專利名稱：一種菠蘿蛋白酶的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種菠蘿蛋白酶的制造方法，特別是以菠蘿莖(植株)為主要原料工業(yè)化提 取菠蘿蛋白酶的新方法。
背景技術(shù)：
菠蘿蛋白酶是一種蛋白質(zhì)水解酶，從菠蘿植物中的莖、葉、果實(shí)、果柄、果皮等經(jīng)生物 技術(shù)方法制得的一種純天然植物蛋白酶；菠蘿蛋白酶為富有菠蘿香氣，淺黃色至棕黃色粉末； 菠蘿蛋白酶有很強(qiáng)的分解纖維蛋白和血凝塊的作用，在醫(yī)療上可以增進(jìn)藥物的吸收，可以輔 助治療心腦血管病、腫瘤及炎癥；菠蘿蛋白酶能進(jìn)行蛋白質(zhì)水解等各種生化反應(yīng)，還可廣泛 應(yīng)用于醫(yī)藥保健品、美容化妝品、食品、生物、制革化工、動(dòng)物飼料等行業(yè)。
國(guó)內(nèi)外很早就對(duì)菠蘿蛋白酶進(jìn)行研究，從發(fā)展過(guò)程來(lái)看，菠蘿蛋白酶的提取方法有高嶺 土吸附法、單寧沉淀法和有機(jī)溶劑提取法，各種方法優(yōu)劣比較為
(1) 、高嶺土吸附法生產(chǎn)工藝和操作都比較復(fù)雜，原料消耗多，所需設(shè)備也多，酶活總 回收率低(達(dá)不到0.1%)，但產(chǎn)品質(zhì)量好，純度高。由于使用高嶺土并使用鹽析工藝，對(duì)環(huán) 境造成污染，環(huán)保投資較大。
(2) 、單寧沉淀法工藝和操作比高嶺土簡(jiǎn)單，原料消耗少，所需設(shè)備少，易于土法上馬。 但酶回收率低(約0.1%)，部分產(chǎn)品能達(dá)到食品級(jí),由于生產(chǎn)中加入單寧，對(duì)環(huán)境污染大。
(3) 、有機(jī)溶劑提取法需要投入大量的有機(jī)溶劑，酶的活性不高，成本高。 高嶺土吸附法和單寧吸附法均為傳統(tǒng)的菠蘿蛋白酶的提取方法，提取的過(guò)程中均需要加
入化學(xué)物質(zhì)將酶與非酶物質(zhì)分開(kāi)，從而達(dá)到分離純化酶的目的。由于提取過(guò)程中化學(xué)物質(zhì)的 加入以后難以完全分離，會(huì)影響產(chǎn)品的質(zhì)量，從而也限制了產(chǎn)品的應(yīng)用范圍。
中國(guó)專利871000106提供了菠蘿加工下腳料提取菠蘿蛋白酶的新方法，用一種高分子化 合物聚丙烯酸作為沉淀劑將果汁中的菠蘿蛋白酶沉淀，然后沉淀用水懸浮，調(diào)節(jié)Ph值解析， 用0&++將聚丙烯酸除去，鹽析后得到酶成品，整個(gè)生產(chǎn)工藝操作較為復(fù)雜，難以形成產(chǎn)業(yè) 化生產(chǎn)。
中國(guó)專利200610043457.6提供了一種菠蘿蛋白酶冷凍干燥分的制備方法，菠蘿莖壓搾 取汁后用氧化鋅吸附，解析后進(jìn)行超濾濃縮，濃縮液冷凍干燥得成品，該方法在酶濃縮提取 的過(guò)程中的溫度均高于3(TC，根據(jù)現(xiàn)實(shí)工廠生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，如此高的溫度，菠蘿酶料液早已發(fā)酸 變質(zhì)，酶活力損失也很大，產(chǎn)品質(zhì)量的難以保證，而且吸附與解析操作過(guò)程繁瑣，無(wú)法形成 連續(xù)操作，難以進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化提取生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服以上菠蘿蛋白酶提取方法在實(shí)際生產(chǎn)中存在的不足，本發(fā)明提供了一種具有酶 提取回收率高(達(dá)到0.2%)、酶純度高、酶活力高(達(dá)到3000GDU/g以上)且穩(wěn)定性好，節(jié) 能、降低生產(chǎn)成本的菠蘿蛋白酶的制造方法。
