR技術(shù)用于人血清肺瘤標志物的臨床檢測和it斷。由此實現(xiàn)了多種血清胂瘤標志物的同時檢測，并且顯著提高了檢測靈敏度及臨床檢測線性范圍的方法。本發(fā)明也涉及用于上迷方法的改良的SPR生物傳感器芯片，以及包含該芯片和核酸探針的試劑盒。
背景技術(shù)：
：表面等離子體共振技術(shù)(SPR)是利用在金屬膜/液面界面，由光的全反射引起的物理光學現(xiàn)象來分析分子間相互作用的技術(shù)。SPR儀由自動釆樣機械手、高分辨率的CCD照相儀和上面布有一個或多個流池的鍍金或鍍銀SPR生物傳感器芯片構(gòu)成。SPR技術(shù)在檢測、分析生物分子間的相互作用等方面得到廣泛的應用。SPR技術(shù)利用了能夠在某些金屬(特別是金、銀)界面上激發(fā)產(chǎn)生的表面等離子波。當入射光以大于臨界角的角度入射到金屬界面上時，發(fā)生全反射，在合適的角度下，入射光的平行矢量與表面等離子波的頻率相匹配時，發(fā)生共振，能量從入射光轉(zhuǎn)移到表面等離子波中，反射光的反射率表現(xiàn)出急劇衰減(反射光強度最低時所對應的入射角稱為"共振角")。發(fā)生共振時的入射角或波長高度依賴于金屬表面近表面的折射率。表面上的生物分子的結(jié)合會改變此處的折射率，從而引起發(fā)生共振的入射角的變化。通過監(jiān)測共振角的變化，可以實現(xiàn)實時檢測傳感芯片表面的生物分子間的相互作用。傳統(tǒng)的SPR傳感器測量完整的SPR曲線作為入射光角度或者波長的函數(shù)，這種模式應用廣泛，但通量較低。而高通量的SPR儀可以通過成像系統(tǒng)實現(xiàn)同時檢測成千上萬個生物分子的相互作用。一個典型的SPR成像裝置包括一個p偏振光源和一個隨后接收來自SPR生物傳感芯片的反射光的探測器。CCD照相儀以成像的方式來收集反射光強度。SPR成像檢測以固定入射角的方式來檢測時，光強度變化與由生物分子結(jié)合到表面后引起的折射率變化成比例。結(jié)果，引起的光暗度與結(jié)合到探測區(qū)的物質(zhì)的量有關。另外影響SPR成像系統(tǒng)靈敏度的一個因素是光源強度。來自金屬表面的信號強度與入射光強度成線性比例，因此相對于發(fā)光二極管和卣素燈，優(yōu)先選擇激光光源。SPR儀是一種光學傳感器，可以通過檢測金膜近表面折射率的變化來檢測金屬表面生物分子的結(jié)合。對金屬-水界面的探測深度在100-1000nm以內(nèi)，這使得SPR成為一種比較理想的研究固定的生物分子與溶液中分析物質(zhì)相互作用的工具。相對于傳統(tǒng)技術(shù)如基于熒光或ELISA的技術(shù)，SPR技術(shù)有如下幾個優(yōu)點l因為檢測的是折射率，所以分析物質(zhì)無需任何標記(如放射性或熒光標記)而直接用于檢測；2檢測能夠?qū)崟r進行，可以讓用戶收集動力學數(shù)據(jù)；3SPR是一項通用技術(shù)，能夠檢測寬范圍的具有不同分子量和親和力的分析物質(zhì)。因此，SPR技術(shù)是一種研究生物分子相互作用的有力工具。至今，在研究領域內(nèi)，SPR技術(shù)已經(jīng)用于研究蛋白-肽相互作用、蛋白-DNA相互作用，DNA雜交等。但目前SPR方法還未有用于臨床檢測及診斷的報道。惡性腫瘤嚴重危害人類的健康，近年來多種惡性腫瘤的發(fā)病率及發(fā)病絕對人數(shù)皆有不斷升高的趨勢，并趨于年輕化。血液腫瘤標志物的檢測是腫瘤診斷的常用方法之一，對于惡性腫瘤的診斷、療效的觀察、病情進展的判斷和復發(fā)的監(jiān)測等皆有一定的臨床應用價值，并具有簡便無創(chuàng)、測定結(jié)果定量客觀、可重復測定以便動態(tài)監(jiān)測、費用相對低廉等優(yōu)點。腫瘤標志物是癌細胞生長過程中產(chǎn)生的一種或幾種正常情況下沒有的或含量很低的特異性物質(zhì)，或是宿主細胞因癌細胞入侵而過量產(chǎn)生的正常細胞組分。