專利名稱：無氰化鉀溶血劑的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種無氰化鉀溶血劑的生產(chǎn)方法，特別涉及一種不含氰化鉀的國產(chǎn)TEK系列三分群血細胞分析儀使用的無毒溶血劑的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
三分群血細胞分析儀是目前我國普及使用的血常規(guī)檢測儀器，長期以來這類儀器和試劑在我國均為進口，因試劑價格高昂和供貨不及時等原因給醫(yī)院和患者帶來沉重的經(jīng)濟負擔(dān)和不便。在我國普及使用的三份群血細胞分析儀中，各種品牌不少于20種，由于各種儀器的稀釋比例和測定方法的差異，各種儀器的試劑配方各不相同，不同型號和生產(chǎn)廠家的血細胞分析儀必須使用專用的配套試劑，這是血細胞分析儀試劑開發(fā)的一個重要難點。
溶血劑是三分群血細胞分析儀試劑中的最主要試劑，它第一個作用是在稀釋液的配合作用下，使紅細胞膜在極短的時間內(nèi)完全溶解，使各種白細胞在規(guī)定時間內(nèi)通過改變白細胞的細胞膜結(jié)構(gòu)，適當?shù)尼尫鸥黝惏准毎麅?nèi)容物，控制各類白細胞體積大小維持在一定范圍。第二個作用是血紅蛋白含量的測定，是當溶血劑使紅細胞破碎釋放出血紅蛋白(Hb)后，血紅蛋白與溶血劑中的氰化鉀結(jié)合形成氰化血紅蛋白，在特定波長(一般在530～550nm)下比色，吸光度的變化與液體中Hb含量成比例，儀器便可顯示Hb濃度。
因此評價溶血劑質(zhì)量的好壞，不僅要考慮在一定作用時間內(nèi)分類計數(shù)的準確性，還要考慮血紅蛋白測定的準確性。
現(xiàn)有的TEK血細胞分析儀溶血劑的主要缺點是1、產(chǎn)品成本高；2、使用劇毒氰化鉀測定血紅蛋白；3、加入防腐劑影響分類測定效果、增加生產(chǎn)成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種無氰化鉀溶血劑的生產(chǎn)方法，它工藝配方合理、原料易得，生產(chǎn)成本低廉，生產(chǎn)的溶血劑無毒、不含防腐劑。
本發(fā)明是這樣來實現(xiàn)的，生產(chǎn)的原料主要是十二烷基季胺鹽和乙二胺四乙酸，其工藝步驟為1、純凈水制備純凈水采用自來水制備，步驟包括(1)電滲析除鹽；(2)陰、陽離子交換柱除鹽；(3)0.22微米超慮過濾除微粒，使純凈水的電導(dǎo)率小于5μs/cm；2、緩沖液配制配制1/30M，PH＝7.0的Na2HPO4-KH2PO4緩沖液100升，充分攪混勻，0.22微米超濾過濾；3、乙二胺四乙酸溶解將25～200克乙二胺四乙酸用10～20升Na2HPO4-KH2PO4緩沖液加熱溶解，充分攪混勻，冷卻備用；4、十二烷基季胺鹽溶解將500～4000克十二烷基季胺鹽用10～20升Na2HPO4-KH2PO4緩沖液加熱溶解，充分攪拌勻，冷卻備用；5、定容將溶解備用的乙二胺四乙酸溶液和十二烷基季胺鹽溶液與剩余的磷酸鹽緩沖液混和，用電導(dǎo)率小于5μs/cm的純凈水定容到100升，充分攪混勻；6、過濾灌裝將定容混勻好的溶血劑，用0.22微米超慮過濾，用塑料瓶灌裝，密封，包裝；7、包裝材料處理(1)5L軟包裝或1L塑料瓶用5～30％洗潔精浸泡6～12小時；(2)電導(dǎo)率小于5μs/cm的純凈水蕩洗3～4次，要求沒有泡沫為止；(3)蕩洗完畢，將水清空，每個包裝里加入50～1000μl的甲醛，密封待用；8、產(chǎn)品生產(chǎn)過程要求是在30萬級的潔凈廠房或相對封閉的潔凈生產(chǎn)環(huán)境中進行。所有生產(chǎn)設(shè)備和管道(包括純凈水陽離子交換柱之后的設(shè)備和管道)每天配制之后必須用5~30％NaOH溶液浸泡，配制之前放出NaOH溶液，用電導(dǎo)率小于5μs/cm的純凈水沖洗3～4遍，測定洗水PH值接近中性為止。最后的過濾灌裝必須盡可能的在密閉條件下進行，灌裝完畢立刻密封包裝。
本產(chǎn)品為無毒環(huán)保產(chǎn)品，其淋巴和中性粒細胞檢測結(jié)果與顯微鏡檢測結(jié)果可達極為相關(guān)(r＞0.96)，t檢驗，P＞0.05，無顯著性差異。
血紅蛋白測定采用無毒無害的乙二胺四乙酸代替劇毒的氰化鉀，該試劑在血紅蛋白含量0～300g/l濃度范圍，線性R2＝0.9951，用20份低、中、高值血樣檢測結(jié)果與經(jīng)典氰化高鐵法檢測結(jié)果，相關(guān)性r＝0.9995，t檢驗，P＞0.05，無顯著性差異。
