專利名稱::半胱氨酸顆粒及其作為動物乳酸雙歧桿菌生長刺激物的用途的制作方法半胱氨酸顆粒及其作為動物乳酸雙歧桿菌生長刺激物的用途發(fā)明領域本發(fā)明涉及半胱氨酸顆粒以及它們作為動物雙歧桿菌乳酸亞種(5zydoZac&n-wmaw'wa//51/ac/Zs)生長刺激物的用途。發(fā)明的現(xiàn)有技術在乳制品領域中,益生菌劑市場正在萌發(fā)。為了提出含有高水平益生菌菌抹同時具有良好器官感覺屬性的產(chǎn)品,乳制品專業(yè)人員面臨混合發(fā)酵的問題,所述混合發(fā)酵采用工業(yè)酵素或專門酵素和益生菌酵素。被稱為益生菌菌抹的菌林以在乳制品底物中生長緩慢的菌種(對于雙歧桿菌,世代時間為1h至2h)為代表,而工業(yè)酵素源自生長較快的酸乳酪酵素(對于嗜熱鏈球菌OS."wmo;/n7tw)和保加利亞乳桿菌(丄.Z)w/gahcws),世時間為15min至30min)。難以在工業(yè)酵素生長與益生菌劑生長之間實現(xiàn)良好折衷;大多數(shù)工業(yè)專業(yè)人員偏向器官感覺方面多于益生菌的質量通常,益生菌個數(shù)為106至1()7ufc/g發(fā)酵產(chǎn)品。目前,大多數(shù)對這樣的益生菌劑的健康研究已經(jīng)用含有最少108ufc/g益生菌菌抹的產(chǎn)品進行。對能夠刺激益生菌生長的化合物的研究以對菌株的營養(yǎng)要求和乳制品底物滿足這些要求的能力方面的深入了解為基礎。工業(yè)菌林的菌株的生長,它們?yōu)槭称芳壊⑶宜鼈儾唤档彤a(chǎn)品的器官感覺屬性。此外,必須用來提供刺激而且滿足以上限制的激活劑化合物的量相對于乳制品底物的比例通常很小。這樣的劑量(通常小于100mg/L)和允許的公差與用來生產(chǎn)乳制品底物的測量系統(tǒng)和并入模式不相容,因此以工業(yè)規(guī)模使用這樣的物質是有問題的。當所采用的工業(yè)菌抹必須在若干乳酸菌菌株共生的背景下起作用時,問題更加復雜,這是除了用益生菌產(chǎn)生乳酸發(fā)酵外使用嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌共生發(fā)酵的發(fā)酵乳的情形?,F(xiàn)有技術中已經(jīng)進行了多種試驗來確定有利于益生菌劑生長的條件。然而,多數(shù)這樣的試驗用益生菌的純培養(yǎng)物進行,不考慮在工業(yè)環(huán)境中生產(chǎn)產(chǎn)品期間其它乳酸菌的可能存在和活性。熱爾韋達諾尼公司于2005年7月15日提交的法國專利申請FR-0507529中描述了一解決方案它提出將含硫氨基酸用作雙歧桿菌的激活劑。本發(fā)明提出尤其適于動物雙歧桿菌乳酸亞種的菌抹的改進。本發(fā)明因此提出接種體,其不具有現(xiàn)有技術的劣勢,而且克服在用于人類消費的具有益生菌價值的發(fā)酵乳制品的工業(yè)生產(chǎn)期間簡單、安全而且有效地激活和/或刺激動物乳酸雙歧桿菌CB.fl"z'ma/h/ac""的問題,并且更具體地涉及發(fā)酵乳制品,其除了益生菌動物乳酸雙歧桿菌進行的發(fā)酵以外,還包含嗜熱鏈球菌-保加利亞乳桿菌的共生發(fā)酵。發(fā)明概述本發(fā)明涉及改進的動物雙歧桿菌乳酸亞種接種體,涉及所述接種體的用途,并涉及用所述接種體獲得的發(fā)酵乳制品。本發(fā)明的接種體尤其適于向乳制品底物中直接接種至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹以將所述乳制品底物轉化成適于人類消費的發(fā)酵乳制品,并且更具體地轉化成含有至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株的具有益生菌價值的發(fā)酵乳制品。接種體作為混合物或以成套的形式包括冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉,其中含有特殊的L-半胱氨酸和至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹。本發(fā)明人已經(jīng)選擇了特殊形式的半胱氨酸,即L-半胱氨酸,其形式使得由所述半胱氨酸生產(chǎn)的顆粒和/或一種或多種凍干粉(一旦解凍和/或再溶解)的pH至少為4。適當?shù)腖-半胱氨酸的一實例是通常^皮稱為半胱氨酸堿的L-半胱氨酸(其簡化形式的通式為HSCH2CH(NH)2C02H)。這種特殊形式的半胱氨酸比通常使用的其它形式(通常為半胱氨酸-HCl,鹽酸半胱氨酸一水合物的形式)的半胱氨酸有效。盡管本發(fā)明人選擇的特殊的L-半胱氨酸溶解度低,但是本發(fā)明人已經(jīng)成功地制造冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉形式的接種體,所述冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉使動物乳酸雙歧桿菌的細胞和這種特殊形式的L-半胱氨酸結合或整合,而不以任何方式損傷動物乳酸雙歧桿菌的生理狀態(tài)和/或代謝。在本發(fā)明的接種體的"整合"形式中,至少一種接種體的顆?;騼龈煞弁瑫r含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞和這種特殊形式的L-半胱氨酸。本發(fā)明的接種體的"結合"形式中,部分顆?;騼龈煞酆斜景l(fā)明的特殊的L-半胱氨酸,另一部分顆?;蛄硪粌龈煞酆袆游锶樗犭p歧桿菌的細胞。本發(fā)明因此提出與半胱氨酸激活劑結合或整合的動物乳酸雙歧桿菌的接種體。顯然,本發(fā)明的接種體能夠生產(chǎn)所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)的種群,在將發(fā)酵產(chǎn)品于4。C至ITC儲存至少20天后,優(yōu)選至少30天后,所述種群不低于每克所述發(fā)酵產(chǎn)品5x107ufc,優(yōu)選不低于108ufc(見圖8和9)。本發(fā)明的接種體尤其適于生產(chǎn)具有高益生菌價值的發(fā)酵乳,因為它能夠使產(chǎn)品在冷凍環(huán)境下的儲存期間維持很高水平的動物乳酸雙歧桿菌,并且因為所用的L-半胱氨酸激活劑的量使得發(fā)酵乳的嗜熱鏈球菌+保加利亞乳桿菌共生和器官感覺屬性都不受到負面影響。附圖簡述本申請引用下述附圖圖k以下的流程圖9-結合溶液,其計劃生產(chǎn)一種或多種益生菌酵素顆粒和半胱氨酸顆粒,所述兩種類型的顆粒能夠在后來被混合在一起;和-整合溶液,其計劃生產(chǎn)同時含有一種或多種益生菌酵素和半胱氨酸的顆粒。圖2:生產(chǎn)整合顆粒(半胱氨酸-HCl+—種或多種益生菌酵素)的流程圖將動物乳酸雙歧桿菌菌林1-2494或菌株BB12⑧酵素配制成同時含有益生菌酵素和半胱氨酸的整合顆粒,在這里半胱氨酸是半胱氨酸誦HC1。圖3:用如下接種的乳制品混合物的pH隨時間的變化-動物乳酸雙歧桿菌菌抹1-2494顆粒(參考曲線,下面);或-同時含有動物乳酸雙歧桿菌菌4朱1-2494和半胱氨酸-HCl的整合顆粒(上面的曲線);說明當與半胱氨酸-HCl配制在相同顆粒(與半胱氨酸-HCl整合的制劑)中時益生菌動物乳酸雙歧桿菌在生理狀態(tài)下經(jīng)歷的降解。圖4:生產(chǎn)整合顆粒(半胱氨酸堿+—種或多種益生菌酵素)的流程圖將動物乳酸雙歧桿菌菌4朱1-2494或菌才朱BB12⑧酵素配制成同時含有益生菌酵素和半胱氨酸的整合顆粒,在這里半胱氨酸是半胱氨酸堿。圖5:用如下接種的乳制品混合物的pH隨時間的變化-動物乳酸雙歧桿菌菌4朱1-2494顆粒(參考曲線,上面);或-同時含有動物乳酸雙歧桿菌菌4朱1-2494和半胱氨酸堿的整合顆粒(下面的曲線);說明選擇半胱氨酸》咸配制的整合顆粒(動物乳酸雙歧桿菌+半胱氨酸)意味著這種益生菌的生理狀態(tài)沒有惡化。圖6至9:乳制品混合物的比較;-用工業(yè)酵素(嗜熱鏈球菌1-1630、保加利亞乳桿菌-1-1632和保加利亞乳桿菌1-1519顆粒的混合物)的冷凍顆粒和益生菌酵素動物乳酸雙歧桿菌(菌抹BB12⑧或菌林I-2494)的冷凍顆粒將所述乳制品混合物接種至0.5g/L;和-與已經(jīng)向其中添加水而不是整合半胱氨酸的參考混合物相比,已經(jīng)以不同于益生菌酵素顆粒的半胱氨酸顆粒形式(結10合溶液G4)或與益生菌酵素顆粒的整合形式(整合溶液G4I)向所述乳制品混合物中添加半胱氨酸堿。圖6和7:pH隨時間(小時)的變化;圖8和9:在10°C下儲存發(fā)酵乳制品期間生物量(ufc/mL)隨時間(天)的變化;圖6和8:動物乳酸雙歧桿菌菌4朱BB12⑧益生菌酵素-乳制品混合物BB12T=用工業(yè)酵素顆粒和雙歧桿菌BB12⑧酵素參考顆粒(含有水而不是半胱氨酸的顆粒)的混合物接種至0.5g/L的乳制品混合物;-乳制品混合物BB12G4=如對BB12T乳制品混合物進行接種的乳制品混合物,即用工業(yè)酵素顆粒和雙歧桿菌BB12⑧酵素參考顆粒的混合物接種至0.5g/L,但是已經(jīng)向所述乳制品混合物中添加了不同于益生菌顆粒的冷凍顆粒形式的半胱氨酸堿,使得7.5mg/L濃度的半胱氨酸被添加至混合物中;-乳制品混合物BB12G4I=用工業(yè)酵素顆粒和雙歧桿菌BB12⑧酵素參考顆粒的混合物接種至0.5g/L的乳制品混合物,所述益生菌的整合顆粒含有半胱氨酸堿,以便向混合物中添加7.5mg/L的半胱氨酸石威;圖7和9:動物乳酸雙歧桿菌1-2494益生菌酵素-乳制品混合物1-2494T=用工業(yè)酵素顆粒和雙歧桿菌1-2494酵素參考顆粒(含有水而不是半胱氨酸的顆粒)的混合物接種至0.5g/L的乳制品混合物;-乳制品混合物1-2494G4=如對1-2494T乳制品混合物進行接種的乳制品混合物,即用工業(yè)酵素顆粒和雙歧桿菌1-2494酵素參考顆粒的混合物接種至0.5g/L,但是已經(jīng)向所述乳制品混合物中添加了不同于益生菌顆粒的冷凍顆粒形式的半胱氨酸堿,使得7.5mg/L濃度的半胱氨酸被添加至混合物中;ii-乳制品混合物1-2494G4I=用工業(yè)酵素顆粒和雙歧桿菌1-2494酵素參考顆粒的混合物接種至0.5g/L的乳制品混合物,所述益生菌的整合顆粒含有半胱氨酸堿,以便向混合物中添加7.5mg/L的半胱氨酸堿;詳細描述某些定義本申請中使用的所有術語具有在乳制品工業(yè)和/或食品工業(yè)領域中通常應用的范圍和含義。因此,當提到"乳酸發(fā)酵"時,這與酸化乳酸發(fā)酵有關,指的是伴隨乳酸生產(chǎn)的酸化,所述生產(chǎn)可能伴隨著其它酸、二氧化碳和諸如外泌多糖(EPS)或芳香物質如丁二酮和乙醛的多種物質的產(chǎn)生。