專利名稱：用于皮膚化妝應(yīng)用和治療應(yīng)用的水溶性的酚類衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及制備酚類化合物O-α-葡萄糖苷的方法，該方法包括將蔗糖和得自明串珠菌、優(yōu)選得自腸膜明串珠菌NRRL B-512F的葡聚糖蔗糖酶，在具有適于酶活性的pH下的經(jīng)過緩沖的水(本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的)中或在具有適于酶活性-共溶劑混合物的pH下的經(jīng)過緩沖的水中，與具有下式所示結(jié)構(gòu)的酚類化合物溫育
其中 R2是H或OH；和 R1選自
其中R3和R4獨(dú)立地是H或OH，前提條件是R3和R4中至少一個(gè)表示OH；和，
其中R7選自H，-OH或-OCOR且R8是H或OH，前提條件是R7和R8中至少一個(gè)表示OH；
其中R5是OH或OCH3；R6是H或OH，R9是H或OH，R10是H，OCH3或C6H11O5，和R11是H，OH或C6H11O5，前提條件是當(dāng)R5和R6同時(shí)是OH時(shí)R10和R11不能同時(shí)是H，和當(dāng)R10是C6H11O5時(shí)R11是H； --(CH2)n-COOR或-(CH2)n-CONHR，n是0-2的整數(shù)； --(CR12＝CH)-COOR或-(CR12＝CH)-CONHR，R12是H或C1-C6直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，優(yōu)選甲基，乙基，丙基，環(huán)己基或苯基，更優(yōu)選甲基或苯基； --(CH2)n-OR或-(CH2)n-NHR，n是0-2的整數(shù)； --(CH2)n-COR或-(CH＝CH)n-COR，n是0-2的整數(shù)； --H；

-C1-C10烴基，其與式(I)中所示的環(huán)以及R1的鄰位碳一起形成稠合芳環(huán)(雙環(huán)或三環(huán))； 其中R是H或直鏈、支鏈或環(huán)狀的，芳香或非芳香的，飽和或不飽和的C1-C10烴基，任選地被至少一個(gè)雜原子中斷，其中所述烴基包括烷基，烯基，或炔基，優(yōu)選烷基或烯基，其可被一個(gè)或幾個(gè)選自以下的取代基取代(C5-C9)芳基，(C4-C9)雜環(huán)，(C1-C3)烷氧基，(C2-C3)?；?，(C1-C3)醇，羧基(-COOH)，(C2-C3)酯，(C1-C3)胺，氨基(-NH2)，酰胺(-CONH2)，(C1-C3)亞胺，腈，羥基(-OH)，醛基(-CHO)，鹵素，(C1-C3)鹵代烷基，硫醇(-SH)，(C1-C3)硫烷基，(C1-C3)砜，(C1-C3)亞砜及其組合。
在第一實(shí)施方案中，R2是H。在該實(shí)施方案中，酚類化合物可以是例如表兒茶素沒食子酸酯，圣草酚，七葉亭，表兒茶素，漆黃素，黃顏木素，高原兒茶酸，原兒茶酸，原兒茶酸乙酯，羥基酪醇，桑橙素，去甲二氫愈創(chuàng)木酸，橄欖苦苷，焦兒茶酚，鼠李亭，迷迭香酸，花旗松素，3-羥基大豆苷元，3，4-二羥基二苯甲酮，咖啡酸，二氫咖啡酸，咖啡酸苯乙酯，兒茶酚，5，3’，4’-三羥基-6，7-二甲氧基黃酮，綠原酸，棉皮皮素，葒草素，異葒草素，3，4-二羥基苯甲醛，紫鉚花素，3，4-二羥基苯乙酮，馬里苷，金雞菊甙，圣草酚查耳酮，4-甲基七葉亭，去甲黃檀素，去甲豬毛菜堿，菊苣酸，松果菊苷，毛蕊花苷和脫氧茜素。
在備選實(shí)施方案中，R2是OH。在該實(shí)施方案中，酚類化合物可以是例如表焙兒茶素，雙氫刺槐亭，焙兒茶素，沒食子酸，沒食子酸丙酯，表焙兒茶素沒食子酸酯，金縷梅丹寧和刺槐亭。
在本發(fā)明方法的具體實(shí)施方案中，酚類化合物如下式所示
其中 R2是H或OH；和 R1是
其中R3和R4獨(dú)立地是H或OH，前提條件是R3和R4中至少一個(gè)表示OH。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3和R4是OH。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R3是H和R4是OH。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R3是OH和R4是H。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2是H和R3/R4選自以下組合OH/OH；H/OH；OH/H。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R2是OH和R3/R4選自以下組合OH/OH；H/OH；OH/H。優(yōu)選地，酚類化合物選自花旗松素，圣草酚，雙氫刺槐亭和黃顏木素。
在本發(fā)明方法的另一個(gè)具體實(shí)施方案中，酚類化合物如下式所示
其中 R2是H或OH；和 R1是
其中R7選自H，-OH或-OCOR且R8是H或OH，前提條件是R7和R8中至少一個(gè)表示OH。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R8是OH和R7是OH或OCOR。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R7和R8都是OH。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R7是-OCOR和R8是OH。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2是H和R3/R4選自以下組合H/OH，OH/H，OH/OH和OCOR/OH。在另外的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2是OH和R3/R4選自以下組合H/OH，OH/H，OH/OH和OCOR/OH。更優(yōu)選地，R是
優(yōu)選地，酚類化合物選自兒茶酚，表兒茶素，兒茶素沒食子酸酯，表兒茶素沒食子酸酯，焙兒茶素，表焙兒茶素，焙兒茶素沒食子酸酯和表焙兒茶素沒食子酸酯。
在本發(fā)明方法的另一個(gè)具體實(shí)施方案中，酚類化合物如下式所示
其中 R2是H或OH；和 R1是
其中R5是OH或OCH3；R6是H或OH，R9是H或OH，R10是H，OCH3或C6H11O5，和R11是H，OH或C6H11O5，前提條件是當(dāng)R5和R6同時(shí)是OH時(shí)R10和R11不能同時(shí)是H，和當(dāng)R10是C6H11O5時(shí)R11是H。特別地，R6，R5和R11可以選自以下組合 a)R6是OH和R5是OCH3和R11是H； b)R6是OH和R5是OH和R11是OH； c)R6是OH和R5是OH和R11是C6H11O5；和， d)R6是H和R5是OH和R11是H；和 R9是H或OH，和R10是H或OCH3或C6H11O5， 前提條件是當(dāng)R10是C6H11O5時(shí)，R11是H。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R9是OH，R10是H和R11是H，而R6是OH和R5是OCH3，或者R6是H和R5是OH。優(yōu)選地，R2是H?；蛘?，R2是OH。
在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R9是H和R10是OCH3或C6H11O5。
在本實(shí)施方案的具體方面，R9和R11是H，R10和R5是OCH3，和R6是OH。
在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R5和R6都是OH，R9是H或OH，R10是OH或C6H11O5，和R11是H，OH或C6H11O5，前提條件是當(dāng)R10是C6H11O5時(shí)R11是H。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R5和R6都是OH，R9是H或OH，R10是H，和R11是OH或C6H11O5。
在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R9是H和R10是H。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R9是H，R10和R5是OCH3，和R6是OH。
在具體實(shí)施方案中，R2，R5，R6，R9，R10和R11可以選自上述的組合。
優(yōu)選地，酚類化合物選自鼠李亭，漆黃素，刺槐亭，棉皮皮素，葒草素，異葒草素和5，3’，4’-三羥基-6，7-二甲氧基黃酮。
在本發(fā)明方法的另一個(gè)具體實(shí)施方案中，酚類化合物如下式所示
其中 R2是H或OH；和R1是-(CH2)n-COOR或-(CH2)n-CONHR，n是0-2的整數(shù)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2是H?；蛘?，R2是OH。優(yōu)選地，R選自H，C1-C3烷基，優(yōu)選甲基，乙基或丙基，和
在第一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，n是0和R優(yōu)選是H。在第二更優(yōu)選的實(shí)施方案中，n是1和R優(yōu)選是H。在第三更優(yōu)選的實(shí)施方案中，n是2和R優(yōu)選是H。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，n是0和R是C1-C3烷基，優(yōu)選甲基，乙基或丙基，或
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是-(CH2)n-COOR。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R是H。
優(yōu)選地，酚類化合物選自高原兒茶酸，二氫咖啡酸，原兒茶酸乙酯，沒食子酸丙酯，沒食子酸，金縷梅丹寧(2’，5-二-O-沒食子酰基-金縷梅糖)和原兒茶酸。
在本發(fā)明方法的另外的具體實(shí)施方案中，酚類化合物如下式所示
其中 R2是H或OH；和R1是-(CR12＝CH)-COOR或-(CR12＝CH)-CONHR，R12是H或C1-C6直鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，優(yōu)選甲基，乙基，丙基，環(huán)己基或苯基，更優(yōu)選甲基或苯基。優(yōu)選地，R1是-(CH＝CH)-COOR或-(CH＝CH)-CONHR。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2是H?；蛘?，R2是OH。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是-(CH＝CH)-COOR。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R選自H；

和，在R1的鄰位碳上與式(I)的苯基連接的鍵。
當(dāng)R是在R1的鄰位碳上與式(I)的苯基連接的鍵時(shí)，R12可以具體選自H；甲基和苯基。則酚類化合物可以如下式所示

R12是H或C1-C6直鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，優(yōu)選甲基，乙基，丙基，環(huán)己基或苯基，更優(yōu)選甲基或苯基。
優(yōu)選地，酚類化合物選自咖啡酸，迷迭香酸，七葉亭，4-甲基七葉亭，去甲黃檀素(6，7-二羥基苯基香豆素)，綠原酸，咖啡酸苯乙酯，菊苣酸(二咖啡?；剖?，松果菊苷(2-(3，4-二羥基苯基)乙基O-6-脫氧-α-L-吡喃甘露糖基-(1→3)-O-(β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6))-，4-(3-(3，4-二羥基苯基)-2-丙烯酸酯)，β-D-吡喃葡萄糖苷)和毛蕊花苷。
在本發(fā)明方法的另外的具體實(shí)施方案中，酚類化合物如下式所示
其中 R2是H或OH；和R1是-(CH2)n-OR，n是0-2的整數(shù)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，n是2。優(yōu)選地，酚類化合物是羥基酪醇。
在本發(fā)明方法的另外的具體實(shí)施方案中酚類化合物如下式所示
其中 R2是H或OH；和R1是-(CH2)n-COR或-(CH＝CH)n-COR，n是0-2的整數(shù)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，n是0或1和R選自 H；C1-C3烷基，優(yōu)選甲基，乙基或丙基，更優(yōu)選甲基；

