專利名稱：：富集的嬰兒配方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及富含和包含磷脂、乳鐵蛋白、神經(jīng)節(jié)苷脂及唾液酸的選擇組合的嬰兒配方，其各自是由富含乳清蛋白的濃縮物整體或部分提供的，以便更好地類似于人乳的天然組成和性能。
背景技術(shù)：
：補充或唯一來源的營養(yǎng)。這些配方含有多種營養(yǎng)素以滿足成長的嬰兒的營養(yǎng)需求，通常包括類脂、碳水化合物、蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)及有助于最佳嬰兒生長和發(fā)育的其他營養(yǎng)素。商業(yè)上的嬰兒配方是設(shè)計用以盡可能接近地類似于人乳的組成和功能。在美國，F(xiàn)ederalFood,Drug,andCosmeticAct(FFDCA)定義嬰兒配方為"一種食物，其目的在于或代表僅僅用作嬰兒的食物的專門飲食用途，因為其模擬人乳或其適用性，作為全部或部分替代人乳，，(FFDCA201(z))。根據(jù)FFDCA規(guī)定，商業(yè)上的嬰兒配方是通過基本營養(yǎng)素定義的，在美國其一定是按配方制成不免稅(non-exempt)的嬰兒配方。每100千卡的配方，這些營養(yǎng)素包括蛋白質(zhì)(l.8-4.5g至少營養(yǎng)上等同于酪蛋白)、脂肪(3.3-6.0g)、亞油酸(至少300mg)、為3見黃醇等同物的維生素A(75-225mcg)、維生素D(40-100IU)、維生素K(至少4.0mcg)、維生素E(至少0.7IU/g亞油酸)、抗壞血酸(至少8.0mg)、石危胺(至少40mcg)、核黃素(至少60mcg)、維生素(在配方中至少35.0mcg具有15mcg/g的蛋白質(zhì))，維生素B12(至少0.15mcg)、煙酸(至少250mcg)、葉酸(至少4.0mcg)、泛酸(至少300.0mcg)、生物素(至少1.5mcg)、膽堿(至少7.0mg)、肌醇(至少4.0mg)、鈣(至少50.0mg)、亞磷(至少25.0mg，鈣與亞磷比例是1.1-2.0)、鎂(至少6.0mg)、鐵(至少0.15mg)、碘(至少5.0mcg)、鋅(至少0.5mg)、銅(至少60.0mcg)、錳(至少5.0mcg)、鈉(20.0-60.0mg)、鉀(80.0-200.0mg)和氯化物(55.0-150.0mg)。盡管嚴格的調(diào)節(jié)控制，商業(yè)上的嬰兒配方在組成或功能上仍然不等同于人乳。在人乳中已經(jīng)鑒定出幾乎200個不同的化合物，其中超過1006種在商業(yè)配方中仍然是典型地未以顯著量發(fā)現(xiàn)或根本沒有發(fā)現(xiàn)。這樣的化合物包括各種免疫球蛋白類、酶類、激素類、某些蛋白質(zhì)、乳鐵蛋白、神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂(鞘磷脂、磷脂酰基乙醇胺、磷脂酰基膽堿、磷脂?；z氨酸、磷脂?；〈?等等。多種這些物質(zhì)是人乳獨有的或者換句話講僅以較低濃度存在于制備商業(yè)上的嬰兒配方所用的牛乳或其他蛋白質(zhì)源中。因此，對于新的嬰兒配方存在持續(xù)需求，所迷新嬰兒配方含有甚至更多的在人乳中發(fā)現(xiàn)的天然成分，因此可能提供當前母乳喂養(yǎng)嬰兒所享有的更多的營養(yǎng)益處。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及具有選擇濃度和類型的在人乳中固有發(fā)現(xiàn)的那些化合物的嬰兒配方，所述化合物包括磷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂、乳鐵蛋白和唾液酸。根據(jù)嬰兒配方中這些所選成分及其相應(yīng)濃度，在此所述的嬰兒配方的營養(yǎng)素分布較常規(guī)嬰兒配方更類似于人乳。已發(fā)現(xiàn)，除了與人乳中發(fā)現(xiàn)的某些成分相類似之外，本發(fā)明的嬰兒配方還減少了如在此所述的動物研究中證實的腹瀉的危險。研究表明，在對比本發(fā)明的嬰兒配方與含少許或不含乳鐵蛋白、磷脂和神經(jīng)節(jié)苷脂的商業(yè)上的嬰兒配方的動物模型中減少了腹瀉期間。還發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的嬰兒配方促進類似在配方喂養(yǎng)的嬰兒中發(fā)現(xiàn)的腸微生物群落分布的發(fā)育，如使用由TNO生命質(zhì)量(TNO體外模型或TIM-2)研發(fā)的大腸的驗證的動力學體外;f莫型系統(tǒng)中證實的那樣。眾所周知，母乳喂養(yǎng)和配方喂養(yǎng)的嬰兒'具有顯著不同的腸微生物群落分布，其中母乳喂養(yǎng)的嬰兒的腸微生物群落分布被認為是兩者中更建康的。發(fā)明概述本發(fā)明的第一個實施方案涉及嬰兒配方，以一次喂食(as-fed)為基準計，其包含(A)至少約5mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂、(B)至少約150mg/L的磷脂、(C)乳鐵蛋白，及(D)至少約70mg/L的唾液酸，其中至少約2.5%重量的唾液酸為脂質(zhì)結(jié)合唾液酸。約50-100%重量的各個神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸是由富含乳清蛋白的濃縮物提供的，其中以一次喂食為基準計，所述濃縮物代表至少約6.5g/L的配方。本發(fā)明的第二實施方案涉及減少嬰兒中腹瀉危險的方法，包括當遭受腹瀉時減少嬰兒中腹瀉持續(xù)時間的方法。該方法包含給予需要其的嬰兒一種配方，所述配方，以一次喂食為基準計，包含(A)至少約5mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂、(B)至少約150mg/L的磷脂、(C)乳鐵蛋白，和(D)至少約70mg/L的唾液酸，其中至少約2.5%重量的唾液酸為脂質(zhì)結(jié)合的唾液酸。約50-100%重量的各個神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸是由富含乳清蛋白的濃縮物提供的，其中以一次喂食為基準計，所述濃縮物代表至少約6.5g/L的配方。本發(fā)明的第三個實施方案涉及促進類似于在母乳喂養(yǎng)的嬰兒中發(fā)現(xiàn)的腸微生物群落的方法。該方法包含向需要其的嬰兒給予一種配方，所述配方，以一次喂食為基準計，包含(A)至少約5mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂、(B)至少約150mg/L的磷脂、和(C)乳鐵蛋白，和(D)至少約70mg/L的唾液酸，其中至少約2.5%重量的唾液酸為脂質(zhì)結(jié)合的唾液酸。約50-100%重量的各個神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸是由富含乳清蛋白的濃縮物提供的，其中以一次喂食為基準計，所述濃縮物代表至少約6.5g/L的配方。已發(fā)現(xiàn)，除了與人乳中發(fā)現(xiàn)的某些成分相類似之外，本發(fā)明的嬰兒配方還減少了如在下文所述的動物研究中證實的腹瀉的危險。該研究表明，在對比本發(fā)明的嬰兒配方與商業(yè)上的嬰兒配方的動物模型中減少了腹瀉的持續(xù)時間。還發(fā)現(xiàn)了，本發(fā)明的嬰兒配方促進類似于在配方喂養(yǎng)的嬰兒中發(fā)現(xiàn)的腸微生物群落分布的發(fā)育，如使用TIM-2系統(tǒng)模型所證實的那樣。眾所周知母乳喂養(yǎng)和配方喂養(yǎng)的嬰兒具有顯著不同的腸微生物群落分布，其中母乳喂養(yǎng)的嬰兒被認為是兩者中更建康的。附圖簡述圖1是概述在母乳喂養(yǎng)的菌落72小時發(fā)酵之后，含0.5g/L短鏈FOS的常規(guī)嬰兒配方的短鏈脂肪酸分布的餅形圖(實驗1)。圖2是概述在母乳喂養(yǎng)的菌落72小時發(fā)酵之后，含2.0g/L短鏈FOS的常規(guī)嬰兒配方的短鏈脂肪酸分布的餅形圖(實驗1)。圖3是概述在母乳喂養(yǎng)的菌落72小時發(fā)酵之后，含2.0g/L短鏈和長鏈FOS的常規(guī)嬰兒配方的短鏈脂肪酸分布的餅形圖(實驗1)。圖4是概述在母乳喂養(yǎng)的菌落72小時發(fā)酵之后，含0.8g/L短鏈FOS的本發(fā)明的嬰兒配方實施方案的短鏈脂肪酸分布的餅形圖(實驗1)。圖5是概述母乳喂養(yǎng)的嬰兒的典型短鏈脂肪酸分布的餅形圖，由腸中微生物群落的發(fā)酵導致的(實驗1)。圖6是概述母乳喂養(yǎng)的菌落72小時發(fā)酵之后的常規(guī)嬰兒配方的典型短鏈脂肪酸分布的餅形圖(實驗1)。圖7是棒圖，顯示了用食物A(含有常規(guī)乳清蛋白濃縮物的商業(yè)上的嬰兒配方)、食物B和C(含有富含乳清蛋白濃縮物的嬰兒配方，以一次喂食為基準計為7.1g/L水平的配方)喂養(yǎng)的小豬的腹瀉持續(xù)時間(天)。數(shù)據(jù)是平均值士SEM。(*)顯著差異于A組(p〈0.05)(實驗2)。圖8是棒圖，顯示了用食物A和C(含有常規(guī)乳清蛋白濃縮物的商業(yè)上的嬰兒配方)或食物B(含有富含乳清蛋白濃縮物的嬰兒配方，以一次喂食為基準計為6.4g/L水平的配方)喂養(yǎng)的小豬的腹瀉持續(xù)時間(天)(實驗3)。發(fā)明詳述本發(fā)明的組合物包含神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸，其各自是通過富含乳清蛋白的濃縮物全部或部分提供的，其各自是在下文中^f細4笛述。如在此所用的術(shù)語"嬰兒，，指的是不超過大約一歲齡的個體，并包括0-約4個月大的嬰兒、約4-約8個月大的嬰兒、約8-約12個月大的嬰兒，出生時少于2,500克的低出生體重的嬰兒、和在小于約37周孕齡出生的早產(chǎn)(preterm)嬰兒，通常是約26周-約34周孕齡。如在此所用的術(shù)語"嬰兒配方"，除非另外說明，指的是含有脂肪、蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素和礦物質(zhì)的制劑，其適于口服給予嬰兒作為補充、主要或唯一的營養(yǎng)源，其非限制性實例包括重建的粉末、可稀釋濃縮物和易于喂食(ready-to-feed)的液體。