同樣地,術語"乳酸酵素"是指能夠使得在乳制品底物上發(fā)生這樣的酸化乳酸發(fā)酵的微生物或者活的或能養(yǎng)活的微生物的菌林。術語"發(fā)酵乳"具有在乳制品工業(yè)中通常應用的含義,即用于動物消費,更具體地用于人類消費,并且來源于乳制品底物的酸化乳酸發(fā)酵的產(chǎn)品。這樣的產(chǎn)品可以含有次要成分如水果、蔬菜、糖、調(diào)味劑等。名稱"發(fā)酵乳"滿足嚴格的法定標準。在這方面可以參考食品標準(CodexAlimentarius)(在FAO和WHO支持下由食品標準委員會制定并由FAO的信息部門出版,可在http:〃codexalimentarius.net上在線獲得;具體參見食品標準的巻12,"NormesCodespourlelaitetlesproduitslaitiers(乳和乳制品的法典標準)",和標準"CODEXSTANA-ll(a)-1975",其內(nèi)容因此通過引用并入本申請)??梢跃唧w參考1988年12月30日關于發(fā)酵乳和酸乳酪的reporterauD6cretfra罕isn°88-1203或1988年12月31日在JournalOfficieldelaRipubliqueFran^aise中/>開的酸乳酪。該法的內(nèi)容據(jù)此通過引用并入本申請。術語"發(fā)酵乳"因此被保留在本申請中用于用乳制品底物制備的乳制品,所述乳制品底物已經(jīng)經(jīng)過至少與巴斯德消毒法相當?shù)奶幚?,用屬于特有種或每一產(chǎn)品的特有種的微生物接種。除了由所采用的微生物的活性引起,任何其它手段都必須不能實現(xiàn)"發(fā)酵乳"的凝固。"發(fā)酵乳"尚未經(jīng)過能夠除去所采用的乳底物的組成成分的任何處理,并且尤其是尚未除去凝固物。"發(fā)酵乳"可以被補充一種或多種香味提取物、一種或多種天然香料,以及限度為最終產(chǎn)品的30%重量比的一種或多種糖和提供特別味道的其它食品添加劑,或者甚至谷類。不允許并入非乳制品來源的脂肪和/或蛋白作為替代品。在銷售給消費者時每100克發(fā)酵乳中所含游離乳酸的量必須不低于0.6克,并且所述乳部分的蛋白量必須不低于正常乳的蛋白量。本申請使用的術語"乳制品底物"是指如該術語在乳制品工業(yè)中被理解的"乳",即基本上含有乳和/或乳組分的底物,其組成使得諸如嗜熱鏈球菌和/或保加利亞乳桿菌乳酸菌菌抹對所述乳制品底物的乳酸發(fā)酵得到可以被指定為人類食品并且能夠更具體地被叫做發(fā)酵乳的產(chǎn)口口o術語"乳制品底物"因此包括任何形式及有任何組成差異的動物來源的乳全脂或脫脂乳,濃縮或未濃縮的乳,超濾或未超濾的乳,新鮮乳或不新鮮的乳,粉末狀或非粉末狀乳,復原或非復原乳,再制或非再制乳,富含乳成分或其他的乳,補充或未補充加工助劑或增強最終產(chǎn)品質量的試劑如風味劑、調(diào)味劑、糖等的乳。例如,用于生產(chǎn)發(fā)酵乳的乳制品底物可以包含脫脂乳、奶油和脫脂乳粉(見下文實施例1)。然而,術語"乳制品底物"在其范圍中不包括名稱"培養(yǎng)基"。術語"培養(yǎng)基"是指旨在促進和/或刺激乳酸菌生長并因此產(chǎn)生乳酸菌接種體的介質,而術語"乳制品底物"是指用來經(jīng)過發(fā)酵轉化以產(chǎn)生適于人類消費的食物的介質。因此,可以被添加至培養(yǎng)基以刺激和/或促進乳酸菌生長的許多化合物不能被添加至乳制品底物以獲得發(fā)酵乳或酸乳酪。這種情形具體是13-許多表面活性劑和/或乳化劑和/或增溶劑和/或去垢劑,如聚氧乙烯-山梨糖醇酐-20-單油酸酯(也被稱為聚山梨酯80或吐溫80);-酸,如檸檬酸或乙酸類酸;_肉提取物;-植物蛋白胨;-甘油磷酸。最頻繁地使用的乳酸酵素包括以下乳酸菌-嗜熱#逄;求菌(&rep/ococcwsAenwo;////^)(例如,可得自CNCM的菌4朱1-1630);和誦德爾布呂克氏乳桿菌<呆力。利亞亞種(丄fl"oZ^"7/Mfife/Z^MecA:/z'6w/ga〃.cws),或l呆力口利亞吝'L才干菌(丄flCtoZ(2C/〃lW^/gan'cws)(例如,可得自CNCM的菌#朱I-1519和I-1362);隱乳酸片王求菌(尸ec^ococcws""Wz7fl"/);-明串J朱菌屬(Z^"cowasfoc50,^口■乳月旨明串珠菌(丄ewcowo^occremon'力;■葡萄聚糖明串珠菌(丄ewcowastocd"/ra"/ci/附);幽乳明串J朱菌(丄ewcowostoc/aC、);-IL^干菌屬(丄aCo6fla'〃w》,^口■嗜酸乳桿菌(丄a"o^d〃i/;sa"Wo/^Z/";y)(例如,可得自CNCM的菌4朱I-0967);■干酪乳桿菌(丄flc^^c"/"sco^〕(例如,可得自CNCM的菌4朱I-518);■瑞士乳軒菌(丄a"o^。7/w51/^/v幼.cws);■德爾布呂克氏乳桿菌乳酸亞種(丄ac/o^c/〃Mcfe/Z)n/ech'z'^;/ac似)(例如,可得自CNCM的菌#朱1-2843);-乳J求菌屬(Zactococci/力,^口疆乳月旨鏈J求菌(丄actococcw51cre附on'力;■乳酸孝L5求菌孝L酸亞種/ac"sssp/aC's)(例如,可得自CNCM的菌抹I-1631);■乳酸乳球菌乳酸亞種二乙?;樗嵘镒兎N(例如,可得自CNCM的菌株1-2806);-3又jt支4干菌屬(5(/^/o6a"en'wm),^口■動物乳酸雙歧桿菌(例如,可得自CNCM的菌抹1-2494,或由Chr.Hansen以標準BB12⑧銷售的菌抹);■#豆乂又jt支4干菌(5zykoZ^cten.Mm6reve);■兩歧只又it支^干菌(^zydo6a"en'wmZ)(/dwm);■長2又歧桿菌(5zyJoZac化n'i/m/owgwm);■嬰兒雙歧桿菌(萬,oZ)aCm-wm乳酸菌被定義為在以足夠的量被攝取時對健康具有超出它們的基本營養(yǎng)價值的有益效果的活乳酸菌(來自世界衛(wèi)生組織的官方定義)。益生菌乳酸菌尤其包括如下乳酸菌-乳桿菌屬,如,嗜酸乳桿菌(例如,可得自CNCM的菌抹I-0967);■干酪乳桿菌(例如,可得自CNCM的菌林I-518);■瑞士乳桿菌;,德爾布呂克氏乳桿菌乳酸亞種(例如,可得自CNCM的菌林I-2843);-雙歧桿菌屬,如■動物乳酸雙歧桿菌(例如,可得自CNCM的菌林1-2494,或由Chr.Hansen以標準BB12⑧銷售的菌抹);纏短雙i支桿菌;■兩i支雙jt支斥干菌;■長雙歧桿菌;■嬰兒雙jt支桿菌。益生菌乳酸菌不是能夠簡單地被大量添加至乳制品的簡單食品添加劑。它們是使酸化發(fā)酵發(fā)生的活菌,其代謝受到在發(fā)酵乳制品生產(chǎn)期間和隨后直至保質期(EBD)的儲存發(fā)酵乳制品期間其所經(jīng)受的條件的影響。保質期取決于通過有效法規(guī)確定的法律上必需的儲存期。對于新鮮的發(fā)酵乳制品如發(fā)酵乳,EBD通常為自生產(chǎn)日期起30天。在此使用的術語"酵素,,,或者為細菌或者為工業(yè)菌林,是指參與發(fā)酵乳制品的結構和/或質地的細菌或菌林酵素,與基本具有益生菌功能的細菌或菌抹酵素相對。例如,可以另外使用至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株作為益生菌菌抹,通過共生的保加利亞乳桿菌-嗜熱鏈球菌發(fā)酵來生產(chǎn)發(fā)酵乳。在這種情況下,被稱為工業(yè)菌抹的菌株是嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的菌林。本發(fā)明的實施和方面本發(fā)明涉及特別適于向乳制品底物中直接接種至少一種動物雙歧桿菌乳酸亞種的菌林以將所述乳制品底物轉化成適合人類消費并且具有益生菌價值的發(fā)酵乳制品的接種體,還涉及所述接種體在生產(chǎn)這樣的乳制品的領域中的用途。本發(fā)明的接種體更具體地適于生產(chǎn)由通過益生菌動物乳酸雙歧桿菌和通過嗜熱鏈球菌-保加利亞乳桿菌共生使乳制品底物發(fā)酵而獲得的發(fā)酵乳制品。這樣的產(chǎn)品因此含有活體形式的至少一種嗜熱鏈球菌的菌抹、至少一種保加利亞乳桿菌的菌林和至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹。本發(fā)明的接種體包含至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株。本發(fā)明的接種體包含特殊的半胱氨酸,即L-半胱氨酸,其形式使得用這種形式的L-半胱氨酸獲得的顆粒和/或一種或多種凍干粉使得在-使所述一種或多種顆粒解凍;和/或-使所述一種或多種凍干粉以1至2克一種或多種凍千粉每8至10mLH20的比例再溶解;之后所得溶液的pH至少為4。優(yōu)選i也,該pH不超過8。16為了這一目的,優(yōu)選選擇L-半胱氨酸,其形式使得在被置于溶液中時pH大于4。例如,每50mLH20含1.25克這種形式的半胱氨酸的溶液的pH為4.5至5.5。這樣的形式的半胱氨酸的一實例是通常被稱為L-半胱氨酸堿(或堿式L-半胱氨酸)的L-半胱氨酸。L-半胱氨酸堿簡化形式的通式為HSCH2CH(NH)2C02H。L-半胱氨酸堿不是半胱氨酸-HCl:因此它既不是半胱氨酸的鹽酸鹽也不是鹽酸半胱氨酸一水合物。選擇這種特殊的半胱氨酸是在多種可獲得的半胱氨酸形式中進行選擇的結果。這種特殊的半胱氨酸能夠被動物乳酸雙歧桿菌吸收并且是乳制品底物上的動物乳酸雙歧桿菌生長的激活劑。這種特殊的半胱氨酸適合人類消費。它滿足關于用于人類消費的發(fā)酵乳制品法規(guī)。這種特殊的半胱氨酸還能夠刺激動物乳酸雙歧桿菌的生長或至少代謝,而不干擾其它非益生菌乳酸菌的代謝,尤其是不干擾由嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌進行的共生乳酸發(fā)酵。除了所有這些性質,這種特殊的半胱氨酸能夠產(chǎn)生接種體,其被稱為整合的,其在相同物理單元中同時包括所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌菌林和半胱氨酸,這種動物乳酸雙歧桿菌菌抹的生長或至少代謝不受到負面影響。高度優(yōu)選地,本發(fā)明的接種體不包括酸形式的半胱氨酸如半胱氨酸-HCl(具有通式HSCH2CH(NH)2C02H*HC1的鹽酸L-半胱氨酸)。本發(fā)明的接種體為特殊的物理形式。它是一種或多種冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉的形式。這種具體形式的接種體特別適合直接接種。選擇上述特殊的半胱氨酸意味著能夠生產(chǎn)具有所有這些特征的接種體,并且能夠獲得特別有效的接種體。