苯基；


優(yōu)選地，n是0。或者，n是1。
優(yōu)選地，酚類化合物選自桑橙素，3，4-二羥基苯甲醛，3，4-二羥基二苯甲酮，紫鉚花素(2’，3，4，4’-四羥基查耳酮)，3，4-二羥基苯乙酮，馬里苷(2’，3，3’，4，4’-五羥基-4’-葡糖基查耳酮)和圣草酚查耳酮(2’，4’，6’，3，4-五羥基查耳酮)。
在本發(fā)明方法的另外的具體實(shí)施方案中，酚類化合物如下式所示
其中 R2是H或OH；和R1選自
優(yōu)選地，酚類化合物選自焦兒茶酚，去甲二氫愈創(chuàng)木酸，3-羥基大豆苷元，橄欖苦苷和金雞菊甙(3’，4’，6，7-四羥基-6-O-葡糖基噢哢)。
在該實(shí)施方案中，酚類化合物的R1是C1-C10烴基，其與式(I)中所示的環(huán)以及R1的鄰位碳一起形成稠合芳環(huán)(雙環(huán)或三環(huán))。特別地，酚類化合物可以選自
所述稠環(huán)可以任選地被至少一個(gè)雜原子中斷并且可以被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代(C1-C3)烷氧基，(C2-C3)?；?，(C1-C3)醇，羧基(-COOH)，(C2-C3)酯，(C1-C3)胺，氨基(-NH2)，酰胺(-CONH2)，(C1-C3)亞胺，腈，羥基(-OH)，醛基(-CHO)，鹵素，(C1-C3)鹵代烷基，硫醇(-SH)，(C1-C3)硫烷基，(C1-C3)砜，(C1-C3)亞砜及其組合。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，酚類化合物是
酶的性質(zhì)和來源 可用于該縮合反應(yīng)的酶是糖基轉(zhuǎn)移酶，更優(yōu)選是己糖基轉(zhuǎn)移酶(EC2.4.1)，優(yōu)選為葡聚糖蔗糖酶(EC 2.4.1.5)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于這些酚類化合物與葡萄糖進(jìn)行所需的縮合反應(yīng)的酶是得自細(xì)菌的葡聚糖蔗糖酶，更確切地說得自明串珠菌，更優(yōu)選得自腸膜明串珠菌NRRL B-512F。
酶的可供選擇的來源可以是得自腸膜明串珠菌NRRL B-742，腸膜明串珠菌NRRL B-1299，腸膜明串珠菌NRRL B-1355或腸膜明串珠菌NRRL B-23192的葡聚糖蔗糖酶。
這些酶可以如下獲得對(duì)產(chǎn)酶菌株進(jìn)行自然發(fā)酵，然后進(jìn)行細(xì)胞處理和酶回收以及純化。因?yàn)槠暇厶钦崽敲钢饕窃谂囵B(yǎng)肉湯中的溶液形式的或與細(xì)胞結(jié)合的細(xì)胞外的大型酶，因此可用于酶回收的技術(shù)包括但是不限于離心作用和切向微量過濾，并且如果葡聚糖蔗糖酶是與細(xì)胞結(jié)合的酶，則針對(duì)細(xì)胞離解的技術(shù)包括但是不限于法氏壓濾均化，玻璃珠，超聲處理或任何等價(jià)方法。針對(duì)酶濃縮的技術(shù)包括但是不限于使用10kDa到300kDa的分子量截?cái)嘀档某瑸V，可用于酶純化的技術(shù)包括但是不限于使用聚乙二醇的相分離，凝膠滲透色譜法?？晒┻x擇的方案是所述酶在公知的表達(dá)宿主如大腸桿菌(E.coli)，釀酒酵母菌(S.cerevisiae)，桿狀病毒(Baculovirus)，脂耶氏酵母(Y.lipolytica)，黑胸?cái)⊙?Bacillus sp.)，假單胞菌(Pseudomonas sp.)，多形漢遜酵母(H.polymorpha)或哺乳動(dòng)物細(xì)胞等中的重組表達(dá)(參見參考文獻(xiàn)″Production of Recombinant ProteinsNovel Microbial and EukaryoticExpression Systems″Wiley 2004-Gerd Gellissen Ed.)，然后任選地使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知方法進(jìn)行純化的步驟。
酶還可通過本領(lǐng)域公知的隨機(jī)誘變、定向誘變或直接演變方法獲得(MIYAZAKI K，ARNOLD FH，(2004)，In vitro DNA recombination.InPhage DisplayA practical approach(體外DNA重組。在噬菌體展示文庫(kù)中實(shí)用方法)，Clarkson T和Lowman H編輯.New YorkOrxfordUniversity Press Inc.，43-60)。這些技術(shù)還能夠獲得具有更高比放射性、更低的產(chǎn)物抑制、專有區(qū)(dedicated region)、化學(xué)和立體選擇性、更高的穩(wěn)定性或其任何組合的酶。
因此，本發(fā)明的方法可以使用完整細(xì)胞，或使用天然的或重組的粗制酶或純化酶進(jìn)行。酶可以“游離”形式，或以固定催化劑形式被使用。這種固定過程包括但是不限于凝膠密封(海藻酸鈣，…)，樹脂吸附，戊二醛網(wǎng)組化，在存在最終的適當(dāng)助劑的條件下噴霧干燥，從而獲得不溶形式的酶，膜反應(yīng)器或其任何組合，并且是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。固定過程的選擇根據(jù)其經(jīng)濟(jì)成本并根據(jù)牽涉所述固定化酶的方法的最終收率的不同而異。
酶制劑中酶活性的量可以使用蔗糖水解并通過比色法(諸如牽涉3，5-二硝基-水楊酸的比色法)測(cè)量釋放的還原糖(果糖)進(jìn)行評(píng)價(jià)；SUMNER JB，HOWELL SF(1935)，A method for determination ofinvertase activity).J Biol Chem 10851-4(用于測(cè)定轉(zhuǎn)化酶活性的方法)。該酶活性用單位表示，其中一個(gè)單位(U)相當(dāng)于在30℃，pH 5.2(蔗糖100g/L；乙酸鈉緩沖劑50mM；氯化鈣二水合物10mg/L)下，每分鐘釋放1μmole果糖的酶的量。
反應(yīng)條件 反應(yīng)可以在經(jīng)過緩沖的水或經(jīng)過緩沖的水/共溶劑混合物中實(shí)現(xiàn)。實(shí)際上，本發(fā)明人令人驚訝地注意到酶能夠在不存在共溶劑的條件下進(jìn)行葡糖基化。
優(yōu)選地，未與共溶劑一起使用或與共溶劑混合使用的具有處在適于酶活性的pH下的經(jīng)過緩沖的水由在水中的濃度為20到500mM的乙酸鈉或乙酸鉀的緩沖劑組成，但是可以使用任何其它的對(duì)酶活性沒有消極作用的緩沖物質(zhì)。優(yōu)選地，具有處在適于酶活性-共溶劑混合物的pH下的經(jīng)過緩沖的水由水(優(yōu)選前面所述的經(jīng)過緩沖的水)和二甲基(DMSO)以低于35％的DMSO(體積/體積)，優(yōu)選15-25％的DMSO，更優(yōu)選約15％的DMSO的比例組成。
反應(yīng)可以在水/共溶劑混合物中實(shí)現(xiàn)，所述水/共溶劑混合物能夠允許酶發(fā)揮適當(dāng)?shù)幕钚砸约霸试S酚類化合物和葡萄糖供體即蔗糖的可溶性達(dá)到更好水平。這些共溶劑可以是以下的在不同的重量/體積比下使用的可與水混溶的有機(jī)溶劑二甲基亞砜，二氧雜環(huán)己烷，二甲基甲酰胺，乙醇，正丙醇，異丙醇，乙二醇，甘油，1，2-丙二醇，環(huán)丁砜，四甲基脲，乳酸乙酯，二甘醇二乙醚，三甘醇二甲醚。除了這些簡(jiǎn)單的有機(jī)溶劑之外，還可設(shè)計(jì)使用離子性液體(咪唑鎓鹽，吡啶鎓鹽，磷鎓和銨鹽)。共溶劑還可是以下的與水不混溶的有機(jī)溶劑乙酸乙酯，甲基乙基酮，甲基-2丁醇-2，以及可與水混溶的有機(jī)溶劑以及與水不溶混的有機(jī)溶劑的組合。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，混合物由水和二甲基亞砜(DMSO)組成，DMSO的濃度為5到70％(體積/體積)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，DMSO的濃度為5到50％(體積/體積)。在最優(yōu)選方案中，DMSO的濃度為10-35％(體積/體積)。實(shí)際上，本發(fā)明人令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在DMSO比率低于40％的條件下進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)更加高度有效。產(chǎn)物的更高比率可達(dá)15％比率。因此，本發(fā)明方法的優(yōu)選比率為15-25％，優(yōu)選約15％(+/-3％)。
每個(gè)酚類化合物與蔗糖和酶在該反應(yīng)混合物中溫育，在允許酶發(fā)揮活性并合成出盡可能多的所需葡萄糖苷的pH和溫度的條件下進(jìn)行。優(yōu)選地，反應(yīng)介質(zhì)另外包含氯化鈣形式的鈣陽離子(或鈣的任何水溶性鹽的形式)以改善酶的穩(wěn)定性?？s合反應(yīng)可以在pH 4到8，優(yōu)選pH 5到7下進(jìn)行，通過在反應(yīng)介質(zhì)中引入少量乙酸鹽緩沖劑進(jìn)行。合成介質(zhì)的溫度保持在10-40℃，優(yōu)選約25-33℃下。
使用得自腸膜明串珠菌NRRL B-512F的葡聚糖蔗糖酶的典型的反應(yīng)條件包括以下的混合物10mM到100mM的乙酸鹽緩沖劑，10到35％(體積/體積)的DMSO，100mM到900mM的蔗糖和2到200mM的酚類化合物，0.5mg到1g/l的鈣鹽和最終濃度為0.5到5U/ml的酶。該反應(yīng)在30℃溫育幾小時(shí)(如10到48小時(shí))，酚類化合物衍生物的合成以及所述酚類化合物的消失在這一時(shí)間之后進(jìn)行HPLC分析。對(duì)產(chǎn)物的更好表征可以通過與質(zhì)譜儀聯(lián)用的結(jié)合有光二極管矩陣檢測(cè)器的高效液相色譜法進(jìn)行，以直接評(píng)價(jià)與酚類化合物連接的葡萄糖部分，并因此對(duì)合成的衍生物進(jìn)行良好的分析表征。
在本發(fā)明的一個(gè)方案中，允許對(duì)合成的衍生物進(jìn)行分析表征的這些條件可如下所示 合成介質(zhì)可以通過與質(zhì)譜儀(Micromass ZQ 2000，

)聯(lián)用并結(jié)合有光二極管矩陣檢測(cè)器(PDA

996)的高效液相色譜法進(jìn)行分析。
i)色譜法的操作條件 -柱KROMASIL C18 5μ，250mm×4.6mm(參考K2185；A.I.T.Chromato；117rue de Stalingrad；78800Houilles) -洗脫(方法1) ·溶劑A包含1％v/v乙酸的去離子水 ·溶劑B包含1％v/v乙酸的HPLC級(jí)甲醇 ·0到10分鐘90％到80％(線性)；10％到20％B(線性)；1ml/分鐘 ·10到25分鐘80％到50％(線性)；20％到50％B(線性)；1ml/分鐘 ·25到30分鐘50％A；50％B；1ml/分鐘 ·30到35分鐘50％到90％(線性)；50％到10％B(線性)；1ml/分鐘 ·45分鐘下次注射 -柱溫30℃ -注射體積10μL ii)光二極管矩陣檢測(cè)器 -起始波長(zhǎng)210nm -終止波長(zhǎng)400nm -分辨率1.2nm -進(jìn)樣速率1譜/秒 iii)LC質(zhì)譜儀(一級(jí)四極桿質(zhì)譜儀) -離子化陰離子方式的電噴射 -噴射電壓3.0kV -源溫150℃ -錐電壓20或40V -提取器3.0V -去溶劑化溫度300℃ -錐氣流30L/小時(shí) -去溶劑化氣流600L/小時(shí) -全掃描質(zhì)譜m/z，從100到2000 純化 合成之后，酚類化合物O-α-葡萄糖苷，根據(jù)未轉(zhuǎn)化酚類化合物、糖、酶和共溶劑的殘留程度可以直接或經(jīng)過純化以達(dá)到所需純度。
例如，利用物質(zhì)吸收能力的差異，酚類化合物O-α-葡萄糖苷可被吸附到人造大孔吸附樹脂上。由于在間隙體積內(nèi)存在保留物質(zhì)，帶有被吸附的酚類物質(zhì)的樹脂用水洗滌以完全洗去酶，糖和多糖以及共溶劑。然后，樹脂可用適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行洗脫以回收合成的產(chǎn)物。適當(dāng)?shù)娜軇┦羌兊募状迹掖迹?，異丙醇，丙酮或其混合物，或其與不超過20％的體積/體積的水的混合物。包含合成產(chǎn)物的溶液可以在適當(dāng)溫度(不高于50℃)下真空蒸發(fā)或者使用適合的薄膜設(shè)備進(jìn)行濃縮用于進(jìn)一步純化，或直接用于進(jìn)一步的純化?？墒褂昧硗獾募兓襟E如液/液提取，制備性HPLC，或其它回合的樹脂純化以獲得所需的純度用于最終應(yīng)用?？捎糜谝?液提取的有機(jī)溶劑是乙酸乙酯，乙酸丁酯，甲基乙基酮，根據(jù)酚類化合物和酚類化合物葡萄糖苷的可溶性的差異而異。
最后，包含所需物質(zhì)的漿料可以通過在適當(dāng)溫度(不高于50℃)下真空蒸發(fā)或使用適合的薄膜設(shè)備除去溶劑(水或有機(jī)溶劑)并將得到的溶液濃縮以獲得指定濃度。該漿料可進(jìn)行干燥(冷凍干燥，噴霧干燥或任何其它的干燥方式，其將保留分子的完整性)以獲得粉末。
可使用在容器(可使用具有根據(jù)樹脂粒度測(cè)定法的不同而具有適當(dāng)?shù)暮Y目的篩來回收樹脂)中的或借助于泵被填充到柱中的人造大孔吸附樹脂。關(guān)于人造大孔吸附樹脂，可以理解為是非離子的和多孔的合成樹脂，其具有相對(duì)大的表面積，諸如包括苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、酚醛聚合物、和甲基丙酸烯系聚合物的那些。這些樹脂的例子是XAD型的Amberlite(Rohm and Haas Company，USA)，HP系列的Diaion(Mitsubishi Chemical Industries，Japan)。
本發(fā)明涉及包含兒茶酚結(jié)構(gòu)并例如選自以下的酚類化合物的O-α-葡萄糖苷原兒茶酸及其酯衍生物，咖啡酸及其酯衍生物，特別是迷迭香酸，綠原酸和咖啡酸苯乙酯以及氫化咖啡酸或3，4-二羥基氫化肉桂酸，3，4-二羥基苯基乙酸和3，4-二羥基苯基二醇，七葉亭，花旗松素，黃顏木素，圣草酚，漆黃素和鼠李亭。特別地，本發(fā)明涉及包含兒茶酚結(jié)構(gòu)并選自以下的酚類化合物的O-α-葡萄糖苷表兒茶素沒食子酸酯，圣草酚，七葉亭，漆黃素O-α-葡萄糖苷，黃顏木素，高原兒茶酸，原兒茶酸，原兒茶酸乙酯，羥基酪醇，桑橙素，去甲二氫愈創(chuàng)木酸，橄欖苦苷，焦兒茶酚，鼠李亭，迷迭香酸，花旗松素，3-羥基大豆苷元，3，4-二羥基二苯甲酮，咖啡酸，二氫咖啡酸，咖啡酸苯乙酯，5，3’，4’-三羥基-6，7-二甲氧基黃酮，綠原酸苷，脫氧茜素，表焙兒茶素，雙氫刺槐亭，焙兒茶素，沒食子酸，沒食子酸丙酯和刺槐亭。這些新的酚類化合物衍生物通過具有改善的水溶性和/或該衍生物在使用期間，被人類天然微生物水解，并且更具體地說被人類皮膚的微生物水解，或被諸如由釀酒酵母產(chǎn)生的α-葡糖苷酶的所選α-葡糖苷酶水解，原地釋放糖苷配基，而具有更好的生物利用度。
特別地，本發(fā)明涉及具有下式所示結(jié)構(gòu)的酚類化合物O-α-葡萄糖苷
其中 A和B，相同或不同，是H或-α-葡糖基殘基，前提條件是A和B中至少一個(gè)是-α-葡糖基殘基； R2是H或OH；和， R1選自
其中R3和R4獨(dú)立地是H或OH，前提條件是R3和R4中至少一個(gè)表示OH；
其中R7選自H，-OH或-OCOR且R8是H或OH，前提條件是，當(dāng)R2是H時(shí)，R7和R8不同時(shí)是OH，并且R7和R8中至少一個(gè)是OH；
其中R5是OH或OCH3；R6是H或OH，R9是H或OH，R10是H，OCH3或C6H11O5，和R11是H，OH或C6H11O5，前提條件是當(dāng)R5和R6同時(shí)是OH時(shí)R10和R11不能同時(shí)是H，和當(dāng)R10是C6H11O5時(shí)R11是H； --(CH2)n-COOR或-(CH2)n-CONHR，n是0-2的整數(shù)； --(CR12＝CH)-COOR或-(CR12＝CH)-CONHR，R12是H或C1-C6直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，優(yōu)選甲基，乙基，丙基，環(huán)己基或苯基，更優(yōu)選甲基或苯基； --(CH2)n-OR或-(CH2)n-NHR，n是0-2的整數(shù)； --(CH2)n-COR或-(CH＝CH)n-COR，n是0-2的整數(shù)； -H；

