專(zhuān)利名稱(chēng)：白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5的啟動(dòng)子及其分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5的啟動(dòng)子及其分離方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，TAIL-PCR方法被廣泛用于擴(kuò)增T-DNA插入位點(diǎn)兩端的側(cè)翼序列，但用于克隆啟動(dòng)子序列的報(bào)道還比較少，在山藥(Dioscorea)中已有成功的報(bào)道，證明TAIL-PCR用來(lái)擴(kuò)增基因的啟動(dòng)子序列是切實(shí)可行的。花粉外壁蛋白(PCPs-pollen coat proteins)是一些小的、配子體表達(dá)、高度多態(tài)性的富含半胱氨酸的小分子巰基蛋白，屬于一個(gè)大的基因家族。PCPs在蕓薹屬植物自交不親合和植物有性生殖中花粉和柱頭的黏附過(guò)程中起重要的作用。PCP-A類(lèi)花粉外壁蛋白(pollen coat protein，class A)是迄今為止分離的唯一在花粉和柱頭互作和花粉識(shí)別中起關(guān)鍵作用的一類(lèi)花粉外壁蛋白基因。為了闡明BcMF5基因在育性決定、蕓薹屬植物SI反應(yīng)和植物有性生殖中花粉和柱頭的黏附過(guò)程的作用，有必要分離其啟動(dòng)子序列。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5的啟動(dòng)子及其分離方法。
本發(fā)明提供的白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5的啟動(dòng)子具有SEQ ID No.1的序列，在其正向鏈和反向互補(bǔ)鏈都預(yù)測(cè)到一個(gè)啟動(dòng)子區(qū)域，在其序列中有多個(gè)花粉特異表達(dá)的保守元件及一些環(huán)境響應(yīng)元件。
本發(fā)明提供的白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5啟動(dòng)子的分離方法，包括以下步驟1)根據(jù)BcMF5的cDNA擴(kuò)增序列設(shè)計(jì)3個(gè)反向引物，A15′-TTTGGCACATTGGGCTTTA-3′、A25′-GGCACATTGGGCTTTACATT-3′和A35′-GACAATTAAGCGATGATCGATA-3′；2)分別用3個(gè)簡(jiǎn)并引物AD1、AD2和AD3與BcMF5基因的特異引物A1結(jié)合進(jìn)行TAIL-PCR的第一輪擴(kuò)增，其中AD15′-NGTCGASWGANAWGAA-3′、AD25′-TGWGNAGSANCASAGA-3′、AD35′-AGWGNAGWANCAWAGG-3′；3)將第一輪的PCR產(chǎn)物稀釋20倍，用作第二輪反應(yīng)的模板，再分別用簡(jiǎn)并引物AD1、AD2和AD3與特異引物A2結(jié)合進(jìn)行TAIL-PCR的第二輪擴(kuò)增；4)將第二輪的PCR產(chǎn)物稀釋10倍，用作第三輪反應(yīng)的模板，再分別用簡(jiǎn)并引物AD1、AD2和AD3與特異引物A3結(jié)合進(jìn)行TAIL-PCR的第三輪擴(kuò)增；5)將簡(jiǎn)并引物AD2與特異引物A3結(jié)合擴(kuò)增出的大小大約為650-bp的特異條帶，回收、連接、轉(zhuǎn)化大腸桿菌并測(cè)序；
6)對(duì)克隆得到的啟動(dòng)子序列用Blast軟件在GENEBANK數(shù)據(jù)庫(kù)上作同源搜索進(jìn)行同源性分析，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其同源啟動(dòng)子序列，確認(rèn)得到的是新的白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5啟動(dòng)子。
上述的第一輪TAIL-PCR反應(yīng)程序?yàn)?2℃3min，95℃1min，1個(gè)循環(huán)；94℃30s，50℃1min，72℃30s，5個(gè)循環(huán)；94℃30s，25℃3min，3min內(nèi)退火溫度升到72℃，72℃2min，1個(gè)循環(huán)；94℃30s，40℃1min，72℃2min，94℃30s，40℃1min，72℃2min，94℃30s，65℃1min，72℃2min，10個(gè)循環(huán)。