腫瘤標志物存在于組織、細胞、血液或體液中，可用生物化學、免疫學或分子生物學方法對其進行定性或定量檢測，目前最常用的是酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和放射免疫分析法(RIA)。傳統(tǒng)的腫瘤標志物檢測方法操作繁瑣，需要標記，多數(shù)不能同時檢測多種腫瘤標志物。與此相對，SPR技術(shù)能夠提供非標記，高通量和在線的平行分析。鑒于這種現(xiàn)狀，申請人首次將SPR技術(shù)應用于血清肺瘤標志物的臨床檢測及診斷。具體而言，申請人利用SPR技術(shù)對多種血清肺瘤標志物同時進行檢測，針對每一種血清腫瘤標志物選擇特異的單克隆抗體。同時申請人采用改進了的SPR傳感芯片的包被技術(shù)和反應液的成分，顯著提高了檢測靈敏度及臨床檢測線性范圍，使得臨床應用SPR技術(shù)檢測血液腫瘤標志物成為可能。通過不斷的研究，申請人已經(jīng)對CEA，CA125,CA19-9,CA242,CA15-3，CA724,CA50,AFP，Cyfre21-l，HCG，P-HCG，TPA，F(xiàn)er，NSE，PSA，f-PSA，SCCA等多種腫瘤標志物進行了有效的檢測。本發(fā)明的方法和芯片對腫瘤篩選和病程監(jiān)測及指導治療非常有用。進而，申請人首次發(fā)現(xiàn)可以將SPR作為同時檢測多種腫瘤標志物的強有力工具。圖1.PSA測定時的標準曲線，橫坐標為PSA的濃度，縱坐標為對應的SPR檢測的信號結(jié)果。圖2.HCG測定時的標準曲線，橫坐標為HCG的濃度，縱坐標為對應的SPR檢測的信號結(jié)果。具體實施例方式本發(fā)明提供了下迷檢測人血清腫瘤標志物的SPR生物傳感器芯片和使用表面等離子共振技術(shù)檢測人血清腫瘤標志物的方法。1.一種用于檢測人血清肺瘤標志物的SPR生物傳感器芯片，該芯片基質(zhì)為玻璃片，玻璃片表面鍍有金屬膜，金屬膜表面經(jīng)化學修飾形成巰基烴類單分子層，并且?guī)€基烴類的末端官能團與葡聚糖相連。2.1的SPR生物傳感器芯片，其中所述金屬膜由選自銅、銀、鋁和金的金屬構(gòu)成，優(yōu)選為金。3.1或2的SPR生物傳感器芯片，其中巰基烴類選自分子式為HS(CH2)raR和HS(CH2)nR，的混合巰基烴類、分子式為R(CH丄S-S(CH2)nR，的不對稱雙烴基二硫化物和分子式為R(CH2)mS(CH2)nR，的不對稱雙烴基硫化物，其中n和m代表亞甲基單位的數(shù)目，其為8-16的整數(shù)，R和R，代表烴鏈的末端，其為-013、-OH、-C00H或NH2。4.3的SPR生物傳感器芯片，其中巰基烴類為巰基十一醇和巰基十六醇的混合巰基烴類、(CH2)U0H-S-S-(CH2)160H或(CH2)OH-S-(CH2)16COOH。5.制備2所述的SPR生物傳感芯片的方法，包括i.使用適當濃度的環(huán)氧氯丙烷與SAM反應生成環(huán)氧化合物；ii.用葡聚糖溶液與固定了環(huán)氧氯丙烷的傳感芯片表面反應形成葡聚糖修飾的表面；Hi.將前述修飾的芯片浸入適當濃度的溴乙酸溶液中反應使葡聚糖表面羧甲基化；iv.把NHS和EDC的混合水溶液注射到葡聚糖修飾的傳感芯片上進行表面活化；v.在測試通道注入肺瘤標志物捕獲物質(zhì)，陰性對照通道注入陰性對照，聯(lián)接配體，vi.封閉活性位點。6.—種使用表面等離子共振技術(shù)檢測人血清腫瘤標志物的方法，包括步驟(1)用反應緩沖液處理血清樣品；(2)使反應緩沖液處理的血清樣品流過包被腫瘤標志物單抗或配體的權(quán)利要求1的SPR生物傳感器芯片表面，當生物大分子間發(fā)生特異性結(jié)合時可以引起傳感器芯片表面折射率的改變；(3)用SPR測定混合物流過芯片之前和之后相應流池的信號差值；和(4)根據(jù)上述信號差值，利用參考標準品繪制標準曲線而對血清腫瘤標志物進行定量檢測。