-C1-C10烴基，其與式(I)中所示的環(huán)以及R1的鄰位碳一起形成稠環(huán)(雙環(huán)或三環(huán))，所述環(huán)任選地被至少一個(gè)雜原子中斷； 其中R是H或直鏈、支鏈或環(huán)狀的，芳香或非芳香的，飽和或不飽和的C1-C10烴基，任選地被至少一個(gè)雜原子中斷，其中所述烴基包括烷基，烯基，或炔基，優(yōu)選烷基或烯基，其可被一個(gè)或幾個(gè)選自以下的取代基取代(C5-C9)芳基，(C4-C9)雜環(huán)，(C1-C3)烷氧基，(C2-C3)?；?，(C1-C3)醇，羧基(-COOH)，(C2-C3)酯，(C1-C3)胺，氨基(-NH2)，酰胺(-CONH2)，(C1-C3)亞胺，腈，羥基(-OH)，醛基(-CHO)，鹵素，(C1-C3)鹵代烷基，硫醇(-SH)，(C1-C3)硫烷基，(C1-C3)砜，(C1-C3)亞砜及其組合。
在第一實(shí)施方案中，R2是H。在該實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖苷可以是例如表兒茶素沒食子酸酯O-α-葡萄糖苷，圣草酚O-α-葡萄糖苷，七葉亭O-α-葡萄糖苷，漆黃素O-α-葡萄糖苷，黃顏木素O-α-葡萄糖苷，高原兒茶酸O-α-葡萄糖苷，原兒茶酸O-α-葡萄糖苷，原兒茶酸乙酯O-α-葡萄糖苷，羥基酪醇O-α-葡萄糖苷，桑橙素O-α-葡萄糖苷，去甲二氫愈創(chuàng)木酸O-α-葡萄糖苷，橄欖苦苷O-α-葡萄糖苷，焦兒茶酚O-α-葡萄糖苷，鼠李亭O-α-葡萄糖苷，迷迭香酸O-α-葡萄糖苷，花旗松素O-α-葡萄糖苷，3-羥基大豆苷元O-α-葡萄糖苷，3，4-二羥基二苯甲酮O-α-葡萄糖苷，咖啡酸O-α-葡萄糖苷，二氫咖啡酸O-α-葡萄糖苷，咖啡酸苯乙酯O-α-葡萄糖苷，5，3’，4’-三羥基-6，7-二甲氧基黃酮O-α-葡萄糖苷，綠原酸O-α-葡萄糖苷和脫氧茜素O-α-葡萄糖苷。
在備選實(shí)施方案中，R2是OH。在該實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖苷可以是例如表焙兒茶素O-α-葡萄糖苷，雙氫刺槐亭O-α-葡萄糖苷，焙兒茶素O-α-葡萄糖苷，沒食子酸O-α-葡萄糖苷，沒食子酸丙酯O-α-葡萄糖苷和刺槐亭O-α-葡萄糖苷。
在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖苷如下式所示
其中 A和B，相同或不同，是H或-α-葡糖基殘基，前提條件是A和B中至少一個(gè)是-α-葡糖基殘基； R2是H或OH；和 R1是
其中R3和R4獨(dú)立地是H或OH，前提條件是R3和R4中至少一個(gè)表示OH。
在具體實(shí)施方案中，R2是H。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2是OH。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3和R4是OH。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R3是H和R4是OH。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R3是OH和R4是H。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2是H和R3/R4選自以下組合OH/OH；H/OH；OH/H。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R2是OH和R3/R4選自以下組合OH/OH；H/OH；OH/H。
特別地，R2是H，R3是H和R4是OH(得到圣草酚O-α-葡萄糖苷)?；蛘撸琑2是H，R3是OH和R4是H(得到黃顏木素O-α-葡萄糖苷)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2是H，并且R3和R4都是OH(得到花旗松素O-α-葡萄糖苷)。
優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自花旗松素O-α-葡萄糖苷，圣草酚O-α-葡萄糖苷，雙氫刺槐亭O-α-葡萄糖苷和黃顏木素O-α-葡萄糖苷。
在本發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖苷如下式所示
其中 A和B，相同或不同，是H或-α-葡糖基殘基，前提條件是A和B中至少一個(gè)是-α-葡糖基殘基； R2是H或OH；和 R1是
其中R7選自H，-OH或-OCOR且R8是H或OH，前提條件是，當(dāng)R2是H時(shí)，R7和R8不同時(shí)是OH，和R7和R8中至少一個(gè)表示OH。
在具體實(shí)施方案中，R2是H。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2是OH。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2是OH，R8是OH和R7是OH或OCOR。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R7和R8都是OH。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R2是H，R8是OH和R7是OCOR。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R2是H或OH，R7是-OCOR和R8是OH。更優(yōu)選地，R是
優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖選自表焙兒茶素O-α-葡萄糖，焙兒茶素O-α-葡萄糖和表兒茶素沒食子酸酯O-α-葡萄糖。
在本發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖如下式所示
其中 A和B，相同或不同，是H或-α-葡糖基殘基，前提條件是A和B中至少一個(gè)是-α-葡糖基殘基； R2是H或OH；和 R1是
其中R5是OH或OCH3；R6是H或OH，R9是H或OH，R10是H，OCH3或C6H11O5，和R11是H，OH或C6H11O5，前提條件是當(dāng)R5和R6同時(shí)是OH時(shí)R10和R11不能同時(shí)是H，和當(dāng)R10是C6H11O5時(shí)R11是H。特別地，R6，R5和R11可以選自以下組合 a)R6是OH和R5是OCH3和R11是H； b)R6是OH和R5是OH和R11是OH； c)R6是OH和R5是OH和R11是C6H11O5；和， d)R6是H和R5是OH和R11是H；和 R9是H或OH和R10是H或OCH3或C6H11O5， 前提條件是當(dāng)R10是C6H11O5時(shí)，R11是H。
在具體實(shí)施方案中，R2是H。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2是OH。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R9是OH，R10是H和R11是H，而R6是OH和R5是OCH3，或者R6是H和R5是OH。優(yōu)選地，R2是H。或者，R2是OH。
在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R9是H和R10是OCH3或C6H11O5。在該實(shí)施方案的具體方面，R9和R11是H，R10和R5是OCH3和R6是OH。
在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R5和R6都是OH，R9是H或OH，R10是OH或C6H11O5，和R11是H，OH或C6H11O5，前提條件是當(dāng)R10是C6H11O5時(shí)R11是H。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R5和R6都是OH，R9是H或OH，R10是H，和R11是OH或C6H11O5。
在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R9是H和R10是H。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，R9是H，R10和R5是OCH3和R6是OH。
在具體實(shí)施方案中，R2，R5，R6，R9，R10和R11可以選自上述的組合。
在具體實(shí)施方案中，R2是H和R1是
其中R6是OH和R5是OCH3(得到鼠李亭O-α-葡萄糖苷)，或者R6是H和R5是OH(得到漆黃素O-α-葡萄糖苷)。
優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖選自鼠李亭O-α-葡萄糖，漆黃素O-α-葡萄糖，刺槐亭O-α-葡萄糖，棉皮皮素O-α-葡萄糖，葒草素O-α-葡萄糖，異葒草素O-α-葡萄糖和5，3’，4’-三羥基-6，7-二甲氧基黃酮O-α-葡萄糖。
在本發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖如下式所示
其中 A和B，相同或不同，是H或α-葡糖基殘基，前提條件是A和B中至少一個(gè)是α-葡糖基殘基； R2是H或OH；和 R1是-(CH2)n-COOR或-(CH2)n-CONHR，n是0-2的整數(shù)。
在具體實(shí)施方案中，R2是H。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2是OH。
優(yōu)選地，R選自H，C1-C3烷基，優(yōu)選甲基，乙基或丙基，和
在第一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，n是0和R優(yōu)選是H。在第二更優(yōu)選的實(shí)施方案中，n是1和R優(yōu)選是H。在第三更優(yōu)選的實(shí)施方案中，n是2和R優(yōu)選是H。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，n是0和R是C1-C3烷基，優(yōu)選甲基，乙基或丙基，或者
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是-(CH2)n-COOR。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R是H。
優(yōu)選地，酚類化合物選自高原兒茶酸，二氫咖啡酸，原兒茶酸乙酯，沒食子酸丙酯，沒食子酸，金縷梅丹寧(2’，5-二-O-沒食子?；?金縷梅糖)和原兒茶酸。
在具體實(shí)施方案中，R2是H和R1是-COOH(得到原兒茶酸O-α-葡萄糖苷)。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，R2是H和R1是-(CH2)2-COOH(得到氫化咖啡酸O-α-葡萄糖苷)。
本發(fā)明涵蓋了其酯及其可藥用鹽。
優(yōu)選地，酚類化合物選自高原兒茶酸O-α-葡萄糖苷，二氫咖啡酸O-α-葡萄糖苷，原兒茶酸乙酯O-α-葡萄糖苷，沒食子酸丙酯O-α-葡萄糖苷，沒食子酸O-α-葡萄糖苷，金縷梅丹寧(2’，5-二-O-沒食子?；?金縷梅糖)O-α-葡萄糖苷和原兒茶酸O-α-葡萄糖苷。
在本發(fā)明的另外的具體實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖如下式所示
其中 A和B，相同或不同，是H或α-葡糖基殘基，前提條件是A和B中至少一個(gè)是α-葡糖基殘基； R2是H或OH；和 R1-(CR12＝CH)-COOR或-(CR12＝CH)-CONHR，R12是H或C1-C6直鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，優(yōu)選甲基，乙基，丙基，環(huán)己基或苯基，更優(yōu)選甲基或苯基。優(yōu)選地，R1是-(CH＝CH)-COOR或-(CH＝CH)-CONHR。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2是H。或者，R2是OH。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是-(CH＝CH)-COOR。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R選自H；

和，在R1的鄰位碳處與式(I)的苯基連接的鍵。
在具體實(shí)施方案中，R2是H和R1是-(CH＝CH)-COOH(得到咖啡酸O-α-葡萄糖苷)。本發(fā)明涵蓋了其酯及其可藥用鹽。特別地，當(dāng)R1是-(CH＝CH)-COOR時(shí)，R選自1，3，4，5-四羥基環(huán)己烷羧酸并連接到3位(得到綠原酸O-α-葡萄糖苷)，(R)-1-羧基-2-(3，4-二羥基苯基)乙基(得到迷迭香酸O-α-葡萄糖苷)，和苯乙基(得到咖啡酸苯乙酯O-α-葡萄糖苷)。特別地，當(dāng)R1是-(CR12＝CH)-COOR時(shí)，R是通過OB的間位碳連接到式(II)的苯基的鍵給出下式
(即，當(dāng)R12是H時(shí)，則得到七葉亭O-α-葡萄糖苷，當(dāng)R12是甲基時(shí)，則得到4-甲基七葉亭O-α-葡萄糖苷，和當(dāng)R12是苯基時(shí)，則得到去甲黃檀素O-α-葡萄糖苷)。在具體實(shí)施方案中，R12是H。
優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖選自咖啡酸O-α-葡萄糖苷，迷迭香酸O-α-葡萄糖苷，七葉亭O-α-葡萄糖苷，4-甲基七葉亭O-α-葡萄糖苷，去甲黃檀素(6，7-二羥基苯基香豆素)O-α-葡萄糖苷，綠原酸O-α-葡萄糖苷，咖啡酸苯乙酯O-α-葡萄糖苷，菊苣酸(二咖啡?；剖?O-α-葡萄糖苷，松果菊苷(2-(3，4-二羥基苯基)乙基O-6-脫氧-α-L-吡喃甘露糖基-(1→3)-O-(β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6))-，4-(3-(3，4-二羥基苯基)-2-丙烯酸酯)O-α-葡萄糖苷，β-D-吡喃葡萄糖苷O-α-葡萄糖苷和毛蕊花苷O-α-葡萄糖苷。
在本發(fā)明的另外的具體實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖如下式所示
其中 A和B，相同或不同，是H或α-葡糖基殘基，前提條件是A和B中至少一個(gè)是α-葡糖基殘基； R2是H或OH；和 R1是-(CH2)n-OR，n是0-2的整數(shù)。
在具體實(shí)施方案中，R2是H。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2是OH。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，n是2。優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷是羥基酪醇O-α-葡萄糖苷。
在本發(fā)明的另外的具體實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖苷如下式所示
其中 A和B，相同或不同，是H或α-葡糖基殘基，前提條件是A和B中至少一個(gè)是α-葡糖基殘基； R2是H或OH；和 R1是-(CH2)n-COR或-(CH＝CH)n-COR，n是0-2的整數(shù)。
在具體實(shí)施方案中，R2是H。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2是OH。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，n是0或1和R選自 H；C1-C3烷基，優(yōu)選甲基，乙基或丙基，更優(yōu)選甲基；