第二輪TAIL-PCR反應(yīng)程序?yàn)?4℃30s，50℃1min，72℃2min，94℃30s，50℃1min，72℃2min，10個(gè)循環(huán)；94℃30s，40℃1min，72℃2min，72℃5min，1個(gè)循環(huán)。
第三輪TAIL-PCR反應(yīng)程序?yàn)?4℃30s，40℃1min，72℃2min，20個(gè)循環(huán)；72℃5min，1個(gè)循環(huán)。
本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明提供的白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5的啟動(dòng)子是一個(gè)能在花粉中表達(dá)并可能受環(huán)境誘導(dǎo)表達(dá)的雙向啟動(dòng)子，目前還沒(méi)有見(jiàn)到類(lèi)似報(bào)道，說(shuō)明這是一個(gè)新的花粉外壁蛋白基因的啟動(dòng)子。這為研究花粉外壁蛋白基因啟動(dòng)子的啟動(dòng)功能和鑒定其特有的序列元件奠定了工作基礎(chǔ)，對(duì)闡明花粉外壁蛋白基因在花粉和柱頭互作及自交不親和反應(yīng)的花粉識(shí)別中所起作用有重要意義，并在基因工程領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。


圖1是BcMF5基因啟動(dòng)子與GUS基因的融合表達(dá)載體菜心轉(zhuǎn)化植株花粉的GUS染色情況，其中A圖是非轉(zhuǎn)化菜心植株花粉的GUS染色(×320)；B圖是啟動(dòng)子612bp正向鏈與與GUS基因的融合表達(dá)載體的菜心轉(zhuǎn)化植株花粉的GUS染色(×640)；C圖是啟動(dòng)子612bp反向互補(bǔ)鏈與GUS基因的融合表達(dá)載體的菜心轉(zhuǎn)化植株花粉的GUS染色(×320)。
具體實(shí)施例方式
1.白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5啟動(dòng)子的分離方法，步驟如下1)根據(jù)BcMF5的cDNA擴(kuò)增序列設(shè)計(jì)3個(gè)反向引物，A15′-TTTGGCACATTGGGCTTTA-3′、A25′-GGCACATTGGGCTTTACATT-3′和A35′-GACAATTAAGCGATGATCGATA-3′；2)分別用3個(gè)簡(jiǎn)并引物AD1、AD2和AD3與BcMF5基因的特異引物A1結(jié)合進(jìn)行TAIL-PCR的第一輪擴(kuò)增，其中AD15′-NGTCGASWGANAWGAA-3′、AD25′-TGWGNAGSANCASAGA-3′、AD35′-AGWGNAGWANCAWAGG-3′；第一輪PCR反應(yīng)程序?yàn)?2℃3min，95℃1min，1個(gè)循環(huán)；94℃30s，50℃1min，72℃30s，5個(gè)循環(huán)；94℃30s，25℃3min，3min內(nèi)退火溫度升到72℃，72℃2min，1個(gè)循環(huán)；94℃30s，40℃1min，72℃2min，94℃30s，40℃1min，72℃2min，94℃30s，65℃1min，72℃2min，10個(gè)循環(huán)。
3)將第一輪的PCR產(chǎn)物稀釋20倍，用作第二輪反應(yīng)的模板，再分別用簡(jiǎn)并引物AD1、AD2和AD3與特異引物A2結(jié)合進(jìn)行TAIL-PCR的第二輪擴(kuò)增；第二輪PCR反應(yīng)程序?yàn)?4℃30s，50℃1min，72℃2min，94℃30s，50℃1min，72℃2min，10個(gè)循環(huán)；94℃30s，40℃1min，72℃2min，72℃5min，1個(gè)循環(huán)。
4)將第二輪的PCR產(chǎn)物稀釋10倍，用作第三輪反應(yīng)的模板，再分別用簡(jiǎn)并引物AD1、AD2和AD3與特異引物A3結(jié)合進(jìn)行TAIL-PCR的第三輪擴(kuò)增；第三輪PCR反應(yīng)程序?yàn)?4℃30s，40℃1min，72℃2min，20個(gè)循環(huán)；72℃5min，1個(gè)循環(huán)。
