專利名稱：中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基，特別是在臨床大量使用抗生素后的淋 病患者，需要淋球菌培養(yǎng)檢查時(shí)培養(yǎng)基的配方及其制備方法。其配方主要成分是氨基酸促 生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸 和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基)、多價(jià)蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白 胨、酵母浸膏粉、葡萄糖、可溶性淀粉、氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、瓊脂粉、多粘
菌素B、萬(wàn)古霉素、卵黃、土溫-80、卵磷酯。淋球菌培養(yǎng)檢査是診斷淋病的重要方法。尤其 對(duì)慢性患者及女性患者，需經(jīng)培養(yǎng)后才能做出正確診斷；對(duì)已治療的患者需經(jīng)培養(yǎng)才能證實(shí) 是否痊愈。該培養(yǎng)基能夠檢測(cè)大量臨床使用抗生素后的生殖道淋球菌陽(yáng)性結(jié)果，具有指導(dǎo)臨 床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。淋病(Gonorrhea)是淋菌性尿 道炎的簡(jiǎn)稱，是由淋球菌引起的泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎性疾病，主要通過(guò)性交傳染。是當(dāng)前 世界范圍內(nèi)流行非常廣泛的一種性傳播疾病。近30年來(lái)由于性亂的社會(huì)背景，無(wú)癥狀帶菌者 的增多(女性患者高達(dá)75%)、避孕方法的改變(避孕藥取代了子宮帽、避孕套)以及耐藥 菌株的不斷出現(xiàn)，更加快了本病的傳播。在許多國(guó)家和地區(qū)，淋病的患病率一直居于各種性 傳播疾病的首位。本病最初多侵犯尿道、宮頸內(nèi)膜，繼而可波及前列腺、精囊、副睪、子宮 內(nèi)膜及輸卵管。有時(shí)肛門、直腸、咽粘膜、眼結(jié)膜也可受染。尚可經(jīng)血行播散引起菌血癥、 關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及腦膜炎，可引起死亡或不育、不孕、失明及尿道狹窄等后果。由于本病 潛伏期短、傳染性強(qiáng)、后果嚴(yán)重，因此它是我國(guó)當(dāng)前重點(diǎn)防治的性病之一。為使培養(yǎng)獲得成 功，除取材部位必須準(zhǔn)確外，標(biāo)本采集后，要盡快接種到己預(yù)溫至36。C的淋球菌培養(yǎng)基上。 用白金耳床邊取材，立即接種。正確地采取標(biāo)本，及時(shí)接種和規(guī)范地鑒定是提高陽(yáng)性率和準(zhǔn) 確性的關(guān)鍵。最關(guān)鍵的是采用優(yōu)質(zhì)的淋球菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基富含高營(yíng)養(yǎng) 物和其所需的基質(zhì)(促生長(zhǎng)液)及特殊的抑菌劑，可快速準(zhǔn)確地檢測(cè)出臨床標(biāo)本中的淋球菌。
技術(shù)背景 本發(fā)明的目的在于提供一種中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基，用于臨床泌尿生殖道標(biāo)本 淋球菌的規(guī)范鑒定。淋球菌培養(yǎng)檢査是診斷淋病的重要方法。由淋球菌引起的泌尿生殖系統(tǒng) 化膿性炎性疾病是近年來(lái)越來(lái)越引起臨床重視的病原體之一。尤其是大量臨床用抗生素后的 淋球菌檢測(cè)十分難檢，由于標(biāo)本中含大量殘余抗生素，在恢復(fù)培養(yǎng)淋球菌時(shí)繼續(xù)受到殘余抗 生素的作用。因此，不釆用去除殘余的抗生素措施的實(shí)驗(yàn)，應(yīng)認(rèn)為是在設(shè)計(jì)上的嚴(yán)重失誤， 依據(jù)這樣的實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果是不可靠的。淋球菌較為嬌嫩，酶系統(tǒng)不完整，初代培養(yǎng)普通培 養(yǎng)基不易成功，需在含有動(dòng)物蛋白的培養(yǎng)基上，且含有5% 10%二氧化碳的條件下才能生 長(zhǎng)。與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基比較.中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基不僅以卵黃雙抗為基礎(chǔ)，還富含8種氨基 酸促生長(zhǎng)液；將傳統(tǒng)培養(yǎng)基中的抑菌劑青霉素改為萬(wàn)古霉素、多粘菌素；加入營(yíng)養(yǎng)豐富的酵 母浸膏粉和淋球菌生長(zhǎng)唯一熱能來(lái)源的葡萄糖及有吸附毒素作用的可溶性淀粉，并加入淋球 菌生長(zhǎng)必須的生長(zhǎng)因子胱胺酸、谷氨酰胺、半胱胺酸等。營(yíng)養(yǎng)素選擇新鮮蛋黃，實(shí)驗(yàn)證明效 果很好。將傳統(tǒng)培養(yǎng)基中尤其是大量臨床用抗生素后的營(yíng)養(yǎng)改為增加土溫-80、卵磷酯中和劑； 中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基與其它類培養(yǎng)基相比具備下列特點(diǎn)中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基淋球菌培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)豐富、配制簡(jiǎn)單、選擇性強(qiáng),與傳統(tǒng)培養(yǎng)基比較，檢出率高,污染小，臨床應(yīng)用效果滿 意.大大提高檢測(cè)陽(yáng)性率，方法簡(jiǎn)單、時(shí)間短、準(zhǔn)確性髙。能夠中和標(biāo)本中含大量殘余抗生素， 對(duì)已治療的患者需經(jīng)培養(yǎng)才能證實(shí)是否痊愈，具有指導(dǎo)臨床診斷和治療作用，為防止濫用抗 菌藥物也具有重要意義
