專利名稱：一種葡萄白粉菌的離體接種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種葡萄白粉菌的接種方法。
(二)
背景技術(shù)：
葡萄白粉菌屬于專性寄生菌，目前只能在鮮活的組織材料上培養(yǎng)和保藏，因此 葡萄白粉菌的培養(yǎng)和保存十分困難?，F(xiàn)在技術(shù)條件下，葡萄白粉菌只在葡萄生長的 植株上存在并存活，當(dāng)其侵染葡萄植株的葉片和果實時才發(fā)病，并產(chǎn)生新鮮的白粉 病菌飽子，才能進(jìn)行防病、抗病宵種等試驗研究，受自然條件的影響大，存在時間 短，不容易控制和保存，對實驗研究帶來不便。
(三)

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有葡萄白粉菌能在鮮活的組織材料上培養(yǎng)和保藏因此給實驗研究帶 來不便的不足，本發(fā)明提供一種葡萄白粉菌的離體接種方法。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案是 一種葡萄白粉菌的離體接種方法，包
括如下歩驟離體葉片的選擇采摘葡萄梢尖以下的第34片的新鮮葉片；
菌種的選用選用葡萄種植園中新鮮的葡萄白粉病菌飽子；
藥劑的配制配制濃度為10~90mg/L的苯丙咪唑溶液；
葉片的處理將采集的新鮮葡萄葉片，用無菌水沖洗三遍后，用0.5%NaCI0 溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水沖洗三遍，瀝干置于無菌培養(yǎng)皿中，葉片的葉柄 上纏繞無菌棉,加滴配制好的苯丙咪唑溶液；
接種將毛筆在70%酒精中消毒后晾干，將感染白粉病的葡萄葉片上的白粉 病菌，用毛筆輕刷，直接接種到上述經(jīng)苯丙咪唑溶液處理的離體葉片上，置于25 r、朋為85%的人工氣候箱中，每天進(jìn)行16小時光培養(yǎng)，8小時暗培養(yǎng)。
優(yōu)選的，所述苯丙咪唑溶液的濃度為5(K70mg/L,當(dāng)苯丙咪唑溶液的濃度為
5(^70fflg/L時，其保綠效果最好，可保綠22天以上。
優(yōu)選的，采摘的離體葉片為葡萄梢尖以下的第3片葉，葡萄梢尖以下的第3 片離體葉片的白粉病發(fā)病最好。
本發(fā)明的有益效果在于采用苯丙咪唑作為保綠劑使用，將葡萄白粉菌接種 在離體葉片上，苯丙咪唑?qū)﹄x體葉片發(fā)生白粉病無影響，解決了葡萄白粉菌的培 養(yǎng)與保藏的問題。 具體實施例方式
下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一歩詳細(xì)說明。
實施例一
一種葡萄白粉菌的離體接種方法，包括如下歩驟 離體葉片的選擇采摘葡萄梢尖以下的第3片的新鮮葉片； 菌種的選用選用葡萄種植園中新鮮的葡萄白粉病菌飽子； 藥劑的配制配制濃度為60mg/L的苯丙咪唑溶液；
葉片的處理將采集的新鮮葡萄葉片，用無菌水沖洗三遍后，用0.5%NaCI0 溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水沖洗三遍，瀝干置于無菌培養(yǎng)皿中，葉片的葉柄 上纏繞無菌棉,加滴配制好的苯丙咪唑溶液；
接種將毛筆在70%酒精中消毒后晾干，將感染白粉病的葡萄葉片上的白粉 病菌，用毛筆輕刷，直接接種到上述經(jīng)苯丙咪唑溶液處理的離體葉片上，置于25 X:、 RH為8596的人工氣候箱中，每天進(jìn)行16小時光培養(yǎng)，8小時暗培養(yǎng)。
實施例二
一種葡萄白粉菌的離體接種方法，包括如下步驟 離體葉片的選擇采摘葡萄梢尖以下的第4片的新鮮葉片； 菌種的選用選用葡萄種植園中新鮮的葡萄白粉病菌飽子； 藥劑的配制配制濃度為10mg/L的苯丙咪唑溶液；