7.6所述的方法，其中所述反應緩沖液含有但不限于1%-10%小牛血清或牛血清白蛋白溶液，0.l-10mg/ml羧甲基葡聚糖溶液和含有1-10ug/ml膠體金標記的單克隆抗體。8.6所述的方法，其中在將所述的血清樣品和反應緩沖液用于SPR儀器反應時，采用靜止或流動反應，流動反應時樣品流速為5-50ul/min。9.6所述的方法，所述步驟在溫度為25t:的條件下進行。10.6所述的方法，其中所述的用反應緩沖液處理血清樣品是指抽取人靜脈血，室溫以1200轉(zhuǎn)速離心10分鐘，取上清液，用反應緩沖液將血清配制成上樣液注入芯片進行檢測。11.6所述的方法，該方法用于同時檢測多種血清腫瘤標志物，包括以下步驟(i)提供SPR系統(tǒng)，包括根據(jù)權(quán)利要求1-4所述的SPR生物傳感器芯片，其包被有腫瘤標志物單抗和陰性對照蛋白；(ii)提供一系列不同濃度的參考標準品，在與待測物質(zhì)相同的條件下用(i)的系統(tǒng)制作標準曲線；(iH)在SPR系統(tǒng)進樣品之前記錄一個SPR基線值，反應結(jié)束之后再記錄一個SPR響應值，以反應前后的差值為待測血清腫瘤標志物的信號值；(iv)根據(jù)標準曲線，得到每一反應信號值對應的濃度值。具體地，一方面，本發(fā)明為了實現(xiàn)使用表面等離子共振技術(shù)(SPR)對多種腫瘤標志物進行同時檢測，將腫瘤標志物特異單克隆抗體(如抗體等)包被在SPR傳感芯片上，血液樣品流過傳感芯片表面，分子間發(fā)生特異性結(jié)合時可引起傳感芯片表面折射率的改變，從而導致SPR信號的改變，通過檢測SPR信號改變對血液腫瘤標志物進行定性，定量檢測。另一方面，本發(fā)明在反應緩沖液中加入膠體金標記的抗體，從而進一步提高了SPR檢測靈敏度及檢測范圍。具體地，在反應緩沖液中含有1%-10%BSA(重量百分比)溶液和0.1-10mg/ml的羧甲基葡聚糖鈉溶液及l(fā)-10ug/ml膠體金標記的放大抗體，此種緩沖液極大提高信噪比，降低非特異反應。其中BSA溶液的濃度優(yōu)選為2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%;羧甲基葡聚糖鈉溶液的濃度優(yōu)選為0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mg/ml;膠體金標記的放大抗體的濃度優(yōu)選為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10ug/ml。另一方面，本發(fā)明提供了一種SPR傳感芯片，該芯片最內(nèi)層為玻璃，玻璃表面鍍上金屬膜(可以是銅膜，銀膜，鋁膜或者金膜)形成棵金片。用強氧化劑或者等離子刻蝕法清洗棵金片，然后用超純水和除氣的乙醇清洗表面，接著將潔凈的棵金片浸入巰基烴類化合物的乙醇溶液中，在潔凈的金表面上形成巰基烴類的單種成分或混合成分的自組裝單分子層(SAMs)。在合適的條件下用葡聚糖修飾SAMs表面暴露的的末端官能團(-0H，-COOH)。本發(fā)明中，申請人用環(huán)氧活化方法聯(lián)接葡聚糖。具體講，使用環(huán)氧氯丙烷與十一醇反應，生成環(huán)氧化合物，然后用葡聚糖與固定了環(huán)氧氯丙烷的傳感器芯片表面反應，形成葡聚糖修飾的表面。為了能夠更好的與配體反應，可通過使前面修飾的芯片與溴乙酸溶液反應將葡聚糖表面羧曱基化。將NHS和EDC的水溶液通過葡聚糖修飾的傳感芯片，使SAMs表面的末端官能團重新暴露出來，從而使芯片表面被活化。注射PH值為弱酸性的特異單克隆抗體的醋酸緩沖液，以此反應來聯(lián)接配體，最后以弱堿性的乙醇胺溶液封閉殘存的活性位點。一一方面，經(jīng)反應緩沖液處理的血液樣品注入傳感芯片表面，反應在SPR儀上進行，反應液包含放大信號和降低非特異反應的成分，反應溫度25T恒溫。反應方式有兩種靜止相和流動反應。靜止反應即將上樣液通到芯片上以后，上樣液靜止不流動。