選擇本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸意味著能夠將所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株和所述半胱氨酸一起混合來生產(chǎn)冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉,其在相同的顆粒和/或相同的一種或多種凍干粉中同時包含所述動物乳酸雙歧桿菌的菌林和所述半胱氨酸,所述動物乳酸雙歧桿菌的菌林的生長或至少代謝不受負面影響。使用酸形式的半胱氨酸如半胱氨酸-HC1(具有通式HSCH2CH(NH)2C02H*HC1的鹽酸L-半胱氨酸)而不是L-半胱氨酸堿不能獲得這樣的結果。本發(fā)明人因此提出在其中同時發(fā)現(xiàn)所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林的細胞和所述特殊的L-半胱氨酸的冷凍顆粒或凍干粉。這種冷凍顆?;騼龈煞劭梢宰鳛榫哂姓霞せ顒┑膭游锶樗犭p歧桿菌接種體。這種冷凍顆?;騼龈煞凼潜景l(fā)明的優(yōu)選實施方案。整合激活劑的可選途徑可以是不使激活劑與動物乳酸雙歧桿菌的菌抹在相同顆?;騼龈煞壑薪Y合,而是生產(chǎn)不同的冷凍顆粒或凍干粉。例如,可以以例如混合物或成套的形式生產(chǎn)-含有所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林的細胞的冷凍顆粒和含有所述特殊L-半胱氨酸的不同的冷凍顆粒^不是整合的而是結合的顆粒);或-含有所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林的細胞的凍干粉和含有所述特殊L-半胱氨酸的凍干粉—不是整合的而是結合的凍干粉);或-含有所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林的細胞的冷凍顆粒和含有所述特殊L-半胱氨酸的凍干粉,或者反過來(=顆粒和一種或多種凍干粉的結合)或者-這些選項的混合。這些接種體是整合冷凍顆?;騼龈煞鄣闹苯觽溥x項,因為它們是將本發(fā)明的手段結合在一起,但是物理形式不同。這些接種體在此可作為"結合的"并且包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。圖1顯示本發(fā)明的整合顆粒的生產(chǎn)方式和本發(fā)明的結合顆粒的生產(chǎn)方式的說明。本發(fā)明因此是選擇特殊半胱氨酸(優(yōu)選L-半胱氨酸堿)和開發(fā)尤其適于直接接種的特殊物理形式(冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉)的結18合。本發(fā)明的接種體還尤其適于刺激動物乳酸雙歧桿菌的菌林的生長。它不能適于刺激其它種或屬的益生菌。為了刺激動物乳酸雙歧桿菌菌株的生長,生長激活劑必須是可獲得的,其對動物乳酸雙歧桿菌的生長或者至少代謝產(chǎn)生正面影響,而不以任何方式對所得發(fā)酵乳制品的質地或結構或有益健康和味覺品質產(chǎn)生負面或有害影響。在生產(chǎn)除了動物乳酸雙歧桿菌以外還需要使用其它乳酸菌的發(fā)酵乳制品時,該問題尤其困難。所采用的每一乳酸菌不一定具有相同的代謝,而且有利于一種或一屬的的條件不一定有利于另一種或另一屬。因此,可能難以尋找適合于所有有關菌抹的乳酸發(fā)酵條件。該要素被乳酸發(fā)酵受特殊的酸化動力學的限制以便能夠生產(chǎn)品質優(yōu)良、安全的發(fā)酵乳制品的事實補充。為了限制多種污染風險,盡快獲得5.5的pH是理想的。然而,快速的酸化動力學與動物乳酸雙歧桿菌的良好生長和/或良好代謝相沖突。通過嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌發(fā)酵并且還通過益生菌動物乳酸雙歧桿菌發(fā)酵獲得的發(fā)酵乳的情形特別困難,因為除了動物乳酸雙歧桿菌的發(fā)酵,必須進行包括至少一種嗜熱鏈球菌的菌林和至少一種德爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種的菌抹的共生乳酸發(fā)酵。然而,動物乳酸雙歧桿菌是在乳制品底物上生長緩慢的菌種(世代時間量級為l至2小時),而工業(yè)酵素嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌生長迅速(世代時間量級為15至30min)。在這些情況下,控制所有這些參數(shù)特別困難。因此,本發(fā)明的接種體尤其被設計為對能夠通過被稱為工業(yè)菌抹的乳酸菌菌林進行的發(fā)酵,尤其是對嗜熱鏈球菌和德爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種的共生發(fā)酵不產(chǎn)生負面影響。因此,本發(fā)明的接種體尤其適合在生產(chǎn)發(fā)酵乳的情形中使用,所述發(fā)酵乳包括至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株作為益生菌菌林,并且通過除了由動物乳酸雙歧桿菌進行的發(fā)酵,還由至少一種嗜熱鏈球菌的菌抹和至少一種德爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種的菌抹對乳制品底物的發(fā)酵獲得。本發(fā)明的接種體滿足各種標準,并能夠生產(chǎn)具有高益生菌價值且品質優(yōu)良的發(fā)酵乳制品o然而,針對動物乳酸雙歧桿菌發(fā)酵存在下的嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌共生發(fā)酵造成的特別復雜的問題而最優(yōu)化本發(fā)明的接種體的事實,顯然沒有阻止它在較簡單情形中的應用,例如乳制品底物的發(fā)酵除了所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹以外僅使用動物乳酸雙歧桿菌之外的一種或一屬乳酸菌乳制品,或乳制品底物的發(fā)酵僅使用動物乳酸雙歧桿菌菌抹乳制品。本發(fā)明的接種體的一優(yōu)勢為它能夠產(chǎn)生所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株(或者如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌林)的種群,所述種群基本上高于會在除了使用無生長激活劑的動物乳酸雙歧桿菌的相同菌抹的常規(guī)接種體的相同條件下會獲得的種群,并且還基本上高于會在除了使用來自動物乳酸雙歧桿菌的相同菌抹和半本發(fā)明的接種體因此能夠產(chǎn)生所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株(或者如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)的種群,所述種群在發(fā)酵結束時為每克發(fā)酵產(chǎn)品至少5xl07ufc,優(yōu)選在發(fā)酵結束時為每克發(fā)酵產(chǎn)品至少108ufc。明顯地,本發(fā)明的接種體具有適合產(chǎn)生所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林(或者如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)的種群的優(yōu)勢,所述種群在4。C至11。C,優(yōu)選4。C至10。C,高度優(yōu)選4。C至9°C的溫度下儲存所述發(fā)酵產(chǎn)品至少20天,優(yōu)選至少30天后不低于每克發(fā)酵產(chǎn)品5x107ufc。特別明顯地,本發(fā)明的接種體具有能夠產(chǎn)生所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)的種群的的優(yōu)勢,所述菌抹的種群在4°C至11°C,優(yōu)選4。C至10。C,高度優(yōu)選4。C至9。C的溫度下儲存所述發(fā)酵產(chǎn)品至少20天,20優(yōu)選至少30天后不低于每克發(fā)酵產(chǎn)品108ufc:見圖8和9,表明與動物乳酸雙歧桿菌的種群從第21天開始迅速下降的參考發(fā)酵乳相比,使用本發(fā)明接種體生產(chǎn)的發(fā)酵乳(嗜熱鏈球菌-保加利亞乳桿菌+動物乳酸雙歧桿菌)中動物乳酸雙歧桿菌的種群能夠維持在10°C下儲存至少30天。本發(fā)明的接種體的另一優(yōu)勢為其形式適合在工業(yè)領域中應用。事實上,本發(fā)明的接種體是改進的形式,這意味著它能夠以特別安全和容易的方式在發(fā)酵乳制品的工業(yè)生產(chǎn)領域中應用。關于用于在工業(yè)環(huán)境中生產(chǎn)發(fā)酵乳制品的測量和結合系統(tǒng),生長激活劑的劑量和可接受的公差有時可能難以控制。例如,過量激活劑雖然有益于益生菌菌抹,但通常對所得發(fā)酵乳制品的品質高度有害它可能引起味道差(例如過量添加的半胱氨酸的硫磺味),或者它可能對工業(yè)菌林的發(fā)酵產(chǎn)生負面或有害影響(這是例如使用過量半胱氨酸時嗜熱鏈球菌的情況)。對所添加的激活劑的量的控制還由于衛(wèi)生原因而很重要,因為這種控制限制人類干預和對必須絕對保證清潔的工業(yè)線的改進和適應量??刂萍せ顒┑牧窟€顯然具有經(jīng)濟上的重要性。因此,事實可能是技術人員可以獲得適當?shù)纳L激活劑但是知道在以工業(yè)規(guī)模使用它時面臨的困難,因為控制激活劑的量在該領域中看起來比較困難。在另一方面,本發(fā)明的接種體很容易在工業(yè)領域中使用而且能夠安全容易地控制激活劑用量。本發(fā)明的接種體因此較易使用,并且意味著具有優(yōu)良質地、結構和味覺品質的發(fā)酵乳制品能夠在工業(yè)環(huán)境中有效可靠地生產(chǎn)并且含有很高劑量的益生菌動物乳酸雙歧桿菌。本發(fā)明的接種體是在以下各者之間巧妙折衷的結果-為消費者保持發(fā)酵乳制品優(yōu)良品質的要求(結構、質地、有益健康的品質、味覺品質);-進一步增加動物乳酸雙歧桿菌含量以加強產(chǎn)品的益生菌效應的期望;和-提供特別適合直接接種并且能夠十分安全簡單地控制所添加的激活劑的量的改進形式的接種體的期望。21本發(fā)明的接種體滿足這些不同的目標。