如在此所用的術(shù)語"一次喂食(as-fed)",除非另外說明，指的是適于直接口服給予嬰兒的液體配方，其中該配方是易于喂食的液體、重建的粉末或稀釋的濃縮物。如在此所用的、用于表征本發(fā)明的嬰兒配方的全部成分的范圍，除非另外說明，是以一次喂食為基準計的嬰兒配方的重量計。如在此所用的全部百分比、份和比例是基于總組合物的重量計，除非另外說明。所有這些重量當其涉及所列出的成分時是基于活性水平計，因此不包括可能包含在商購的物質(zhì)中的溶劑或副產(chǎn)物，除非另外說明。本發(fā)明的嬰兒配方還可能基本上不含任何任選或所選的在此所述的必需成分或特征，條件是剩下的配方仍然含有全部的在此所述的需要的成分或特征。在此上下文中，除非另外說明，術(shù)語"基本上不含"指的是所選組合物含有少于起作用量的任選的成分，通常少于0.1%重量，還包括零百分比重量的所述任選或所選的必需成分。限制，反之亦然，除非參考內(nèi)l的上下文;4說明或清楚隱含相反內(nèi)^。參考組合的上下文另外;兌明或清楚隱含;目反內(nèi)i。'。'、本發(fā)明的方法和組合物，包括其組分，可以包含、組成為或基本上組成為在此所述的本發(fā)明的必需元素和限制，以及在此所述的任何另外或任選的成分、組分或限制或在營養(yǎng)配方應(yīng)用另外有用的。富含乳清蛋白的濃縮物本發(fā)明的嬰兒配方包含所選水平的富含乳清蛋白濃縮物，其以整體或部分形式提供配方中的神經(jīng)節(jié)苷脂、乳鐵蛋白、磷脂和唾液酸組分。在嬰兒配方中，富含乳清蛋白的濃縮物可以提供約10%-100%，包括約50%-約100%i還包4§約50/。-約90/。，而且包i舌約60%-約85%重量的各個總的磷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂、乳鐵蛋白和唾液酸水平。盡管后面的化合物可以個別和分開地加入，如來自哺乳動物的乳或其他適合來源的分離的化合物那樣，優(yōu)選大多數(shù)如果不是全部的這樣的化合物可以由富含乳清蛋白濃縮物提供。嬰兒配方中富含乳清蛋白濃縮物的水平必須超過約6.5g/L的配方，以一次喂食為基準計。這樣的濃度也可以介于約6.5-約10.9g/L的配方，包括約6.6-約8.5g/L,還包括約6.7-約7.3g/L配方，以一次喂食為基準計。用于本發(fā)明的嬰兒配方的富含乳清蛋白的濃縮物是具有高濃度的乳脂球膜物質(zhì)的那些。乳脂球膜物質(zhì)是在牛乳或其他哺乳動物的乳中包圍富含三酰甘油乳脂球的膜及膜相關(guān)的物質(zhì)。多種在乳脂球膜物質(zhì)中鑒定的化合物是以比商業(yè)上的嬰兒配方以高得多的濃度存在于人乳中的。通過向嬰兒配方中加入在這樣物質(zhì)中富含的乳清蛋白濃縮物，所得的配方在組成上是更加類似人乳，特別是相對于神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸的人乳濃度而言。10如在此所用的術(shù)語"富含乳清蛋白濃縮物"，除非另外說明，通常是指具有至少約3%更代表性地是至少約5%,重量的磷脂，其中至少約20%重量的鞘磷脂；至少約0.5%代表性地是至少約1.2%重量的唾液酸；和至少約0.05%代表性地是至少約0.1%,重量的神經(jīng)節(jié)苷脂的任何乳清蛋白濃縮物。來自濃縮物的至少約2.5%重量的唾液酸是脂質(zhì)結(jié)合的。適于在此所用的富含乳清蛋白濃縮物的來源包括任何乳清蛋白濃縮物，其具有上迷水平的富含成分，其非限制性實例包括LACPRODANMFGM-IO。從AriaFoodIngredients,Denmark得到的乳清蛋白濃縮物，其含有6.5%磷脂、0.2%神經(jīng)節(jié)苷脂、1.80%唾液酸(按總唾液酸的重量計至少2.5%脂質(zhì)結(jié)合唾液酸)，及1.5%乳鐵蛋白，基于濃縮物的重量計。唾液酸以一次喂食為基準計，本發(fā)明的嬰兒配方包含唾液酸，其濃度為至少70mg/L，包括約90mg/L-約4000mg/1，還包括約190mg/l-約2000mg/1,還包括約300mg/L-約900mg/L;其中至少2.5%的重量的唾液酸為脂質(zhì)結(jié)合的，包括約2.6%-約10%，包括約2.7%-約5%重量的唾液酸為脂質(zhì)結(jié)合的。一些或全部的唾液酸可以是由在此所述的富含乳清蛋白的濃縮物提供的。嬰兒配方中脂質(zhì)結(jié)合唾液酸組分最典型地是神經(jīng)節(jié)苷脂的形式，其固有地含有脂質(zhì)結(jié)合唾液酸。如下文所述的本發(fā)明的神經(jīng)節(jié)苷脂組分，因此可以是本發(fā)明的脂質(zhì)結(jié)合唾液酸組分的主要或唯一來源。如在此所用的術(shù)語"唾液酸"，除非另外說明，指的是所有共軛和非共輒形式的唾液酸，包括唾液酸衍生物。本發(fā)明的嬰兒配方中的唾液酸因此可以包括游離的唾液酸、蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸、脂質(zhì)結(jié)合唾液酸(包含神經(jīng)節(jié)芬脂)、碳水化合物結(jié)合的唾液酸及其組合或衍生物。在此所述的所有唾液酸的濃度是基于唾液酸化合物或其部分、結(jié)合到唾液酸結(jié)構(gòu)的較少蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、碳水化合物或其他共軛物(conjugates)的重量百分比計。嬰兒配方中所用的唾液酸來源可以是作為單獨的成分加入或獲得的。然而，更典型地，唾液酸是主要作為來自乳清蛋白濃縮物組分的固有成分提供的，優(yōu)選來自在此所述的富含乳清蛋白濃縮物。盡管較少優(yōu)選，但是唾液酸可以作為單獨的成分獲得并加入到嬰兒配方中，在此情ii形下，加入的唾液酸結(jié)合來自其他成分的固有唾液酸；以提供嬰兒配方中總的唾液酸含量。作為單獨的化合物或部分，唾液酸是9碳氨基糖，其結(jié)構(gòu)在化學文獻中易于描述。N-乙酰基神經(jīng)氨酸的其他通?？山邮艿拿Q包括唾液酸、o-唾液酸、5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-D-甘油基-D-半乳糖-2-nonulosonicacid、5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-D-甘油基-D-半乳糖nulosonicacid、醋紐拉酸(Aceneuramicacid)、N-乙?；?神經(jīng)氨酸酯、N-乙酰基神經(jīng)氨酸、NANA、NANA,Neu5Ac和Neu5Ac。適合的唾液酸來源可以是天然或合成的，包括超過40種天然存在及當前鑒定的唾液酸衍生物之任一，其包括游離唾液酸、寡糖共軛物(例如，唾液酸(sialylo)寡糖)、脂質(zhì)共軛物(即，糖脂類)、蛋白質(zhì)共軛物(即，糖蛋白)及其組合。適于這里應(yīng)用的唾液酸包括常在人乳中發(fā)現(xiàn)的唾液酸寡糖，無論天然或合成的，其中兩種最豐富的是3'唾液酸(sialyl)乳糖(3'SL,NeuNAca2-3半乳糖卩l(xiāng)-4葡萄糖)和6'唾液酸乳糖(6'SL,NeuNAca2-6半乳糖pi-4葡萄糖)。其他適合的唾液酸寡糖包括含有結(jié)合到大量人乳或其他更復(fù)雜寡糖的一個或多個唾液酸分子的那些。在此所用的其他適合的唾液酸包括也適用于嬰兒配方的任何相應(yīng)的糖脂，包括神經(jīng)節(jié)苷脂如含唾液酸的糖脂，包含脂肪酸、鞘氨醇、葡萄糖、半乳糖、N-乙?；肴樘前?、N-乙?；咸烟前泛蚇-乙酰基神經(jīng)氨酸分子。這些唾液酸化合物也可以包括任何一種或多種在人乳中通常發(fā)現(xiàn)的幾種糖蛋白，其已知是唾液酸化的(例如，k-酪蛋白、a-乳清蛋白、乳鐵蛋白)。在此所用的唾液酸的適合來源包括哺乳動物的乳或乳制品(包括人和牛的乳)的分離物、濃縮物或提取物。牛乳是在此所用的優(yōu)選來源，包含在此所述的富含乳清蛋白濃縮物。在此適用的唾液酸的個另'J來源包4舌從ArlaFoodIngredients,DenmarK獲得的LacprodanCGMP-10(含4.2%唾液酸的酪蛋白糖巨肽),；以及從DaviscoFoodsInternational,EdenPrairie,Minnesota,USA獲得的生物純的糖巨肽(含7-8%唾液酸)。盡管嬰兒配方可以含有作為唾液酸源的糖巨肽，但是所述配方優(yōu)選基本上降低糖巨肽含量。糖巨肽是牛乳蛋白酪蛋白分子的部分。僅有非常少量的游離糖巨肽是在脫脂乳中發(fā)現(xiàn)，但是乳清蛋白濃縮物含有較高量的游離糖巨肽。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，糖巨肽連同其他唾液酸來源是不被嬰兒耐受的。因此，用乳清蛋白濃縮物制得的嬰兒配方具有更高的游離糖巨肽含量，但是也可能是嬰兒較少耐受的。在此上下文中，術(shù)語"基本上減少"指的是嬰兒配方優(yōu)選含有少于0.5%，包括少于0.4%也包括少于0.35%，而且還包括O百分比重量的配方作為游離糖巨肽，以一次喂食為基準計。傳統(tǒng)的嬰兒配方通常含有0.6-0.8%的糖巨肽，作為來自干酪乳清的典型乳清蛋白濃縮物的固有成分。神經(jīng)節(jié)苷脂本發(fā)明的嬰兒配方包含富集濃度的一種或多種神經(jīng)節(jié)苷脂，一組由鞘糖脂(神經(jīng)酰胺和寡糖)與一種或多種連接到寡糖鏈的唾液酸(n-乙?；窠?jīng)氨酸)組成的化合物。一些或全部的神經(jīng)節(jié)苷脂可以是由在此所述的富含乳清蛋白濃縮物提供。神經(jīng)節(jié)苷脂是哺乳動物細胞的質(zhì)膜的正常組分，特別是在神經(jīng)元細胞膜中含量豐富。其是酸性的鞘糖脂，含有疏水的部分、神經(jīng)酰胺以及親水部分，含一個或多個唾液酸分子的寡糖鏈。神經(jīng)節(jié)苷脂的寡糖部分具有構(gòu)成作為單個實體的神經(jīng)節(jié)苷脂分離及其識別的參考基準的不同的化學結(jié)構(gòu)。最常見的神經(jīng)節(jié)苷脂的神經(jīng)酰胺部分具有異形的脂肪酸的組合物，普遍具有C18和C20衍生物。神經(jīng)節(jié)苷脂最常見使用M、D和T名稱命名，其分別指的是單-、二-和三唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂，數(shù)字1、2、3等指的是薄層色譜上神經(jīng)節(jié)苷脂的遷移順序。