本發(fā)明的目的可以通過(guò)下列技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)
本發(fā)明的菠蘿蛋白酶的制造方法，包括以下步驟(1)菠蘿莖清洗一(2)菠蘿莖的粉碎
—(3)壓榨取汁一(4)粗過(guò)濾一(5)熱交換一(6)離心一分離一(7)微濾一(8)超濾 —(9)精制一合成一(10)真空冷凍干燥一(11)粉碎一調(diào)制一包裝一成品
所述的粉碎步驟是清洗干凈的新鮮優(yōu)質(zhì)菠蘿莖(去除嫩莖、葉、泥土等雜質(zhì))通過(guò)傳
送帶輸送到破碎機(jī)進(jìn)行破碎處理，即將菠蘿莖破碎成5 15細(xì)小塊，再經(jīng)過(guò)輸送帶到達(dá)粉碎 機(jī)進(jìn)行粉碎處理，粉碎成3.1 mm以上面的顆粒；
所述的壓榨步驟是粉碎好的菠蘿莖通過(guò)傳送帶到達(dá)壓搾機(jī)進(jìn)行壓搾處理,壓榨機(jī)下有接 料槽,此時(shí)就得到菠蘿酶料液(含雜質(zhì)較多)，壓榨機(jī)尾部排除的渣手碾不出水；
所述的粗濾步驟是菠蘿酶料液經(jīng)過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾，三足離心機(jī)連續(xù)分離去除淀粉等雜質(zhì)， 取清液；
所述的熱交換步驟是菠蘿酶料液通過(guò)板式換熱器達(dá)到熱交換的目的，迅速將料液溫度 降低，并保存于儲(chǔ)罐中；同時(shí)在分離、濃縮過(guò)程中通過(guò)制冷機(jī)組的冷水循環(huán)保持料液溫度在 低溫狀態(tài)(8。C 12。C);
所述的離心步驟是儲(chǔ)罐中的料液經(jīng)過(guò)碟式離心機(jī)、管式離心機(jī)的連續(xù)分離得到干凈的 菠蘿酶清液；
所述的微濾步驟是菠蘿酶清液通過(guò)截留分子量為200000的微濾膜組件達(dá)到除菌和除雜 質(zhì)的目的；
所述的超濾步驟是除菌除雜質(zhì)后的清液通過(guò)截流分子量為10000 20000的超濾膜組件 進(jìn)行超濾濃縮，去除水分和小分子雜質(zhì)，得到菠蘿酶濃縮液，濃縮體積比為100: 1;
所述的精制、合成步驟是通過(guò)添加酶保護(hù)劑和重金屬螯合劑等，并用大容量冷凍離心 機(jī)分離，取清液；
所述的真空冷凍干燥步驟是合成后的菠蘿酶濃縮液即可通過(guò)真空冷凍干燥機(jī)組，烘干 水分，得到酶干固體。操作過(guò)程為
原料預(yù)凍將菠蘿酶濃縮液放入真空冷凍干燥機(jī)或超低溫冰箱(冷庫(kù))中速凍至溫度為 —3(TC;
抽真空原料冷凍至一3(TC時(shí)開(kāi)始抽真空，繼續(xù)維持制冷2小時(shí)；加熱抽真空維持2小時(shí)后將制冷變?yōu)榧訜?，緩慢加熱使料液溫度上升?(TC時(shí)即得菠 蘿蛋白酶真空冷凍干燥固體。
所述的粉碎、包裝步驟是酶干固體經(jīng)過(guò)粉碎、添加輔料、混勻后就可以包裝成成品。 本發(fā)明的有益效果是