本發(fā)明的接種體以混合物或成套的形式包含-至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹;和-稱為其游離形式的L-半胱氨酸(即不通過肽鍵與其它氨基酸連接的L-半胱氨酸),所述游離形式的L-半胱氨酸的形式還使得其能夠生產(chǎn)顆粒和/或一種或多種凍干粉,所述顆粒和/或一種或多種凍干粉在o使所述一種或多種顆粒解凍;和/或o使所述一種或多種凍干粉以1至2克一種或多種凍干粉每8至10mLH20的比例再溶解;之后所得溶液的pH至少為4。優(yōu)選地,該pH不超過8。為了這一目的,優(yōu)選選擇游離L-半胱氨酸,其形式使得在被置于溶液中時pH大于4。例如,每50mL1120含1.25克這種形式的半胱氨酸的溶液的pH為4.5至5.5。這樣的形式的半胱氨酸的優(yōu)選實例是也被稱為L-半胱氨酸堿(或堿式L-半胱氨酸)的L-半胱氨酸。L-半胱氨酸堿簡化形式的通式為HSCH2CH(NH)2C02H。本發(fā)明的L-半胱氨酸和本發(fā)明的接種體中所含的動物乳酸雙歧桿菌的細胞的具體量分布在固體物理結構即冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉中。所述半胱氨酸和所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹可以一起包含在相同的固體結構中,或者它們可以存在于不同的固體結構中。這些不同的固體結構本身可以在成套部件中分開包裝,或者它們可以作為混合物。顯然,可以生產(chǎn)同時含有本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸和動物乳酸雙歧桿菌的細胞的共同固體結構與不同固體結構的混合物。所述半胱氨酸和所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹因此可以-一起在相同的冷凍顆粒和/或相同的凍干粉中;和/或22-在不同的冷凍顆粒和/或不同的凍干粉中分開,但在成套部件中。因此,并且根據(jù)本發(fā)明的有利實施,所述特殊L-半胱氨酸和動物乳酸雙歧桿菌細胞的全部或部分可以一起在相同的冷凍顆?;蛟谙嗤膬龈煞壑?。于是,本發(fā)明的接種體包含至少一種同時含有本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸和動物乳酸雙歧桿菌細胞的冷凍顆粒和/或凍干粉。優(yōu)選地,接種體中含有的全部特殊L-半胱氨酸和動物乳酸雙歧桿菌細胞一起在相同的冷凍顆?;蛟谙嗤膬龈煞壑小H炕虿糠直景l(fā)明的所述特殊L-半胱氨酸和動物乳酸雙歧桿菌細胞可以在不同的冷凍顆粒和/或凍干粉中物理地分開但是收集在成套部件中。于是,本發(fā)明的接種體包含-至少兩種冷凍顆粒;或-至少兩種不同的凍干^^分;或-至少一種冷凍顆粒和至少一種凍干粉;每一種所述接種體都含有本發(fā)明的特殊半胱氨酸或動物乳酸雙歧桿菌的細胞,使得每一種所述物理實體對(顆粒+顆粒;或凍干粉+不同的凍干粉;或顆粒+凍干粉)-兩種物理實體中的一種含有全部或部分所述特殊L-半胱氨酸而不含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞;以及-兩種物理實體中的另一種含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞而不含有所述特殊L-半胱氨酸。顯然,接種體中含有的全部本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸和全部動物乳酸雙歧桿菌細胞因此可以包含在不同的一種或多種顆粒和/或不同的一種或多種凍千粉中或者為不同的一種或多種顆粒和/或不同的一種或多種凍干粉的形式。a)含有本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸和動物乳酸雙歧桿菌的細胞的冷凍顆粒;b)含有本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸和動物乳酸雙歧桿菌的細胞的凍干粉;C)含有本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸但不含動物乳酸雙歧桿菌的細胞的冷凍顆粒,和含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞但不含本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸的冷凍顆粒;d)含有本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸但不含動物乳酸雙歧桿菌的細胞的凍干粉,和含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞但不含本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸的凍干粉;e)含有本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸但不含動物乳酸雙歧桿菌的細胞的冷凍顆粒,和含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞但不含本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸的凍干粉;f)含有本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸但不含動物乳酸雙歧桿菌的細胞的凍干粉,和含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞但不含本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸的冷凍顆粒;g)或在以上a)至f)中列出的制劑中至少兩種的混合物。本發(fā)明的接種體含有稱為游離形式的半胱氨酸(即不通過肽鍵與其它氨基酸連接),這是本發(fā)明人進行特別選擇的結果。所述游離形式的半胱氨酸是游離的L-半胱氨酸,其形式還使得它能夠生產(chǎn)顆粒和/或一種或多種凍干粉,所述顆粒和/或一種或多種凍干粉使得-使所述一種或多種顆粒解凍(例如通過在手動攪拌下將顆粒放置在37。C水浴中3min);和/或-使所述一種或多種凍干粉以l至2克一種或多種凍干粉對8至10mLH20的比例再溶解(例如在》茲攪拌下于25。C再水合30分鐘);之后所得溶液的pH至少為4。為了這一目的,優(yōu)選選擇L-半胱氨酸,其形式使得由50mL至100mLH20中的1克至1.5克所述半胱氨酸組成的溶液的pH至少為4。適當?shù)陌腚装彼岬囊粚嵗荓-半胱氨酸,也稱為L-半胱氨酸堿,其簡化形式的通式為HSCH2CH(NH)2C02H。不適當?shù)陌腚装彼岬囊粚嵗前腚装彼?HCl(鹽酸半胱氨酸,或鹽酸半胱氨酸一水合物)。優(yōu)選地,用來生產(chǎn)本發(fā)明的接種體的化合物都不是鹽酸鹽形式。本發(fā)明的接種體中所含的本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸不是半胱氨酸酸如鹽酸L-半胱氨酸(HSCH2CH(NH)2C02l^HCl)或鹽酸L-半胱氨酸一水合物(HSCH2CH(NH)2C02HHOH20)。鹽酸L-半胱氨酸一水合物不是本發(fā)明的特殊半胱氨酸,因為由100mLH20中的1.0g鹽酸L-半胱氨酸一水合物組成的溶液的pH為1.5至2.0。因此,使由不是本發(fā)明的特殊半胱氨酸的半胱氨酸制得的冷凍顆?;騼龈煞劢鈨龌蛟偃芙馑玫降娜芤簳哂袕娝嵝詐H,更具體地具有小于4,通常小于3.5的pH。多數(shù)強酸形式的半胱氨酸是鹽形式的半胱氨酸,如鹽酸L-半胱氨酸或鹽酸L-半胱氨酸一水合物。該鹽中的一種或多種離子在冷凍顆粒或凍干粉中不存在。因此,這一種或多種離子的存在有時候可以作為使用與酸性實體(其通常起增加半胱氨酸溶解度的作用)結合的半胱氨酸的標志物。這樣的情形是例如鹽酸L-半胱氨酸或鹽酸L-半胱氨酸一水合物中含有的氯離子。事實上,如果使用鹽酸L-半胱氨酸或鹽酸L-半胱氨酸一水合物的酸性半胱氨酸,會觀察到顆?;騼龈煞酆写罅康穆?C1),因為鹽酸L-半胱氨酸一水合物含有19%以上的氯,而L-半胱氨酸堿通常所含的氯通常少于0.05%,更優(yōu)選少于0.040%。因此,顆?;騼龈煞壑写罅柯鹊拇嬖诳梢宰鳛槭褂貌皇前腚装彼釅A的半胱氨酸的間接標志物。因此,本發(fā)明的接種體中使用的半胱氨酸的形式通常會在每克干物質含量為16%至17%的顆粒中提供少于60微克氯離子。然而,可應用的第一標準是pH標準。測量pH實際上構成纟企測本發(fā)明的特殊半胱氨酸的存在的直接標準解凍的顆粒或再溶解的凍干4分的pH至少為4。它通常至少為5,例如5至6.5。優(yōu)選地,所述pH不超過8。至少為4且至多為8的pH對動物乳酸雙歧桿菌沒有壓力。動物乳酸雙歧桿菌因此可以被混合進入半胱氨酸溶液而不受壓力,并被配制成在固體物理結構中整合半胱氨酸和動物乳酸雙歧桿菌細胞的冷凍顆?;騼龈煞?。所得動物乳酸雙歧桿菌接種體于是含有處于良好生理和/或代謝狀態(tài)并且迅速響應半胱氨酸施加的激活的動物乳酸雙歧桿菌的細胞。同時含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞和本發(fā)明特殊L-半胱氨酸的本發(fā)明的"整合"冷凍顆?;騼龈煞垡虼耸翘貏e地改進的動物乳酸雙歧桿菌接種體,因為它成功地將動物乳酸雙歧桿菌激活劑整合進入其結構中而不以任何方式改變動物乳酸雙歧桿菌細胞的生理和/或代謝狀態(tài)。選擇本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸意味著能夠獲得比由強酸形式的L-半胱氨酸如鹽酸L-半胱氨酸配制的顆粒和/或凍干粉更有效的顆粒和/或凍千粉。另外,這種選擇能夠以有效的方式將半胱氨酸整合進入相同的冷凍顆粒或進入相同的凍干粉中。當使用強酸形式的半胱氨酸如鹽酸L-半胱氨酸來配制同時包含半胱氨酸-HCl和動物乳酸雙歧桿菌細胞的冷凍顆?;騼龈煞蹠r,所得整合顆?;蛘蟽龈煞凼切Ч葟谋景l(fā)明的特殊L-半胱氨酸開始獲得的相同顆?;騼龈煞鄄畹膭游锶樗犭p歧桿菌接種體。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施,本發(fā)明的接種體因此不包括強酸性半胱氨酸并且更具體地不包括鹽酸L-半胱氨酸和/或不由這樣的半胱氨酸生產(chǎn)。本發(fā)明的接種體還不包括胱氨酸。于是,優(yōu)選地,不向本發(fā)明的接種體添加胱氨酸。然而,可能發(fā)現(xiàn)痕量的胱氨酸,但是它們會是例如接種體中所含半胱氨酸的氧化的結果。