例如，單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂的遷移順序是GM3>GM2>GM1。為了指出基本結(jié)構(gòu)的不同，加上進一步的下標，例如GMla、GDlb等。本發(fā)明的嬰兒配方包含至少約5mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂，包括約7mg/L-50mg/L，還包括約10-約30mg/L。這些神經(jīng)節(jié)苷脂濃度類似在人乳中發(fā)現(xiàn)的那些，其通常含有至少約3mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂，更典型地是約3mg/L-約30mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂。嬰兒配方所用的這些神經(jīng)節(jié)苷脂通常含有神經(jīng)節(jié)苷脂GD3、0-乙?；?GD3和GM3的一種或多種，更典型地為全部?；谠诖说膵雰号浞街械娜可窠?jīng)節(jié)苷脂的重量計，這些神經(jīng)節(jié)芬脂通常代表至少約80%,更典型地至少約90%。在此所用的神經(jīng)節(jié)苷脂的適合來源包括哺乳動物的乳或乳制品(包13括人乳和牛乳)的分離物、濃縮物或提取物。牛乳是在此所用的優(yōu)選的神經(jīng)節(jié)苷脂來源，包含在此所述的富含乳清蛋白濃縮物。適用于此的神經(jīng)節(jié)苷脂的個別來源包括神經(jīng)節(jié)苷脂500(〉0.5%GM3和<1.0%GD3)以及神經(jīng)節(jié)苷脂600(〉1.2%GD3),從Fonterra,NewZealand獲得。用于定義本發(fā)明嬰兒配方的目的的神經(jīng)節(jié)苷脂濃度是根據(jù)下文所述的神經(jīng)節(jié)苷脂方法測量的。磷脂本發(fā)明的嬰兒配方包含富集濃度的磷脂。這樣的濃度是高于常規(guī)嬰兒配方中發(fā)現(xiàn)的濃度，但是類似于人乳中發(fā)現(xiàn)的濃度。一些或全部的磷脂可以是由在此所述的富含乳清蛋白的濃縮物提供的。適于在此所用的磷脂包括在牛乳和其他哺乳動物的乳中通常發(fā)現(xiàn)的那些。優(yōu)選的磷脂包括鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸及其組合。最優(yōu)選的是全部五種磷脂的組合，特別是這樣的組合，其中鞘磷脂代表至少20%重量的總磷脂。本發(fā)明的嬰兒配方中的磷脂濃度是至少約150mg/L,包括約200mg/L-約600mg/L，還包括約250-約450mg/L。用于對照，人乳通常含有約163-約404mg/L的磷脂，其中鞘磷脂代表總磷脂的約51%。在此所用的磷脂的適合來源包括哺乳動物的乳或乳制品(包括人乳和牛乳)的分離物、濃縮物或提取物。牛乳是在此所用的優(yōu)選的磷脂來源，包括在此所述的富含乳清蛋白的濃縮物。其他適合的磷脂來源包括大豆，如大豆卵磷脂。然而，本發(fā)明的嬰兒配方優(yōu)選是基本上不含來自大豆的磷脂。嬰兒配方也優(yōu)選是基本上不含蛋(egg)磷脂，其也稱為卵磷脂(egglecithin)。在此上下文中，術(shù)語"基本上不含"指的是嬰兒配方含有少于0.5%,更優(yōu)選少于0.1%，包括0百分比重量的大豆或蛋磷脂。適用于此的磷脂的個別來源包括乳衍生來源例如磷脂濃縮物600(〉18.0%鞘磷脂、>36.0%磷脂酰膽堿、>9.0%磷脂酰乙醇胺、4.0%磷脂酰絲氨酸)，從Fonterra，NewZealand獲得。乳鐵蛋白本發(fā)明的嬰兒配方包含乳鐵蛋白，一種在人乳中發(fā)現(xiàn)的鐵轉(zhuǎn)運蛋白。這些配方含有富集濃度的乳鐵蛋白，其水平高于常規(guī)嬰兒配方中發(fā)14現(xiàn)的那些。一些或全部的乳鐵蛋白可以是由在此所述的富含乳清蛋白的濃縮物提供。如在此所用的術(shù)語"乳鐵蛋白"包括變性的乳鐵蛋白以及乳鐵蛋白的大量、生物活性的片段(例如，乳鐵蛋白片段)及未變性或天然的乳鐵蛋白。乳鐵蛋白是一種屬于鐵運輸?shù)鞍谆蜻\鐵蛋白家族的糖蛋白。其在牛和其他哺乳動物的乳中作為乳清蛋白的較少蛋白組分而發(fā)現(xiàn)的。乳鐵蛋白含有703個氨基酸，其具有80千道爾頓的分子量，也在人乳中發(fā)現(xiàn)。本文所用術(shù)語"天然乳鐵蛋白"是指不與其他蛋白質(zhì)或脂質(zhì)聚集的乳鐵蛋白。但是，天然乳鐵蛋白可以結(jié)合于鐵或其他無機物上。本發(fā)明的嬰兒配方中的乳鐵蛋白濃度優(yōu)選是至少約50mg/L,包括約50mg/L-約2000mg/L,包括約100-約1500mg/L。其中優(yōu)選至少約6%重量，包括約6約30%，也包括約7~14%的乳鐵蛋白作為天然乳鐵蛋白。用于對照，人乳通常含有約1390-約1940mg/L的乳鐵蛋白。人乳和牛乳)的分離物、濃縮物或提^:物。牛乳是在此所;的優(yōu)選的乳鐵蛋白來源，包含在此所述的富含乳清蛋白的濃縮物。適用于這個應(yīng)用的乳鐵蛋白的個別來源包括乳鐵蛋白FD(80%乳鐵蛋白)，從DMVInternational,Veghel,TheNetherlands獲得。其他營養(yǎng)素本發(fā)明的嬰兒配方包含脂肪、蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素和礦物質(zhì)，其全部在類型和用量上進行選擇，以滿足目標嬰兒或確定嬰兒人群的唯一、主要或補充的營養(yǎng)需求。碳水化合物、脂肪、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)和維生素的多種不同來源和類型是已知的，并且可以用于在此的基礎(chǔ)配方中，條件是這樣的營養(yǎng)素是與在所選制劑中加入的成分相配伍的，而且在其他方面適用于嬰兒配方。適用于在此的配方的碳水化合物可以是簡單或復(fù)雜的、含乳糖或不含乳糖的、或者其組合，其非限制性實例包括水解的、完整的、天然的和/或化學改性的玉蜀黍淀粉、麥芽糖糊精、葡萄糖聚合物、蔗糖、玉米糖漿、玉米糖漿固體、稻或馬鈴薯衍生的碳水化合物、葡萄糖、果糖、乳糖、高果糖玉米糖漿及不消化的寡糖例如果糖寡糖(FOS)、半乳糖寡糖(GOS)及其組合。適用于在此的配方的蛋白質(zhì)包括水解的、部分水解的和非水解的或者完整的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)來源，而且可以衍生自任何已知或其他適合的來源如乳(例如，酪蛋白、乳請、人乳蛋白)、動物(例如，肉、魚)、谷類(例如，稻、玉米)、蔬菜(例如，大豆)或其組合。用于本文的蛋白質(zhì)也可以包括，或者是用下述完全或部分替代，已知用于或在其他方面適用于嬰兒配方的游離氨基酸，其非限制性實例包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、肉毒堿、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、?；撬?、蘇氨酸、色氨酸、?；撬?taurine)酪氨酸、纈氨酸及其組合。這些氨基酸是最典型地是以其L-形使用，盡管當營養(yǎng)上相當時，對應(yīng)的D-異構(gòu)體也可以使用。外消旋或同分異構(gòu)體的混合物也可以4吏用。適用于在此的配方的脂肪包括椰子油、豆油、玉米油、橄欖油、紅花油，高油酸的紅花油、藻油，MCT油(中鏈甘油三酯)、葵花油，高油酸的葵花油、棕櫚及棕櫚仁油、棕櫚油精、蕓苔油、船用照明油(marineoils)、棉籽油及其組合。本發(fā)明的嬰兒配方包括那些實施方案，其包含少于約1%,包括少于約0.2%,還包括O百分比的重量的乳脂，以一次喂食為基準計。適用于在此的配方的維生素和類似的其他成分包括維生素A、維生素D、維生素E、維生素K、硫胺素、維生素B2、維生素B6、維生素B12、煙酸、葉酸、泛酸、生物素、維生素C、膽^5成、"幾醇、其鹽和衍生物，及其組合。適用于在此的基礎(chǔ)配方的礦物質(zhì)包括鈣、磷、鎂、鐵、鋅、錳、銅、鉻、碘、鈉、鉀、氯化物及其組合。根據(jù)針對目標消費者或使用者人群的有關(guān)嬰兒配方指南，本發(fā)明的嬰兒營養(yǎng)配方優(yōu)選包含營養(yǎng)素，其實例可以是嬰兒配方Act,21U.S.C.350(a)節(jié)。用于配方中的優(yōu)選的碳水化合物、脂質(zhì)及蛋白質(zhì)濃度是在下表提出。表1:常量營養(yǎng)元素范圍營養(yǎng)素范圍1gm/100kcalgm/100gm粉末gm/升一次喂食碳水化合物優(yōu)選的8-1630-9054-108史優(yōu)ii的9-1345-6061-88脂質(zhì)優(yōu)選的3-815-3520-54更優(yōu)選的4《.625-252745蛋白質(zhì)優(yōu)選的1-3.58-177-24更優(yōu)選的1.5-3.410-1710-231、所有數(shù)值優(yōu)選是用術(shù)語"約"修飾的。嬰兒配方也可以每100千卡的配方包括一種或多種以下成分維生素A(約250-約7S0IU)、維生素D(約40-約100IU)、維生素K(大于約4iLim)、維生素E(至少約0.3IU)、維生素C(至少約8mg)、硫胺素(至少約8pg)、維生素B12(至少約0.15嗎)、煙酸(至少約250pg)、葉酸(至少約4ng)、泛酸(至少約300pg)、生物素(至少約1.5pg)、膽堿(至少約7mg)及肌醇(至少約2mg)。嬰兒配方也可以每100千卡的配方包括一種或多種以下成分鈣(至少約50mg)、磷(至少約25mg)、鎂(至少約6mg)、鐵(至少約0.15mg)、捵(至少約5pg)、鋅(至少約0.5mg)、銅(至少約60pg)、錳(至少約5pg)、鈉(約20-約60mg)、鉀(約80-約200mg)、氯化物(約55-約150mg)和硒(至少約0.5mcg)。嬰兒配方可以進一步包含果糖多糖，其濃度介于最高至約5%重量的配方，以一次喂食為基準計，包括約0.05%-約3%,也包括約O.l%-約2%。這些果糖多糖可以是長鏈(例如，菊糖)、短鏈(例如，F(xiàn)OS或果糖寡糖)，或其組合，其中混合物包含不同鏈長結(jié)構(gòu)，其大多數(shù)具有約2-約60的DP(聚合度)。本發(fā)明的嬰兒配方可以進一步包含多不飽和的脂肪酸，如二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid)、花生四烯酸或其組合。