5)將TAIL-PCR的第二輪和第三輪產(chǎn)物用1.2％的瓊脂糖電泳分離，在TAIL-PCR第三輪反應(yīng)中簡(jiǎn)并引物AD2與特異引物A3結(jié)合擴(kuò)增出650-bp左右的特異條帶。用VITAGENE公司的DNA凝膠回收試劑盒回收此片段，連接到pGEM-T Easy載體(購(gòu)自Promega公司)、轉(zhuǎn)化大腸桿菌、藍(lán)白斑篩選陽(yáng)性克隆、堿裂解法抽提質(zhì)粒，用EcoR I進(jìn)行單酶切鑒定和PCR鑒定后，重組質(zhì)粒送上海博亞生物公司測(cè)序。
6)測(cè)序結(jié)果表明，其長(zhǎng)度為654bp，具有SEQ ID No.1的序列。此序列與BcMF5序列重疊的堿基數(shù)是64bp，實(shí)際向上擴(kuò)增了568bp，這樣起始密碼子ATG上游的5’-UTR長(zhǎng)度就是620bp。對(duì)BcMF5基因的堿基組成進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)堿基A、G、T、C所占比例依次是34.82％，12.54％，41.91％，10.73％；A+T的比例為76.73％，C+G的比例為23.27％，符合啟動(dòng)子的堿基組成。對(duì)ATG上游的5’-UTR序列用Blast軟件在GENEBANK數(shù)據(jù)庫(kù)上作同源搜索，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其同源啟動(dòng)子序列，確認(rèn)得到的白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5啟動(dòng)子是新的啟動(dòng)子。
本發(fā)明分離得到的白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5啟動(dòng)子的特點(diǎn)1)BcMF5的啟動(dòng)子的長(zhǎng)度為654bp，其具有SEQ ID No.1的序列。用Blast軟件在GENEBANK數(shù)據(jù)庫(kù)上作同源搜索，發(fā)現(xiàn)從-390-bp到-297-bp這段長(zhǎng)為94-bp的序列與SLR-BP1基因的3’-UTR序列高度同源，同源性達(dá)到90％以上，這表明外壁蛋白基因的5’-UTR和3’-UTR之間可能存在協(xié)同作用，共同調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄。
2)在http://www.softberry.com/用TSSP程序確定啟動(dòng)子的區(qū)域及其轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，在http://www.dna.affrc.go.jp/htdocs/PLACE/和http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/上對(duì)克隆的啟動(dòng)子序列進(jìn)行序列元件分析，在其正向鏈和反向互補(bǔ)鏈都預(yù)測(cè)到一個(gè)啟動(dòng)子區(qū)域，正向鏈含有兩個(gè)TATA框，反向互補(bǔ)鏈含有一個(gè)TATA框。在其序列中發(fā)現(xiàn)多個(gè)花粉特異表達(dá)的保守元件，如番茄56/59 box及其變體、番茄LAT52啟動(dòng)子花粉特異激活所必需的元件AGAAA、LAT52/56 box的PB核心元件(TGTGGTT)的變體TGTTGGTT、ntp303基因啟動(dòng)子調(diào)節(jié)花粉基因表達(dá)的AAATGA元件等。另外，還含有一些環(huán)境響應(yīng)元件，如赤酶素反應(yīng)元件(GARE)TAACAAA，低溫反應(yīng)元件(LTR)CCGAAA以及水楊酸反應(yīng)元件(TCA-element)GAGAAGAATA等。
BcMF5基因啟動(dòng)子的序列元件分析(加粗的字母T指正向鏈啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)；加粗的字母G指反向互補(bǔ)鏈啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)；上列為正向鏈的序列元件分析，下列為反向互補(bǔ)鏈的序列元件分析，方框?yàn)楸Ｊ氐男蛄性?，陰影部分為?