有利地,接種體中所述本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸的量為-每1x10"ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)1克;-至每3.5x101Gufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌林)1克;和/或量為-每十億ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)O.Ol毫克;26-至每十億ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)30毫克。在本申請中,所有的半胱氨酸質量根據(jù)通式為HSCH2CH(NH)2C02H的半胱氨酸計算。優(yōu)選地,所述接種體中所述本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸的量為-每0.2x10"ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)1克;-至每3.5xl01Qufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌林)1克;和/或量為-每十億ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)0.05毫克;-至每十億ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌林)10毫克。根據(jù)本發(fā)明的具體實施方案,所述本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸在所述接種體中的量為每5x1(f至5x1()Hufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹4.90mg至144mg。優(yōu)選地,所述本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸在所述接種體中的量為25mg至50mg,更^尤選30mg至40mg,更4尤選31mg至39mg,移'JJ(口大約31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg,高度優(yōu)選35mg至37mg,例如大約35mg、36mg、37mg,并且特別優(yōu)選每5x1(^至5x1()Uufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林大約36.9mg。優(yōu)選地,動物乳酸雙歧桿菌的ufc數(shù)為5x109ufc至5x1011ufc,更優(yōu)選2x101Gufc至5xl011ufc動物乳酸雙歧桿菌,高度優(yōu)選2xl01Gufc至lx1011ufc動物乳酸雙歧桿菌,更優(yōu)選2xl01。ufc至7xl01。ufc動物乳酸雙歧桿菌。有利地,會包含16%至17%干物質的1克本發(fā)明的顆粒(將物質在105。C下干燥至少40min),包含5xl09ufc至5xl011ufc至少一種動物乳酸雙》支桿菌的菌才朱。有利地,會包含16%至17%干物質的1克本發(fā)明的顆粒(將物質在105°C下干燥至少40min)包含4.90mg至144mg所述本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸,優(yōu)選L-半胱氨酸堿。有利地,160毫克至170毫克的本發(fā)明的凍干粉包含5xl(^ufc至5xlO"ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株。有利地,160毫克至170毫克的本發(fā)明的凍干粉包含4.90mg至144mg所述本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸。為了計數(shù)動物乳酸雙歧桿菌的菌落形成單位(ufc),可以使用技術人員i人為適當?shù)?壬4可4支術,例如Grandda/,2003(Eur.FoodRes.Technol.217:90-92)描述的雙歧桿菌計數(shù)方法。優(yōu)選地,S.N.Thitaram,G.R.Siragusa禾口A.Hinton,2005(JrLettersinAppliedMicrobiology,volume41,page355-October2005;"5zy^/oZac&n.Mm-5^/eC/veko/a"owaw"6/o"'c-"/ec"-veagarme^'wm(通過改進的寡沖唐#元生素選擇性瓊月旨;咅養(yǎng)基從雞盲腸中進行雙歧桿菌選擇性分離和計數(shù))"描述的方法。為了分析液體中含有的半胱氨酸,可以使用技術人員認為適當?shù)娜魏渭夹g,例如與質譜聯(lián)用的氣相色譜,或者與熒光檢測聯(lián)用的液相色譜。還可以使用氨基酸分析儀如L-8800高速氨基酸分析儀(HitachiHighTechnologies)分析半胱氨酸。優(yōu)選地,本發(fā)明的接種體不包括多于0.5o/。(p/p)的酵母、酵母提取物或酵母自溶產(chǎn)物。優(yōu)選地,本發(fā)明的接種體不包括多于0.5。/。(p/p)的酵母、酵母提取物或酵母自溶產(chǎn)物。高度優(yōu)選地,所述接種體不含酵母、酵母提取物或酵母自溶產(chǎn)物。有利地,本發(fā)明允許配制高活性的動物乳酸雙歧桿菌的接種體,所述接種體產(chǎn)生長時間維持(發(fā)酵乳制品在冷藏溫度下儲存期間)的動物乳酸雙歧桿菌種群,無需在接種體中使用防腐劑且無需向所述乳底物或發(fā)酵乳制品添加防腐劑。由于本發(fā)明,動物乳酸雙歧桿菌的種群在發(fā)酵乳制品中處于特別健康的生理和/或代謝狀態(tài),這意味著它能夠維持在高水平。28本發(fā)明的接種體包含至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹,例如,來自Chr.Hansen的菌抹1-2494或菌株BB12。本發(fā)明的接種體顯然可以包含若干動物乳酸雙歧桿菌的菌抹,例如來自Chr.Hansen的菌林1-2494或菌株BB12。本發(fā)明的接種體還可以包含至少一種動物乳酸雙歧桿菌以外的乳酸菌菌才朱。所述至少一種其它乳酸菌菌抹可以存在于含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞和/或本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸的顆?;蛞环N或多種凍干粉中。所述至少一種其它乳酸菌菌抹可以以不同于含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞的物理結構存在。這種不同的物理結構可以是例如固體結構,如與動物乳酸雙歧桿菌和本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸的顆粒和/或一種或多種凍干粉混合的冷凍顆?;騼龈煞?,或分開但成套的冷凍顆粒或凍干粉。這種至少一種其它乳酸菌菌林可以以例如不同于動物乳酸雙歧桿菌和本發(fā)明的特殊半胱氨酸的顆粒或一種或多種凍干粉的冷凍顆?;騼龈煞鄣男问酱嬖凇_@種至少一種其它乳酸菌菌株可以是雙歧桿菌屬的菌抹或另一屬的菌抹。這種不同屬的菌抹可以是具有益生菌功能的菌林,例如選自嗜酸乳桿菌、鼠李并唐乳桿菌(Mfl"o^c/〃wAamwosM"、干酪乳桿菌的至少一種菌抹。這種不同屬的菌林可以是具有工業(yè)功能的菌林,如嗜熱鏈球菌和/或保加利亞乳桿菌。有利地,本發(fā)明的所述接種體除了動物乳酸雙歧桿菌和特殊L-半胱氨酸的一種或多種顆粒和/或一種或多種凍干粉以外,包含例如適合直接接種的一種或多種冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉形式的嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的接種體。優(yōu)選地,本發(fā)明的接種體包含動物乳酸雙歧桿菌以外的多種菌抹,例如至少兩種,至少三種,或至少四種動物乳酸雙歧桿菌以外的菌才朱。有利地,所述其它菌抹是至少一種嗜熱鏈球菌的菌抹(例如,可得自CNCM的菌抹I-1630)和至少兩種保加利亞乳桿菌的菌抹(例如,可29得自CNCM的菌林1-1632和1-1519)。這樣的接種體的形式可以是含有動物乳酸雙歧桿菌和本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸的冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉和含有嗜熱鏈球菌和/或保加利亞乳桿菌的冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉的混合物或成套集體。該整體因而特別適合乳制品底物的直接接種,以便通過酸化共生嗜熱鏈球菌-保加利亞乳桿菌乳酸發(fā)酵和通過動物乳酸雙歧桿菌發(fā)酵將其轉化,形成具有高益生菌價值并且在制冷劑中儲存期間保持其高益生菌價值的發(fā)酵乳。本申請還涉及本發(fā)明的整合顆粒本身以及本發(fā)明的凍干粉本身。如上文和/或以下的實施例部分指出和描述的那樣,本發(fā)明的整合顆?;騼龈煞郯赋龅膭┝亢?或比例的至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株和本發(fā)明的特殊L-半胱氨酸。優(yōu)選地,所述顆?;騼龈煞鄄话瑥娝嵝问降陌腚装彼崛鏛-半胱氨酸一氯化物。本申請因此涉及包含至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹和不通過肽鍵與其它氨基酸相連的L-半胱氨酸的冷凍顆粒,所述L-半胱氨酸的形式使得在使所述一種或多種顆粒解凍后獲得的溶液的pH至少為4,通常大于5。本申請因此涉及包含至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林和不通過肽鍵與其它氨基酸連接的L-半胱氨酸的凍干粉,所述L-半胱氨酸的形式使得在使所述一種或多種凍干粉以1至2克一種或多種凍干粉每8至10mLH2O的比例再溶解后獲得的溶液的pH至少為4,通常大于5。優(yōu)選地,顆?;騼龈煞鄣膒H小于8(使顆粒解凍或使凍干粉再溶解后所得溶液的pH)。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的接種體的用途。更具體地,本發(fā)明涉及它在酸化乳酸發(fā)酵方面的用途,并且更具體地涉及它在生產(chǎn)適合人類消費的發(fā)酵乳制品方面的用途。