苯基；


優(yōu)選地，n是0?；蛘?，n是1。
優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自桑橙素O-α-葡萄糖苷，3，4-二羥基苯甲醛O-α-葡萄糖苷，3，4-二羥基二苯甲酮O-α-葡萄糖苷，紫鉚花素(2’，3，4，4’-四羥基查耳酮)O-α-葡萄糖苷，3，4-二羥基苯乙酮O-α-葡萄糖苷，馬里苷(2’，3，3’，4，4’-五羥基-4’-葡糖基查耳酮)O-α-葡萄糖苷和圣草酚查耳酮(2’，4’，6’，3，4-五羥基查耳酮)O-α-葡萄糖苷。
在本發(fā)明的另外的具體實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖苷如下式所示
其中 A和B，相同或不同，是H或α-葡糖基殘基，前提條件是A和B中至少一個(gè)是α-葡糖基殘基； R2是H或OH；和 R1選自
優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自橄欖苦苷O-α-葡萄糖苷，去甲二氫愈創(chuàng)木酸O-α-葡萄糖苷，焦兒茶酚O-α-葡萄糖苷，3-羥基大豆苷元O-α-葡萄糖苷和金雞菊甙(3’，4’，6，7-四羥基-6-O-葡糖基噢哢)O-α-葡萄糖苷。
在本發(fā)明的另外的具體實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖苷如下式所示
其中 A和B，相同或不同，是H或α-葡糖基殘基，前提條件是A和B中至少一個(gè)是α-葡糖基殘基； R2是H或OH；和 R1是C1-C10烴基，其與式(I)中所示的環(huán)以及R1的鄰位碳一起形成稠合芳環(huán)(雙環(huán)或三環(huán))。特別地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷可以選自
所述稠環(huán)可以任選地被至少一個(gè)雜原子中斷并且可以被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代(C1-C3)烷氧基，(C2-C3)?；?，(C1-C3)醇，羧基(-COOH)，(C2-C3)酯，(C1-C3)胺，氨基(-NH2)，酰胺(-CONH2)，(C1-C3)亞胺，腈，羥基(-OH)，醛基(-CHO)，鹵素，(C1-C3)鹵代烷基，硫醇(-SH)，(C1-C3)硫烷基，(C1-C3)砜，(C1-C3)亞砜及其組合。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，酚類化合物O-α-葡萄糖苷是
本文所述的O-α-葡糖基殘基是指葡萄糖單體，二聚體，三聚體，四聚體，五聚體或多聚體。優(yōu)選地，O-α-葡糖基殘基是葡萄糖單體，二聚體或三聚體，即，葡糖基，二葡糖基或三葡糖基。仍舊優(yōu)選地，O-α-葡糖基殘基是葡萄糖單體。在具體實(shí)施方案中，O-α-葡糖基殘基通過1位的碳連接到酚類化合物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，OA是OH和OB是O-α-葡糖基殘基。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，OB是OH和OA是O-α-葡糖基殘基。
在具體實(shí)施方案中，R可以是單糖。在其它的具體實(shí)施方案中，R是(C1-C6)烷基或(C1-C3)烷基。
這種鹽包括可藥用的酸加成鹽，可藥用的堿加成鹽，可藥用的金屬鹽、銨鹽和烷基化銨鹽。酸加成鹽包括無機(jī)酸以及有機(jī)酸的鹽。適當(dāng)?shù)臒o機(jī)酸的代表性例子包括鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，磷酸，硫酸，高氯酸等等。適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)酸的代表性例子包括甲酸，乙酸，三氯乙酸，三氟乙酸，丙酸，苯甲酸，肉桂酸，檸檬酸，富馬酸等等?？伤幱脽o機(jī)酸或有機(jī)酸的加成鹽的其它例子包括在如下中所列的可藥用的鹽J.Pharm.Sci.1977，66，2，和Handbook of Pharmaceutical SaltsProperties，Selection，and Use，P.Heinrich Stahl和Camille G.編，Wermuth 2002。金屬鹽的例子包括鋰、鈉、鉀、鎂的鹽等。銨鹽和烷基化銨鹽的例子包括銨鹽，甲銨鹽，二甲銨鹽，三甲銨鹽，乙銨鹽，羥乙銨鹽，二乙銨鹽，丁銨鹽，四甲銨鹽等等。有機(jī)堿的例子包括賴氨酸，精氨酸，胍，diethanolamineoline等。
糖苷配基的原地釋放 令人驚訝地，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷可通過α-葡糖苷酶裂解，導(dǎo)致原地釋放酚類化合物。
本發(fā)明的所有的酚類化合物O-α-葡萄糖苷含至少一個(gè)O-α-葡萄糖苷鍵。該鍵可特別地通過酶如α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.20)水解，以釋放葡糖基殘基和糖苷配基部分。當(dāng)原地實(shí)現(xiàn)時(shí)，這種釋放具有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn) -其能夠在可溶糖苷形式下在給用/注射/施用后釋放溶解性較差的糖苷配基(其可比糖苷衍生物更具有活性)，和/或 -原地釋放可以是時(shí)間依賴性的(如果通過由微生物表達(dá)的酶完成，則釋放酶的量將與微生物的數(shù)量有關(guān)菌落越密集，則發(fā)生越多的糖苷配基釋放，和/或 -原地釋放可以通過給用/注射/施用α-葡糖苷酶或表達(dá)這種酶活性的微生物來控制。
這些優(yōu)點(diǎn)在化妝品或皮膚化妝品制劑中的酚類化合物的配制中是重要的。在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述酚類化合物O-α-葡萄糖苷可以通過被與人結(jié)合的微生物表達(dá)的酶原地激活，更優(yōu)選通過被與人皮膚結(jié)合的微生物表達(dá)的酶原地激活。這種與人共生的或非共生的的微生物的已知的和非詳盡的例子包括鏈球菌，葡萄球菌，腸球菌，大腸埃希氏桿菌，桿菌，棒桿菌，丙酸桿菌。當(dāng)施用到皮膚上時(shí)，本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷通過與人皮膚結(jié)合的微生物被轉(zhuǎn)化為糖苷配基部分和葡糖基殘基。這些細(xì)菌在人的口、腸道、生殖道和上呼吸系統(tǒng)中被發(fā)現(xiàn)。
在本發(fā)明的另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述酚類化合物O-α-葡萄糖苷可以被α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.20)如得自釀酒酵母的α-葡糖苷酶原地激活。
因此，本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷具有前體藥物狀態(tài)，因?yàn)榉肿拥幕钚圆糠?糖苷配基)可以被原地釋放。
因此，本發(fā)明涉及包括本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷或其可藥用鹽的藥物組合物或化妝品組合物。本發(fā)明還涉及作為藥物的本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷或其可藥用鹽。該藥物可以是治療藥或預(yù)防藥。本發(fā)明的的酚類化合物O葡萄糖苷具有一些活性，其中所述活性為抗病毒、抗菌、免疫刺激、抗過敏、抗高血壓、抗缺血、抗心率不齊、抗血栓形成、降膽固醇、抗脂質(zhì)過氧化、肝保護(hù)、抗炎、抗癌、抗誘變、抗腫瘤、抗血栓和血管舒張作用。
在具體實(shí)施方案中，組合物可另外包含O-α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.20)或表達(dá)O-α-葡糖苷酶活性的微生物。優(yōu)選地，O-α-葡糖苷酶來自釀酒酵母。特別地，O-α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.20)或表達(dá)O-α-葡糖苷酶活性的微生物存在于滅活形式的組合物中并且O-α-葡糖苷酶僅在給藥時(shí)被激活。例如，組合物可配制成干燥形式，水的不存在導(dǎo)致葡糖苷酶的鈍化；在加入水后，酶將變得有活性，并然后能夠水解糖苷鍵。酶和酚類化合物O-α-葡萄糖苷可被置入兩種不同的液體制劑中，兩種液體制劑僅在給藥時(shí)才被混合。如果酶和酚類化合物O-α-葡萄糖苷被置于相同的溶液中時(shí)，有可能使用酶可逆性抑制劑，其在給藥后被稀釋，從而允許酶揮發(fā)能力以水解酚類化合物O-α-葡萄糖苷。本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷和O-α-葡糖苷酶或表達(dá)O-α-葡糖苷酶活性的微生物還可被物理分離(例如微膠囊)。
本發(fā)明涉及本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防癌、心血管疾病、細(xì)菌感染、UVB誘導(dǎo)的紅斑、變態(tài)反應(yīng)、炎性或免疫病癥的藥物中的應(yīng)用。特別地，癌是實(shí)體瘤，例如乳癌或結(jié)腸癌。特別的，變態(tài)反應(yīng)可以是過敏性鼻結(jié)膜炎。因此，本發(fā)明還涉及治療或預(yù)防癌、心血管疾病、細(xì)菌感染、UVB誘導(dǎo)的紅斑、變態(tài)反應(yīng)、炎性或免疫病癥的方法，該方法包括給用本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷或其可藥用鹽。另外，該方法可以進(jìn)一步包括順序地或同時(shí)地給用O-α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.20)或表達(dá)O-α-葡糖苷酶活性的微生物的步驟。優(yōu)選地，O-α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.20)或表達(dá)O-α-葡糖苷酶活性的微生物可以相同途徑給藥。
在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷在制備用于局部給藥(即給藥到皮膚)上的藥物組合物或化妝品組合物中的應(yīng)用，其中由與皮膚結(jié)合的微生物產(chǎn)生的酶使相應(yīng)的糖苷配基釋放。另外，本發(fā)明涉及本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷在制備用于經(jīng)口給藥的藥物組合物或化妝品組合物中的應(yīng)用，其中由與口和腸道結(jié)合的微生物產(chǎn)生的酶使相應(yīng)的糖苷配基釋放。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷在制備用于經(jīng)直腸給藥的藥物組合物或化妝品組合物中的應(yīng)用，其中由與腸道結(jié)合的微生物產(chǎn)生的酶使相應(yīng)的糖苷配基釋放。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷在制備用于經(jīng)鼻給藥的藥物組合物或化妝品組合物中的應(yīng)用，其中由與上呼吸系統(tǒng)結(jié)合的微生物產(chǎn)生的酶使相應(yīng)的糖苷配基釋放。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷在制備用于經(jīng)陰道給藥的藥物組合物或化妝品組合物中的應(yīng)用，其中由與陰道結(jié)合的微生物產(chǎn)生的酶使相應(yīng)的糖苷配基釋放。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷或其可藥用鹽與O-α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.20)或表達(dá)O-α-葡糖苷酶活性的微生物的組合用于同時(shí)或順序給藥。當(dāng)進(jìn)行同時(shí)給藥時(shí)，本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷或其可藥用鹽和O-α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.20)或表達(dá)O-α-葡糖苷酶活性的微生物在相同的或不同的組合物中被給藥。
這種組合物可以包括可藥用的載體、穩(wěn)定劑或賦形劑。
酚類化合物作為開發(fā)其它衍生物的關(guān)鍵中間體的應(yīng)用 本發(fā)明的酚類化合物O葡萄糖苷可單獨(dú)作為化妝品或作為活性物質(zhì)被直接用作活性成分，或者與其他產(chǎn)品(包括其它的具有協(xié)同或互補(bǔ)活性的活性分子)組合使用，或與穩(wěn)定劑或賦形劑組合使用。這些酚類化合物的衍生物還可用作起始材料，用于另外的化學(xué)、物理或酶促改進(jìn)以產(chǎn)生第二代衍生物。因?yàn)楸景l(fā)明中使用的酶促反應(yīng)涉及酚類化合物的兒茶酚環(huán)上的特定的羥基位置，因此其它羥基可用在例如化學(xué)反應(yīng)中以產(chǎn)生酯鍵、酰基鍵、硫酸酯或磷酸酯鍵。這種改性可改進(jìn)本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷的已有活性，或者為具體應(yīng)用提供了新的性質(zhì)(治療效力更高，細(xì)胞毒性更低，在由微生物釋放糖苷配糖基部分后穩(wěn)定性更高，……)。