流動反應即上樣液以S-SOul/min的流速流過芯片表面完成。反應后可使系統(tǒng)緩沖液以大于"ul/min的流速洗滌芯片表面清除非特異結(jié)合。反應信號以SPR角毫度(m。)或響應單元(RU)為單位，所有結(jié)果均為扣除陰性對照檢測信號后的值。另一方面，在SPR檢測中固相配體的包被難達到各芯片之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。以檢測物的濃度為橫坐標，以信號差值為縱坐標，將各信號值進行線性回歸，即標準曲線。進樣品之前記錄一個SPR基線值，反應之后再記錄一個SPR基線值，反應前后的差值為某種血清肺瘤標志物的信號值。根據(jù)標準曲線，得到每一反應信號值對應的濃度值。所有結(jié)果均為扣除陰性對照檢測信號后的值。實施例下面使用實例對本發(fā)明進行更直觀詳細的描述，但并不限制本發(fā)明的范圍。實施例一傳感芯片的制備(一)直接偶聯(lián)傳感芯片的制備1,傳感芯片的葡聚糖修飾a).棵金片的清洗首先用強氧化劑(H2S04:H202)或者等離子刻蝕法清洗棵金片，然后用超純水和除氣的乙醇清洗表面，之后以純氮氣流吹干。b).自組裝單分子層(SAMs)的制備在潔凈的金表面上形成巰基烴類的單種成分或混合成分的自組裝單分子層(SAMs)，這種方式已經(jīng)廣泛用于化學或生物傳感芯片的修飾。在金表面制備SAMs的過程是將潔凈的棵金片浸入含l~lOmM巰基烴類化合物的乙醇溶液中，室溫下孵育12~18hr?；旌蠁畏肿訉拥暮铣捎?個簡便方法(1)混合烴基硫醇(HS(CH上R+HS(CH上RO從溶液中的共吸附。(2)不對稱雙烴基二硫化物(R(CH2hS-S(CH2)nR，)的吸附。(3)不對稱雙烴基硫化物(R(CH2LS(CH2)JT)的吸附，這兒n和m代表亞曱基單位的數(shù)目，R代表烴鏈的末端(-CH3，-OH，-COOH，NH2等)。c).自組裝單分子層(SAMs)的葡聚糖修飾自組裝單分子層形成后的修飾方法非常重要，因為這關系到表面是否能夠有效引入具有生物學意義的復雜配基和大分子。在合適的反應條件下，SAMs表面暴露的的末端官能團(-0H,-C00H),先聯(lián)接反應中間體葡聚糖，然后再聯(lián)接到配體分子上。本發(fā)明中，申請人用環(huán)氧活化方法聯(lián)接葡聚糖。具體講，使用~1mol.L—i環(huán)氧氯丙烷與十一醇反應4h，生成環(huán)氧化合物，然后用300mg/ml的葡聚糖與固定了環(huán)氧氯丙烷的傳感表面在25'C下反應20h，形成葡聚糖修飾的表面。為了能夠更好的與配體反應，葡聚糖表面需要羧甲基化將前面修飾的芯片浸入1molf溴乙酸溶液中反應16h即可。2.腫瘤標志物單克隆抗體及陰性對照蛋白包被在葡聚糖修飾的傳感芯片上進行抗體的固定把70111含SOmMNHS和200mMEDC的水溶液注射到葡聚糖修飾的傳感芯片上進行表面活化后，再注射含有IO-IOOug/ml單克隆抗體(1QmM，p!H."),陰性對照通道注入陰性對照蛋白(小鼠IgG10-100ug/ml)的醋酸鈉緩沖液(IOmM，pH4.75),以此反應來聯(lián)接配體，最后以70ul1M乙醇胺溶液(pH8.6)封閉殘存的活性位點。(二)間接偶聯(lián)(生物素標記)傳感芯片的制備1.傳感芯片的葡聚糖修飾。同上2.鏈霉親和素(SA)包被在葡聚糖修飾的傳感芯片上進行SA的固定把70ul含50mM匪S和200mMEDC的水溶液注射到葡聚糖修飾的傳感芯片上進行表面活化后，再注射含有40-200ug/mlSA的醋酸緩沖液(10mM，pH4.5),以此反應來聯(lián)接配體SA，最后以70ul1M乙醇胺溶液(pH8.6)封閉殘存的活性位點。3.生物素標記的單抗及陰性對照蛋白聯(lián)接反應在SPR儀上進行，分別以流速5ul/min注入100ul溶解在緩沖液(PBS)中的生物素標記的單抗aO-100ug/ml)及陰性對照蛋白(小鼠IgG10-100ug/ffll)與傳感芯片表面包被的鏈霉親和素進行反應，這樣生物素標記的蛋白就連接到了芯片上，可以在SPR儀器上進行下一步的樣品檢測。