本發(fā)明因此涉及使用本發(fā)明的至少一種接種體和/或至少一種顆?;騼龈煞鄣娜魏畏椒?。更具體地,本發(fā)明涉及在乳制品底物上刺激動物乳酸雙歧桿菌的生長和/或代謝的方法,所述方法使用本發(fā)明的至少一種接種體和/或至少一種顆粒和/或至少一種凍干粉。30這種刺激方法具有以高度有效的方式刺激動物乳酸雙歧桿菌的優(yōu)勢。如上顯示并如下說明的那樣,本發(fā)明的刺激方法能夠生產(chǎn)動物乳酸雙歧桿菌的種群,所述種群的代謝和/或生長能夠使動物乳酸雙歧桿菌細胞長時間保持存活。為了實施這種方法,以如上指出和/或在實施例和如下的圖中描述的劑量和/或比例添加所述4妄種體。有利地,向乳制品底物提供的本發(fā)明的所述接種體和/或顆粒和/或凍干粉的添加量為-每升乳制品底物5mg至20mg半胱氨酸,優(yōu)選6至15mg/L,更優(yōu)選7至11mg/L;以及-每升底物109至1011ufc動物乳酸雙歧桿菌,優(yōu)選0.4xl(T至lx1011ufc動物乳酸雙歧桿菌,更優(yōu)選0.4xl0"至1.2xl01Qufc動物乳酸雙歧桿菌,高度優(yōu)選0.4xl0"至lxl01Qufc動物乳酸雙歧桿菌。接種的底物優(yōu)選維持在有利于動物乳酸雙歧桿菌代謝的溫度和大氣條件下,例如在37。C至42。C的封閉容器中。本發(fā)明還涉及生產(chǎn)發(fā)酵乳制品,優(yōu)選通過乳酸發(fā)酵獲得的乳制品的方法,所述乳酸發(fā)酵除動物乳酸雙歧桿菌進行的發(fā)酵以外,包含至少共生嗜熱鏈球菌-保加利亞乳桿菌發(fā)酵。本發(fā)明的方法包括使用本發(fā)明的至少一種接種體和/或至少一種顆粒和/或至少一種凍干粉。所得發(fā)酵乳制品是具有高益生菌價值的發(fā)酵乳制品,因為它含有大量動物乳酸雙歧桿菌而且在冷凍氣氛中儲存期間含量高。這種生產(chǎn)方法具有以高度有效的方式激活和/或刺激動物乳酸雙歧桿菌的優(yōu)勢。它還具有對嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的共生不產(chǎn)生負面影響的優(yōu)勢。如上所述和如下說明的那樣,本發(fā)明的生產(chǎn)方法能夠生產(chǎn)動物乳酸雙歧桿菌的種群,所述種群的代謝和/或生長允許動物乳酸雙歧桿菌的細胞長時間存活。為了實施這種方法,以如上指出和/或在如下實施例和圖中描述的劑量和/或比例添加所述接種體。有利地,向乳制品底物添加的本發(fā)明的所述接種體和/或顆粒和/或凍干粉的添加量為誦每升乳制品底物5mg至20mg半胱氨酸,優(yōu)選6至15mg/L,更優(yōu)選7至11mg/L;以及-每升底物109至1011ufc動物乳酸雙歧桿菌,優(yōu)選0.4xl0"至lx1011ufc動物乳酸雙歧桿菌,更優(yōu)選0.4xl0"至1.2xl0"ufc動物乳酸雙歧桿菌,高度優(yōu)選0.4xl0"至lxl01Qufc動物乳酸雙歧桿菌。0.05g至1克本發(fā)明的整合顆粒的劑量,例如大約0.2g本發(fā)明的整合顆粒,是1升乳制品底物的適當劑量的實例。接種的底物優(yōu)選維持在有利于動物乳酸雙歧桿菌代謝的溫度和大氣條件下,例如在37。C至42。C的封閉容器中。所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林作為益生菌菌抹起作用。然而,所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹還必須能夠進行乳制品底物的酸化發(fā)酵。因此,所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹不是簡單地被添加至底物或乳制品,其不允許它像簡單的添加劑那樣進行酸化發(fā)酵。有利地,生產(chǎn)發(fā)酵平行產(chǎn)品的方法可以包括使用所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌以外的菌才朱。所述其它菌抹優(yōu)選乳酸菌菌抹。所述至少一種其它乳酸菌菌抹具有進行酸化乳酸發(fā)酵的功能。因此,將它以進行酸化乳酸發(fā)酵的方式接種入乳制品底物中,即在以允々卞發(fā)酵的量接種。本發(fā)明的發(fā)酵方法因此對應于所述至少一種乳酸菌的菌抹和所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林進行的混合發(fā)酵,并且不對應于無任何可檢測的發(fā)酵作用、作為簡單添加劑添加動物乳酸雙歧桿菌的簡單乳酸發(fā)酵方法。因此,所述至少一種乳酸菌菌抹和所述至少一種動物乳酸雙歧桿32菌的菌株一起存在于乳制品底物中。根據(jù)本發(fā)明的有利方面,該生產(chǎn)方法因而可以不是兩步法添加所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林和任何其它乳酸菌菌林可以同時進行,或者至少基本上在該方法的相同步驟中,即在方法的開始,不必等待并核實一種菌株進行的發(fā)酵已經(jīng)在特定階段發(fā)生以便決定添加其它一種或多種菌林。乳制品底物的發(fā)酵在適合于所采用的菌株的溫度下進行,并且通常在36。C至42。C的溫度下進行。所述發(fā)酵通常一直進行到pH達到4.8至4.2。生產(chǎn)本發(fā)明的發(fā)酵乳制品的方法還可以包括一種或多種其它步驟,例如選自生產(chǎn)相關發(fā)酵乳制品的傳統(tǒng)步驟的一種或多種其它步驟。它可以是例如如下步驟中的一種或多種步驟-制備乳制品底物;-加熱處理乳制品底物(至少與巴斯德消毒法相當?shù)募訜崽幚?,例?5。C5min);-乳制品底物的一次或多次接種;-在適合于所接種菌抹的條件下進行所接種底物的至少一種乳酸發(fā)酵(通常至pH為4.8至4.2);-任選地添加香料、水果、甜味劑、著色劑、防腐劑;-任選地,平滑或攪拌發(fā)酵產(chǎn)品;-包裝發(fā)酵產(chǎn)品,例如裝入密封容器中;-在冷凍環(huán)境中儲存發(fā)酵乳制品。本發(fā)明的接種體因此能夠生產(chǎn)所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌株)的種群,所述種群在發(fā)酵結束時至少為每克發(fā)酵產(chǎn)品5xl07ufc,優(yōu)選在發(fā)酵結束時至少為每克發(fā)酵產(chǎn)品108ufc。明顯地,本發(fā)明的接種體具有適于生產(chǎn)所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌株)的種群的優(yōu)勢,所述種群在4。C至11°C,優(yōu)選4。C至10。C,高度優(yōu)選4。C至9。C的溫度下儲存所述發(fā)酵產(chǎn)品至少20天,優(yōu)選至少30天后不低于每克發(fā)酵產(chǎn)品5x107ufc。特別明顯地,本發(fā)明的接種體具有適于生產(chǎn)所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)的種群的優(yōu)勢,所述種群在4。C至11°C,優(yōu)選4。C至10°C,高度優(yōu)選4°C至9。C的溫度下儲存所述發(fā)酵產(chǎn)品至少20天,優(yōu)選至少30天后不低于每克發(fā)酵產(chǎn)品10sufc:見圖8和9,表明與動物乳酸雙歧桿菌的種群從第21天開始迅速下降的參考發(fā)酵乳相比,使用本發(fā)明接種體(嗜熱鏈球菌-保加利亞乳桿菌+動物乳酸雙歧桿菌)生產(chǎn)的發(fā)酵乳中動物乳酸雙歧桿菌的種群能夠維持在10。C下儲存多達至少30天。在本申請中,術語"發(fā)酵乳制品的質量"是指發(fā)酵乳制品的乳酸部分的質量。本發(fā)明還涉及發(fā)酵乳制品本身。在4。C至11。C,優(yōu)選4。C至10。C,高度優(yōu)選4。C至9°C的溫度下儲存所述發(fā)酵產(chǎn)品甚至至少20天,優(yōu)選至少30天后,這樣的產(chǎn)品的動物乳酸雙歧桿菌種群維持其自身高于現(xiàn)有技術產(chǎn)品中觀察到的種群。因此,它的組成必然不同于現(xiàn)有技術產(chǎn)品。因此,本申請涉及發(fā)酵乳制品,其能夠通過由至少一種本發(fā)明的接種體對乳制品底物乳酸發(fā)酵至pH通常為4.8至4.2來獲得。優(yōu)選地,所述接種體為本發(fā)明的整合冷凍顆粒和/或整合凍干粉(其中特殊L-半胱氨酸與動物乳酸雙歧桿菌酵素整合的接種體)的形式。有利地,所述接種體還可以包含至少一種嗜熱鏈球菌的菌抹和/或至少一種保加利亞乳桿菌的菌抹。在本申請中,縮寫詞CNCM代表法國微生物保藏中心(CollectionNationaledeCulturesdeMicroorganismes)(CNCM,InstitutPasteur;25,rueduDocteurRoux;F-75724PARISCEDEX15)。在CNCM保藏的菌抹開頭帶有符號"I-",如"I-2494"(動物乳酸雙歧桿菌菌株)、"1-1630"(嗜熱鏈球菌菌株)、"I-1632"或"I-1519"(保加利亞乳桿菌菌抹)。與"包括"或"含有"同義的術語"包含"是開放式術語,并且不排除不會明確指出的另外的一個或多個組分、成分或步驟的存在,而術語"組成"或"由...組成"是封閉式式術語,其排除任何其它別的沒有明確說明的組分、步驟或成分的存在。術語"基本上組成"或"基本上由…組成"是部分開放式的術語,其不排除另外的一個或多個組分、成分或步驟的存在,條件是那些一個或多個另外的組分、成分或步驟對本發(fā)明的基本性質沒有實質影響。因jt匕,術i吾"包含(comprenant)"(或"包含(comprend(comprennent))")包括術語"組成"、"由…組成"以及術語"基本上組成"和"基本上由…組成"。本申請引用的每一文件、著作或出版物的內(nèi)容通過引用并入本文。以下實施例純粹以說明的方式給出,不以任何方式限制本發(fā)明。實施例實施例1:使用半胱氨酸-HCl不適于生產(chǎn)會同時包含半胱氨酸和動物乳酸雙歧桿菌的被稱為"整合"顆粒的顆粒方法和儀器在本實施例中,按照圖2所示的顆粒生產(chǎn)原理。在本實施例中使用如下益生菌菌林-Chr.HansenA/S,Hoersholm,Danemark銷售的動物乳酸雙歧桿菌菌抹BB12⑧;-可得自CNCM的動物乳酸雙歧桿菌菌抹1-2494(在CNCM的保藏日期=2000年6月20日);參見熱爾韋.達諾尼公司于2001年7月4日提交的國際專利申請WO-02/02800以及該國際申請的國家或地區(qū)副本;更具體地,關于該國際申請的美國副本,見專利US7,008,785B2。如果必要的話,菌株在使用前解凍。