所述用于化妝品應(yīng)用或治療應(yīng)用的衍生物的配制 本發(fā)明的組合物可經(jīng)口、非腸道、通過吸入噴霧、局部、經(jīng)直腸、經(jīng)鼻、經(jīng)頰、經(jīng)陰道或借助植入的儲(chǔ)庫(kù)形式被給藥。本文使用的術(shù)語“非腸道”包括皮下，靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，關(guān)節(jié)內(nèi)，滑液內(nèi)，胸骨內(nèi)，鞘內(nèi)，肝內(nèi)，病灶內(nèi)和顱內(nèi)的注射或輸注技術(shù)。優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物經(jīng)口、通過吸入噴霧、局部、經(jīng)直腸、經(jīng)鼻、經(jīng)頰或經(jīng)陰道給藥。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物組合物或化妝品組合物被局部給藥。
新型的化妝品產(chǎn)品是不斷地發(fā)展的，并且將新型原材料加入到化妝品化學(xué)師選擇的個(gè)人護(hù)理成分中。本發(fā)明所述的酚類化合物O-α-葡萄糖苷可容易地被并入到化妝品產(chǎn)品的大清單中。這種制劑是該領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其可以是霜?jiǎng)?、棒劑、洗發(fā)劑、淋浴凝膠劑、洗液、皂劑、乳劑、凝膠劑。這些制劑可包括其它成分，諸如但不限于去離子水，鎂，硅酸鋁，黃原膠，尼龍-12，PCA鈉，丙二醇，氧化鐵紅顏料，滑石，氧化鐵黃顏料，氧化鐵黑顏料，二氧化鈦，硬脂酸甘油酯，硬脂酸，DEA-磷酸鯨蠟酯，羥苯甲酯，羥苯丁酯，羥苯乙酯，羥苯丙酯，異硬脂醇新戊酸酯，棕櫚酸異丙酯，乙烯/丙烯/苯乙烯共聚物，丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物，棕櫚酸異丙酯，苯氧乙醇醋酸生育酚，甘油，三乙醇胺，硬脂酸，硬脂酸丙二醇酯，礦物油，丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物，重氮咪唑烷基，氫化聚異丁烯，棕櫚酸辛酯，新戊酸十三烷基酯，異硬脂酸異硬脂醇酯，羥苯異丙酯，羥苯異丁酯，辛基十二烷醇新戊酸酯，醋酸生育酚，香料，辛基甲氧基肉硅酸酯，二苯甲酮，水楊酸辛酯，異硬脂酸異丙酯，丙二醇異鯨蠟醇聚醚-3乙酸酯，或它們的任何組合。
對(duì)于本發(fā)明的酚類化合物O-α-葡萄糖苷在治療應(yīng)用中的應(yīng)用，其可被并入到不同的醫(yī)學(xué)制劑如丸劑、片劑、糖漿劑、霜?jiǎng)?、洗液、凝膠劑中，使用例如包裝，標(biāo)準(zhǔn)化，混合/均質(zhì)化，無菌和非無菌微粉化，造粒/壓實(shí)，過篩或其任何組合進(jìn)行。所述酚類化合物O-α-葡萄糖苷的制備可包括如下的非詳細(xì)列舉的一些賦形劑滑石，乳糖，硬脂酸鎂，單硬脂酸甘油酯，膠體二氧化硅，沉淀二氧化硅，交聯(lián)的聚乙烯基吡咯烷酮，磷酸氫鈣二水合物，微晶纖維素，玉米淀粉，聚維酮，羧基甲基纖維素鈉，聚山梨酯80，乳酸，卡波姆，鯨蠟醇，肉豆蔻酸異丙酯，棕櫚酸異丙酯，葡萄糖，葡萄糖，三乙醇胺，甘油，果糖，蔗糖，聚合物，納米結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的組合物可以任何可口服劑型經(jīng)口給藥，所述劑型包括但不限于膠囊，片劑，水懸浮劑或溶液劑。在用于口服的片劑中，通常使用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還加入潤(rùn)滑劑諸如硬脂酸鎂。對(duì)于膠囊形式口服給藥，有用的稀釋劑包括乳糖和干燥玉米淀粉。當(dāng)水懸浮劑需要用于口服應(yīng)用時(shí)，活性成分與乳化劑或助懸劑混合。如果需要，還可加入某些甜味劑、調(diào)味劑或著色劑。
或者，本發(fā)明的組合物可以用于直腸給藥的栓劑形式被給藥。這些劑型可通過將藥物與在室溫下是固體但是在直腸溫度下是液體并因此在直腸中熔融以釋放藥物的適當(dāng)?shù)臒o刺激性的賦形劑混合。這種材料包括可可脂，蜂蠟和聚乙二醇。
本發(fā)明的組合物還可局部給藥，特別是當(dāng)治療目標(biāo)包括可容易通過局部施用而到達(dá)的區(qū)域或器官，包括眼睛、皮膚或下腸道的疾病。適當(dāng)?shù)木植恐苿┛扇菀椎乇恢苽溆糜谶@些區(qū)域或器官之一。
對(duì)于局部應(yīng)用，組合物可被配制在包含懸浮在或溶解在一種或多種載體中的活性組分的適當(dāng)?shù)母鄤┲小Ｓ糜诒景l(fā)明化合物的局部給藥的甾類包括但是不限于礦物油，液體礦脂，白礦脂，丙二醇，聚環(huán)氧乙烷，聚環(huán)氧丙烷化合物，乳化蠟和水?；蛘?，組合物可被配制在包含懸浮在和溶解在一種或多種可藥用載體中的活性組分的適當(dāng)?shù)南匆夯蛩獎(jiǎng)┲?。適當(dāng)?shù)妮d體包括但是不限于礦物油，單硬脂酸山梨糖醇酐酯，聚山梨酯60，鯨蠟基酯蠟，十六十八醇，2-辛基十二醇，苯甲醇和水。
對(duì)于眼科應(yīng)用，組合物可被配制成在等滲的、經(jīng)pH調(diào)節(jié)的無菌鹽水中的微?；瘧腋∫?，優(yōu)選地，被配制成在等滲的、經(jīng)pH調(diào)節(jié)的無菌鹽水中的溶液，所述鹽水有或者沒有防腐劑諸如芐扎氯銨?；蛘?，對(duì)于眼科應(yīng)用，組合物可被配制成膏劑如礦脂。
本發(fā)明的組合物還可通過鼻氣霧劑或吸入被給藥。該組合物根據(jù)制藥領(lǐng)域公知技術(shù)制備并且可被制備為在鹽水中的溶液劑，采用苯甲醇或其它適當(dāng)?shù)姆栏瘎?，增?qiáng)生物利用度吸收促進(jìn)劑，氟碳化合物和/或其它常規(guī)的增溶劑或分散劑。
本發(fā)明組合物的無菌可注射形式可是水懸浮液或油懸浮液。這些懸浮劑可根據(jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)采用適當(dāng)?shù)姆稚┗驖?rùn)濕劑和助懸劑進(jìn)行配制。無菌的可注射制劑還可是在無毒的非腸道可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌的可注射溶液劑或懸浮劑，例如在1，3-丁二醇中的溶液劑。在可接受的媒介物和溶劑中，可采用水，林格溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，通常使用無菌的固定油類作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，可采用任何溫和的固定油類，包括合成的甘油一酯和甘油二酯。脂肪酸如油酸及其甘油衍生物可用于可注射制劑中，其以原態(tài)的天然的可藥用的油類如橄欖油和蓖麻油的形式，特別是其聚氧乙基化形式被使用。這些油溶液劑或懸浮液還可包含長(zhǎng)鏈醇稀釋劑或分散劑，如羧甲基纖維素或類似的通常用在包括乳劑和懸浮劑的可藥用劑型配制中的分散劑。為了制劑配制目的，其它通常使用的表面活性劑，諸如土溫、司盤和其它乳化劑或通常用于制造可藥用的固體、液體或其它劑型中的生物利用度增強(qiáng)劑也可被使用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn) 本發(fā)明的方法優(yōu)于現(xiàn)有方法的優(yōu)點(diǎn)似乎從上面的描述和具體實(shí)施方式
變得清楚。本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)詳細(xì)描述如下。
本發(fā)明描述了新的原始的酚類化合物O-α-的葡萄糖苷 -原兒茶酸及其酯衍生物， -咖啡酸及其酯衍生物，特別是迷迭香酸，綠原酸和咖啡酸苯乙酯和氫化咖啡酸或3，4-二羥基氫化肉桂酸，3，4-二羥基苯基乙酸和3，4-二羥基苯基二醇， -七葉亭， -花旗松素， -黃顏木素， -圣草酚， -漆黃素， -和鼠李亭。
優(yōu)選地，本發(fā)明的新的原始的酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自表兒茶素沒食子酸酯O-α-葡萄糖苷，圣草酚O-α-葡萄糖苷，七葉亭O-α-葡萄糖苷，漆黃素O-α-葡萄糖苷，黃顏木素O-α-葡萄糖苷，高原兒茶酸O-α-葡萄糖苷，原兒茶酸O-α-葡萄糖苷，原兒茶酸乙酯O-α-葡萄糖苷，羥基酪醇O-α-葡萄糖苷，桑橙素O-α-葡萄糖苷，去甲二氫愈創(chuàng)木酸O-α-葡萄糖苷，橄欖苦苷O-α-葡萄糖苷，焦兒茶酚O-α-葡萄糖苷，鼠李亭O-α-葡萄糖苷，迷迭香酸O-α-葡萄糖苷，花旗松素O-α-葡萄糖苷，3-羥基大豆苷元O-α-葡萄糖苷，3，4-二羥基二苯甲酮O-α-葡萄糖苷，咖啡酸O-α-葡萄糖苷，二氫咖啡酸O-α-葡萄糖苷，咖啡酸苯乙酯O-α-葡萄糖苷，5，3’，4’-三羥基-6，7-二甲氧基黃酮O-α-葡萄糖苷，綠原酸O-α-葡萄糖苷，脫氧茜素O-α-葡萄糖苷，表焙兒茶素O-α-葡萄糖苷，雙氫刺槐亭O-α-葡萄糖苷，焙兒茶素O-α-葡萄糖苷，沒食子酸O-α-葡萄糖苷，沒食子酸丙酯O-α-葡萄糖苷和刺槐亭O-α-葡萄糖苷。
這些酚類化合物O的葡萄糖苷在化妝品和治療領(lǐng)域中很令人感興趣，并表現(xiàn)出改善的水溶性。實(shí)際上，在相同的生理?xiàng)l件，與相應(yīng)的糖苷配基相比，水溶性增加至少20、30或50倍。
這些酚類化合物O-α-葡萄糖苷具有增加的生物利用度。這些酚類化合物O-α-葡萄糖苷可通過被與人共生的微生物水解形成最初的酚結(jié)構(gòu)而被“原地活化”，給出了在化妝品和治療應(yīng)用中很令人感興趣的“前體藥物”狀態(tài)。它們還可使用諸如由釀酒酵母產(chǎn)生的α-葡糖苷酶的α-葡糖苷酶激活。
這些以被證實(shí)的、可靠的、低成本的、“綠色化學(xué)”的酶促方法獲得的新的酚類化合物O葡萄糖苷確保了這些產(chǎn)物的高質(zhì)量(由于所用酶的專一性和選擇性)。
實(shí)施例 本發(fā)明的任何其它實(shí)施方案和優(yōu)點(diǎn)可從以下的實(shí)施例清楚地了解，以下實(shí)施例是本發(fā)明實(shí)施方案的例證，不構(gòu)成對(duì)權(quán)利要求所要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍的限制。
實(shí)施例1葡糖基化花旗松素的合成；非常純的葡糖基化花旗松素的水溶性和葡糖基化衍生物分子在4℃到45℃溫度下的穩(wěn)定性 用于合成葡糖基化花旗松素的條件如下(對(duì)于1升反應(yīng)介質(zhì)而言的量) 通過以表中所示順序混合各種溶液首先獲得不含酶的反應(yīng)介質(zhì)。在足夠達(dá)到所需的30℃(+/-0.2℃)溫度的時(shí)段內(nèi)將混合物在30℃溫育。然后通過引入酶制備物使反應(yīng)開始。反應(yīng)介質(zhì)可適度地被攪拌。
酶制備物如下獲得將用滴定法測(cè)量的酶活性為4到6U/ml的腸膜明串珠菌NRRL B512-F的培養(yǎng)肉湯進(jìn)行離心以將微生物細(xì)胞與含酶液體完全分離。然后通過切向超濾作用將離心上清液濃縮4到10倍(分子量截?cái)嘀禐?00kDa)。然后將殘余物用20mM的乙酸鹽緩沖劑(包含10mg/L的氯化鈣二水合物)稀釋4倍，然后濃縮4倍，以廣泛地除去含酶細(xì)胞培養(yǎng)基中的殘留的低分子量組分。然后將純化的酶制備物以冷凍形式儲(chǔ)存(-20℃)或進(jìn)行冷凍干燥達(dá)數(shù)月而無活性損失。作為一般程序，酶制備物的活性通過增加保留物的濃度進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而酶制備物的體積不高于合成反應(yīng)介質(zhì)的最終體積的20％。
將反應(yīng)介質(zhì)在30℃(+/-0.2℃)下溫育22小時(shí)。從反應(yīng)介質(zhì)中取出小份的反應(yīng)介質(zhì)并用含40/60的比的甲醇和水的溶液稀釋50倍。然后通過HPLC分析甲醇溶液。
分析條件如前所述，除了甲醇濃度如下所示(方法2) -溶劑A包含1％v/v乙酸的除去離子水 -溶劑B包含1％v/v乙酸的HPLC級(jí)甲醇 -0到10分鐘60％A；40％B；1ml/分鐘 -10到12分鐘60％到20％(線性)；40％到80％B(線性)；1ml/分鐘 -12到14分鐘20％A；80％B；1ml/分鐘 -14到16分鐘20％到60％(線性)；80％到40％B(線性)；1ml/分鐘 -16到25分鐘60％A；40％B；1ml/分鐘 -25分鐘下次注射。
圖7表示在剛好開始溫育時(shí)，包含花旗松素作為葡萄糖苷受體的反應(yīng)介質(zhì)的HPLC色譜圖(289nm)。在8.15分鐘的主要峰相當(dāng)于花旗松素。
圖8表示在溫育22小時(shí)后，包含花旗松素作為葡萄糖苷受體的反應(yīng)介質(zhì)的HPLC色譜圖(289nm)。觀察到保留時(shí)間為6.15分鐘的峰。
圖9表示在約8.15分鐘洗脫的峰的質(zhì)譜，