實施例二樣本檢測過程1.試劑準備系統(tǒng)緩沖液HBS-EP，PBSPH7.4，保存于4度冰箱。經(jīng)除氣、0.22um濾器過濾。標準品制備先用零值血清配置高濃度的標準品，然后根據(jù)實驗系統(tǒng)的要求，用零值血清將高值血清稀釋至應有的濃度，制成符合預定要求的，由不同濃度組成的系列標準品。反應緩沖液10%BSA，2mg/ml羧甲基葡聚糖鈉，l-10ug/ml膠體金標記的抗體。經(jīng)除氣、0.22um濾器過濾。2.在SPR儀上進行檢測反應在SPR儀上進行，流速5ul/min，溫度25°C。先檢測一組標準品(5個濃度)，反應信號以SPR角毫度(m。)為單位，以扣除陰性對照檢測信號后的值作為結(jié)果。根據(jù)反應信號繪制標準曲線，每次檢測后用甘氨酸-鹽酸(PH1.5-3.0)再生芯片表面，流速不低于40ul/min。將血清與反應緩沖液(5%BSA，lmg/ml羧曱基葡聚糖，5ug/ml膠體金標記抗體)依照一定比例(1:5-1:10)混合，孵育30min，取100ul注入傳感器芯片表面。然后以大于40ul/min流速注入一定體積的洗滌液(不含樣本的鹽溶液或水，本步驟為備選)，進行反應后的洗滌。也可不洗脫。反應信號以SPR角毫度(m。)為單位。根據(jù)標準曲線，得到與每一反應信號值對應的濃度值。所有值均為扣除陰性對照檢測信號后的值。具體試驗步驟實例1a)配體包被激活芯片表面注入新鮮配制的0.2MEDC/O.05MNHS5ul/min30min。升高20亳度。配體包被注入20ug/mlPSA單克隆抗體溶于lOmM醋酸鈉緩沖溶液(PH4.75)5ul/min30min。升高1100毫度。封閉注入1M乙醇胺鹽酸5|u1/min30min。降低100毫度。最終包被量為1000毫度。b)檢測物分析繪制標準曲線讀取系統(tǒng)緩沖液基線，然后分別注入lOOu10，0.625，2.5，5，25，250jag/L的PSAAg的五個標準品，注入標準品至反應結(jié)束后3分鐘讀取系統(tǒng)緩沖液基線，計算兩者差值得到與標準品濃度對應的亳度值，繪制標準曲線，如圖1所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>檢測樣品讀取系統(tǒng)緩沖液基線，然后注入100ja1處理后的HCG陽性血清樣品，注入樣品至反應結(jié)束后3分鐘讀取系統(tǒng)緩沖液基線，計算兩者差值得到與樣品濃度對應的毫度值實例2:激活芯片表面注入新鮮配制的0.2MEDC/O.05MNHS5ul/min30min。升高20毫度。配體包被注入20ug/mlHCG單克隆抗體溶于10mM醋酸鈉緩沖溶液(PH4.75)5ul/min30min。升高1100毫度。封閉注入1M乙醇胺鹽酸5m1/min30min。降低100毫度。最終包被量為1000毫度。b)檢測物分析繪制標準曲線讀取系統(tǒng)緩沖液基線，然后分別注入100jjl0，2.5，5,10，20，40jag/L的HCGAg的六個標準品，注入標準品至反應結(jié)束后3分鐘讀取系統(tǒng)緩沖液基線，計算兩者差值得到與標準品濃度對應的毫度值，繪制標準曲線，如圖2所示。HCGAgug/L信號值002.5165291044206240104檢測樣品讀取系統(tǒng)緩沖液基線，然后注入lOOu1處理后的HCGAg血清樣品，注入樣品至反應結(jié)束后3分鐘讀取系統(tǒng)緩沖液基線，計算兩者差值得到與樣品濃度對應的毫度值3.結(jié)果判讀讀取扣除陰性對照系統(tǒng)緩沖液基線，然后注入樣品至反應結(jié)束后3分鐘讀取扣除陰性對照系統(tǒng)緩沖液基線，計算兩者差值得到與樣品濃度對應的毫度值。根據(jù)標準曲線，得到每一反應信號值對應的濃度值。所有結(jié)果均為扣除陰性對照檢測信號后的值。