任何來源的這種長鏈的多不飽和的脂肪酸是適用于此的，條件是所述來源是對于用于嬰兒是安全有效的，另外與嬰兒配方中的其他所選成分相配伍。本發(fā)明的嬰兒配方中的花生四烯酸濃度可以介于最高至約2.0%，更優(yōu)選是約0.1%-約1.0%,甚至更優(yōu)選是約0.15-約0.7%,包括約0.2%-約0.45%,也包括約0.38%-約0.43%，基于配方中的總脂肪酸的重量計。本發(fā)明的嬰兒配方中二十二碳六烯酸濃度可以介于最高至約1.0%,包括約0.09%-約1.0%，也包括約0.1%-約0.36%,基于配方中的總脂肪酸的重量17計?；ㄉ南┧岷?或二十二碳六烯酸的某些適合來源的非限制性實例包括船用照明油、蛋衍生的油、霉菌油(fungaloil)、海藻油、其他單細胞油類及其組合。嬰兒配方可以進一步包含其他的任選成分，其可以改變組合物的物理、化學、美感或加工特征，或者用作藥學上的或另外的營養(yǎng)成分，當用于目標嬰兒或嬰兒人群時很多這樣任選的成分是已知的或另外適用于營養(yǎng)產(chǎn)品，也可以用于本發(fā)明的嬰兒配方中，條件是這樣的任選物質(zhì)配伍在此所述的必需物質(zhì)，而且另外適用于嬰兒配方中。所述任選成分的非限制性實例包括另外的抗氧化劑、乳化劑、緩沖劑、著色劑、調(diào)味劑、核苷酸和核苷、益生菌、益生元及其有關(guān)衍生物、增稠劑和穩(wěn)定劑等等。使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明還涉及一種減少嬰兒中腹瀉的風險的方法，包括通過以下方式減少這樣的風險，通過減少傾向于發(fā)展成腹瀉或已遭受腹瀉痛苦的嬰兒中的腹瀉的持續(xù)時間，通過制備然后給予或指導護理人員將嬰兒配方給予嬰兒，作為營養(yǎng)物的唯一來源、主要來源或者補充來源。唯一來源的營養(yǎng)物是優(yōu)選的。本發(fā)明還涉及一種生產(chǎn)類似于在母乳喂養(yǎng)的嬰兒中發(fā)現(xiàn)的腸微生物群落分布的方法，通過制備如在此所述的嬰兒配方，然后給予或指導護理者將配方給予嬰兒，作為營養(yǎng)物的唯一來源、主要來源或者補充來源。唯一來源的營養(yǎng)物是優(yōu)選的。本發(fā)明還涉及一種向嬰兒提供營養(yǎng)物的方法，通過制備在此所述的嬰兒配方，然后給予或指導護理者將配方給予嬰兒，作為營養(yǎng)物的唯一來源、主要來源或者補充來源。唯一來源的營養(yǎng)物是優(yōu)選的。在本發(fā)明方法的上下文中，嬰兒配方可以提供給嬰兒唯一、主要或補充的營養(yǎng)物。對于粉末實施方案而言，各種方法還可以包括用水性載體(最典型地是水或人乳)重建粉末的步驟，以形成期望的熱密度，其然后口服或腸內(nèi)喂食嬰兒以提供期望的營養(yǎng)物。粉末是用一定量的水或其他適宜的流體乳人乳重建，以產(chǎn)生一定體積且適于約一次喂食的營養(yǎng)物分布。本發(fā)明的嬰兒配方最典型地具有約19-約24kcal/floz的熱密度，更典型地是約20-約21kcal/floz,以一次喂食為基準計。18神經(jīng)節(jié)苷脂分析方法在此所用的神經(jīng)節(jié)苷脂濃度是根據(jù)以下分析方法測定的。全部的脂質(zhì)是用氯仿:甲醇:水的混合物從LacprodanMFGM-10或嬰兒配方樣品中提取的。神經(jīng)節(jié)苷脂是從總的脂質(zhì)提取物通過組合二異丙醚(DIPE)/-丁醇/水相分配并通過濾筒的固相提取來純化的。純化的神經(jīng)節(jié)苷脂中的脂質(zhì)結(jié)合的唾液酸(LBSA)是通過與間苯二酚反應(yīng)來分光光度計測量。樣品中神經(jīng)節(jié)苷脂的量是通過換算因數(shù)乘以LBSA得到的。這種因數(shù)是從神經(jīng)節(jié)苷脂和唾液酸單元的分子量比獲得的。因為神經(jīng)節(jié)苦脂是具有不同分子量和唾液酸殘基數(shù)的化合物的一類。所以HPLC分離是用于測量個體神經(jīng)節(jié)苷脂分布以便更精確地計算這種換算因數(shù)。標準，.品二唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂GDla,來自牛腦，最少95%(TLC)SIGMA,refG-2392。，單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂GM1,來自牛腦，最少95%(TLC)SIGMA，refG-7641。二唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂GD3銨鹽，來自牛酪乳，最少(TLC)Calbiochem,ref345752或Matreya,ref,1503。單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂GM3銨鹽，來自牛乳，最少98%(TLC)Calbiochem，ref345733或Matreya,ref,1504。N-乙?；窠?jīng)氨酸，(唾液酸，NANA)來自大腸桿菌，最少98%SIGMA，refA-2388。神經(jīng)節(jié)苦脂標準品不被考慮為是真實的標準品，因為供應(yīng)商通常不保證其濃度。為此原因，濃度是按照作為通過間笨二酚操作測量的LBSA來估計的。根據(jù)神經(jīng)節(jié)苷脂的類型，標準品是用氯仿:甲醇(C:M)l:1(v/v:稀釋成1-2.5mg/ml的理論濃度。取10、20和40pl的等分試樣，在氮氣流下使其干燥并按照以下說明的(LBSA的測量方法)測量。三個等分試樣的平均濃度被認為是神經(jīng)節(jié)普脂標準品的濃度，表達為LBSA。神經(jīng)節(jié)苷脂濃度是通過用換算因數(shù)乘以LBSA獲得的，換算因數(shù)是由分子量t匕(換算因數(shù)神經(jīng)節(jié)苷脂:其中n-唾液酸單元的數(shù)目)得到的。試劑裝置氯仿，HPLC等級，Prolabo.甲醇，HPLC等級，Merck.,二異丙鍵，HPLC等級'Prolabo.乙酸丁酯，PA,Merck.''1—丁醇，PA,Merck.'二堿式碌酸鈉，PA,P3nre3c.鹽酸35%,PA，Panreac.,疏酸銅，PA,Panreac.間苯二紛，99%,Merck..氯化鈉，PA，Panreac.'分析天平，精密度O.1mg..HPLC管形瓶，screwscap和inserts來自Waters.'漢密爾頓微量注射器(50,100，250,500,1000pi).'HPLC:Alliance2690來自Waters.'HPLCUV檢測器，參考號number2487,來自Waters.HPLC積分儀WatersMillennium32.'SolvacFilterHolder(聚丙辨)，ref.No.4020.'0.45|jm的Durapore膜過濾器ref.No.VLP04700'Multi-reaxVortex(Heidoiph〉'數(shù)字吸量管(2-20,5"50,40-200,200-1000的-玻璃圃底10ml離心管'玻璃圓底50ml離心管'玻璃圓錐形底40ml離心管.500mgC-18濾筒(5ml,ref52604-U,Supelco)Reacti-VapIH蒸發(fā)器27-孔模型(Pierce);離心機i超聲浴槽卜SPE-真空多支管24-孔模型i隔膜真空泵,Triple^BlockReacti-Therm川:(Pierce)I水-真空泵〗*玻璃Pasteur吸量管!'有機溶劑配料器(2.5-25mf)〗Vortex(Heidolph)J水浴40-100oC.'玻璃移液管(5，10,25ml).分光光度計(ThermoSpectronicUV500).搡作脂質(zhì)提取脂質(zhì)提取物是根據(jù)如下制得的:稱重1g配方的樣品或100mg的LacprodanMFGM-10進入圓底玻璃離心管(50ml管用于配方，10ml管用于LacprodanMFGM-IO)。每克樣品加入25ml的氯仿:甲醇:水(C:M:W)50:50:10(v/v),通過選擇性渦旋樣品完全分散，超聲處理分鐘。所述管在室溫下孵育45分鐘，同時劇烈和持續(xù)渦旋(2000rpm),每15分鐘浴槽超聲脈沖l分鐘。樣品離心(1500xg，IO分鐘，15°C)。上清液轉(zhuǎn)移至40ml的圓錐形底玻璃離心管，開始在37。C的氮氣下使其20干燥。同時，團粒每克用12.5ml的C:M:W在室溫下再提取15分鐘，同時持續(xù)渦旋(2000rpm)并且每7.5分鐘浴槽超聲脈沖1分鐘。離心之后，上清液與第一部分匯集入40ml管中并連續(xù)蒸發(fā)。團粒用C:M1:1(v/v)洗滌，并在與以前相同的條件下孵育10分鐘，每5分鐘超聲脈沖。離心之后，上清液再加入到40ml管中并蒸發(fā)。神經(jīng)節(jié)苷脂級分從總的脂質(zhì)提取物中提純，通過組合二異丙醚(DIPE)/l-丁醇/水相分配，如LadischS.andGillardB.(1985)AsolventpartitionmethodformicroscaleGangliosidepurification,Anal.Biochem,146:220-231所述。接著通過C-18濾筒固相提取，如WilliamsMandMcCluerR(1980)，TheuseofSep-PakTMCI8cartridgesduringtheisolationofgangliosides,丄Neurochem,35:266-269所述，并作改變。二異丙醚/l-丁醇/NaCl水溶液分配:4ml的DIPE/1-丁醇60:40(v/v)被加入到干燥的脂質(zhì)提取物中。樣品渦旋并超聲處理以得到脂質(zhì)提萃物的精細混懸液。加入2ml的0.1。/。NaCl水溶液，在2分鐘期間，所述管交替地渦旋并超聲處理15秒脈沖，然后離心(1500xg,10min,15°C)。上面的有機相(含中性脂質(zhì)和磷脂)是使用Pasteur吸液管小心移去，小心不要帶走中間相。含神經(jīng)節(jié)苷脂的下部的水相用最初體積的新鮮有機溶劑萃取兩次。樣品是在37匸的氮氣流下部分蒸發(fā)30-45分鐘，直至體積(接近2ml)減少至約原始體積的一般。通過反相C-18濾筒的固相提取(SPE):500mgC-18濾筒裝配于24孔線性SPE真空多支管上，并用5ml的甲醇、5ml的C:M2:1(v/v)及2.5ml的曱醇的三次連續(xù)洗滌活化。