′-UTR同源的序列)52/56box variart1AAACTCAAAG GACTAATGCA G T AGTGCAAGGC AGC CATAGGA ATAAC TAGGTTTTGAGTTT C CTGATTACGT CACAACCAAA TCAC GTTC CG T CGGT ATCCT TATTGATCCAGATAmotf core of CuRE61TTCATAGTTT GAGTTAT GAATTCTTT AGTTATTGGT ATAAAC ATTCTTTTTCAAGTATCAAA CTCAATACTA TCTTAAGAAATCAA A TATTTGTAAGAAAAAGCCAAT box core of CuRE52 box Box4 GTGAmotj121CTGATGATCA ATAAATTTAA CATTTCATCA AA GACTACTAGT TATTTAAATT GTAAAGTAGT TTTCTTT core of CuREGARE181 core of CuRE ATC-motifRY repeat 52boxcore of CuRE241 core of CuRELTR52boxTATAbox 56/59boxIbox301 TTT CTTCATAGA ATTTGATTTC TTATGTATAT C ATAT ATTTAAA ACTTAAACAC T GAAGTATCT TAAACT ATACAT A52 boxGATAmotf TATAHSErtp303 box361TTTCA AAAT GTCA AACTTTTTAT CTATTAAATA AATAAAATTAAAAGTTTTTT TTAAATTTTA TTTACT TTGAAA ATAATTTAT TTATTTTAATWboxIboxCAT-box421GAATTTT GAT TTTTTTT GGG T CAAACTAGA TCCTTATATT TT GGCATTTT TAAC CTTAAAACTA AAAAAAAC T GATCT AGGAATATAA AACC GTAAAA ATTGC GGTGAW boxGAT Amotf56/59box variart TATA box481TAACTTAATT TA TATT T TTGATC ATACTT CTC GGTCTTCATT GAATTAA ATCTATATAAATTAAAACAC TAACTAGATA TTT GCCAGAAGTCA-elemerit52box541CTTAATTTTT AAACACTATC AGTTTATTAT TTAATTTATT CTGTC ATACAAAAAAGAATTAAAAA TTTGTG TCAAATAATA AATTAAATAA GA CTTT TATGTTTTTTGATAmotifWbox601ATAAGTATTC3)根據(jù)BcMF5啟動(dòng)子的堿基序列，設(shè)計(jì)帶有Hind III和Xba I酶切位點(diǎn)的引物PCR擴(kuò)增612bp啟動(dòng)子序列，替換pBI121表達(dá)載體上原有的35S啟動(dòng)子序列，構(gòu)建與GUS基因融合的的融合表達(dá)載體。其上游引物是SP1，5’端加Hind III酶切位點(diǎn)，外加3個(gè)保護(hù)性堿基，其引物序列是SP15’-GCTAAG CTTGCCGAAACTCAAAGGACTAA-3’；在起始密碼子ATG的前面設(shè)計(jì)5’端加X(jué)ba I酶切位點(diǎn)下游引物XP1，外加3個(gè)保護(hù)性堿基，其引物序列為XP15’-GATTCT AGACATCTTATTTTTTTGTATTTTCTGA-3’。為了驗(yàn)證BcMF5啟動(dòng)子是否具有雙向啟動(dòng)功能，把上游引物SP1 5’端的Hind III酶切位點(diǎn)換為Xba I酶切位點(diǎn)，分別命名為ASP1，把下游引物XP1的Xba I酶切位點(diǎn)換為Hind III酶切位點(diǎn)，命名為XP2。PCR反應(yīng)體系cDNA模板0.5μL，10×PCR緩沖溶液5μL，25mM的Mg2+4μL，特異引物(20μM)1μL，錨定引物(20μM)1μL，10mM dNTPs 1μL，Taq酶(5U/μL)0.5μL，加水到總體積50μL。PCR程序94℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，50℃退火30s，72℃延伸2min，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸7min，4℃保存。PCR產(chǎn)物用VITAGENE公司的DNA凝膠回收試劑盒回收、連接到pGEM-T easy載體、轉(zhuǎn)化大腸桿菌、藍(lán)白斑篩選陽(yáng)性克隆、PCR和酶切鑒定正確后，送上海博亞生物公司測(cè)序。將測(cè)序正確的質(zhì)粒用Hind III和Xba I雙酶切后的目的片段與用Hind III和Xba I雙酶切去掉35S啟動(dòng)子的pBI121大片段定向連接，構(gòu)建含有BcMF5基因啟動(dòng)子的雙向表達(dá)載體，命名為pBI-S612，pBI-AS612，凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404。