本發(fā)明的積極效果是1、利用十二烷基季胺鹽作為溶血劑的主要成分，十二烷基季胺鹽對細胞的作用強度合適，可以在很寬的濃度范圍進行選擇配制，且在這些濃度范圍中對不同細胞的作用強度有明顯的區(qū)分，可以根據(jù)細胞計數(shù)和分類的要求選擇合適的作用濃度；2、通過對乙二胺四乙酸測定血紅蛋白的吸收峰的掃描，可知其在537nm處有明顯的吸收峰。通過對乙二胺四乙酸測定血紅蛋白的線性測定，可知乙二胺四乙酸測定血紅蛋白，在0～300g/l的血紅蛋白的濃度范圍內(nèi)檢測準確性可以達到臨床要求，可以替代氰化鉀用于血紅蛋白測定。產(chǎn)品無毒環(huán)保，更加受到消費者的青睞；3、本產(chǎn)品運用GMP質(zhì)量管理原則，結(jié)合實際經(jīng)驗，制定了科學(xué)合理的生產(chǎn)工藝，產(chǎn)品不添加防腐劑，保質(zhì)期可達到2年；4、本方法的生產(chǎn)工藝簡單、容易實現(xiàn)工業(yè)化。
具體實施例方式
實施例一、以國產(chǎn)TEK-II三分群血細胞分析儀溶血劑為例，其工藝步驟為1、純凈水制備純凈水采用自來水制備，步驟包括(1)電滲析除鹽；(2)陰、陽離子交換柱除鹽；(3)0.22微米超慮過濾除微粒，使純凈水的電導(dǎo)率小于5μs/cm；2、緩沖液配制配制1/30M，PH＝7.0的Na2HPO4-KH2PO4緩沖液100升，充分攪混勻，0.22微米超濾過濾；
3、乙二胺四乙酸溶解將100克乙二胺四乙酸用10～20升Na2HPO4-KH2PO4緩沖液加熱溶解，充分攪混勻，冷卻備用；4、十二烷基季胺鹽溶解將2000克十二烷基季胺鹽用10～20升Na2HPO4-KH2PO4緩沖液加熱溶解，充分攪拌勻，冷卻備用；5、定容配制將溶解備用的乙二胺四乙酸溶液和十二烷基季胺鹽溶液用剩余的磷酸鹽緩沖液混和，用電導(dǎo)率小于5μs/cm的純凈水定容到100升，充分攪混勻；6、過濾灌裝將定容混勻好的溶血劑，用0.22微米超慮過濾，用5L軟包裝或1L塑料瓶灌裝，密封，包裝；7、包裝材料處理(1)5L軟包裝或1L塑料瓶用10％洗潔精浸泡6～12小時；(2)電導(dǎo)率小于5μs/cm的純凈水蕩洗3～4次，要求沒有泡沫為止；(3)蕩洗完畢，將水清空，每個包裝里加入100～300μl的甲醛，密封待用；8、產(chǎn)品生產(chǎn)過程要求是在30萬級的潔凈廠房或相對封閉的潔凈生產(chǎn)環(huán)境中生產(chǎn)。所有生產(chǎn)設(shè)備和管道(包括純凈水陽離子交換柱之后的設(shè)備和管道)每天配制之后必須用5~30％NaOH溶液浸泡，配制之前放出NaOH溶液，用電導(dǎo)率小于5μs/cm的純凈水沖洗3～4遍，測定洗水PH值接近中性為止。最后的過濾灌裝必須盡可能的在密閉條件進行，灌裝完畢立刻密封包裝。
權(quán)利要求
1.一種無氰化鉀溶血劑的生產(chǎn)方法，生產(chǎn)的原料主要是十二烷基季胺鹽和乙二胺四乙酸，其特征是工藝步驟為1)純凈水制備純凈水采用自來水制備，步驟包括(1)電滲析除鹽；(2)陰、陽離子交換柱除鹽；(3)0.22微米超慮過濾除微粒，使純凈水的電導(dǎo)率小于5μs/cm；2)緩沖液配制配制1/30M，PH＝7.0的Na2HPO4-KH2PO4緩沖液100升，充分攪混勻，0.22微米超濾過濾；3)乙二胺四乙酸溶解將25～200克乙二胺四乙酸用10～20升Na2HPO4-KH2PO4緩沖液加熱溶解，充分攪混勻，冷卻備用；4)十二烷基季胺鹽溶解將500～4000克十二烷基季胺鹽用10～20升Na2HPO4-KH2PO4緩沖液加熱溶解，充分攪拌勻，冷卻備用；5)定容將溶解備用的乙二胺四乙酸溶液和十二烷基季胺鹽溶液與剩余的磷酸鹽緩沖液混和，用電導(dǎo)率小于5μs/cm的純凈水定容到100升，充分攪混勻；6)過濾灌裝將定容混勻好的溶血劑，用0.22微米超慮過濾，用塑料瓶灌裝，密封，包裝。
全文摘要
一種不含氰化鉀的國產(chǎn)TEK系列三分群血細胞分析儀使用的溶血劑的生產(chǎn)方法，采用十二烷基季胺鹽為溶血劑主要作用試劑，使用無毒物質(zhì)替代劇毒氰化鉀測定血紅蛋白，其工藝步驟為(1)純凈水制備；(2)緩沖液配制；(3)乙二胺四乙酸溶解；(4)十二烷基季胺鹽溶解；(5)定容配制；(6)過濾灌裝。本產(chǎn)品工藝配方合理，原料易得，易于加工、成本低廉，不添加防腐劑。
文檔編號C12Q1/02GK101021524SQ20071005157
公開日2007年8月22日 申請日期2007年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月12日
發(fā)明者羅舜菁, 劉成梅, 鄒常春, 涂宗財 申請人:南昌大學(xué)