然后，濾筒是用2.5ml的0.1%NaCl水溶液甲醇60:40(v/v)平衡。測量部分蒸發(fā)的下部相的體積，用水加入高至1.2ml，力口入0.8ml甲醇。然后，其離心(1500xg,10min)以除去不溶物并兩次裝栽在C-18濾筒上。SPE濾筒是用10ml的蒸餾水洗以除去鹽類和水溶性污染物，然后在真空下干燥30秒。神經(jīng)節(jié)苷脂用5ml的甲醇和5ml的C:M2:1(v/v)洗脫，在氮氣流下干燥，重新溶解于2ml的C:M1:1(v/v)中。樣品和溶劑靠重力或弱真空強迫通過濾筒，流速為1-1.5ml/分鐘。神經(jīng)節(jié)苷脂是在-30。C下儲藏，直至分析時。總的神經(jīng)節(jié)苷脂是根據(jù)LBSA測量的。500nl的等分試樣放置入10ml玻璃離心管中，在氮氣下干燥，并通過間笨二酚測定法測量(3)。LBSA的測量加入1ml的間笨二酚試劑和lml的水。將管蓋上(cupped)并在100。C的沸水浴中加熱15分鐘。加熱之后，所述管在冰浴水中冷卻，加入2ml的乙酸丁酯丁醇85:15(v/v)，所述管劇烈sacked1分鐘，然后在750xg下離心IO分鐘。取上部相，在580nm的分光光度計下測量。NANA(O、2、4、8、16、32和64pg/ml)的標準溶液以相同的方式處理，并用于計算樣品中的唾液酸濃度。間苯二酚試劑如下制備10ml的2%間苯二酚在去離子水中、0.25ml的0.1M疏酸銅、80ml的濃鹽酸，用水補充至100ml。試劑是避光每曰制備。通過HPLC分離神經(jīng)節(jié)苷脂神經(jīng)節(jié)苷脂是通過在具有雙重吸光度檢測器的Alliance2690設(shè)備中HPLC分離，使用來自Waters的Luna-NH24主、5|im,100人，250x4.6mm來自Phenomenex，ref.00G-4378-EO。其在室溫下使用以下溶劑系統(tǒng)洗脫不同體積比和離子強度的乙腈-磷酸鹽緩沖液，根據(jù)GazzottiG.，SonnionS.，GhidoniaR(1985),Normal-phasehigh-performanceliquidchromatographicseparationofnon-derivatizedgangliosidemixtures.JChromatogr.348:37卜378的方法。使用具有兩種移動相的梯度.溶劑A:乙腈-5mM磷酸鹽緩沖液，pH5.6(83:17)。此緩沖液是用0.6899g的NaH2PCVH20加入lL的水中制得，pH調(diào)節(jié)至5.6。溶劑B:乙腈-20mM磷酸鹽緩沖液，pH5.6(1:1)。此緩沖液是用2.7560g的NaH2P(VH20加入1L的水中制得，pH調(diào)節(jié)至5.6。使用以下梯度洗脫程序<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>樣品是如上解釋的液相提取，分配并固相提取。來自2ml樣品在C:M1:1中的0.5ml等分試樣是在氮氣下蒸發(fā)并再溶解于0.150ml的水中》對于完美重建而言，樣品是渦旋和超聲處理。最終溶液是轉(zhuǎn)移至HPLC玻璃瓶中。樣品和標準品的注射體積是30pl。GD3和GM3標準品是通過以上解釋的間苯二酚操作測量并計算真實濃度。含GD3和GM3的四種標準品溶液以及空白是在水中制得。校正標準品的濃度范圍對于GD3是約0-0.5mg/ml而對于GM3是0-0.2mg/ml。各套標準品的準確濃度可以根據(jù)標準品的純度變化每次注射一套標準品，例如對于新柱子，裝備一種系統(tǒng)。系統(tǒng)適宜的性能是通過每10次運行注射一個中間體濃度的標準品檢查，如果內(nèi)插濃度不是介于理論濃度的95%-105%之間，則注射入新的校正組合并用于隨后的計算。天然乳鐵蛋白分析方法在此所用的天然乳鐵蛋白濃度是根據(jù)在此所述的HPLC法測定(分子篩析(sizeexclusion)色譜法)。試驗參數(shù)例如如下柱子(2個，串聯(lián))ShodexKW-804(Waters#36613)和ShodexKW-803(Waters#35946)移動相525mLMilli-Q加H20，475mL乙腈，0.5mL三氟乙酸流速0.2mL/分鐘溫度40。C檢測在205nm、214nm、280nm紫外檢測注射2.0uL運4亍時間150分鐘LF標準范圍20-80mg/LWPC樣品制備-1.0mg/mL，在移動相中。生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的嬰兒配方可以通過任何已知的或另外的適于制備和配制嬰兒或類似其他配方的有效技術(shù)制得。這樣的技術(shù)及用于任何給定配方的變體是由制備在此所迷的配方中的嬰兒營養(yǎng)制劑或生產(chǎn)領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員易于確定和應(yīng)用的。生產(chǎn)本發(fā)明的嬰兒配方的方法可以包括由一種或多種可以含水和一種或多種以下物質(zhì)的溶液形成漿液碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、穩(wěn)定劑、維生素和礦物質(zhì)。這種漿液被乳化、均化并冷卻u進一步加工之前、期間、之后，可以加入各種其他溶液、混合物或其他物質(zhì)到所得乳化液中。這種乳化液然后可以進一步稀釋，滅菌并包裝成易于喂食或濃縮的液體，或者其可以滅菌并隨后加工和包裝為重建粉末(例如，噴霧干燥、干混、成團)。用于制備嬰兒配方的其他適合的方法例如描述于美國專利6,365,218(Borschd)和美國專利申請20030118703Al(Nguyen等人)中，其描述在此引入本文作為參考。實驗I此實驗的目的是用于評價本發(fā)明的嬰兒配方對于腸微生物群落的影響，并把這些影響與人乳產(chǎn)生的影響相比較。這是通過使用確認的大的腸模型系統(tǒng)測量由人乳和嬰兒配方產(chǎn)生的短鏈脂肪酸濃度來完成的。眾所公知，人乳喂養(yǎng)的嬰兒的腸微生物群落分布是不同于配方喂養(yǎng)的嬰兒的腸微生物群落分布。并且因為腸微生物群落是造成影響腸中短鏈脂肪酸產(chǎn)生的的原因，人乳喂養(yǎng)和配方喂養(yǎng)嬰兒的腸微生物群落分布之間的差異可以是通過測量其各自結(jié)腸中短鏈脂肪酸的濃度評價。人乳喂養(yǎng)的嬰兒典型地產(chǎn)生更多量的乙酸酯和較低用量的丙酸酯和丁酸酯，同配方喂養(yǎng)的嬰兒比較。確認的大腸模型系統(tǒng)是用于進行評價(TIM-2System,TNOQualityofLife，Zeist,Netherlands.)-在此特定系統(tǒng)中，人乳喂養(yǎng)的嬰兒的結(jié)腸微生物群落被引入到試驗嬰兒配方，當其存在時變化記錄在小鏈脂肪酸分布中。要評價的各個嬰兒配方是容易預(yù)消化的，以便其加入到TIM-2系統(tǒng)中是穿過嬰兒的胃和小腸后進入大腸的嬰兒配方的化學特征的代表。TIM-2系統(tǒng)含有由專門人乳喂養(yǎng)的嬰兒(通常來自2-4個月大的嬰兒)的糞便樣品培養(yǎng)的代表性的微生物群落。母乳喂養(yǎng)的微生物群落是被喂食的預(yù)消化的嬰兒配方，在72小時的發(fā)酵期間之內(nèi)，確定的短鏈脂肪酸(乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯)的相對比例的變化反映發(fā)酵的終產(chǎn)物(小鏈脂肪酸)變化。然后比較各個試驗配方在72小時的SCFA分布與來自人乳的已知SCFA分布(圖5),和常規(guī)嬰兒配方的已知SCFA分布(圖6)。這個實驗評價和比較了以下嬰兒配方(配方l-4)的SCFA分布<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>各個配方l-4在72小時之后的SCFA分布的總結(jié)是如圖1-4分別所示。就對照目的而言，在2-4個月大的人乳喂養(yǎng)的嬰兒的結(jié)腸中的典型SCFA分布是在圖5中顯示(Gibson,G.R.和M.B.Roberfroid,1995，Dietarymodulationofthehumancolonicmicrobiota:introducingtheconceptofprebiotics，JournalofNutrition,125;1401-1412),而當將預(yù)消化以乳為基礎(chǔ)的嬰兒配方(常規(guī)嬰兒配方)引入作為營養(yǎng)物的唯一來源時，72小時之后的典型SCFA分布是在圖6中所示(Knol,丄，Scholtens，P.，Kafka，C.，Steenbakkers,J.,Gross,S.,Hem,K.,Klarczyk，M.，SchopferH.,Bockler,H.-M，andWells,丄，2004，Colonmicrofloraininfantsfedformulawithgalacto-andfructo-oligosaccharides:morelikebreast-fedinfats，JournalPediatricGastroenterology.40(1》36-42》根據(jù)以上總結(jié)的結(jié)果，可以看出，本發(fā)明的嬰兒配方(配方4)產(chǎn)生了代謝活性分布，.如通過正丁酸酯、丙酸酯和乙酸酯的相對SCFA濃度所反映的那樣，類似于母乳喂養(yǎng)嬰兒的代謝活'性分布(圖5)，而且顯著不同于與常規(guī)嬰兒配方有關(guān)的分布(圖6.)。這種類似母乳喂養(yǎng)的嬰兒的代謝活性分布將有助于產(chǎn)生可抑制潛在病原體如C.difficile生長的腸環(huán)境，因此預(yù)防傳染性腹瀉疾病的可能性(MarieenH.M.C.vanNuenen，P.DiederickMeyer,和KoenVenema，2003，TheeffectsofvariousinulinsandClostridiumdifficileonthemetabolicactivityofthehumancolonicmicrobiotainvitro,MicrobialEcologyinHealthDisease,15:137-144)。應(yīng)當注意到，各個配方1-4包含F(xiàn)OS，其是一種公知的對于其益生菌影響腸中微生物群落分布的成分。配方2和3含有2g/LFOS,并且可預(yù)料產(chǎn)生類似人乳的SCFA分布，而僅含0.5g/LFOS的相同制劑(配方l)產(chǎn)生類似常規(guī)嬰兒配方的SCFA分布。