將構(gòu)建好的載體用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化到菜心，獲得菜心轉(zhuǎn)基因KanR苗。待其長(zhǎng)大開(kāi)花后，對(duì)其花粉用GUS染色的方法確定BcMF5啟動(dòng)子是否在花粉中具有啟動(dòng)活性。GUS染色參照J(rèn)efferson(1987)的方法。結(jié)果表明(見(jiàn)圖1)pBI-S612和pBI-AS612的菜心轉(zhuǎn)化植株的花粉都能被染上藍(lán)色(見(jiàn)圖1B和C)，而其非轉(zhuǎn)基因陰性對(duì)照沒(méi)有顏色(見(jiàn)圖1A)，這表明BcMF5啟動(dòng)子是一個(gè)能在花粉中表達(dá)并可能受環(huán)境誘導(dǎo)表達(dá)的雙向啟動(dòng)子，可以用來(lái)調(diào)控基因的表達(dá)時(shí)間，表達(dá)部位和表達(dá)強(qiáng)度。這在基因工程領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，上述實(shí)施用來(lái)解釋說(shuō)明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制，在本發(fā)明的精神和權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)，對(duì)本發(fā)明作出的任何修改和改變，都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
SEQ ID No.1的信息<110>浙江大學(xué)<120>白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5的啟動(dòng)子及其分離方法<160>1<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>605<212>DNA
<213>cabbage leaf curl virus<400>1aaactcaaag gactaatgca gtgttggttt agtgcaaggc agceatagga ataactaggt 60ttcatagttt gagttatgat agaattcttt agttattggt gtacataaac attctttttc120ctgatgatca ataaatttaa catttcatca aaagaaaaaa tattaataat tttgttggtg180attgttgtgt aataaggtgt actagattac taaataaaaa taacaaattt gcatgtttct240gtcttattgt acaataacat tttacatttt atttttcggt ttctttttta actaggtatt300gtataaattt tgaatttgtg acttcataga atttgatttc ttatgtatat cgataaatat360tttcaaaaaa aatttaaaat aaatgagtca aactttttat ctattaaata aataaaatta420gaattttgat tttttttggg tcaaactaga tccttatatt ttggcatttt taacgccact480taacttaatt tagatatatt taattttgtg attgatctat aaatatactt ctcggtcttc540cttaattttt aaacactatc agtttattat ttaatttatt ctgtcagaaa atacaaaaaa600ataag60權(quán)利要求
1.白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5的啟動(dòng)子，其特征在于，它具有SEQ ID No.1的序列。