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的要點(diǎn)在于選擇合適的組分，并進(jìn)行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混合、 冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基淋球菌培養(yǎng)基。
本發(fā)明選擇的培養(yǎng)基配方如下(克、ml /每升蒸餾水)氨基酸促生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨 酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基 酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;多價(jià)蛋白胨9. 0-12.0;蛋白月示胨4. 0_5. 0;胰蛋 白胨4. 0-5. 0;酵母浸膏粉4. 0-6. 0;葡萄糖1. 0-2. 0;可溶性淀粉1. 5-2. 5;氯化鈉14. 0-16. 0; 磷酸氫二鉀3. 0-5. 0;磷酸二氫鉀1. 5-2. 5;瓊脂粉14. 0-16. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B 0. 2-0. 3 ml; 3mg/L萬(wàn)古霉素0. 2-0. 3 ml; 15%無(wú)菌卵黃鹽水10. 0-15. 0 ml; 土溫-80 0.3-0.5;卵 磷酯O. 5-0. 8;雙重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基，原材料易得，制作方便，基礎(chǔ)成分以GC基礎(chǔ)為主，調(diào)整蛋白胨 的成分比例，加入營(yíng)養(yǎng)豐富的酵母浸膏粉和淋球菌生長(zhǎng)唯一熱能來(lái)源的葡萄糖及有吸附毒素 作用的可溶性淀粉，并加入淋球菌生長(zhǎng)必須的生長(zhǎng)因子胱胺酸、谷氨酰胺、半胱胺酸等。營(yíng) 養(yǎng)素選擇新鮮蛋黃，實(shí)驗(yàn)證明效果很好。淋球菌在該培養(yǎng)基孵育24小時(shí)后，淋球菌可生長(zhǎng)成 細(xì)小、圓形、凸起、濕潤(rùn)、光滑、半透明或灰白色如露珠狀的菌落，直徑為0. 5ram 1. 0ram。 邊緣呈花瓣?duì)?，用白金耳觸之有粘性。如繼續(xù)培養(yǎng)，菌落面積增大，表面變得粗糙，邊緣出 現(xiàn)皺縮。從菌落上取材作涂片，可見(jiàn)到菌的大小及染色的深度有差異，排列也不一致，約有 25%的菌為典型的雙球菌，其他75%為單球菌、四聯(lián)形或八疊形。
本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是
1) 、將蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白胨、酵母浸膏粉、可溶性淀粉、氯化鈉、磷酸氫二 鉀、磷酸二氫鉀、瓊脂粉、土溫-80 、卵磷酯、按比例進(jìn)行加溫、溶解；冷卻后調(diào)rapH7.4;
2) 、分裝后，壓力蒸汽滅菌121。C， 20-30min;
3) 、在無(wú)菌條件下將消毒的復(fù)合生長(zhǎng)因子、卵黃加入到溶液中，混合均勻；
4) 、冷卻至6(TC在無(wú)菌條件下加入葡萄糖，萬(wàn)古霉素和多粘菌素B溶液；不時(shí)搖動(dòng)， 凝固備用。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)豐富、配制簡(jiǎn)單；(2)選擇性強(qiáng)、 方法靈敏、檢出率高、污染小，臨床應(yīng)用效果滿意；(3)大大提高檢測(cè)陽(yáng)性率，方法簡(jiǎn)單、時(shí) 間短、準(zhǔn)確性高。(4)靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好。能夠中和標(biāo)本中含大量殘余抗生素， 對(duì)已治療的患者需經(jīng)培養(yǎng)才能證實(shí)是否痊愈，具有指導(dǎo)臨床診斷和治療作用，為防止濫用抗 菌藥物也具有重要意義。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明
按照下表所列數(shù)據(jù)(克、ml /每升蒸餾水)及其所述步驟進(jìn)行配置 配方一氨基酸促生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮 氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;多價(jià)蛋白胨9. 0-12. 0; 蛋白月示胨4.0-5.0;胰蛋白胨4.0-5.0;酵母浸膏粉4.0-6.0;葡萄糖1.0-2.0;可溶性淀 粉1. 5-2. 5;氯化鈉14. 0-16. 0;磷酸氫二鉀3. 0-5. 0;磷酸二氫鉀1. 5-2. 5;瓊脂粉14. 0-16. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B0. 2-0.3ml; 3mg/L萬(wàn)古霉素0. 2-0.3ml; 15%無(wú)菌卵黃鹽水10. 0-15. 0 ml; 土溫-80 0. 3-0. 5;卵磷酯0. 5-0. 8;雙重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