有趣地是，配方4產(chǎn)生類似人乳的SCFA分布，雖然其僅含0.8g/LFOS。據(jù)認為，配方4的所選濃度和組合的乳鐵蛋白、唾液酸、磷脂和神經(jīng)節(jié)苷脂是造成類似人乳的SCFA分布的原因。實驗II這個研究的目的是比較喂養(yǎng)對照配方或具有富集濃度的神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸的本發(fā)明兩種不同配方實施方案之一的新生豬的行為益處。背景新生的小豬構(gòu)成適合的在設(shè)計和執(zhí)行人類臨床試驗之前評價營養(yǎng)介入的模型。其適和性存在于小豬和人類新生兒的胃腸生理學的相似性上。該模型是預(yù)測嬰兒配方的耐受性的有用工具(MUler,E.R.,Ullrey，Thepigasmodelforhumannutrition,AnnuRevNutr1987;7;361-82)。i殳計本研究以提供本發(fā)明的兩種配方實施方案的效果的生物學評估。意義在于腹瀉風險降低，即減少的腹瀉持續(xù)時間的領(lǐng)域中。實驗設(shè)計該研究是縱向的，包括3組喂養(yǎng)實驗食物的小豬。A、B或C(參見表3)具有在喂養(yǎng)8-9、15-16和29-30天之后的三個處死時間點。一另外的組，在研究開始時被處死，用作參比。該研究被分成兩個實驗。研究中的小豬是通過經(jīng)過檢驗的農(nóng)場供給。在研究中的兩個實驗的第一個中，將33只雄性馴養(yǎng)的小豬(4-5天齡)是喂養(yǎng)在27-30。C在調(diào)控(conditioned)的空間中的不銹鋼絲籠子(每個籠子2只動物)中。動物每天用適應(yīng)的豬食喂養(yǎng)四次，根據(jù)其營養(yǎng)需要。在3天的適應(yīng)期之后，3只小豬被處死。研究中這些動物被處死的時間被認為是"零時"。剩下的小豬是通過體重和垃圾(litter)配對，分成3組(分別11=10、n-10和n-10),其用以下的食物也是每日喂養(yǎng)4次。食物A:類似于SimilacAdvance嬰兒配方，從AbbottLaboratories,Columbus,OhioUSA獲得，具有常規(guī)的乳清蛋白濃縮物。.食物B和C:本發(fā)明的嬰兒配方實施方案，其含有富含乳清蛋白的濃縮物，在7.1g/L配方的水平，以一次喂養(yǎng)為基準計。在微營養(yǎng)素(礦物質(zhì)和維生素)方面，食物A、B和C是適應(yīng)于新生小豬的專門需要。下表顯示了食物A、B、C以及標準豬食的組成。表3:實驗食物<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表4<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>1.Milacteal-75、乳清蛋白濃縮物、DairySpecialties,Inc.,MILEIGmbH,Germany;包含2.LacprodanMFGM10,富含乳清蛋白的濃縮物，AriaFoodIngredients,Denmark全部食物，一旦制備，立即使用或在4。C的惰性氣氛下的罐頭中儲藏并在24小時內(nèi)使用。食物是粉末形式并用水重建至18.8%重量用于適合的豬食，并重建至12.85。/。重量用于食物A、B和C。重建的液體食物傾注入籠子的喂食器。除去剩下的液體除去并測量，在隨后喂食之前清潔喂食器。對于各組，3或4只小豬在開始用對照(食物A)或?qū)嶒炁浞?食物B和C)喂食之后的8-9、15-16和29-30天時被處死。在本研究的第二個實驗中，44只雄性馴養(yǎng)的小豬(4-5天齡)各自喂養(yǎng)在第一個實驗所述的相同類型的籠子和相同空間中。喂食的實驗設(shè)計(protocol)是相同的，在適應(yīng)期之后4只小豬^皮處死，以完成參比組。剩下的小豬通過體重和litter配對，分成3組(分別11=13、n=13和n=14),其用食物A、B和C喂養(yǎng)。各組包括一只或兩只小豬用于代替退出者。對于各只小豬，進食和增重分別是每日監(jiān)控4次，每周監(jiān)控2次。記錄和評估發(fā)病率和腹瀉持續(xù)時間。腹瀉定義為糞便稠度得分為稀薄(5分)持續(xù)2天或更長時間，具有并發(fā)的弱的增加生長。一旦證實持久腹瀉，按照對于新生小豬的標準實驗設(shè)計之后，受病侵襲的小豬用抗生素治療。結(jié)果退出者實驗l:A組的一只小豬在出生時非常小，不能趕上剩下的小豬。C組的一只小豬在登記后10天死亡。C組的另一只小豬在實驗結(jié)束時證實為雌性。結(jié)果，在29-30天A組的n為3而不是4，相同年齡C組的n為2而不是4。實驗2:—只小豬在適應(yīng)期期間死亡。B組的另一只小豬在登記之后6天死亡。A組的兩只豬和B組的一只豬從研究中排除，因為其在出生時非常小，沒有如同剩下小豬那樣生長。結(jié)果，各個時間點有7只小豬完成研究目標，除了A組在29-30天(n=6)，在全部小組中，該組滿足。體重和飲食攝入對于3個不同飲食組，體重和飲食攝入的進展是非常類似的。對于實驗的持續(xù)時間而言，各組的體重評價不存在差異。僅對于16-28天之間的時間間隔而言，C組中的飲食攝入是顯著高于A組和B組。對于剩下的時間而言，組間不存在差異。當攝入表示為累積的飲食攝入時，組間沒有差異。同樣地，按照克體重/IOO千卡的攝入來計算的食物有效性的進展，對于三個組是類似的。當考慮不同的時間間隔或?qū)τ谌垦芯恐芷诙裕M間不存在差異。腹瀉對于三個飲食組(注意沒有顯著差異)，在研究期間遭受腹瀉的豬的數(shù)量是類似的。然而，當分析腹瀉偶發(fā)事件的持續(xù)時間時(圖7)，在組間有可能檢測到顯著的差異。C組的腹瀉的持續(xù)時間是顯著低于A組，對此參數(shù)而言B組表現(xiàn)出低于A組的趨勢(p-0.1512)。事實上，如果Bonferroni's校正不是用于此最后比較，發(fā)現(xiàn)更強的趨向，p值為0.0504。.絲C組的腹瀉的持續(xù)時間顯著低于A組，對此參數(shù)而言B組表現(xiàn)出低于A組的趨勢(p-0.1512)。事實上，如果Bonferroni's校正不是用于此最后比較，發(fā)現(xiàn)更強的趨向，p值為0.0504。同傳統(tǒng)乳清蛋白質(zhì)分離物(SIMILACADVANCE嬰兒配方:AbbotLabs,Coumbus,Ohio-修改用于樣品A)相比，減少的腹瀉持續(xù)時間似乎是使用含有富集水平的乳鐵蛋白、磷脂、唾液酸和神經(jīng)節(jié)苷脂的乳清蛋白濃縮物(樣品B和C的PSNU2900WPC)的結(jié)果。實驗HI進行第二個動物研究，試驗設(shè)計類似于在實驗II中使用的，例外是這個研究比較以下喂食的行為益處食物A:本發(fā)明的嬰兒配方實施方案，具有富含乳清蛋白濃縮物，以一次喂食為基準計，水平為6.4g/L的配方。食物B:SimilacAdvance⑧嬰兒配方，從AbbottLaboratories,Columbus,OhioUSA獲得，具有常規(guī)的乳清蛋白濃縮物。食物C:EnfalacDHA+ARA丁M嬰兒配方，從Bristol-MyersSqutbb(Thailand)獲得，具有常規(guī)的乳清蛋白濃縮物。實驗設(shè)計研究是縱向的，包括3組喂養(yǎng)試驗食物的小豬。A、B或C(參見表4),在喂食的7-8天和14-15天之后的兩個時間點處死。喂養(yǎng)豬乳的另外組的小豬在研究中作為參比。喂養(yǎng)豬乳組的動物是年齡相匹配的以符合喂食實驗食物的動物的處死時間點。來自豬乳組的動物是在研究開始、14-16天之后和23-24天之后處死。六十只馴養(yǎng)小豬(3-4天齡)是由有保證的農(nóng)場提供。來自喂食豬乳參比組的八只小豬被處死。48只小豬是通過體重、litter和性別配對，并分成3組(分別是n=16、n=16和n=16)。4只剩下的小豬是隨機地分配到3個組(1只去A組、1只去B組，而2只去C組)。小豬是喂養(yǎng)在27。C調(diào)制的空間的不銹鋼絲籠子中。3天的期間，根據(jù)其營養(yǎng)需要，動物是用適合的豬食每天喂養(yǎng)4次。3天的適應(yīng)期之后，小豬是用三種試驗食物之一每天喂養(yǎng)四次。研究中，動物第一次喂食實驗食物的時間認定為"零時"。下表顯示了標準豬食和食物A、B和C的組成<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>1、LacprodanMFGM1Q，富含乳清蛋白濃縮物，ArtaFoodIngredients,Denmark全部食物，一旦配制，立即使用或在4。C的惰性氣氛的罐頭中儲藏并在24小時內(nèi)使用。食物是粉末形式并用水重建至12.85%重量用于食物A、B和C。重建的液體食物傾注入籠子的喂食器上。除去剩下的液體并稱量，在隨后喂食之前清潔喂食器。對于各組，8只小豬在開始用對照(食物B和C)或?qū)嶒炁浞?食物A)喂食之后的7-8和14-15天時被處死。結(jié)果退出者來自各組的4只小豬死亡。A組3只小豬和B組的1只小豬在適應(yīng)期間死亡。來自B組的1只小豬從研究中除去，因為其是非常小，不能如同剩下的小豬一樣生長。結(jié)果，在7-8天，A組的n是7，B組的n是8，C組的n是8。在14-15天，A組的n是6，B組的n是4，C組的n是6。體重和飲食攝入對于3個不同飲食組，體重和飲食攝入的進展是非常類似的。對于實驗的持續(xù)時間而言，各組的體重進展不存在差異。當攝入表示為累積的飲食攝入時，組間沒有差異。同樣地，按照克體重/100千卡的攝入來計算的食物有效性的進展，在c組是較高的但是不顯著差異于A組和B組，僅對于7-14天之間的時間間隔而言。在0-6天之間的時間間隔觀察到高的變異性，但是組間沒有差異。腹渴對于三個飲食組(注意沒有顯著差異)，在研究期間遭受腹瀉的豬的數(shù)量是類似的。組間，腹瀉的持續(xù)時間也沒有顯著差異(圖8)。結(jié)論實驗I顯示了，含有常規(guī)乳清蛋白分離物的嬰兒配方(食物A)不減少腹瀉持續(xù)時間。實驗l還顯示了，含有富集水平的乳鐵蛋白、磷脂、唾液酸和神經(jīng)節(jié)苷脂的嬰兒配方(食物B和C),減少了腹瀉持續(xù)時間，其中各成分是由富含乳清蛋白濃縮物(PSNU2900WPC在7.1g/L的配方，以一次喂食為基準計)整體或部分提供。