2.權(quán)利要求1所述的白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5啟動(dòng)子的分離方法，其特征在于，包括以下步驟1)根據(jù)BcMF5的cDNA擴(kuò)增序列設(shè)計(jì)3個(gè)反向引物，A15′-TTTGGCACATTGGGCTTTA-3′、A25′-GGCACATTGGGCTTTACATT-3′和A35′-GACAATTAAGCGATGATCGATA-3′；2)分別用3個(gè)簡(jiǎn)并引物AD1、AD2和AD3與BcMF5基因的特異引物A1結(jié)合進(jìn)行TAIL-PCR的第一輪擴(kuò)增，其中AD15′-NGTCGASWGANAWGAA-3′、AD25′-TGWGNAGSANCASAGA-3′、AD35′-AGWGNAGWANCAWAGG-3′；3)將第一輪的PCR產(chǎn)物稀釋20倍，用作第二輪反應(yīng)的模板，再分別用簡(jiǎn)并引物AD1、AD2和AD3與特異引物A2結(jié)合進(jìn)行TAIL-PCR的第二輪擴(kuò)增；4)將第二輪的PCR′產(chǎn)物稀釋10倍，用作第三輪反應(yīng)的模板，再分別用簡(jiǎn)并引物AD1、AD2和AD3與特異引物A3結(jié)合進(jìn)行TAIL-PCR的第三輪擴(kuò)增；5)將簡(jiǎn)并引物AD2與特異引物A3結(jié)合擴(kuò)增出的大小大約為650-bp的特異條帶，回收、連接、轉(zhuǎn)化大腸桿菌并測(cè)序；6)對(duì)克隆得到的啟動(dòng)子序列用Blast軟件在GENEBANK數(shù)據(jù)庫(kù)上作同源搜索進(jìn)行同源性分析，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其同源啟動(dòng)子序列，確認(rèn)得到的是新的白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5啟動(dòng)子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5啟動(dòng)子的分離方法，其特征在于第一輪TAIL-PCR反應(yīng)程序?yàn)?2℃ 3min，95℃ 1min，1個(gè)循環(huán)；94℃ 30s，50℃ 1min，72℃ 30s，5個(gè)循環(huán)； 94℃ 30s，25℃ 3min，_3min內(nèi)退火溫度升到72℃，72℃ 2min，1個(gè)循環(huán)；94℃ 30s，40℃ 1min，72℃ 2min，94℃ 30s，40℃ 1min，72℃ 2min，94℃ 30s，65℃1min，72℃ 2min，10個(gè)循環(huán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5啟動(dòng)子的分離方法，其特征在于第二輪TAIL-PCR反應(yīng)程序?yàn)?4℃ 30s，50℃ 1min，72℃ 2min，94℃ 30s，50℃ 1min，72℃ 2min，10個(gè)循環(huán)；94℃ 30s，40℃ 1min，72℃ 2min，72℃ 5min，1個(gè)循環(huán)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5啟動(dòng)子的分離方法，其特征在于第三輪TAIL-PCR反應(yīng)程序?yàn)?4℃ 30s，40℃ 1min，72℃ 2min，20個(gè)循環(huán)；72℃ 5min，1個(gè)循環(huán)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5的啟動(dòng)子及其分離方法。利用TAIL－PCR方法從中國(guó)普通白菜中克隆了一個(gè)新的花粉外壁蛋白BcMF5基因的啟動(dòng)子。序列分析表明，在其正向鏈和反向互補(bǔ)鏈都預(yù)測(cè)到一個(gè)啟動(dòng)子區(qū)域，并含有多個(gè)花粉特異表達(dá)的保守元件和一些環(huán)境響應(yīng)元件。對(duì)啟動(dòng)子的功能分析表明其正反兩個(gè)方向都有驅(qū)動(dòng)GUS基因在花粉中表達(dá)的能力。因此BcMF5啟動(dòng)子是一個(gè)能在花粉中表達(dá)并可能受環(huán)境誘導(dǎo)表達(dá)的雙向啟動(dòng)子。這對(duì)闡明花粉外壁蛋白基因在花粉和柱頭互作及自交不親和反應(yīng)的花粉識(shí)別中所起的作用有重要意義，并在基因工程領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)C12N15/10GK1995348SQ20061015539
公開(kāi)日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2006年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月22日
發(fā)明者張強(qiáng), 曹家樹(shù) 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)