所用的半胱氨酸是半胱氨酸-HCl,其由于溶解度良好(20。C下大約110g每100gH2O)而通常被用來提供半胱氨酸。半胱氨酸-HCl是鹽酸L-半胱氨酸的一水合物(或(R)-2-氨基-3-巰基丙酸單鹽酸鹽的一水合物)。它的通式為C3H7N02S*HC1*H20(或L-35-04-6;它的摩爾質量是175.63。半胱氨酸-鹽酸是可購自例如AjinomotoAminoscienceLLC,RaleighNC27610,USA。生產(chǎn)顆粒的方法(見圖2):將50克動物乳酸雙歧桿菌的每一菌抹與以下混合-15克325g/L的半胱氨酸-HCl(G4ICys-HCl整合顆粒);或隱15克水(參考顆粒1-2494T和BB12T)?;旌显跀嚢柘逻M行以便完全合并半胱氨酸-HCl溶液(或參考情況下的水)。通過將混合物滴入液氮中生產(chǎn)冷凍顆粒。向包括若干通過管子與蠕動泵相連的注射器針頭的裝置供給混合物,使針頭末端處形成的小滴落入充滿液氮的等溫容器中。獲得G4ICys-HCl益生菌酵素的冷凍顆粒(含有半胱氨酸-HCl的動物乳酸雙歧桿菌1-2494或BB12⑧顆粒)和含有水而不是半胱氨酸-HC1的參考顆粒。乳制品混合物(=乳制品底物)的制備乳制品混合物由以下成分組成含0%脂肪的脫脂乳、含40%脂肪的奶油和含33%蛋白的脫脂乳粉(PLE)。首先,用HEIDOLPH⑧攪拌器在大約750rpm下攪拌介質60分鐘以便使蛋白再水合,將所有成分混合在一起以將乳標準化至蛋白含量(TP)為4.4%,脂肪含量(MG)為3.5%且干物質含量為15.8%。使用來自FOSS⑧的MILKOSCANFT120⑧紅外檢測器檢驗標準化。以下給出使乳獲得目標特性所需的每一成分的量的實例。表1:成分%脫脂乳0%MG87.5奶油,40%MG8.7脫脂乳蛋白,33%TP3,836然后將乳加熱至50°C至60°C的溫度以使脂肪球完全融化。一旦達到該溫度,將10升在MICROFLUIDIZER⑧中勻化。這通過在350巴的壓力下使毛細管中的乳過篩破壞脂肪球。準備MEMMERT⑧水浴并調(diào)整到103°C。將乳轉移至8個1升的瓶中,精確稱量放置在每一瓶中的量。將jf瓦浸至頸底部,于103°C在水浴中下浸35分鐘,然后于95。C在相同水浴中下浸IO分鐘。將瓶置于連續(xù)流動冷水浴中冷卻,然后在水箱中4。C儲存12至24小時直至使用。乳制品混合物的接種接種酵素前45分鐘將乳瓶從冰箱中取出并置于發(fā)酵溫度(37。C)下的水浴中。對乳制品混合物進行四種不同的接種-1-2494G4ICys-HCl顆粒;-1-2494T參考顆粒;-BB12G4ICys隱HCl顆粒;-BB12T參考顆粒。每一接種以0.2克顆粒每升乳制品混合物的量進行。將瓶再次浸入水浴(37。C)中并監(jiān)測pH隨時間的變化(來自YSEBAERT⑧的CINAC⑧儀器)。結果對于動物乳酸雙歧桿菌1-2494,如同對于動物乳酸雙歧桿菌BB12⑧一樣,由于顆粒中半胱氨酸-HCl的存在,觀察到了在益生菌生理狀態(tài)下的降解(生理學時間=細菌使pH降低0.08個pH單位所需的時間;這提供了這些細菌的代謝活性恢復的量度)。這些結果顯示于圖3(1-2494G4I,與1-2494T相比)中。向益生菌顆粒中添加半胱氨酸-HCl非常影響益生菌動物乳酸雙歧桿菌的活性(Ta增加)。半胱氨酸-HCl不是生產(chǎn)整合顆粒的半胱氨酸的滿意來源,所述整合顆粒在相同顆粒中包含動物乳酸雙歧桿菌和半胱氨酸,并且用于生產(chǎn)具有高益生菌價值的發(fā)酵乳制品。整合溶液(動物乳酸雙歧桿菌顆粒+半胱氨酸)不能使用半胱氨酸-HC1,因為它使得益生菌酵素的代謝活性不適當。鑒于這些結果,會觀察到半胱氨酸-HCl溶液的pH小于3.5;更具體地,1g每100mLH20的濃度的半胱氨酸-HCl溶液的pH為1.5至2.0,而且益生菌動物乳酸雙歧桿菌對低pH特別敏感,甚至當將接觸時間減少時。因此,有必要鑒定能夠被動物乳酸雙歧桿菌吸收、適合人類消費并且其溶液的pH對動物乳酸雙歧桿菌沒有壓力的半胱氨酸的來源。實施例2:選擇適合生產(chǎn)高效"整合"顆粒的L-半胱氨酸堿,盡管存在與這種形式的半胱氨酸的低溶解度相關的問題方法與以上的實施例1的方法類似,但是選擇了L-半胱氨酸堿(L-半胱氨酸;C3H7N02S;CAS號52-90-4;摩爾質量121.16)而不是半胱氨酸-HCl。L-半胱氨酸堿可得自AjinomotoAminoscienceLLC,RaleighNC27610,USA。所述半胱氨酸堿的溶解度是20。C下每100gH2016g。50mLH20含1.15g半胱氨酸i威的溶液的pH為4.5至5.5。制備含有160g/L半胱氨酸堿儲備溶液,并將3克這種儲備溶液與10克動物乳酸雙歧桿菌酵素(動物乳酸雙歧桿菌菌抹1-2494或菌抹BB12⑧)混合,所述動物乳酸雙歧桿菌酵素如以上的實施例1所述^皮配制入冷凍顆粒(1-2494G4ICys-堿;和BB12G4ICys-堿)。用3克水而不是半胱氨酸堿制備參考顆粒1-2494T和BB12T。這些顆粒的生產(chǎn)圖表如圖4所示。如以上的實施例1所述進行四種不同的0.2g/L的乳制品混合物的接種。因此,G4I顆粒中所含的半胱氨酸堿的量是這樣的38(160x3)/(3+10)=36.92毫克半胱氨酸石威每克冷凍G4I顆粒。在該試驗中,動物乳酸雙歧桿菌的量大約是2xl01Gufc每克冷凍G4I或G4顆粒(1-2494或BB12)。因此,在這種情況下每十億ufc的動物乳酸雙歧桿菌酵素添加1.85mg半胱氨酸C3H7N02S。通過接種至0.2g/L濃度的G4I顆粒向乳制品混合物添加的半胱氨酸石威的量為0.2x36.92=7.384mg半胱氨酸每升乳制品混合物。37。C下孵育該混合物的結果表明選擇半胱氨酸堿能夠防止益生菌酵素的生理狀態(tài)降解程度太大。這些結果如圖5(菌林I-2494)所示。"整合半胱氨酸顆粒"方法(動物乳酸雙歧桿菌+半胱氨酸顆粒)可以用L-半胱氨酸堿進行,因為動物乳酸雙歧桿菌可以因此保持其適當?shù)拇x活性。實施例3:整合G41Cys-堿系統(tǒng)的性能,首先與結合G4系統(tǒng)(不同于益生菌酵素顆粒的半胱氨酸顆粒)相比,其次與參考系統(tǒng)(T顆粒,無半胱氨酸)相比在本實施例中,使用如實施例2所述生產(chǎn)的動物乳酸雙歧桿菌酵素顆粒,即-BB12T顆粒(含有動物乳酸雙歧桿菌BB12+水的參考顆粒);陽BB12G4I顆粒(含有動物乳酸雙歧桿菌BB12+濃度為每十億ufc益生菌酵素大約1.85mgL-半胱氨酸C3H7N02S的L-半胱氨酸堿的整合顆粒);隱1-2494T顆粒(含有動物乳酸雙歧桿菌1-2494+水的參考顆粒);和-1-2494G4I顆粒(含有動物乳酸雙歧桿菌1-2494+量為每十億ufc益生菌酵素大約1.85mg半胱氨酸C3H7N02S的L-半胱氨酸堿的整合顆粒)。在本實施例中,還使用被稱為工業(yè)酵素的酵素;它們是嗜熱鏈球39菌和德爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種的酵素。在此使用的工業(yè)酵素對應于三種工業(yè)酵素,即嗜熱鏈球菌的1-1630菌抹和保加利亞乳桿菌的菌林1-1632和1-1519(可得自CNCM的菌林),的混合物。工業(yè)酵素以冷凍顆粒的形式提供。將工業(yè)酵素接種至乳制品混合物中,至每克乳制品底物大約1x106ufc嗜熱鏈球菌I-1630,和大約2.7x105ufc保加利亞乳桿菌(含5%的菌抹1-1632和95%的菌林1-1519)的量。如實施例1所述制備六種乳制品混合物并如下接種-混合物BB12T和混合物1-2494T:用工業(yè)酵素顆粒分別與BB12T顆?;?-2494T顆粒的混合物接種的參考混合物(含有益生菌動物乳酸雙歧桿菌不含舉胱氨酸的顆粒);-混合物BB12G4和混合物1-2494G4:結合方法的混合物,如參考混合物進行接種,并且其中還添加了冷凍半胱氨酸顆粒;誦混合物BB12G4I和混合物1-2494G4I:用工業(yè)酵素顆粒分別與BB12G41顆?;?-2494G41顆粒的混合物接種的"整合,,方法混合物(含有整合形式半胱氨酸的動物乳酸雙歧桿菌的顆粒)。混合物的接種量為0.5g/L的顆?;旌衔?0.3g/L工業(yè)酵素和0.2g/L益生菌酵素顆粒動物乳酸雙歧桿菌)。添加G4混合物的半胱氨酸顆粒以便向混合物提供7.5mg/L的半胱氨酸,即相當于G4I顆粒提供的半胱氨酸的量(計算值7.384mg/L的半胱氨酸;見以上的實施例2)。將這六種接種的混合物在37。C下如實施例1中描述的那樣孵育。將瓶冷卻并在20。C下儲存。接著,對瓶進行手動"破壞"。向125mL壺中的包裝手動進行,并用來自FESTO的DNV-100-25PPV-A⑧熱封口才幾加熱密封進行封閉。整個測試期間將產(chǎn)品儲存在10。C的冷庫中。在發(fā)酵期間測量pH并在10°C下儲存乳制品期間測量生物量的變化(作為天數(shù)的函數(shù)的ufc/mL)。結果如圖6至9所示。動物乳酸雙歧桿菌的菌株BB12提供的結果完全與菌林1-2494給出的結果相當。在圖6和7(作為以小時的時間函數(shù)的pH變化),觀察到了半胱氨酸的存在引起了Vmax與參考混合物相比的不同。因此,半胱氨酸對動物乳酸雙歧桿菌的酸化動力學的影響是明顯的。還觀察到,G4I混合物(整合入動物乳酸雙歧桿菌顆粒的L-半胱氨酸堿)提供的結果完全與G4混合物(不同于動物乳酸雙歧桿菌顆粒的L-半胱氨酸堿顆粒)的結果相當。因此生長因子的整合十分成功。以下的表2和3顯示圖6和7中給出的若干酸化動力學參數(shù)值。表2(圖6的BB12酸化動力學)<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>表3(圖7的1-2494酸化動力學)<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>Ta潛伏期(min);Vmax最大速率(pH單位/min);pHm最大酸化率處的pH;Tmax達到Vmax的時間(min);pH0發(fā)酵開始時的pH;TpH5.5pH達到5.5的時間(min);TpH5pH達到5的時間(min)。圖8和9顯示在10°C下儲存發(fā)酵乳制品期間(除動物乳酸雙歧桿菌以外嗜熱鏈球菌-保加利亞乳桿菌共生),圖8中益生菌酵素動物乳酸雙歧桿菌BB12和圖9中動物乳酸雙歧桿菌益生菌1-2494的細胞種群的變化。這些細胞種群圖證實了用圖6和7給出的酸化動力學觀察到的結果。L-半胱氨酸的存在明顯地刺激了益生菌的細胞種群并且L-半胱氨酸堿的整合對于兩種動物乳酸雙歧桿菌菌抹中的每一種都十分成功。因此,與"結合"G4系統(tǒng)(動物乳酸雙歧桿菌益生菌酵素顆粒+不同的L-半胱氨酸石威顆粒)相比,L-半胱氨酸i威的"整合"G4I顆粒也有效它們能夠引起至少質量同樣優(yōu)良的共生乳酸發(fā)酵(嗜熱鏈球菌+保加利亞乳桿菌)并且能夠產(chǎn)生動物乳酸雙歧桿菌益生菌酵素的細胞種群,所述種群在規(guī)模上完全相當而且在發(fā)酵乳儲存期間維持同樣長的時間。