實驗2顯示了，含有富集水平的乳鐵蛋白、磷脂、唾液酸和神經(jīng)節(jié)苷脂，但是低水平的富含乳清蛋白濃縮物(PSNU2900WPC在6.4g/L的配方，以一次喂食為基準計)的嬰兒配方(食物A)不減少腹瀉持續(xù)時間。因此，兩個實驗的結(jié)果揭示，包含富集水平的乳鐵蛋白、磷脂、唾液酸和神經(jīng)節(jié)苷脂的嬰兒配方減少腹瀉持續(xù)時間，條件是配方包括最小閾值水平的如本文所定義的富含乳清蛋白濃縮物。具體實施方式實施例以下實施例代表本發(fā)明范圍之內(nèi)的特定實施方案，其各自給出僅僅是用于說明的目的，并不能被理解為是限制本發(fā)明，因為其多種變化可能沒有背離本發(fā)明的精神和范圍。所有列舉的量是基于組合物的總重量計的重量百分比，除非另外指出。粉末嬰兒配方以下是本發(fā)明的粉末配方實施方案，包括在嬰兒中使用配方的方法。各個配方的成分是在下表中列出表5:實施例-4成分實施例l實施例2實施例3實施例4每IOOOkg配方的量乳糖428.76kg428.76kg428.76kg525.02kg低熱的非脂肪干乳200.62kg197.62kg197.62kg隨kgl高油的向曰葵油106.53kg106.53kg106.53kg102.97kg'椰子油90.74kg91纖g92.87kg87.57kg大豆油86.37kg86.37kg86.37kg83,49kgLACPRODANMFGM-1051加kg53.96kg53.96kg154.18kg檸檬酸鉀7.20kg7.20kg7.20kg7.20kg:寡聚果糖(果糖-寡糖)7.04kg7.04kg7.04kg7.04kg碳酸朽4.018kg4微g4.02kg9.563kg花生四烯酸(AA)2.87kg2.87kg1-44kg2.87kg氯化鉀1.614kg1.61kg1.6Ug1.717kg二十二碳六烯酸(叫A)1.40kg1.05kg0.70kg1.40kg氯化鈉1.303kg1.30kg1.30kg3.280kg氯化膽堿1.04kg1.04kg1.04kg1.04kg抗壞血酸766.88g766.38g766.88g766.88g維生素預(yù)混物25913746.460g746.46g746.46g746.460g氯化鎂S41.63gS41.63g641.63g硫酸亞鐵5"M鄰g511.98g5".98g508.79g?；撬?73.84g373.84g373.84g373.84g抗壞血酸棕櫚酸酯349.22g349.22g349.22g349.22g維生素A、D、RRR-E、K預(yù)混物345.00g345.00g345.009345.009M-肌醇254.64g254.64g254.64g254.64g胞苷5'-單磷酸243掘g243.19g243.199243.188g尿普5'-單磷酸二鈉.25%192.286g192.29g192.29g192_286g烏苷5'-單磷酸二鈉175.452g175.45g175.45g175.452g生育酚-2食物級抗氧刑166.37g湖.37g168.37g166.37g琉酸鋅165.70g165.70g165.70g206.02g腺苷5'-單磷酸92.043g92.04g92.04g92.043g包哀的疏酸銅26.136g26.14g26.，4g27.691gP胡蘿卜素30K".64g".64g".64g".64g確酸三鈣3.000g3夠3.oog3.000g硫酸猛1.00g1夠i.oogi.oog硒酸鈉232.03mg232.03mg232,03mg232,03mg各個舉例說明可以相似方法制得，通過制備至少兩種單獨的漿液，其之后混合在一起、加熱處理、標準化、蒸發(fā)、干燥和包裝。開始，在一油混和罐中，在氮氣條件下，通過混合高油的向日葵油、大豆油和椰子油制得油性漿液，接著加入抗壞血酸棕櫚酸鹽、|3-胡蘿卜素、維生素ADEK并混入生育酚。該罐然后攪動20分鐘，進行QA分析。QA清除之后機立刻加工ARA油之前，DHA油加入油混和罐中。得到的油漿液在溫和攪動下維持在室溫(<30°0,直至其隨后與另外制得的漿液摻合。脫脂乳-油漿液是通過這樣制得，在連續(xù)的攪動過程中在35-45°CT34把油混合漿液摻入約40%的液體脫脂乳中，接著加入富含乳清蛋白濃縮物。這種油-蛋白質(zhì)漿液加熱至65-70°C，兩個階段在154-190/25-45巴下均化，冷卻至3-6。C并儲藏在加工料倉中。脫脂乳-碳水化合物漿液是通過在65-75。C的約60%的液體脫脂乳中溶解乳糖和脫脂乳粉制得。這種漿液在泵入平板交換器之前，是在增溶罐中在攪動下保持大約2分鐘，其在平板交換器中冷卻至3-6。C并傳送加工料倉，在此其與脫脂乳-油漿液混合。礦物質(zhì)漿液1是通過把氯化鎂、氯化鈉、氯化鉀和檸檬酸鉀溶解于室溫的水中并保持攪動最低5分鐘制得。把礦物質(zhì)漿液1加進加工料倉。礦物質(zhì)漿液2是通過把磷酸三鈣和碳酸鈣溶解于40-60。C的水中并保持攪動最低5分鐘制得。礦物質(zhì)漿液2加進加工料倉。寡聚果糖漿液是通過把寡聚果糖溶解于40-60。C的水中并保持攪動最低5分鐘制得。寡聚果糖漿液加進加工料倉。在取樣進行分析測試之前，一批次在加工料倉中攪動最低45分鐘?；谫|(zhì)量控制測試的分析結(jié)果，進行適宜的標準化過程。維生素C漿液是通過把檸檬酸鉀和抗壞血酸溶解于室溫的水中并保持攪動最低5分鐘制得。維生素C漿液加進加工料倉。水溶性維生素-肌醇漿液是通過把檸檬酸鉀、水溶性維生素預(yù)混料和肌醇溶解于40-60。C的水中并保持攪動最低5分鐘制得。水溶性維生素-肌醇漿液加進加工料倉。硫酸亞鐵漿液是通過把檸檬酸鉀和疏酸亞鐵溶解于室溫的水中并保持攪動最低5分鐘制得。核苷酸-膽堿漿液是通過把核苷酸-膽堿預(yù)混合料溶解于室溫的水中并保持攪動最低5分鐘制得。核苷酸-膽堿漿液加進加工料倉。取樣進行分析測試之前，最終批次是在加工料倉中攪動最低60分鐘?；谫|(zhì)量控制測試的分析結(jié)果，可以進行適合的維生素C和pH校正。最終批次在溫和攪動下保持在3-6°C。在等待不長于7天的時間之后，所得的摻合物預(yù)加熱至90-96°C,并在110-130。C下加熱3秒。加熱的摻合物通過閃蒸冷卻器以降低溫度至93-97。C,然后通過蒸發(fā)器以獲得期望的固體u產(chǎn)品然后加熱至75-78。C并泵入噴霧干燥塔。收集得到的粉末產(chǎn)品并儲藏在散粉料倉中，用于質(zhì)量檢測。成品然后放置入適合的容器中。在過程中和成品階段，取樣用于微生物學檢測和分析檢測?？晒┻x擇的方法各個例證可以類似的方式制得，通過制備至少兩種單獨的漿液，所述漿液隨后混合在一起、加熱處理、標準化、干燥、干混和包裝。開始，脫脂乳-礦物質(zhì)漿液是通過在60-65。C的軟化水中溶解約80%的脫脂乳粉，接著加入檸檬酸鉀和氫氧化鉀制得。得到摻合物的pH用氫氧化鉀或檸檬酸調(diào)節(jié)至7.7-8.7。剩余的脫脂乳粉和氯化鎂加入先前的摻合物中。得到摻合物的pH用氫氧化鉀或檸檬酸調(diào)節(jié)至6.7-7.2。在單獨的罐中，新漿液通過把氯化膽堿和肌醇溶解于室溫的軟化水中制得。得到的漿液是與脫脂乳-礦物質(zhì)漿液組合，并在60-65。C下在溫和攪動下保持不長于1小時，直至其隨后與另外的成分摻合。在單獨的罐中，新漿液是通過把?；撬崛芙庥?(TC的軟化水中制得。得到的漿液是與脫脂乳-礦物質(zhì)漿液組合，并在60-65。C下在溫和攪動下保持不長于l小時，直至其隨后與另外的成分摻合。富含乳清蛋白濃縮物加入脫脂乳-礦物質(zhì)漿液中，接著加入乳糖和寡聚果糖。取樣進行分析測試之前，漿液在加工料倉中攪動最低30分鐘。所得到摻合物的pH用氫氧化鉀或檸檬酸調(diào)節(jié)至6.5-7.1。在油加工罐中，在氮氣條件下，油漿液是通過組合高油的向日葵油、大豆油和椰子油，接著加入維生素ADEK卩胡蘿卜素、混合的生育酚、抗壞血酸棕櫚酸鹽、ARA油和DHA油制得。得到的油漿液在室溫下在溫和攪拌下保持不長于6小時，直至其隨后與蛋白質(zhì)-碳水化合物-礦物質(zhì)漿液摻合。在等待不少于30分鐘和不超過6小時的時間之后，蛋白質(zhì)-碳水化合物-礦物質(zhì)漿液是在70-80。C下排氣，并進一步加熱至84-86。C。在加工的這一點上，油漿液是在50-8(TC下在線注射。最后的摻合物冷卻至68-72°C，并通過雙階段均化器乳化，第一階段是145-155bars,第二階段是30-40bars。加熱的摻合物通過平板冷卻器以減少溫度至3-5°C，并儲藏在加工料倉。制得。礦物、質(zhì)溶液是通過在攪動下把以下成、分加入到足量的軟;匕水中制得檸檬酸、碌L酸錳、硒酸鈉和硫酸鋅?？箟难崛芤菏峭ㄟ^纟巴抗壞血酸加入到足量的軟化水中制得以溶解成分。加工的摻合物在3-5。C下在溫和攪動下保持不長于48小時。取樣用于分析測試。冷卻的摻合物然后在69-73。C下加熱并在60-70/30-40bars下均化并送入噴霧干燥塔。收集基礎(chǔ)粉末產(chǎn)品并儲藏在散粉容器中。取樣用于微生物學測試和分析測試。在相應(yīng)的分析和微生物學的測試完成之后，釋放出基礎(chǔ)粉末產(chǎn)品用于剩下成分的干混。確定獲得最終粉末產(chǎn)品所需的剩下成分的量，并進入自動稱量系統(tǒng)。系統(tǒng)稱重干混的預(yù)混物的每種組分(乳糖、碳酸鈣、氯化鉀、氯化鈉、水溶性預(yù)混物、核苷酸胞苷5-單磷酸、核苷酸尿苷5-單磷酸二鈉、核苷酸鳥苷5-單磷酸二鈉、核苷酸腺苷5-單磷酸、硫酸銅和三堿式磷酸4丐)?；A(chǔ)粉末產(chǎn)品和干混的預(yù)混物是傳送至攪拌器。摻合物在攪動下保持不小于20分鐘。在完成混合之后，成品傳送至包裝機并放置入適合的容器中。取樣用于微生物和分析的測試。列舉的配方(實施例l-4)是本發(fā)明粉末配方實施方案的非限制實施例。使用之前，各個配方是用水重建至約19-約24kcal/floz的熱密度范圍，然后喂食給嬰兒作為生命最初9個月(包括生命最初4個月)的營養(yǎng)的唯一來源。使用配方體驗的嬰兒降低了腹瀉的風險，當受腹瀉侵襲時，較少嚴重疾病是以減少腹竭持續(xù)時間的形式。這些嬰兒也發(fā)展了類似于母乳喂養(yǎng)的嬰兒的腸微生物群落。液體嬰兒配方實施例1-4是通過常規(guī)方法改變以形成本發(fā)明的易于喂食的液體配方實施方案(實施例5-8)。實施例5-8的成分分別對應(yīng)于實施例1-4的成分。舉例說明的配方(實施例5-8)是本發(fā)明液體配方實施方案的非限制性實施例。各個配方調(diào)節(jié)至約19-約24kcal/floz范圍的熱密度。配方喂食給嬰兒作為生命最初9個月(包括生命最初4個月)期間的營養(yǎng)的唯一來源。