(1) 選擇新鮮優(yōu)質(zhì)菠蘿莖，保證24小時(shí)內(nèi)壓搾，減少因高溫腐敗變質(zhì)導(dǎo)致的酶活力降
低；
(2) 通過(guò)清洗池的清洗去除雜質(zhì)，使原料后續(xù)分離更易進(jìn)行；
G)通過(guò)熱交換迅速降低料液溫度并通過(guò)制冷機(jī)組的循環(huán)冷水保持分離提取的料液溫度
在低溫環(huán)境，減少酶活力損失；
(4) 采用逐級(jí)分離的方式，提高酶純度和酶活力，即通過(guò)三足離心機(jī)、碟式離心機(jī)、管 式離心機(jī)的連續(xù)分離來(lái)實(shí)現(xiàn)；
(5) 通過(guò)微濾膜組件達(dá)到去除微生物和雜質(zhì)的目的，保證產(chǎn)品質(zhì)量；
(6) 料液通過(guò)超濾膜組件濃縮比例為100: 1，減少水分，降低能耗；
(7) 通過(guò)添加酶保護(hù)劑和重金屬螯合劑并用大容量冷凍離心機(jī)分離達(dá)到精制合成，去除 重金屬的目的；
(8) 釆用真空冷凍干燥技術(shù)，通過(guò)物料中的水變成冰時(shí)直接升華被排走，保證酶在干燥 過(guò)程中在低溫條件下進(jìn)行，減少烘干過(guò)程中的酶質(zhì)量的損失和酶活力的降低。
(9) 釆用本方法提取的菠蘿蛋白酶外觀指標(biāo)、干燥失重、灰分、酶活性、重金屬含量、 微生物限度等指標(biāo)均達(dá)到或超過(guò)國(guó)內(nèi)外相關(guān)藥典標(biāo)準(zhǔn)。
具休實(shí)施方式 實(shí)施例一
本實(shí)施例的菠蘿蛋白酶的制造方法，它包括以下步驟菠蘿莖的采購(gòu)一菠蘿莖清洗一菠 蘿莖的粉碎一壓搾取汁一粗過(guò)濾一熱交換一離心一微濾一超濾一精制一合成一真空冷凍干燥 —粉碎一調(diào)制一包裝一成品。具體是選擇新鮮優(yōu)質(zhì)菠蘿老莖，去除嫩莖、葉、等雜質(zhì)，放 入清洗池中清洗，清洗干凈的菠蘿莖通過(guò)傳送帶輸送到破碎機(jī)進(jìn)行破碎處理，破碎成3 5小 塊，再經(jīng)過(guò)輸送帶到達(dá)粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎處理，粉碎成3.1 mm大小的顆粒;粉碎好的菠蘿莖通 過(guò)傳送帶到達(dá)壓榨機(jī)進(jìn)行壓搾處理,壓榨機(jī)下有接料槽,此時(shí)就得到菠蘿酶料液(含雜質(zhì)較多)； 菠蘿酶料液經(jīng)過(guò)網(wǎng)篩和三足離心機(jī)連續(xù)分離去除淀粉等雜質(zhì)，取清液；菠蘿酶料液通過(guò)板式 換熱器達(dá)到熱交換的目的，迅速將料液溫度降低，并保存于儲(chǔ)罐中；儲(chǔ)罐中的料液經(jīng)過(guò)碟式 離心機(jī)、管式離心機(jī)的分離得到干凈的菠蘿清液；菠蘿酶清液通過(guò)截流分子量100000的微濾 達(dá)到除菌和除雜質(zhì)的目的；除菌除雜質(zhì)后的清液通過(guò)截流分子量10000 20000的超濾膜組件進(jìn)行超濾濃縮，去除水分和小分子雜質(zhì)，得到菠蘿酶濃縮液，濃縮體積比為100: 1;通過(guò)添 加酶保護(hù)劑0.1%硫代硫酸鈉和重金屬螯合劑0.1%乙二胺四乙酸二鈉等，并用大容量冷凍離 心機(jī)分離，取清液，達(dá)到精制、合成的目的；合成后的菠蘿酶濃縮液即可通過(guò)真空冷凍干燥 機(jī)組，烘干水分，預(yù)凍8小時(shí)至一3(TC開(kāi)始抽真空，維持制冷2小時(shí)后將制冷變?yōu)榧訜?，?溫至30'C時(shí)得到酶干固體，共花時(shí)間20小時(shí)；酶干固體經(jīng)過(guò)粉碎、添加輔料、混勻后就可 以包裝成成品，成品酶活力為3000GDU/g。 實(shí)施例二