葉片的處理將采集的新鮮葡萄葉片，用無菌水沖洗三遍后，用0.5%NaCIO 溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水沖洗三遍，瀝干置于無菌培養(yǎng)皿中，葉片的葉柄 上纏繞無菌棉，加滴配制好的苯丙咪唑溶液；
接種將毛筆在70%酒精中消毒后晾干，將感染白粉病的葡萄葉片上的白粉 病菌，用毛筆輕刷，直接接種到上述經(jīng)苯丙咪唑溶液處理的離體葉片上，置于25 1C、 RH為8596的人工氣候箱中，每天進(jìn)行16小時光培養(yǎng)，8小時暗培養(yǎng)。
實施例三
一種葡萄白粉菌的離體接種方法，包括如下歩驟
離體葉片的選擇采摘葡萄梢尖以下的第5片的新鮮葉片； 菌種的選用選用葡萄種植園中新鮮的葡萄白粉病菌飽子； 藥劑的配制配制濃度為90mg/L的苯丙咪唑溶液
葉片的處理將采集的新鮮葡萄葉片，用無菌水沖洗三遍后，用0.5柳aCI0 溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水沖洗三遍，瀝干置于無菌培養(yǎng)皿中，葉片的葉柄 上纏繞無菌棉，加滴配制好的苯丙咪唑溶液；
接種:將毛筆在70%酒精中消毒后晾干，將感染白粉病的葡萄葉片上的白粉病菌，
用毛筆輕刷，直接接種到上述經(jīng)苯丙咪唑溶液處理的離體葉片上，置于251C、 RH為 85%的人工氣候箱中，每天進(jìn)行16小時光培養(yǎng)，8小時暗培養(yǎng)。
實施例四
—種葡萄白粉菌的離體接種方法，包括如下步驟 離體葉片的選擇采摘葡萄梢尖以下的第6片的新鮮葉片； 菌種的選用選用葡萄種植園中新鮮的葡萄白粉病菌飽子； 藥劑的配制配制濃度為70mg/L的苯丙咪唑溶液；
葉片的處理將采集的新鮮葡萄葉片，用無菌水沖洗三遍后，用0.5%NaCIO 溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水沖洗三遍，瀝干置于無菌培養(yǎng)皿中，葉片的葉柄 上纏繞無菌棉，加滴配制好的苯丙咪唑溶液；
接種:將毛筆在70%酒精中消毒后晾干，將感染白粉病的葡萄葉片上的白粉病菌，
用毛筆輕刷，直接接種到上述經(jīng)苯丙咪唑溶液處理的離體葉片上，置于25"C、 RH為 85%的人工氣候箱中，每天進(jìn)行16小時光培養(yǎng)，8小時暗培養(yǎng)。
實施例五
一種葡萄白粉菌的離體接種方法，包括如下歩驟 離體葉片的選擇采摘葡萄梢尖以下的第3片的新鮮葉片； 菌種的選用選用葡萄種植園中新鮮的葡萄白粉病菌飽子； 藥劑的配制配制濃度為50mg/L的苯丙咪唑溶液；
葉片的處理將采集的新鮮葡萄葉片，用無菌水沖洗三遍后，用0.5%NaCIO 溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水沖洗三遍，瀝干置于無菌培養(yǎng)皿中，葉片的葉柄
上纏繞無菌棉,加滴配制好的苯丙咪唑溶液；
接種:將毛筆在70%酒精中消毒后晾干，將感染白粉病的葡萄葉片上的白粉病菌，
用毛筆輕刷，直接接種到上述經(jīng)苯丙咪唑溶液處理的離體葉片上，置于251C、 RH為 8596的人工氣候箱中，每天進(jìn)行16小時光培養(yǎng)，8小時暗培養(yǎng)。
實施例六
一種葡萄白粉菌的離體接種方法，包括如下歩驟 離體葉片的選擇采摘葡萄梢尖以下的第4片的新鮮葉片； 菌種的選用選用葡萄種植園中新鮮的葡萄白粉病菌飽子； 藥劑的配制配制濃度為20mg/L的苯丙咪唑溶液；
葉片的處理將采集的新鮮葡萄葉片，用無菌水沖洗三遍后，用0.5%NaCI0 溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水沖洗三遍，瀝干置于無菌培養(yǎng)皿中，葉片的葉柄 上纏繞無菌棉,加滴配制好的苯丙咪唑溶液；
接種:將毛筆在709b酒精中消毒后晾干，將感染白粉病的葡萄葉片上的白粉病菌，
用毛筆輕刷，直接接種到上述經(jīng)苯丙咪唑溶液處理的離體葉片上，置于25"、 RH為 85%的人工氣候箱中，每天進(jìn)行16小時光培養(yǎng)，8小時暗培養(yǎng)。