圖10表示紫外線吸收光譜；該物質(zhì)是花旗松素(m/z[M-H]302,96和m/z[M-H-H2O]284.96)其分子量是304。
圖11表示在約6.15分鐘洗脫的峰的質(zhì)譜，圖12表示紫外線吸收光譜；相應(yīng)物質(zhì)是花旗松素葡萄糖苷(m/z[M-H]464.98)因?yàn)槠浞肿恿渴?66。
在9.33和12.75分鐘洗脫的物質(zhì)是在花旗松素制備中發(fā)現(xiàn)的多酚化合物。
圖13表示在進(jìn)行純化以除去酶、右旋糖酐、果糖和DMSO和殘留的花旗松素級(jí)分之后，包含花旗松素和花旗松素葡萄糖苷的含水溶液的HPLC色譜圖。洗脫條件如前所述，其中甲醇的初始含量為10％(方法1)?；ㄆ焖伤卦?4.01分鐘被洗脫，和花旗松素葡萄糖苷在22.33分鐘被洗脫。
花旗松素葡萄糖苷已經(jīng)進(jìn)行深入地純化以盡可能地降低花旗松素的濃度。最終獲得用滴定法測(cè)量具有高于93mM的花旗松素葡萄糖苷，花旗松素殘余濃度低于2mM的溶液。(圖14；花旗松素在8.95分鐘被洗脫，和花旗松素葡萄糖苷在6.55分鐘被洗脫)。
花旗松素葡萄糖苷的濃度如下測(cè)定在使用被精確表征的花旗松素制備物(SIGMA)確立花旗松素的摩爾濃度和峰面積之間的關(guān)系后，通過將面積和濃度之間的關(guān)系應(yīng)用到花旗松素葡萄糖苷上而測(cè)定花旗松素葡萄糖苷的濃度，因?yàn)榛ㄆ焖伤睾突ㄆ焖伤仄咸烟擒站哂邢嗤腢V光譜。然后，用花旗松素葡萄糖苷的分子量值(466)乘摩爾濃度得到用g/L表示的濃度。而花旗松素在25℃水中的溶解度經(jīng)過測(cè)量為1.19g/L(3.91mM)，花旗松素葡萄糖苷在25℃水中的溶解度高于43.5g/L(93.2mM)。
因此根據(jù)所述方法可合成新的物質(zhì)，即，花旗松素葡萄糖苷，其分子量為466，在約25℃水中的溶解度高于93mM，相當(dāng)于與花旗松素殘余物有關(guān)的水溶解度增加高于23倍。花旗松素葡萄糖苷可以根據(jù)上述技術(shù)(樹脂吸附，洗脫，濃縮，液-液提取，除去溶劑和濃縮并最終干燥)進(jìn)行純化。
花旗松素葡萄糖苷溶液可在較長(zhǎng)時(shí)段內(nèi)儲(chǔ)存而不損失糖苷鍵，并且具有相當(dāng)令人滿意的抗氧化性。
使用在4℃、22℃、37℃和45℃的恒溫箱進(jìn)行加速儲(chǔ)存期限研究4個(gè)月。頻繁地測(cè)量花旗松素葡萄糖苷的含量，并粗略地對(duì)比顏色和氣味?；ㄆ焖伤仄咸烟擒蘸咳缜八鐾ㄟ^HPLC測(cè)定(將小份溶液500倍稀釋并使用方法2進(jìn)行分析；檢測(cè)波長(zhǎng)210-400nm)。
下表描述了在不同的儲(chǔ)存溫度下花旗松素葡萄糖苷的量的測(cè)量值-存儲(chǔ)時(shí)間。

在無論那種貯藏溫度下都未觀察到顏色和氣味改變。
因此，在花旗松素和葡萄糖部分之間的葡萄糖苷在上述的試驗(yàn)條件下是穩(wěn)定的。在37℃和45℃下，觀察到花旗松素葡萄糖苷的輕微降解大概是由于氧化所致實(shí)際上，在相應(yīng)的溶液中沒有觀察到表明糖苷鍵水解的花旗松素濃度的增加。在上述條件下，花旗松素葡萄糖苷的半衰期估計(jì)為在37℃下為1.6年，在45℃下為0.67年。
本實(shí)施例證明了花旗松素葡萄糖苷在苛刻的儲(chǔ)存條件下具有高的化學(xué)穩(wěn)定性。
實(shí)施例2DMSO濃度對(duì)花旗松素葡萄糖苷的合成效率的影響 花旗松素葡萄糖苷的酶促合成如實(shí)施例1所述進(jìn)行，但是存在以下例外 ·酶濃度是1U/ml ·DMSO濃度是35％、25％、15％或5％。
在溫育22小時(shí)后，在四種反應(yīng)介質(zhì)中的花旗松素葡萄糖苷的相對(duì)濃度如下表所示。
對(duì)于花旗松素葡萄糖苷的合成，最佳的DMSO濃度似乎處在顯著低于30％并接近于15％的值。
實(shí)施例3花旗松素葡萄糖苷被人皮膚菌群的活化 皮膚菌群?jiǎn)为?dú)地從5個(gè)供體被收集。每個(gè)供體的前臂和前額用飽和有NaCl溶液(v＝5mL，8g/l)的棉-毛拭子掛擦。在每次掛擦之后，將拭子分配在剩余的NaCl溶液中并積壓以釋放被采樣的材料。在兩個(gè)前臂上進(jìn)行掛擦/擠壓和在前額上進(jìn)行三次掛擦/擠壓進(jìn)行兩輪后，獲得的題述(trouble)制備物經(jīng)過過濾(40μm)以除去鱗片并最終進(jìn)行離心(4℃，5000g，15min)。將微生物小球再懸浮在NaCl溶液(v＝1mL，8g/l)中并在600nm下通過OD進(jìn)行表征。
將5個(gè)微生物樣品混合形成最終的微生物懸浮液以供測(cè)試。使用Hickey-Tresner培養(yǎng)基(1.0g/L的酵母抽提物，1.0g/L的肉類抽提物，2.0g/L的酪蛋白胨，10.0g/L的淀粉，20mg/l的六水合氯化鈷；pH＝6)對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。微生物生長(zhǎng)在100毫升的錐形依氏燒瓶中在37℃下在連續(xù)攪拌(100rpm)下進(jìn)行。無菌培養(yǎng)肉湯(20ml)被摻入0.1毫升的懸浮液。通過在600nm下測(cè)量OD控制微生物生長(zhǎng)。
花旗松素葡萄糖苷如實(shí)施例1所述獲得(相當(dāng)于圖14報(bào)導(dǎo)的HPLC色譜的高純度制備物)。在第0天加入或不加入花旗松素葡萄糖(V＝0.5mL的0.20μm無菌溶液)，通過在缺乏花旗松素葡萄糖苷的條件下生長(zhǎng)最終的微生物懸浮液制備對(duì)照。
在將小份細(xì)胞培養(yǎng)基離心后，上清液用比例為40/60的甲醇和水的溶液稀釋4倍，并且通過HPLC測(cè)定上清液中的花旗松素葡萄糖苷和花旗松素的濃度(方法2)。
圖15表示在Hickey-Tresner培養(yǎng)基中1周后有表觀細(xì)菌生長(zhǎng)。從第3天到第7天，在花旗松素葡萄糖苷存在時(shí)的表觀生物質(zhì)產(chǎn)生高于不存在花旗松素葡萄糖苷時(shí)的表觀生物質(zhì)產(chǎn)生。這可被解釋為在細(xì)菌水解條件下，由于葡萄糖從花旗松素葡萄糖苷中的釋放所導(dǎo)致的更高濃度的碳和能源。
在圖16中，在前三天檢測(cè)不到花旗松素葡萄糖苷的水解。在溫育三天后，大概是當(dāng)碳和能源變得有限時(shí)，花旗松素葡萄糖苷的濃度以顯著方式減少并且附隨地出現(xiàn)糖苷配基類黃酮花旗松素。來自人皮膚菌群的菌落所經(jīng)歷的營(yíng)養(yǎng)應(yīng)激可能刺激葡糖基殘基經(jīng)由分泌的酶的作用而發(fā)生的釋放。
本實(shí)施例說明了人皮膚菌群識(shí)別并且能夠以高產(chǎn)量水解類黃酮糖苷鍵，為遞送活性成分提供了新型路徑。
實(shí)施例4花旗松素葡萄糖苷通過α-葡糖苷酶制備物的活化 花旗松素葡萄糖苷在α-葡糖苷酶酶存在的條件下在以下條件下進(jìn)行溫育 -花旗松素葡萄糖苷如實(shí)施例1所述獲得(相當(dāng)于圖14報(bào)道的HPLC色譜的高純度制備物)0.25毫升； -α-葡糖苷酶(得自釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；FLUKA 70797；批號(hào)0641337/1；活性5.8U/mg)50.1mg在5ml的磷酸鉀緩沖液(0.1M，pH 7.3)中；在對(duì)照反應(yīng)介質(zhì)中沒有酶； -溫度30℃； -適度攪拌。
小份用甲醇稀釋2倍后，通過HPLC分析反應(yīng)介質(zhì)(方法2)。
在溫育18小時(shí)后，在不含α-葡糖苷酶酶的反應(yīng)介質(zhì)中，花旗松素葡萄糖苷分子保持不變，而在α-葡糖苷酶的酶存在的條件下，花旗松素葡萄糖苷分子完全變成花旗松素。
這些結(jié)果表明了被分離的特異性水解α-葡糖苷鍵的酶能夠水解花旗松素葡萄糖苷分子這說明了花旗松素葡萄糖苷分子包含花旗松素和葡萄糖，葡萄糖通過α-葡糖苷鍵與花旗松素的羥基連接。為此，合成的新的葡萄糖苷衍生物是要求保護(hù)的O-α-D-葡萄糖苷衍生物。
實(shí)施例5焦兒茶酚，原兒茶酸和原兒茶酸乙酯的O-α-D-糖苷的酶促合成。
反應(yīng)介質(zhì)如實(shí)施例1所述制備，花旗松素用焦兒茶酚(SIGMA，reference C 9510)代替，或用原兒茶酸(ALDRICH，reference D10，980-0)代替或用原兒茶酸乙酯(ALDRICH，reference E 2,485-9)代替。
在溫育21小時(shí)后，將每個(gè)反應(yīng)介質(zhì)的樣品用包含比例為40/60的甲醇和水的溶液稀釋5倍，并然后通過HPLC進(jìn)行分析(方法1)。
結(jié)果如下表所示。

因此有可能根據(jù)上述方法合成新的焦兒茶酚、原兒茶酸和原兒茶酸乙酯的葡糖基化衍生物得到的產(chǎn)物是一組包含至少一葡糖基化、二葡糖基化、三葡糖基化和四葡糖基化衍生物的物質(zhì)。
實(shí)施例6咖啡酸、3，4-二羥基氫化肉桂酸(氫化咖啡酸)和迷迭香酸的O-α-D-糖苷的酶促合成。
反應(yīng)介質(zhì)如實(shí)施例1所述制備，花旗松素用咖啡酸(SIGMA，reference C 0625)代替，或用3，4-二羥基氫化肉桂酸(ALDRICH，reference D10,980-0)代替或用迷迭香酸(FLUKA，reference 44699；迷迭香酸在反應(yīng)介質(zhì)中的濃度是1g/L)代替。
在溫育21小時(shí)后，將每個(gè)反應(yīng)介質(zhì)的樣品用包含比例為40/60的甲醇和水的溶液稀釋5倍，并然后通過HPLC進(jìn)行分析(方法1)。
結(jié)果如下表所示。