本實(shí)施例的菠蘿蛋白酶的制造方法，它包括以下步驟菠蘿莖的采購(gòu)一菠蘿莖清洗一菠
蘿莖的粉碎一壓搾取汁一粗過(guò)濾一熱交換一離心一微濾一超濾一精制一合成一真空冷凍干燥
—粉碎一調(diào)制一包裝一成品。具體是選擇新鮮優(yōu)質(zhì)菠蘿老莖，去除嫩莖、葉、等雜質(zhì)，放
入清洗池中清洗，清洗干凈的菠蘿莖通過(guò)傳送帶輸送到破碎機(jī)進(jìn)行破碎處理，破碎成5 8小 塊，再經(jīng)過(guò)輸送帶到達(dá)粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎處理，粉碎成4.0 mm大小的顆粒;粉碎好的菠蘿莖通 過(guò)傳送帶到達(dá)壓搾機(jī)進(jìn)行壓榨處理,壓榨機(jī)下有接料槽，此時(shí)就得到菠蘿酶料液(含雜質(zhì)較多)； 菠蘿酶料液經(jīng)過(guò)網(wǎng)篩和三足離心機(jī)連續(xù)分離去除淀粉等雜質(zhì),取清液；菠蘿酶料液通過(guò)板式換
熱器達(dá)到熱交換的目的，迅速將料液溫度降低,并保存于儲(chǔ)罐中；儲(chǔ)罐中的料液經(jīng)過(guò)碟式離心 機(jī)、管式離心機(jī)的分離得到干凈的菠蘿清液；菠蘿酶清液通過(guò)截流分子量200000的微濾達(dá)到 除菌和除雜質(zhì)的目的；除菌除雜質(zhì)后的清液通過(guò)截流分子量10000 20000的超濾膜組件進(jìn)行
超濾濃縮，去除水分和小分子雜質(zhì)，得到菠蘿酶濃縮液，濃縮體積比為100: 1;通過(guò)添加酶
保護(hù)劑0.1%硫代硫酸鈉和重金屬螯合劑0.1%乙二胺四乙酸二鈉等，并用大容量冷凍離心機(jī) 分離，取清液，達(dá)到精制、合成的目的；合成后的菠蘿酶濃縮液即可通過(guò)真空冷凍干燥機(jī)組， 烘干水分，預(yù)凍8小時(shí)至一30。C開(kāi)始抽真空，維持制冷2小時(shí)后將制冷變?yōu)榧訜幔郎刂?0 "C時(shí)得到酶干固體，共花時(shí)間20小時(shí)；酶干固體經(jīng)過(guò)粉碎、添加輔料、混勻后就可以包裝成 成品，成品酶活力為3050GDU/g。 實(shí)施例三
本實(shí)施例的菠蘿蛋白酶的制造方法，它包括以下步驟菠蘿莖的采購(gòu)一菠蘿莖清洗一菠
蘿莖的粉碎一壓榨取汁一粗過(guò)濾一熱交換一離心一微濾一超濾一精制—合成—真空冷凍干燥
—粉碎一調(diào)制一包裝一成品。具體是選擇新鮮優(yōu)質(zhì)菠蘿老莖，去除嫩莖、葉、等雜質(zhì)，放
入清洗池中清洗，清洗干凈的菠蘿莖通過(guò)傳送帶輸送到破碎機(jī)進(jìn)行破碎處理，破碎成8 12
小塊，再經(jīng)過(guò)輸送帶到達(dá)粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎處理，粉碎成4.5 mm大小的顆粒;粉碎好的菠蘿莖