實施例七
一種葡萄白粉菌的離體接種方法，包括如下步驟 離體葉片的選擇采摘葡萄梢尖以下的第5片的新鮮葉片； 菌種的選用選用葡萄種植園中新鮮的葡萄白粉病菌飽子； 藥劑的配制配制濃度為40mg/L的苯丙咪唑溶液；
葉片的處理將采集的新鮮葡萄葉片，用無菌水沖洗三遍后，用0.5%NaCI0
溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水沖洗三遍，瀝干置于無菌培養(yǎng)皿中，葉片的葉柄 上纏繞無菌棉,加滴配制好的苯丙咪唑溶液；
接種:將毛筆在70%酒精中消毒后晾干，將感染白粉病的葡萄葉片上的白粉病菌，
用毛筆輕刷，直接接種到上述經(jīng)苯丙咪唑溶液處理的離體葉片上，置于25"、 RH為
85%的人工氣候箱中，每天進(jìn)行16小時光培養(yǎng)，8小時暗培養(yǎng)。
實施例八
一種葡萄白粉菌的離體接種方法，包括如下步驟 離體葉片的選擇采摘葡萄梢尖以下的第3片的新鮮葉片； 菌種的選用選用葡萄種植園中新鮮的葡萄白粉病菌飽子 藥劑的配制配制濃度為80mg/L的苯丙咪唑溶液；
葉片的處理將采集的新鮮葡萄葉片，用無菌水沖洗三遍后，用0.5%NaCIO 溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水沖洗三遍，瀝干置于無菌培養(yǎng)皿中，葉片的葉柄 上纏繞無菌棉,加滴配制好的苯丙咪唑溶液
接種:將毛筆在70%酒精中消毒后晾干，將感染白粉病的葡萄葉片上的白粉病菌，
用毛筆輕刷，直接接種到上述經(jīng)苯丙咪唑溶液處理的離體葉片上，置于25"C、 RH為 85%的人工氣候箱中，每天進(jìn)行16小時光培養(yǎng)，8小時暗培養(yǎng)。
權(quán)利要求
1.一種葡萄白粉菌的離體接種方法，其特征在于包括如下步驟離體葉片的選擇采摘葡萄梢尖以下的第3～6片的新鮮葉片；菌種的選用選用葡萄種植園中新鮮的葡萄白粉病菌飽子；藥劑的配制配制濃度為10～90mg/L的苯丙咪唑溶液；葉片的處理將采集的新鮮葡萄葉片，用無菌水沖洗三遍后，用0.5％NaCIO溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水沖洗三遍，瀝干置于無菌培養(yǎng)皿中，葉片的葉柄上纏繞無菌棉，加滴配制好的苯丙咪唑溶液；接種將毛筆在70％酒精中消毒后晾干，將感染白粉病的葡萄葉片上的白粉病菌，用毛筆輕刷，直接接種到上述經(jīng)苯丙咪唑溶液處理的離體葉片上，置于25℃、RH為85％的人工氣候箱中，每天進(jìn)行16小時光培養(yǎng)，8小時暗培養(yǎng)。
2. 如權(quán)利要求1所述的葡萄白粉菌的離體接種方法，其特征在于所述苯丙 咪唑溶液的濃度為50~70 mg/L。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的葡萄白粉菌的離體接種方法，其特征在于采摘 的離體葉片為葡萄梢尖以下的第3片葉。
全文摘要
一種葡萄白粉菌的離體接種方法，包括如下步驟離體葉片的選擇采摘葡萄梢尖以下的第3～6片的葉片；菌種的選用選用新鮮的葡萄白粉病菌飽子；藥劑的配制配制濃度為10～90mg/L的苯丙咪唑溶液；葉片的處理清理后在葉片的葉柄上纏繞無菌棉，加滴配制好的苯丙咪唑溶液；接種直接接種到上述經(jīng)苯丙咪唑溶液處理的離體葉片上培養(yǎng)。本發(fā)明采用苯丙咪唑作為保綠劑使用，將葡萄白粉菌接種在離體葉片上，苯丙咪唑?qū)﹄x體葉片發(fā)生白粉病無影響，解決了葡萄白粉菌的培養(yǎng)與保藏的問題。
文檔編號C12N1/14GK101372670SQ20081006193
公開日2009年2月25日 申請日期2008年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月27日
發(fā)明者徐永江, 房聰玲, 王漢榮, 王立如, 王連平 申請人:王立如;王漢榮;徐永江;王連平;房聰玲