使用配方體驗的嬰兒降低了腹瀉的風險，當受腹瀉侵襲時，以減少腹瀉持續(xù)時間的形式。這些嬰兒也發(fā)展了類似于母乳喂養(yǎng)的嬰兒的腸代謝活性分布。權(quán)利要求1、一種嬰兒配方，以一次喂食為基準計，其包含(A)至少約5mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂，(B)至少約150mg/L的磷脂，(C)乳鐵蛋白，和(D)至少約70mg/L的唾液酸，其中至少約2.5％重量的唾液酸為脂質(zhì)結(jié)合的唾液酸；其中約50％-100％重量的各個神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸是由富含乳清蛋白的濃縮物提供的，以一次喂食為基準計，所述濃縮物代表至少約6.5g/L的配方。2、根據(jù)權(quán)利要求的嬰兒配方，其中脂質(zhì)結(jié)合的唾液酸代表總唾液酸的約2.7%-約5%重量。3、根據(jù)權(quán)利要求1的嬰兒配方，以一次喂食為基準計，其包含(A)約7mg/L-約50mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂、(B)約200mg/L-約600mg/L的磷脂，和(C)約90mg/L-約250mg/L的唾液酸。4、根據(jù)權(quán)利要求1的嬰兒配方，以一次喂食為基準計，其包含約50mg/L-約2000mg/L的乳鐵蛋白，其中至少約6%重量的乳鐵蛋白為天然乳鐵蛋白。5、根據(jù)權(quán)利要求1的嬰兒配方，其中總磷脂包含至少20%重量的鞘磷脂。6、根據(jù)權(quán)利要求5的嬰兒配方，其中磷脂包含鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇和磷脂酰絲氨酸。7、根據(jù)權(quán)利要求1的嬰兒配方，進一步包含約0.05%-約5%的果糖多糖。8、根據(jù)權(quán)利要求1的嬰兒配方，其中配方含有少于約0.5%的游離糖巨肽，以一次喂食為基準計。9、根據(jù)權(quán)利要求1的嬰兒配方，其中嬰兒配方是基本上不含磷脂、卯磷脂及其組合。10、根據(jù)權(quán)利要求1的嬰兒配方，其中嬰兒配方包含少于約0.2%重量的乳脂，以一次喂食為基準計。11、根據(jù)權(quán)利要求1的嬰兒配方，其中嬰兒配方是粉末。12、根據(jù)權(quán)利要求1的嬰兒配方，其中嬰兒配方是易于喂食的液體。13、根據(jù)權(quán)利要求1的嬰兒配方，以一次喂食為基準計，其包含約6.5g/L-約10.9g/L的富含乳清蛋白的濃縮物。14、根據(jù)權(quán)利要求1的嬰兒配方，其中約60%-約90%重量的各個神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸是由富含乳清蛋白的濃縮物提供的，以一次喂食為基準計，所述濃縮物代表至少約6.5g/L的配方。15、一種減少嬰兒中腹瀉的危險的方法，該方法包含(I)制備一種嬰兒配方，以一次喂食為基準計，其包含(A)至少約5mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂，(B)至少約150mg/L的磷脂，(C)乳鐵蛋白，(D)至少約70mg/L的總唾液酸，其中至少約2.5%重量的唾液酸為脂質(zhì)結(jié)合的唾液酸；其中約50%-100%重量的各個神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸是由富含乳清蛋白的濃縮物提供的，以一次喂食為基準計，所述濃縮物代表至少約6.5g/L的配方，(II)給予或指導護理者給予配方至嬰兒。16、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中配方是作為營養(yǎng)的唯一來源給予的。17、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中嬰兒配方，以一次喂食為基準計，包含約50mg/L-約2000mg/L的乳鐵蛋白，其中至少約6%重量的乳鐵蛋白為天然乳鐵蛋白。18、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中脂質(zhì)結(jié)合的唾液酸代表示總唾液酸的約2.7%-約5%重量。19、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中嬰兒配方，以一次喂食為基準計，包含(A)約7mg/L-約50mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂、(B)約200mg/L-約600mg/L的磷脂，和(C)約90mg/L-約250mg/L的唾液酸。20、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中總磷脂包含至少20%重量的鞘磷脂。21、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中嬰兒配方包含少于約0.2%重量的乳脂，以一次喂食為基準計。22、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中配方包含少于0.5%重量的游離糖巨肽，以一次喂食為基準計。23、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中嬰兒配方，以一次喂食為基準計，包含約6.5g/L-約10.9g/L的富含乳清蛋白的濃縮物。24、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中約60%-約90%重量的各個神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸是由富含乳清蛋白的濃縮物提供的，以一次喂食為基準計，所述濃縮物代表至少約6.5g/L的配方。25、一種生產(chǎn)類似于母乳喂養(yǎng)的嬰兒的腸微生物群落分布的方法，所述方法包含(I)制備一種嬰兒配方，以一次喂食為基準計，其包含(A)至少約5mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂，(B)至少約150mg/L的磷脂,(C)乳鐵蛋白，(D)至少約70mg/L的總唾液酸，其中至少約2.5%重量的唾液酸為脂質(zhì)結(jié)合的唾液酸；其中約50%-100%重量的各個神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸是由富含乳清蛋白的濃縮物提供的，以一次喂食為基準計，所述濃縮物代表至少約6.5g/L的嬰兒配方，(II)給予或指導護理者給予配方至嬰兒。26、根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中配方，以一次喂食為基準計，包含約50mg/L-約2000mg/L的乳鐵蛋白，其中至少約6%重量的乳鐵蛋白為天然乳鐵蛋白。27、根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中嬰兒配方，以一次喂食為基準計，包含約6.5g/L-約10.9g/L的富含乳清蛋白的濃縮物。28、根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中約60%-約90%重量的各個神經(jīng)節(jié)芬脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸是由富含乳清蛋白的濃縮物提供的，以一次喂食為基準計，所述濃縮物代表至少約6.5g/L的配方。29、根據(jù)權(quán)利要求25的方法，'其中約50%-100%重量的神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、和唾液酸的組合來自富含乳清蛋白的濃縮物。30、根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中脂質(zhì)結(jié)合的唾液酸代表示總唾液酸的約2.7%-約5%重量。31、根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中所述配方，以一次喂食為基準計，包含(A)約7mg/L-約50mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂、(B)約200mg/L-約600mg/L的磷脂，和(C)約90mg/L-約250mg/L的唾液酸。32、根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中總磷脂包含至少20%重量的鞘磷脂。33、根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中所迷配方包含少于約0.2%重量的乳脂，以一次喂食為基準計。34、根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中所述配方包含少于0.5%重量的游離糖巨肽，以一次喂食為基準計。35、根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中所述配方進一步包含約0.05%-約5%的果糖多糖。全文摘要本發(fā)明公開了一種嬰兒配方，以一次喂食為基準計，其包含(A)至少約5mg/L的神經(jīng)節(jié)苷脂(gangiioskfes)、(B)至少約150mg/L的磷脂、(C)乳鐵蛋白，及(D)至少約70mg/L的唾液酸，其中至少約2.5％重量的唾液酸為脂質(zhì)結(jié)合的唾液酸。約50％-100％重量的各個神經(jīng)節(jié)苷脂、磷脂、乳鐵蛋白和唾液酸是由富含乳清蛋白的濃縮物提供的，以一次喂食為基準計，所述濃縮物代表至少約6.5g/L的配方。本發(fā)明還公開了一種使用所述配方以減少嬰兒的腹瀉風險的方法和以生產(chǎn)類似于母乳喂養(yǎng)的嬰兒的腸道微生物群落分布的方法。文檔編號A23L1/29GK101484024SQ200780024978公開日2009年7月15日申請日期2007年6月29日優(yōu)先權(quán)日2006年6月30日發(fā)明者A·巴蘭科,E·瓦爾維德,E·瓦斯克斯,M·多赫納列,M·拉米雷斯,P·普里托,R·呂達-卡布雷拉申請人:艾博特公司