專利名稱：鏈激酶發(fā)酵液的鏈球菌分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鏈激酶，尤其涉及一種鏈激酶發(fā)酵液的細(xì)胞分離方法。
技術(shù)背景鏈激酶是六十年代國際上研發(fā)成功的第一代溶血栓藥物。40多年來的 臨床研究和應(yīng)用，積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，并充分肯定了鏈激酶在治療心 肌梗塞、動靜脈血栓等疾病中的確切療效。至今鏈激酶仍然是治療心肌梗 塞的首選藥物之一。國際上公認(rèn)的鏈激酶是由天然的C-族溶血性鏈球菌發(fā)酵生產(chǎn)，經(jīng)離子 交換層析，分子篩層析等精制純化手段，達(dá)到可供靜脈注射用的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 然后添加穩(wěn)定劑，冷凍干燥成凍干制劑。鏈球菌發(fā)酵后的鏈激酶發(fā)酵液一般都采用冷凍連續(xù)高速離心機(jī)進(jìn)行離 心分離，除去鏈球菌，離心清液采用硫酸銨鹽析等方法將SK沉淀下來。采用冷凍連續(xù)高速離心機(jī)分離鏈球菌，需要一筆較大的投資；并消耗 大量能量和對設(shè)備維修保養(yǎng)的幵支。整個(gè)操作比較復(fù)雜，使用的泵和離心 機(jī)在運(yùn)行過程中還有可能使鏈激酶失活。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是提供了一種鏈激酶發(fā)酵液的鏈球菌分離 方法，旨在解決上述的問題。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是通過以下步驟實(shí)現(xiàn)的 鏈激酶發(fā)酵液冷卻到25 °(〕- 40°C; ra調(diào)到PH 2 - 10;
加生物絮凝劑P(;A(聚谷氨酸)或者PGA鹽；生物絮凝劑的用量在 0. 0(M% - 0. 1%;充分?jǐn)嚢?0-40分鐘,靜止沉淀3-5小時(shí)； 虹吸上清液。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是由于采用生物絮凝劑沉淀分 離鏈球菌，可大大節(jié)約固定資產(chǎn)投資，以及采用離心機(jī)，板框過濾等設(shè)備 所需的大量能量。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明是通過以下步驟實(shí)現(xiàn)的鏈激酶發(fā)酵液冷卻到25 aC- 40°C; PH調(diào)到PH 2 - 10;加生物絮凝劑PGA(聚Y-谷氨酸)或者PGA鹽；生物絮凝劑的用量在 0. 001% - 0. 1%;充分?jǐn)嚢?0-40分鐘，靜止沉淀3-5小時(shí)； 虹吸上清液；所述的PGA鹽可以是或者K或者順4或者Zn或者Ca或者Al。 實(shí)施例1鏈激酶發(fā)酵液1. 5T(4000IU/ml)冷卻到27°C， PH調(diào)到7.2加0.01% PGA-Na，充分?jǐn)嚢?0分鐘，靜止沉淀4小時(shí)，虹吸上清液1. 35T (3800IU/ ml)。 實(shí)施例2鏈激酶發(fā)酵液1. 5T (4100IU/ ml),冷卻到20°C， PH調(diào)節(jié)到7. 2加0. 005% PGA-Zn充分?jǐn)嚢?0分鐘，靜止沉淀4小時(shí)，虹吸上清液l. 35T (3850IU/ral)。 鏈激酶發(fā)酵液1. 5T(40「,OIt」/ML)，冷卻至U 27°C， PH調(diào)節(jié)到8. 0加0. 01% PGA充分?jǐn)嚢?0分鐘，靜止沉淀4小時(shí)，虹吸上清液1. 35T (3850IU/ ml)。采用本發(fā)明的方法分離鏈球菌可大大節(jié)約固定資產(chǎn)投資，以及采用離 心機(jī)，板框過濾等設(shè)備所需的大量能量。生物絮凝劑為生物大分子物資， 可生物降解，對環(huán)境無危害。采用本發(fā)明分離效率高、產(chǎn)品得率高，不會 因?yàn)椴捎帽煤碗x心機(jī)造成活性物質(zhì)的失活。
權(quán)利要求
1.一種鏈激酶發(fā)酵液的鏈球菌分離方法，是通過以下步驟實(shí)現(xiàn)的鏈激酶發(fā)酵液冷卻到25℃-40℃；PH調(diào)到PH2-10；加生物絮凝劑PGA(聚γ-谷氨酸)或者PGA鹽；生物絮凝劑的用量在0.001％-0.1％；充分?jǐn)嚢?0-40分鐘，靜止沉淀3-5小時(shí)；虹吸上清液。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鏈激酶發(fā)酵液的鏈球菌分離方法，所述的PGA 鹽可以是Na或者K或者NH,或者Zn或者Ca或者Al。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的鏈激酶發(fā)酵液的鏈球菌分離方法，鏈激 酶發(fā)酵液l. 5T(4000IU/ml)冷卻到27°C， PH i周到7. 2加0. 01% PGA-Na，充 分?jǐn)嚢?0分鐘，靜止沉淀4小時(shí)，虹吸上清液1. 35T (3800IU/ ml)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的鏈激酶發(fā)酵液的鏈球菌分離方法，鏈激 酶發(fā)酵液1. 5T(4匪U/ ml)，冷卻到20。C, PH調(diào)節(jié)到7. 2加0. 005% PGA-Zn 充分?jǐn)嚢?0分鐘，靜止沉淀4小時(shí)，虹吸上清液1. 35T (3850IU/ ml)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的鏈激酶發(fā)酵液的鏈球菌分離方法，鏈激 酶發(fā)酵液1. 5T(4050IU/ML)，冷卻到27°C， PH調(diào)節(jié)到8. 0加0. 01% PGA充分 攪拌30分鐘，靜止沉淀4小時(shí)，虹吸上清液1. 35T (3850IU/ ml)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鏈激酶發(fā)酵液的鏈球菌分離方法，是通過以下步驟實(shí)現(xiàn)的鏈激酶發(fā)酵液冷卻到25℃-40℃；pH調(diào)到pH2-10；加生物絮凝劑PGA(聚γ-谷氨酸)或者PGA鹽；生物絮凝劑的用量在0.001％-0.1％；充分?jǐn)嚢?0-40分鐘，靜止沉淀3-5小時(shí)；虹吸上清液；本發(fā)明的有益效果是由于采用生物學(xué)凝劑沉淀分離鏈球菌，可大大節(jié)約固定資產(chǎn)投資，以及采用離心機(jī)，板框過濾等設(shè)備所需的大量能量。
文檔編號C12N9/70GK101161812SQ20061011714
公開日2008年4月16日 申請日期2006年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月13日
發(fā)明者嶺 刑, 晉 史, 朱崇杉 申請人:上海中港亞諾化學(xué)技術(shù)有限公司