附錄簡寫英文名稱中文名稱AFPAlphafetoproteina胎兒蛋白CalcitoninCalcitonin降鈣素CA125Carbohydrateantigen125糖鏈抗原125CA19-9Carbohydrateantigen19-9糖鏈抗原19-9CA242Carbohydrateantigen242糖鏈抗原242CA15-3Carbohydrateantigen15—3糖鏈抗原15-3CA724Carbohydrateantigen724糖鏈抗原724CA50Carbohydrateantigen50糖鏈抗原50CEACarcinoembryonicantigen癌胚抗原Cyfre21-lFragmentofcytokeratin細胞角蛋片段E3Estrogen3雌激素3FerFerritin鐵蛋白P-HCGBata—humanchorionicgonadotrophinP-人絨促性素NSENeuronspecificenolase神經(jīng)元特異性烯醇酶PAPP-APregnantassociateplasmaproteinA妊娠伴隨血漿蛋白APSAProstaticSpecificAntigen前列腺特異性抗原f-PSAfreeProstaticSpecificAntigen游離前列腺特異性抗原SCCASquamouscellcarcinomaantigen鱗狀上皮細胞癌抗原TPATissuepolypeptideantigen參考文獻1.CaoC，KimJP，KimBW，ChaeH，YoonHC，YangSS，SimSJ.基于表面等離子共振技術(shù)提高前列腺特異性抗原al抗狹糜蛋白酶檢測的敏感性和特異性的策略(Astrategyforsensitivityandspecificityenhancementsinprostatespecificantigen-alphal-antichymotrypsindetectionbasedonsurfaceplasmonresonance.)BiosensBioelectron.2006年5月15日；21(11):2106-13.2.ChoiSH，LeeJW，SimSJ.基于修飾的自組裝單層提高表面等離子共振免疫傳感的Ab—GAD抗體檢效'J性能(EnhancedperformanceofasurfaceplasmonresonanceimmunosensorfordetectingAb-GADantibodybasedonthemodifledself-assembledmonolayers.)BiosensBioelectron.2005年8月15曰；21(2):378-83.3.JongSeolYuk,Se-HuiJung,Jae-WanJung,Duk-GeunHong,Jeong-AHan,Young-MyeongKimandKwon-SooHal.使用基于波長詢問的表面等離子生物傳感器分析蛋白質(zhì)陣歹'j上的蛋白質(zhì)相互作用(Analysisofproteininteractionsonproteinarraysbyawavelengthinterrogation-basedsurfacePlasmonresonancebiosensor.)P娃鍾"2004，《3468-3476.4.JohnS.Mitchell，YinqiuWu，ChristianJ.Cook,LyndsayMain.表面等離子共振傳感中的雌激素級合物和抗體結(jié)合作用(Estrogenconjugationandantibodybindinginteractionsinsurfaceplasmonresonancebiosensing).Steroids71(2006)618-631.5.Rebecca丄Green,RichardA.Frazier，KevinM.Shakeshe!，MartynC.Davi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