因此有可能根據(jù)上述方法合成新的咖啡酸、氫化咖啡酸和迷迭香酸的葡糖基化衍生物得到的產(chǎn)物是一組包含至少一葡糖基化、二葡糖基化、三葡糖基化和四葡糖基化衍生物的物質(zhì)。就氫化咖啡酸而言，其明顯顯示兩個(gè)羥基都被取代實(shí)際上，可看到至少兩個(gè)系列的衍生物，這兩個(gè)系列的衍生物都包含至少一葡糖基化(344)、二葡糖基化(506)、三葡糖基化(668)、四葡糖基化(830)和五葡糖基化(992)的衍生物。這表明，在本領(lǐng)域技術(shù)人員不可預(yù)測(cè)的某些情況下，被羥基化的兩個(gè)基團(tuán)都可接受葡萄糖部分。
實(shí)施例73，4-二羥基扁桃酸、七葉亭和七葉苷的O-α-D-糖苷的酶促合成。
反應(yīng)介質(zhì)如實(shí)施例1所述制備，花旗松素用3，4-二羥基扁桃酸(ALDRICH，reference 151610)代替，或用七葉亭(ALDRICH，reference24,657-3)或七葉苷(SIGMA，reference E 8250)代替。
在溫育21小時(shí)后，將每個(gè)反應(yīng)介質(zhì)的樣品用包含比例為40/60的甲醇和水的溶液稀釋5倍，并然后通過HPLC進(jìn)行分析(方法1)。
結(jié)果如下表所示。

3，4-二羥基扁桃酸包含焦兒茶酚結(jié)構(gòu)，花旗松素，焦兒茶酚，原兒茶酸，咖啡酸然而，在本發(fā)明條件下沒有合成出3，4-二羥基扁桃酸的葡糖基化衍生物。
令人意外的是，6，7-二羥基香豆素骨架也是得到一系列葡糖基化七葉亭的葡萄糖苷受體。必需強(qiáng)調(diào)的是，合成的七葉亭一葡萄糖苷的保留時(shí)間為15.65分鐘，而天然的葡糖基化七葉亭(七葉苷或七葉亭6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷)的保留時(shí)間為13.69分鐘這毫無疑問地是由于在天然分子的情況下苷鍵是α-型，而在七葉苷中的苷鍵是β-型。
令人意外的是，七葉苷葡萄糖苷受體大概是由于其葡萄糖部分所致。
實(shí)施例8沒食子酸、沒食子酸丙酯和表焙兒茶素沒食子酸酯的O-α-D-糖苷的酶促合成。
反應(yīng)介質(zhì)如實(shí)施例1所述準(zhǔn)備，花旗松素用沒食子酸(FLUKA，reference 48630)代替，或用沒食子酸丙酯(SIGMA，reference P3130)或用表焙兒茶素沒食子酸酯(SIGMA，reference 44699)代替，并且DMSO濃度減少至15％v/v。
在溫育6小時(shí)后，每個(gè)反應(yīng)介質(zhì)的樣品用包含比例為40/60的甲醇和水的溶液稀釋5倍，然后使用前述的HPLC設(shè)備并結(jié)合后文所述的洗脫液A(含1％v/v的乙酸的去離子水)和洗脫液B(含1％v/v的乙酸的HPLC級(jí)甲醇)進(jìn)行分析。
結(jié)果如下表所示。

分析條件 G1流速1ml/min；從0-10分鐘B線性增加，從10％到20％；10到25分鐘；B線性增加，從20％到50％；25到30分鐘B在50％穩(wěn)定；30到35分鐘B線性降低，從50％到10％。
G6流速1ml/min；0到20分鐘B線性增加，從2.5％到25％；20到25分鐘B在25％穩(wěn)定；25到28分鐘B線性降低，25％到2.5％。
因此有可能根據(jù)上述方法合成新的沒食子酸、沒食子酸丙酯和表焙兒茶素沒食子酸酯的葡糖基化衍生物得到的產(chǎn)物是一組包含至少一葡糖基化衍生物的物質(zhì)。
實(shí)施例9咖啡酸苯乙酯、綠原酸和3，4-二羥基二苯甲酮的O-α-D-糖苷的酶促合成。
反應(yīng)介質(zhì)如實(shí)施例1所述準(zhǔn)備，花旗松素用咖啡酸苯乙酯(SIGMA，reference C8221)代替，或用綠原酸(SIGMA，reference C3878)或用3，4-二羥基二苯甲酮(ALDRICH，reference 579815)代替，并且DMSO濃度是15％和25％v/v。
在溫育6小時(shí)后，每個(gè)反應(yīng)介質(zhì)的樣品用包含比例為40/60的甲醇和水的溶液稀釋5倍，然后使用前述的HPLC設(shè)備并結(jié)合后文所述的洗脫液A(含1％v/v的乙酸的去離子水)和洗脫液B(含1％v/v的乙酸的HPLC級(jí)甲醇)進(jìn)行分析。
結(jié)果如下表所示。
分析條件 G1參見實(shí)施例8 G2流速1ml/min；0到20分鐘B線性增加，從40％到80％；20到22分鐘B在80％穩(wěn)定；22到27分鐘B線性降低，80％到40％。
因此有可能根據(jù)上述方法合成新的咖啡酸苯乙酯、綠原酸和3，4-二羥基二苯甲酮的葡糖基化衍生物得到的產(chǎn)物是一組包含至少一葡糖基化衍生物的物質(zhì)。
實(shí)施例10兒茶素、圣草酚、漆黃素、橄欖苦苷和去甲二氫愈創(chuàng)木酸的O-α-D-糖苷的酶促合成。
反應(yīng)介質(zhì)如實(shí)施例1所述準(zhǔn)備，花旗松素用兒茶素(FLUKA，reference 22110)代替，或用圣草酚(EXTRASYNTHESE，reference 0056)代替，或用漆黃素(SIGMA，reference F4043)代替，或用橄欖苦苷(EXTRASYNTHESE，reference 0204)或用去甲二氫愈創(chuàng)木酸(EXTRASYNTHESE，reference6135)代替，并且DMSO濃度是15％和25％v/v。
在溫育6小時(shí)后，每個(gè)反應(yīng)介質(zhì)的樣品用包含比例為40/60的甲醇和水的溶液稀釋5倍，然后使用前述的HPLC設(shè)備并結(jié)合后文所述的洗脫液A(含1％v/v的乙酸的去離子水)和洗脫液B(含1％v/v的乙酸的HPLC級(jí)甲醇)進(jìn)行分析。
結(jié)果如下表所示。
分析條件 G1參見實(shí)施例8 G2參見實(shí)施例9 因此有可能根據(jù)上述方法合成新的兒茶素、圣草酚、漆黃素、橄欖苦苷和去甲二氫愈創(chuàng)木酸的葡糖基化衍生物得到的產(chǎn)物是一組包含至少一葡糖基化衍生物的物質(zhì)。
實(shí)施例11在嚴(yán)格的含水介質(zhì)中兒茶素、3，4-二羥基苯甲酸、沒食子酸、迷迭香酸、咖啡酸和綠原酸的O-α-D-糖苷的酶促合成 反應(yīng)介質(zhì)如實(shí)施例1所述制備，花旗松素用7.5g/L濃度的兒茶素(FLUKA，reference 22110)代替，或用9.0g/L濃度的3，4-二羥基苯甲酸(ALDRICH，reference D10,980-0)代替，或用9.0g/L濃度的沒食子酸(FLUKA，reference 48630)代替，或用7.5g/L濃度的迷迭香酸(FLUKA，reference 44699)代替，或用9.0g/L濃度的咖啡酸(SIGMA，referenceC0625)或用7.5g/L濃度的綠原酸(SIGMA，reference C3878)代替。省略了DMSO的使用，而乙酸鈉緩沖劑濃度增加到100mM并且酶活性降低至1.0U/ml。
在溫育6小時(shí)后，每個(gè)反應(yīng)介質(zhì)的樣品用包含比例為40/60的甲醇和水的溶液稀釋5倍，然后使用前述的HPLC設(shè)備并結(jié)合后文所述的洗脫液A(含1％v/v的乙酸的去離子水)和洗脫液B(含1％v/v的乙酸的HPLC級(jí)甲醇)進(jìn)行分析。
結(jié)果如下表所示。
分析條件 G1參見實(shí)施例8 因此有可能根據(jù)上述方法在缺乏有機(jī)溶劑的條件下合成新的兒茶素、沒食子酸、咖啡酸、3，4-二羥基苯甲酸、迷迭香酸和綠原酸的葡糖基化衍生物得到的產(chǎn)物是一組包含至少一葡糖基化衍生物的物質(zhì)。
實(shí)施例12關(guān)于柔花酸、茜素、腎上腺素、蘆丁和黃芩素的O-α-D-糖苷的酶促合成的嘗試。
反應(yīng)介質(zhì)如實(shí)施例1所述準(zhǔn)備，花旗松素用柔花酸(FLUKA，reference 45140)代替，或用蘆丁(SIGMA，reference R5143)代替，或用茜素(EXTRASYNTHESE，reference 0411)代替，或用腎上腺素(SIGMA，reference E4250)代替，或用黃芩素(FLUKA，reference 11712)代替。DMSO濃度是25％v/v。
在溫育6小時(shí)和21小時(shí)后，每個(gè)反應(yīng)介質(zhì)的樣品用包含比例為40/60的甲醇和水的溶液稀釋5倍，然后使用前述的HPLC設(shè)備并結(jié)合后文所述的洗脫液A(含1％v/v的乙酸的去離子水)和洗脫液B(含1％v/v的乙酸的HPLC級(jí)甲醇)進(jìn)行分析。
結(jié)果如下表所示。
分析條件 G1參見實(shí)施例8 G2參見實(shí)施例9 G6參見實(shí)施例8 G4流速1ml/min；從0-10分鐘B線性增加，從40％到80％；10到15分鐘B在80％穩(wěn)定；15到20分鐘B線性降低，80％到40％。
盡管供試物質(zhì)包含焦兒茶酚結(jié)構(gòu)，但是環(huán)的取代基不允許它們被酶所識(shí)別。在蘆丁的情況中，3-O-蕓香苷的糖部分似乎對(duì)于酶識(shí)別非常重要，因?yàn)殚纹に卦?’和/或4’位被葡糖基化(BERTRAND等)，而蘆丁無此作用。
柔花酸
蘆丁
茜素
腎上腺素
黃芩素