通過(guò)傳送帶到達(dá)壓榨機(jī)進(jìn)行壓搾處理,壓榨機(jī)下有接料槽,此時(shí)就得到菠蘿酶料液(含雜質(zhì)較
多)；菠蘿酶料液經(jīng)過(guò)網(wǎng)篩和三足離心機(jī)連續(xù)分離去除淀粉等雜質(zhì),取清液；菠蘿酶料液通過(guò)板式換熱器達(dá)到熱交換的目的,迅速將料液溫度降低,并保存于儲(chǔ)罐中；儲(chǔ)罐中的料液經(jīng)過(guò)碟式離 心機(jī)、管式離心機(jī)的分離得到干凈的菠蘿清液；菠蘿酶清液通過(guò)截流分子量200000的微濾達(dá) 到除菌和除雜質(zhì)的目的；除菌除雜質(zhì)后的清液通過(guò)截流分子量10000 20000的超濾膜組件進(jìn) 行超濾濃縮，去除水分和小分子雜質(zhì)，得到菠蘿酶濃縮液，濃縮體積比為100: 1;通過(guò)添加 酶保護(hù)劑0.1%硫代硫酸鈉和重金屬螯合劑0.1%乙二胺四乙酸二鈉等，并用大容量冷凍離心 機(jī)分離，取清液，達(dá)到精制、合成的目的；合成后的菠蘿酶濃縮液即可通過(guò)真空冷凍干燥機(jī) 組，烘干水分，預(yù)凍8小時(shí)至一3(TC開(kāi)始抽真空，維持制冷2小時(shí)后將制冷變?yōu)榧訜?，升?至3(TC時(shí)得到酶干固體，共花時(shí)間20小時(shí)；酶千固體經(jīng)過(guò)粉碎、添加輔料、混勻后就可以 包裝成成品，成品酶活力為3080GDU/g。 實(shí)施例四
本實(shí)施例的菠蘿蛋白酶工業(yè)化生產(chǎn)方法，它包括以下步驟菠蘿莖的采購(gòu)一菠蘿莖清洗 —菠蘿莖的粉碎一壓搾取汁一粗過(guò)濾一熱交換一離心一微濾一超濾一精制一合成一真空冷凍
干燥一粉碎一調(diào)制一包裝一成品。具體是選擇新鮮優(yōu)質(zhì)菠蘿老莖，去除嫩莖、葉、等雜質(zhì)，
放入清洗池中清洗，清洗干凈的菠蘿莖通過(guò)傳送帶輸送到破碎機(jī)進(jìn)行破碎處理，破碎成10 15小塊，再經(jīng)過(guò)輸送帶到達(dá)粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎處理，粉碎成5.0mm大小的顆粒;粉碎好的菠蘿 莖通過(guò)傳送帶到達(dá)壓榨機(jī)進(jìn)行壓搾處理,壓榨機(jī)下有接料槽，此時(shí)就得到菠蘿酶料液(含雜質(zhì)較 多)；菠蘿酶料液經(jīng)過(guò)網(wǎng)篩和三足離心機(jī)連續(xù)分離去除淀粉等雜質(zhì)，取清液；菠蘿酶料液通過(guò)板 式換熱器達(dá)到熱交換的目的，迅速將料液溫度降低,并保存于儲(chǔ)罐中；儲(chǔ)罐中的料液經(jīng)過(guò)碟式離 心機(jī)、管式離心機(jī)的分離得到干凈的菠蘿清液；菠蘿酶清液通過(guò)截流分子量200000的微濾達(dá) 到除菌和除雜質(zhì)的目的；除菌除雜質(zhì)后的清液通過(guò)截流分子量10000 15000的超濾膜組件進(jìn) 行超濾濃縮，去除水分和小分子雜質(zhì)，得到菠蘿酶濃縮液，濃縮體積比為100: 1;通過(guò)添加 酶保護(hù)劑0.1%硫代硫酸鈉和重金屬螯合劑0.1%乙二胺四乙酸二鈉等，并用大容量冷凍離心 機(jī)分離，取清液，達(dá)到精制、合成的目的；合成后的菠蘿酶濃縮液即可通過(guò)真空冷凍干燥機(jī) 組，烘干水分，預(yù)凍8小時(shí)至一3(TC開(kāi)始抽真空，維持制冷2小時(shí)后將制冷變?yōu)榧訜?，升?至3(TC時(shí)得到酶干固體，共花時(shí)間20小時(shí)；酶干固體經(jīng)過(guò)粉碎、添加輔料、混勻后就可以 包裝成成品，成品酶活力為3100GDU/g。 實(shí)施例五