因此,選擇L-半胱氨酸堿能夠引起動物乳酸雙歧桿菌的特異性生長激活劑的成功整合。含有動物乳酸雙歧桿菌益生菌酵素和L-半胱氨酸堿的"整合"G41顆粒和"結合"G4顆粒(不同于益生菌顆粒的L-半胱氨酸堿顆粒)比無半胱氨酸的參考系統(tǒng)(T顆粒)有效得多它們引起益生菌的共生乳酸發(fā)酵(嗜熱鏈球菌+保加利亞乳桿菌),其量至少相當,但是產(chǎn)生高得多而且在發(fā)酵乳儲存期間維持長得多的時間的動物乳酸雙歧桿菌酵素的細胞種群。權利要求1.接種體,其特別適合向乳制品底物中直接接種至少一種動物雙歧桿菌乳酸亞種(Bifidobacteriumanimalisssp.lactis)的菌株,以將所述乳制品底物轉化成適于人類消費的發(fā)酵乳制品,其特征在于,所述接種體包含混合物或成套形式的-不通過肽鍵與其它氨基酸相連的半胱氨酸;和-至少一種動物乳酸雙歧桿菌(B.animalislactis)的菌株;所述半胱氨酸和所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株分別包含在一種或多種冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉中或者為一種或多種冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉的形式;所述半胱氨酸還是L-半胱氨酸堿,其簡化形式的通式為HSCH2CH(NH)2CO2H,使得在-使所述一種或多種顆粒解凍;和/或-使所述一種或多種凍干粉以1至2克一種或多種凍干粉每8至10mLH2O的比例再溶解;之后所得溶液的pH至少為4;所述半胱氨酸在所述接種體中的量為-每1×104ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌株)1克;-至每3.5×1010ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌株)1克。2.根據(jù)權利要求1所述的接種體,其特征在于,所述半胱氨酸是在溶液中時pH大于4的L-半胱氨酸。3.根據(jù)權利要求l或2所述的接種體,其特征在于,所述半胱氨酸不是鹽酸半胱氨酸或鹽酸半胱氨酸一水合物。4.根據(jù)前述權利要求中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,它不包含鹽酸半胱氨酸。5.根據(jù)權利要求1至4中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,它包含至少一種冷凍顆粒和/或凍干粉,所述冷凍顆粒和/或凍干粉同時包含-全部或部分所述半胱氨酸;和-所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株的細胞。6.根據(jù)權利要求1至4中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,它包含-至少兩種冷凍顆粒;或-至少兩種不同的凍干粉;或-至少一種冷凍顆粒和至少一種凍干4分;其特征在于,對于這些物理實體對中的每一對-兩種所述物理實體中的一種含有全部或部分所述半胱氨酸而不含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞;以及-兩種所述物理實體中的另一種含有動物乳酸雙歧桿菌的細胞而不含有所述半胱氨酸。7.根據(jù)前述權利要求中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,所述半胱氨酸在所述接種體中的量為-每十億ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙》支桿菌的菌抹)0.01毫克;-至每十億ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌林)30毫克。8.根據(jù)前述權利要求中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,所述半胱氨酸在所述接種體中的量為-每0.2xl014ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)1克;-至每10xl0"ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)1克。9.根據(jù)前述權利要求中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,所述半胱氨酸在所述接種體中的量為-每十億ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌林)0.05毫克;-每十億ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌林(或者,如果有多種的話,所述多種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹)10毫克。10.根據(jù)前述權利要求中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,所述半胱氨酸在所述接種體中的量為每5xl(f至5xl011ufc所述至少一種動物乳酸雙》支桿菌的菌沖朱4.卯mg至144mg。11.根據(jù)前述權利要求中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,干物質含量為16%至17%的l克所述顆粒包含5xl(^至5xlO"ufc所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹。12.根據(jù)前述權利要求中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,干物質含量為16%至17%的1克所述顆粒包含4.90mg至144mg所述半胱氨酸。13.根據(jù)前述權利要求中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,它含有不超過0.5。/。(p/p)的酵母、酵母提取物或酵母自溶產(chǎn)物。14.根據(jù)前述權利要求中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,所述動物乳酸雙歧桿菌的菌林是菌抹1-2494。15.根據(jù)前述權利要求中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,它還包含除動物乳酸雙歧桿菌以外的至少一種乳酸菌的菌林。16.根據(jù)前述權利要求中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,所述至少一種其它乳酸菌菌株存在于如下物理結構中其不同于含有動物乳酸雙歧桿菌細胞的物理結構。17.根據(jù)權利要求14或15所述的接種體,其特征在于,所述至少一種其它乳酸菌菌抹包含至少一種嗜熱鏈球菌(S.^W/MO/7/n7附)的菌抹和至少一種保加利亞乳桿菌(丄.6w/gfln'ow)的菌株。18.冷凍顆粒,其能夠源自權利要求1至17中任一權利要求所述的接種體,其特征在于,它包含至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹和不通過肽鍵與其它氨基酸相連的L-半胱氨酸,所述L-半胱氨酸是如下形式的半胱氨酸其使得在使所述一種或多種顆粒解凍后所得溶液的pH至少為4。19.凍干粉,其能夠是權利要求1至17中任一權利要求所述的接種體或者能夠源自所述接種體,其特征在于,它包含至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌抹和不通過肽鍵與其它氨基酸相連的L-半胱氨酸,所述L-半胱氨酸的形式使得在使所述一種或多種凍干粉以1至2克一種或多種凍干粉每8至10mLH20的比例再溶解后所得溶液的pH至少為4。20.在乳制品底物上刺激動物乳酸雙歧桿菌生長和/或代謝的方法,其包括-用權利要求1至17中任一權利要求所述的至少一種接種體,和/或用權利要求18所述的至少一種顆粒,和/或用權利要求19所述的至少一種凍干粉接種乳制品底物;以及-將所述接種的底物保持在有利于動物乳酸雙歧桿菌代謝的溫度和大氣中。21.生產(chǎn)具有高益生菌價值的發(fā)酵乳制品的方法,其包括-用權利要求1至17中任一權利要求所述的至少一種接種體,和/或用權利要求18所述的至少一種顆粒,和/或用權利要求19所述的至少一種凍干粉接種乳制品底物;以及-用所述至少一種接種體使所述底物發(fā)酵。22.根據(jù)權利要求21所述的方法,其包括-用權利要求1至17中任一權利要求所述的至少一種接種體,和/或用權利要求18所述的至少一種顆粒,和/或用權利要求19所述的至少一種凍干粉接種乳制品底物;以及-用至少一種嗜熱鏈球菌的菌株和至少一種保加利亞乳桿菌的菌株接種所述乳制品底物;以及-用所述至少一種接種體和所述嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的菌林使所述底物發(fā)酵。23.根據(jù)權利要求20至22中任一權利要求所述的方法,其特征在于,向所述乳制品底物添加的所述接種體的量為以每升乳制品底物7至11mgL-半胱氨酸、每升乳制品底物109至1011ufc動物乳酸雙歧桿菌細胞的量添加L-半胱氨酸和動物乳酸雙歧桿菌的細胞。全文摘要本申請涉及特別適于在乳制品底物中直接接種至少一種動物雙歧桿菌乳酸亞種(Bifidobacteriumanimalisssplactis)的菌株的接種體,以將所述乳制品底物轉化成發(fā)酵乳制品。該接種體包含混合物或成套形式的L-半胱氨酸堿和至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株。所述半胱氨酸和所述至少一種動物乳酸雙歧桿菌的菌株分別包含在一種或多種冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉中或者為一種或多種冷凍顆粒和/或一種或多種凍干粉的形式。有利地,所述半胱氨酸被包含在與動物乳酸雙歧桿菌的細胞相同的顆?;蛳嗤膬龈煞壑?。文檔編號A23C9/13GK101489400SQ200780026515公開日2009年7月22日申請日期2007年6月1日優(yōu)先權日2006年7月13日發(fā)明者澤維爾·德烏徹,洛朗·馬查爾申請人:熱爾韋·達諾尼公司