專利名稱：誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，尤其是NL895品種的胚性細(xì)胞發(fā)生方法，包括其激素水平及培養(yǎng)日令的選擇。
背景技術(shù)：
NL895是黑楊派楊樹品種，具有速生、優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、樹干通直圓滿、尖削度小、樹皮薄、單板出材率高及濕心材含量低等優(yōu)點，不同立地條件下，平均7年生材積生長量超過對照24.22％～53.22％，木材密度提高3.2％～5％，單板出材率提高12.4％～15.0％，濕心材含量低的無性系比對照降低15.0％～16.0％。其次，還具有較強的適應(yīng)性和遺傳穩(wěn)定性，在黃淮地區(qū)花斑鹽堿地上生長良好，材積生長量可超過對照92.44％～138.68％?？瓜x抗病性較強，尤其對蛀干害蟲和葉部病害表現(xiàn)較強抗性。適種黃淮、江淮及長江中下游的廣大平原地區(qū)。
黑楊派楊樹為木本植物，因個體大存在不易處理和不易大量處理的困難，如何快速組織培養(yǎng)是科學(xué)界關(guān)注的熱點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹(NL895)胚性細(xì)胞發(fā)生方法，為NL895胚性細(xì)胞的培育提供重要參考資料。
本發(fā)明目的通過下述方法方案實現(xiàn)一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，選取NL895優(yōu)質(zhì)組培苗切成0.1～0.2cm的小段作為外植體，接種于脫分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其中，脫分化培養(yǎng)基為MS+KT0.1-0.4mg/L+2，4-D0.1-0.6mg/L，使外植體器官脫分化，形成愈傷組織，然后，對愈傷組織進(jìn)行再分化培養(yǎng)。
所述的脫分化培養(yǎng)72～144小時，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時間為12～14小時/天，光照強度為2000～3000lux。
所述的再分化培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。
所述的再分化培養(yǎng)時間為72～120小時，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時間為12～14小時/天，光照強度為2000～3000lux。
利用誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，培育出大量黑楊派楊樹(NL895)胚性細(xì)胞，從而通過誘變獲得變異體。
本發(fā)明的優(yōu)點是通過培養(yǎng)基培養(yǎng)，克服了林木生活周期長，個體大的劣勢，獲得大量的，具有細(xì)胞全能性的NL895胚性細(xì)胞，為NL895誘變育種中篩選耐鹽堿、耐旱、抗病、高產(chǎn)等優(yōu)良突變體提供了重要技術(shù)前提。
具體實施例方式
實施例1一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，選取南林895(NL895/2000)(P.×Euroamericana CL“NL895”)優(yōu)質(zhì)組培苗切成0.1～0.2cm的小段作為外植體，接種于脫分化培養(yǎng)基，即MS+KT0.2mg/L+2，4-D 0.2mg/L中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時間為12～14小時/天，光照強度為2000～3000lux，使外植體器官脫分化，形成愈傷組織。
培養(yǎng)72～144小時后，將愈傷組織轉(zhuǎn)移至再分化培養(yǎng)基，即MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L中進(jìn)行再分化培養(yǎng)，培養(yǎng)72～120小時，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時間為12～14小時/天，光照強度為2000～3000lux。此時為胚性細(xì)胞發(fā)生率最高，為50～80％。
利用該誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，培育出大量黑楊派楊樹(NL895)胚性細(xì)胞，從而通過誘變獲得變異體。
實施例2一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，選取南林895(NL895/2000)(P.×Euroamericana CL“NL895”)優(yōu)質(zhì)組培苗切成0.1～0.2cm的小段作為外植體，接種于脫分化培養(yǎng)基，即MS+KT 0.1mg/L+2，4-D0.6mg/L中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時間為12～14小時/天，光照強度為2000～3000lux，使外植體器官脫分化，形成愈傷組織。
培養(yǎng)72～144小時后，將愈傷組織轉(zhuǎn)移至再分化培養(yǎng)基，即MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.3mg/L中進(jìn)行再分化培養(yǎng)，培養(yǎng)72～120小時，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時間為12～14小時/天，光照強度為2000～3000lux。此時為胚性細(xì)胞發(fā)生率最高，為50～80％。利用該誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，培育出大量黑楊派楊樹(NL895)胚性細(xì)胞，從而通過誘變獲得變異體。
實施例3一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，選取南林895(NL895/2000)(P.×Euroamericana CL“NL895”)優(yōu)質(zhì)組培苗切成0.1～0.2cm的小段作為外植體，接種于脫分化培養(yǎng)基，即MS+KT 0.4mg/L+2，4-D0.1mg/L中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時間為12～14小時/天，光照強度為2000～3000lux，使外植體器官脫分化，形成愈傷組織。
培養(yǎng)72～144小時后，將愈傷組織轉(zhuǎn)移至再分化培養(yǎng)基，即MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L中進(jìn)行再分化培養(yǎng)，培養(yǎng)72～120小時，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時間為12～14小時/天，光照強度為2000～3000lux。此時為胚性細(xì)胞發(fā)生率最高，為50～80％。利用該誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，培育出大量黑楊派楊樹(NL895)胚性細(xì)胞，從而通過誘變獲得變異體。
權(quán)利要求
1.一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，選取NL895優(yōu)質(zhì)組培苗切成0.1～0.2cm的小段作為外植體，接種于脫分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其中，脫分化培養(yǎng)基為MS+KT0.1-0.4mg/L+2，4-D 0.1-0.6mg/L，使外植體器官脫分化，形成愈傷組織，然后，對愈傷組織進(jìn)行再分化培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，其特征在于所述的脫分化培養(yǎng)72～144小時，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時間為12～14小時/天，光照強度為2000～3000lux。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，其特征在于所述的再分化培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，其特征在于所述的再分化培養(yǎng)時間為72～120小時，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時間為12～14小時/天，光照強度為2000～3000lux。
5.利用權(quán)利要求3所述的誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，培育出大量黑楊派楊樹(NL895)胚性細(xì)胞，從而通過誘變獲得變異體。
全文摘要
一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，選取NL895優(yōu)質(zhì)組培苗切成0.1～0.2cm的小段作為外植體，接種于脫分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其中，脫分化培養(yǎng)基為MS+KT0.1－0.4mg/L+2，4－D 0.1－0.6mg/L，使外植體器官脫分化，形成愈傷組織，然后，對愈傷組織進(jìn)行再分化培養(yǎng)。本發(fā)明的優(yōu)點是通過培養(yǎng)基培養(yǎng)，克服了林木生活周期長，個體大的劣勢，獲得大量的，具有細(xì)胞全能性的NL895胚性細(xì)胞，為NL895誘變育種中篩選耐鹽堿、耐旱、抗病、高產(chǎn)等優(yōu)良突變體提供了重要技術(shù)前提。
文檔編號C12N5/04GK101066040SQ20071004103
公開日2007年11月7日 申請日期2007年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月22日
發(fā)明者林煜, 章振華, 張承妹, 王凌健, 蘇敏, 宋學(xué)孟 申請人:上海光兆植物速生技術(shù)有限公司