本實(shí)施例的菠蘿蛋白酶的制造方法，它包括以下步驟菠蘿莖的采購(gòu)一菠蘿莖清洗一菠 蘿莖的粉碎一壓搾取汁一粗過(guò)濾一熱交換一離心一微濾一超濾一精制一合成一真空冷凍干燥 —粉碎一調(diào)制一包裝一成品。具體是選擇新鮮優(yōu)質(zhì)菠蘿老莖，去除嫩莖、葉、等雜質(zhì)，放 入清洗池中清洗，清洗干凈的菠蘿莖通過(guò)傳送帶輸送到破碎機(jī)進(jìn)行破碎處理，破碎成10 15小塊，再經(jīng)過(guò)輸送帶到達(dá)粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎處理，粉碎成3.5 mm大小的顆粒;粉碎好的菠蘿莖 通過(guò)傳送帶到達(dá)壓搾機(jī)進(jìn)行壓榨處理,壓搾機(jī)下有接料槽，此時(shí)就得到菠蘿酶料液(含雜質(zhì)較 多)；菠蘿酶料液經(jīng)過(guò)網(wǎng)篩和三足離心機(jī)連續(xù)分離去除淀粉等雜質(zhì),取清液；菠蘿酶料液通過(guò)板 式換熱器達(dá)到熱交換的目的,迅速將料液溫度降低,并保存于儲(chǔ)罐中；儲(chǔ)罐中的料液經(jīng)過(guò)碟式離 心機(jī)、管式離心機(jī)的分離得到干凈的菠蘿清液；菠蘿酶清液通過(guò)截流分子量100000的微濾達(dá) 到除菌和除雜質(zhì)的目的；除菌除雜質(zhì)后的清液通過(guò)截流分子量8000 10000的超濾膜組件進(jìn) 行超濾濃縮，去除水分和小分子雜質(zhì)，得到菠蘿酶濃縮液，濃縮體積比為100: 1;通過(guò)添加 酶保護(hù)劑0.1%硫代硫酸鈉和重金屬螯合劑0.1%乙二胺四乙酸二鈉等，并用大容量冷凍離心 機(jī)分離，取清液，達(dá)到精制、合成的目的；合成后的菠蘿酶濃縮液即可通過(guò)真空冷凍干燥機(jī) 組，烘干水分，預(yù)凍8小時(shí)至一3(TC開(kāi)始抽真空，維持制冷2小時(shí)后將制冷變?yōu)榧訜幔郎?至3(TC時(shí)得到酶干固體，共花時(shí)間20小時(shí)；酶干固體經(jīng)過(guò)粉碎、添加輔料、混勻后就可以 包裝成成品，成品酶活力為3120GDU/g。
權(quán)利要求
1、一種菠蘿蛋白酶的制造方法，其特征在于它包括以下步驟(1)菠蘿莖清洗→(2)菠蘿莖的粉碎→(3)壓榨取汁→(4)粗過(guò)濾→(5)熱交換→(6)離心→(7)微濾→(8)超濾→(9)精制→合成→(10)真空冷凍干燥→(11)粉碎→調(diào)制→包裝→成品。
2、 如權(quán)利要求l所述的一種菠蘿蛋白酶的制造方法，其特征在于所述的粉碎步驟是 將清洗干凈的優(yōu)質(zhì)菠蘿莖(去除嫩莖、葉、土等雜質(zhì))通過(guò)傳送帶輸送到破碎機(jī)進(jìn)行破碎處 理，即將菠蘿莖破碎成5 15細(xì)小塊，再經(jīng)過(guò)輸送帶到達(dá)粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎處理，粉碎成3.1mm 以上的顆粒；