配方二
氨基酸促生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮
氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;多價(jià)蛋白胨 10.0-12.0;蛋白月示胨4. 5-5.0;胰蛋白胨4. 5-5.0;酵母浸膏粉4. 5-6. 0;葡萄糖1. 5-2. 0; 可溶性淀粉2.0-2.5;氯化鈉15.0-16.0;磷酸氫二鉀4. 0-5. 0;磷酸二氫鉀2. 0-2. 5瓊脂粉 15.0-16.0; 2. 5mg/L多粘菌素B 0. 2-0.3 ml; 3mg/L萬(wàn)古霉素0. 2-0. 3 ml; 15%無(wú)菌卵黃 鹽水12. 0-15. 0 ml; 土溫-80 0.3-0.4;卵磷酯0. 5-0. 6;雙重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
配方三
氨基酸促生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮 氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml;多價(jià)蛋白胨9. 0-11.0; 蛋白月示胨4.0-4.5;胰蛋白胨4.0-4.5;酵母浸膏粉4. 0-5. 0;葡萄糖1. 0-1. 5;可溶性淀 粉1. 5-2. 5;氯化鈉14. 0-16. 0;磷酸氫二鉀3. 0-4. 0;磷酸二氫鉀1. 5-2. 0;瓊脂粉14. 0-15. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B0. 2-0.3 ml; 3mg/L萬(wàn)古霉素0. 2-0.3 ml; 15%無(wú)菌卵黃鹽水10. 0-13. 0 ml; 土溫-80 0.4—0.5;卵磷酯0. 6-0. 8;雙重蒸餾水1000ml， pH7. 4。
權(quán)利要求
1、本發(fā)明涉及一種中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基，特別是在臨床大量使用抗生素后的淋病患者，需要淋球菌培養(yǎng)檢查時(shí)特制培養(yǎng)基的配方及其制備方法，其特征在于具有如下配方(克、ml/每升蒸餾水)氨基酸促生長(zhǎng)液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8種氨基酸，次黃嘌呤、尿嘧啶2種堿基，)2ml；多價(jià)蛋白胨9.0-12.0；蛋白月示胨4.0-5.0；胰蛋白胨4.0-5.0；酵母浸膏粉4.0-6.0；葡萄糖1.0-2.0；可溶性淀粉1.5-2.5；氯化鈉14.0-16.0；磷酸氫二鉀3.0-5.0；磷酸二氫鉀1.5-2.5；瓊脂粉14.0-16.0；2.5mg/L多粘菌素B 0.2-0.3ml；3mg/L萬(wàn)古霉素0.2-0.3ml；15％無(wú)菌卵黃鹽水10.0-15.0ml；土溫-800.3-0.5；卵磷酯0.5-0.8；雙重蒸餾水1000ml，pH7.4。
2、 一種權(quán)利要求1所述中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于具有如下的步驟1) 、將蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白胨、酵母浸膏粉、可溶性淀粉、氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、瓊脂粉、土溫-80 、卵磷酯、按比例進(jìn)行加溫、溶解；冷卻后調(diào) ra pH7. 4;2) 、分裝后，壓力蒸汽滅菌121。C， 20-30min;3) 、在無(wú)菌條件下將消毒的氨基酸促生長(zhǎng)液、卵黃加入到溶液中，混合均勻；4) 、冷卻至6(TC在無(wú)菌條件下加入葡萄糖，萬(wàn)古霉素和多粘菌素B溶液；不時(shí)搖動(dòng)，凝固備用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基，特別是在臨床大量使用抗生素后的淋病患者，需要淋球菌培養(yǎng)檢查時(shí)培養(yǎng)基的配方及其制備方法。淋球菌培養(yǎng)檢查是診斷淋病的重要方法。由淋球菌引起的泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎性疾病是近年來(lái)越來(lái)越引起臨床重視的病原體之一。尤其是大量臨床用抗生素后的淋球菌檢測(cè)十分難檢，由于標(biāo)本中含大量殘余抗生素，在恢復(fù)培養(yǎng)淋球菌時(shí)繼續(xù)受到殘余抗生素的作用。因此，不采用去除殘余的抗生素措施的實(shí)驗(yàn)，應(yīng)認(rèn)為是在設(shè)計(jì)上的嚴(yán)重失誤，依據(jù)這樣的實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果是不可靠的。本發(fā)明的目的在于提供一種中和氨基酸卵黃培養(yǎng)基，用于臨床泌尿生殖道標(biāo)本淋球菌的規(guī)范鑒定。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK101565729SQ200810093410
公開(kāi)日2009年10月28日 申請(qǐng)日期2008年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月21日
發(fā)明者奕 曲 申請(qǐng)人:奕 曲