權(quán)利要求
1.制備酚類化合物O-α-葡萄糖苷的方法，該方法包括將蔗糖與得自明串珠菌(Leuconostoc species)、優(yōu)選得自腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)NRRL B-512F的葡聚糖蔗糖酶以及具有下式所示結(jié)構(gòu)的酚類化合物溫育
其中
R2是H或OH；和
R1選自
其中R3和R4獨(dú)立地是H或OH，前提條件是R3和R4中至少一個(gè)表示OH；
其中R7選自H，-OH或-OCOR且R8是H或OH，前提條件是R7和R8中至少一個(gè)表示OH；
其中R5是OH或OCH3；R6是H或OH，R9是H或OH，R10是H，OCH3或C6H11O5，和R11是H，OH或C6H11O5，前提條件是當(dāng)R5和R6同時(shí)是OH時(shí)R10和R11不能同時(shí)是H，和當(dāng)R10是C6H11O5時(shí)R11是H；
- -(CH2)n-COOR或-(CH2)n-CONHR，n是0-2的整數(shù)；
- -(CR12＝CH)-COOR或-(CR12＝CH)-CONHR，R12是H或C1-C6直鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，優(yōu)選甲基，乙基，丙基，環(huán)己基或苯基；
- -(CH2)n-OR或-(CH2)n-NHR，n是0-2的整數(shù)；
- -(CH2)n-COR或-(CH＝CH)n-COR，n是0-2的整數(shù)；
--H；
- C1-C10烴基，其與式(I)中所示的環(huán)以及R1的鄰位碳一起形成稠環(huán)(雙環(huán)或三環(huán))，所述環(huán)任選地被至少一個(gè)雜原子中斷；
其中R是H或直鏈、支鏈或環(huán)狀的，芳香或非芳香的，飽和或不飽和的C1-C10烴基，任選地被至少一個(gè)雜原子中斷，其中所述烴基包括烷基，烯基或炔基，優(yōu)選烷基或烯基，其可被一個(gè)或幾個(gè)選自以下的取代基取代(C5-C9)芳基，(C4-C9)雜環(huán)，(C1-C3)烷氧基，(C2-C3)酰基，(C1-C3)醇，羧基(-COOH)，(C2-C3)酯，(C1-C3)胺，氨基(-NH2)，酰胺(-CONH2)，(C1-C3)亞胺，腈，羥基(-OH)，醛基(-CHO)，鹵素，(C1-C3)鹵代烷基，硫醇(-SH)，(C1-C3)硫烷基，(C1-C3)砜，(C1-C3)亞砜及其組合。
2.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是
其中R3和R4獨(dú)立地是H或OH，前提條件是R3和R4中至少一個(gè)表示OH。
3.權(quán)利要求2的方法，其中酚類化合物選自花旗松素，圣草酚，雙氫刺槐亭和黃顏木素。
4.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是
其中R7選自H，-OH或-OCOR且R8是H或OH，前提條件是R7和R8中至少一個(gè)表示OH。
5.權(quán)利要求4的方法，其中酚類化合物選自兒茶素，表兒茶素，兒茶素沒食子酸酯，表兒茶素沒食子酸酯，焙兒茶素，表焙兒茶素，焙兒茶素沒食子酸酯和表焙兒茶素沒食子酸酯。
6.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是
其中R5是OH或OCH3；R6是H或OH，R9是H或OH，R10是H，OCH3或C6H11O5，和R11是H，OH或C6H11O5，前提條件是當(dāng)R5和R6同時(shí)是OH時(shí)R10和R11不能同時(shí)是H，和當(dāng)R10是C6H11O5時(shí)R11是H。
7.權(quán)利要求6的方法，其中酚類化合物選自鼠李亭，漆黃素，刺槐亭，棉皮皮素，葒草素，異葒草素和5，3’，4’-三羥基-6，7-二甲氧基黃酮。
8.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是
-(CH2)n-COOR或-(CH2)n-CONHR，n是0-2的整數(shù)。
9.權(quán)利要求8的方法，其中酚類化合物選自高原兒茶酸，二氫咖啡酸，原兒茶酸乙酯，沒食子酸丙酯，沒食子酸，金縷梅丹寧(2’，5-二-O-沒食子?；?金縷梅糖)和原兒茶酸。
10.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是-(CR12＝CH)-COOR或-(CR12＝CH)-CONHR，R12是H或C1-C6直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，優(yōu)選甲基，乙基，丙基，環(huán)己基或苯基，更優(yōu)選甲基或苯基。
11.權(quán)利要求10的方法，其中酚類化合物選自咖啡酸，迷迭香酸，七葉亭，4-甲基七葉亭，去甲黃檀素(6，7-二羥基苯基香豆素)，綠原酸，咖啡酸苯乙酯，菊苣酸(二咖啡?；剖?，松果菊苷(2-(3，4-二羥基苯基)乙基O-6-脫氧-α-L-吡喃甘露糖基-(1→3)-O-(β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6))-，4-(3-(3，4-二羥基苯基)-2-丙烯酸酯)，β-D-吡喃葡萄糖苷)和毛蕊花苷。
12.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是
-(CH2)n-OR或-(CH2)n-NHR，n是0-2的整數(shù)，例如酚類化合物是羥基酪醇。
13.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是
-(CH2)n-COR或-(CH＝CH)n-COR，n是0-2的整數(shù)。
14.權(quán)利要求13的方法，其中酚類化合物選自桑橙素，3，4-二羥基苯甲醛，3，4-二羥基二苯甲酮，紫鉚花素(2’，3，4，4’-四羥基查耳酮)，3，4-二羥基苯乙酮，馬里苷(2’，3，3’，4，4’-五羥基-4’-葡糖基查耳酮)和圣草酚查耳酮(2’，4’，6’，3，4-五羥基查耳酮)。
15.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是H，例如酚類化合物是焦兒茶酚。
16.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是
例如酚類化合物是去甲二氫愈創(chuàng)木酸。
17.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是
例如酚類化合物是3-羥基大豆苷元。
18.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是
例如酚類化合物是橄欖苦苷。
19.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是
例如酚類化合物是金雞菊甙(3’，4’，6，7-四羥基-6-O-葡糖基噢哢)。
20.權(quán)利要求1的方法，其中酚類化合物的R1是C1-C10烴基，其與式(I)中所示的環(huán)以及R1的鄰位碳一起形成稠環(huán)(雙環(huán)或三環(huán))，所述環(huán)任選地被至少一個(gè)雜原子中斷。
21.權(quán)利要求20的方法，其中酚類化合物選自
優(yōu)選酚類化合物是脫氧茜素或去甲豬毛菜堿(1-甲基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉)。
22.如下式所示的酚類化合物O-α-葡萄糖苷
其中
A和B，相同或不同，是H或α-葡糖基殘基，前提條件是A和B中至少一個(gè)是α-葡糖基殘基；
R2是H或OH；和，
R1選自
其中R3和R4獨(dú)立地是H或OH，前提條件是R3和R4中至少一個(gè)表示OH；
其中R7選自H，-OH或-OCOR且R8是H或OH，前提條件是，當(dāng)R2是H時(shí)，R7和R8不同時(shí)是OH，并且R7和R8中至少一個(gè)是OH；
其中R5是OH或OCH3；R6是H或OH，R9是H或OH，R10是H，OCH3或C6H11O5，和R11是H，OH或C6H11O5，前提條件是當(dāng)R5和R6同時(shí)是OH時(shí)R10和R11不同時(shí)是H，和當(dāng)R10是C6H11O5時(shí)R11是H；
- -(CH2)n-COOR或-(CH2)n-CONHR，n是0-2的整數(shù)；
- -(CR12＝CH)-COOR或-(CR12＝CH)-CONHR，R12是H或C1-C6直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，優(yōu)選甲基，乙基，丙基，環(huán)己基或苯基，更優(yōu)選甲基或苯基；
- -(CH2)n-OR或-(CH2)n-NHR，n是0-2的整數(shù)；
- -(CH2)n-COR或-(CH＝CH)n-COR，n是0-2的整數(shù)；
-H；
-C1-C10烴基，其與式(I)中所示的環(huán)以及R1的鄰位碳一起形成稠環(huán)(雙環(huán)或三環(huán))，所述環(huán)任選地被至少一個(gè)雜原子中斷；
其中R是H或直鏈、支鏈或環(huán)狀的，芳香或非芳香的，飽和或不飽和的C1-C10烴基，任選地被至少一個(gè)雜原子中斷，其中所述烴基包括烷基，烯基或炔基，優(yōu)選烷基或烯基，其可被一個(gè)或幾個(gè)選自以下的取代基取代(C5-C9)芳基，(C4-C9)雜環(huán)，(C1-C3)烷氧基，(C2-C3)酰基，(C1-C3)醇，羧基(-COOH)，(C2-C3)酯，(C1-C3)胺，氨基(-NH2)，酰胺(-CONH2)，(C1-C3)亞胺，腈，羥基(-OH)，醛基(-CHO)，鹵素，(C1-C3)鹵代烷基，硫醇(-SH)，(C1-C3)硫烷基，(C1-C3)砜，(C1-C3)亞砜及其組合。
23.權(quán)利要求22的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中R1是
并且優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自花旗松素O-α-葡萄糖苷，圣草酚O-α-葡萄糖苷，雙氫刺槐亭O-α-葡萄糖苷和黃顏木素O-α-葡萄糖苷。
24.權(quán)利要求22的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中R1是
并且優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自兒茶素沒食子酸酯O-α-葡萄糖苷，表兒茶素沒食子酸酯O-α-葡萄糖苷，焙兒茶素O-α-葡萄糖苷，表焙兒茶素O-α-葡萄糖苷，焙兒茶素沒食子酸酯O-α-葡萄糖苷和表焙兒茶素沒食子酸酯O-α-葡萄糖苷。
25.權(quán)利要求22的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中R1是
并且優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自鼠李亭O-α-葡萄糖苷，漆黃素O-α-葡萄糖苷，刺槐亭O-α-葡萄糖苷，棉皮皮素O-α-葡萄糖苷，葒草素O-α-葡萄糖苷，異葒草素O-α-葡萄糖苷和5，3’，4’-三羥基-6，7-二甲氧基黃酮O-α-葡萄糖苷。
26.權(quán)利要求22的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中R1是
-(CH2)n-COOR或-(CH2)n-CONHR，n是0-2的整數(shù)，并且優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自高原兒茶酸O-α-葡萄糖苷，二氫咖啡酸O-α-葡萄糖苷，原兒茶酸乙酯O-α-葡萄糖苷，沒食子酸丙酯O-α-葡萄糖苷，沒食子酸O-α-葡萄糖苷，金縷梅丹寧O-α-葡萄糖苷和原兒茶酸O-α-葡萄糖苷。
27.權(quán)利要求22的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中R1是
-(CR12＝CH)-COOR或-(CR12＝CH)-CONHR，R12是H或C1-C6直鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，優(yōu)選甲基，乙基，丙基，環(huán)己基或苯基，并且優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自咖啡酸O-α-葡萄糖苷，迷迭香酸O-α-葡萄糖苷，七葉亭O-α-葡萄糖苷，4-甲基七葉亭O-α-葡萄糖苷，去甲黃檀素(6，7-二羥基苯基香豆素)O-α-葡萄糖苷，綠原酸O-α-葡萄糖苷，咖啡酸苯乙酯O-α-葡萄糖苷，菊苣酸(二咖啡?；剖?O-α-葡萄糖苷，松果菊苷(2-(3，4-二羥基苯基)乙基O-6-脫氧-α-L-吡喃甘露糖基-(1→3)-O-(β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6))-，4-(3-(3，4-二羥基苯基)-2-丙烯酸酯)O-α-葡萄糖苷，β-D-吡喃葡萄糖苷O-α-葡萄糖苷和毛蕊花苷O-α-葡萄糖苷。
28.權(quán)利要求22的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中R1是
-(CH2)n-OR或-(CH2)n-NHR，n是0-2的整數(shù)，并且優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷是羥基酪醇O-α-葡萄糖苷。
29.權(quán)利要求22的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中R1是
-(CH2)n-COR或-(CH＝CH)n-COR，n是0-2的整數(shù)，并且優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自桑橙素O-α-葡萄糖苷，3，4-二羥基苯甲醛O-α-葡萄糖苷，3，4-二羥基二苯甲酮O-α-葡萄糖苷，紫鉚花素(2’，3，4，4’-四羥基查耳酮)O-α-葡萄糖苷，3，4-二羥基苯乙酮O-α-葡萄糖苷，馬里苷(2’，3，3’，4，4’-五羥基-4’-葡糖基查耳酮)O-α-葡萄糖苷和圣草酚查耳酮(2’，4’，6’，3，4-五羥基查耳酮)O-α-葡萄糖苷。
30.權(quán)利要求22的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中R1選自
并且優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自焦兒茶酚O-α-葡萄糖苷，去甲二氫愈創(chuàng)木酸O-α-葡萄糖苷，3-羥基大豆苷元O-α-葡萄糖苷，橄欖苦苷O-α-葡萄糖苷和金雞菊甙(3’，4’，6，7-四羥基-6-O-葡糖基噢哢)O-α-葡萄糖苷。
31.權(quán)利要求22的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中R1是C1-C10烴基，其與式(I)中所示的環(huán)以及R1的鄰位碳一起形成稠環(huán)(雙環(huán)或三環(huán))，所述環(huán)任選地被至少一個(gè)雜原子中斷，并且優(yōu)選地，酚類化合物O-α-葡萄糖苷選自脫氧茜素O-α-葡萄糖苷和去甲豬毛菜堿(1-甲基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉)O-α-葡萄糖苷。
32.權(quán)利要求22-31中任一項(xiàng)的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中所述O-α-葡糖基殘基是葡萄糖單體。
33.權(quán)利要求22-32中任一項(xiàng)的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其在相同的生理?xiàng)l件下具有的溶解度比相應(yīng)的糖苷配基的溶劑度高20倍。
34.權(quán)利要求22-33中任一項(xiàng)的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中所述酚類化合物O-α-葡萄糖苷可通過酶裂解以釋放相應(yīng)的糖苷配基。
35.權(quán)利要求34的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其中所述酶由與人結(jié)合的微生物、特別是與人皮膚結(jié)合的微生物產(chǎn)生。
36.權(quán)利要求22-35中任一項(xiàng)的酚類化合物O-α-葡萄糖苷，其作為藥物。
37.藥物組合物或化妝品組合物，其包括權(quán)利要求22-35中任一項(xiàng)的酚類化合物O-α-葡萄糖苷。
38.權(quán)利要求22-35中任一項(xiàng)的酚類化合物O-α-葡萄糖苷在制備要通過局部、經(jīng)口、經(jīng)直腸、經(jīng)鼻或經(jīng)陰道給藥的藥物組合物或化妝品組合物中的應(yīng)用，其中與皮膚、口、腸道、上呼吸系統(tǒng)或雌性生殖道結(jié)合的微生物產(chǎn)生的酶使相應(yīng)的糖苷配基釋放。
39.權(quán)利要求22-35中任一項(xiàng)的酚類化合物O-α-葡萄糖苷在制備用于治療或預(yù)防癌、心血管疾病、細(xì)菌感染、UVB誘導(dǎo)的紅斑、變態(tài)反應(yīng)、炎性或免疫病癥的藥物組合物或化妝品組合物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過選自焦兒茶酚或其衍生物的酚類化合物與蔗糖的葡萄糖部分進(jìn)行酶促縮合制備酚類化合物的衍生物。所述酚類化合物的衍生物的制備使用糖基轉(zhuǎn)移酶(EC 2.4.1.5)完成。這些被選擇的酚類化合物的葡萄糖苷是新的，在水中的溶解度高于其母體多酚在水中的溶解度，并且可用在化妝品組合物和藥物組合物中，諸如用在抗氧化、抗病毒、抗菌、免疫刺激、抗過敏、抗高血壓、抗缺血、抗心率不齊、抗血栓形成、降膽固醇、抗脂質(zhì)過氧化、肝保護(hù)、抗炎、抗癌、抗誘變、抗腫瘤、抗血栓和血管舒張的制劑，和任何其它的應(yīng)用領(lǐng)域中。
文檔編號(hào)C12P17/02GK101611148SQ200780022307
公開日2009年12月23日 申請(qǐng)日期2007年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月14日
發(fā)明者丹尼爾·奧里奧爾, 雷諾·納林, 帕特里克·羅布, 法布里斯·勒菲弗 申請(qǐng)人:利布萊根公司