3、 如權(quán)利要求l所述的一種菠蘿蛋白酶的制造方法，其特征在于所述的壓榨步驟是 粉碎好的菠蘿莖通過(guò)傳送帶到達(dá)壓榨機(jī)進(jìn)行壓榨處理，壓榨機(jī)下有接料槽，此時(shí)就得到菠蘿酶 料液(含雜質(zhì)較多)；
4、 如權(quán)利要求l所述的一種菠蘿蛋白酶的制造方法，其特征在于所述的粗濾歩驟是 菠蘿酶料液經(jīng)過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾，三足離心機(jī)連續(xù)分離去除淀粉等雜質(zhì)，取清液；
5、 如權(quán)利要求1所述的一種菠蘿蛋白酶的制造方法，其特征在于所述的熱交換步驟是 菠蘿酶料液通過(guò)板式換熱器達(dá)到熱交換的目的，迅速將料液溫度降低，并保存于儲(chǔ)罐中；同 時(shí)在分離、濃縮過(guò)程中通過(guò)制冷機(jī)組的冷水循環(huán)保持料液溫度在低溫狀態(tài)(8'C 12'C);
6、 如權(quán)利要求l所述的一種菠蘿蛋白酶的制造方法，其特征在于所述的離心步驟是 儲(chǔ)罐中的料液經(jīng)過(guò)碟式離心機(jī)、管式離心機(jī)的連續(xù)分離得到千凈的菠蘿酶清液；
7、 如權(quán)利要求l所述的一種菠蘿蛋白酶的制造方法，其特征在于所述的微濾步驟是菠蘿酶清液通過(guò)微濾膜組件達(dá)到除菌和除雜質(zhì)的目的；
8、 如權(quán)利要求1所述的一種菠蘿蛋白酶的制造方法，其特征在于所述的超濾步驟是 除菌除雜質(zhì)后的清液通過(guò)超濾膜組件進(jìn)行超濾濃縮，去除水分和小分子雜質(zhì)，得到菠蘿酶濃 縮液；
9、 如權(quán)利要求l所述的一種菠蘿蛋白酶的制造方法，其特征在于所述的精制、合成歩 驟是通過(guò)添加酶保護(hù)劑和重金屬螯合劑等，并用大容量冷凍離心機(jī)分離，取清液，達(dá)到精 帝U、合成的目的；
10、 如權(quán)利要求1所述的一種菠蘿蛋白酶的制造方法，其特征在于所述的真空冷凍干 燥步驟是將菠蘿酶濃縮液放入真空冷凍干燥機(jī)或超低溫冰箱(冷庫(kù))中速凍至溫度為一30 "C;開(kāi)始抽真空，繼續(xù)維持制冷2小時(shí)；將制冷變?yōu)榧訜幔徛訜崾沽弦簻囟壬仙?(TC 時(shí)即得菠蘿蛋白酶真空冷凍干燥固體。酶干固體經(jīng)過(guò)粉碎、添加輔料、混勾后就可以包裝成 成品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種菠蘿蛋白酶的制造方法，特別是以菠蘿莖(植株)為主要原料工業(yè)化提取菠蘿蛋白酶的新方法。它包括以下步驟(1)菠蘿莖清洗→(2)菠蘿莖的粉碎→(3)壓榨取汁→(4)粗過(guò)濾→(5)熱交換→(6)離心→(7)微濾→(8)超濾→(9)精制→合成→(10)真空冷凍干燥→(11)粉碎→調(diào)制→包裝→成品。酶提取回收率高(達(dá)到0.2％)、酶純度高、酶活力高(達(dá)到3000GDU/g以上)且穩(wěn)定性好，節(jié)能、降低生產(chǎn)成本的菠蘿蛋白酶的制造方法。
文檔編號(hào)C12N9/50GK101319208SQ20081002728
公開(kāi)日2008年12月10日 申請(qǐng)日期2008年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月8日
發(fā)明者森 林, 黃忠華, 龍曉鵬 申請(qǐng)人:徐聞縣美侖生物制品有限公司