專利名稱：革蘭氏陰性桿菌增菌培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種革蘭氏陰性桿菌增菌培養(yǎng)基，其主要成分是胰蛋白胨、枸櫞酸鈉、去氧膽酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、小牛血清、葡萄糖、甘露醇經(jīng)一定的工藝制成。用以供糞便增菌培養(yǎng)痢疾桿菌。利用培養(yǎng)試驗(yàn)鑒別細(xì)菌的種類，其關(guān)鍵在于準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便。而細(xì)菌接種量大小，會(huì)直接影響檢測(cè)結(jié)果。往往需要將樣本通過不同方法進(jìn)行增菌培養(yǎng)，來進(jìn)行細(xì)菌種類的鑒別，這是目前微生物實(shí)驗(yàn)室最常用的手段。由于目前培養(yǎng)條件的應(yīng)用范圍所限，供糞便痢疾桿菌增菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基沒有特效的，存在所需接種量大、培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)、易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性等問題。隨著生物研究的進(jìn)展，國(guó)內(nèi)外對(duì)細(xì)菌鑒別的增菌培養(yǎng)基研究也在不斷的發(fā)展中。生物工作者一直希望能有一種能克服上述不足的增菌培養(yǎng)基----革蘭氏陰性桿菌增菌培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
本發(fā)明的目的在于提供一種能克服已有鑒別培養(yǎng)基不足的革蘭氏陰性桿菌增菌培養(yǎng)基。與其它同類培養(yǎng)基相比具備下列特點(diǎn)所需接種量小，少量細(xì)菌即可迅速繁殖，在通常室溫下或37℃培養(yǎng)5-6小時(shí)即可觀察結(jié)果；不易出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性；能破壞標(biāo)本中存在的抑菌物質(zhì)，使細(xì)菌生長(zhǎng)不受抑制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的要點(diǎn)在于選擇合適的組分，并進(jìn)行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種革蘭氏陰性桿菌增菌培養(yǎng)基。
本發(fā)明選擇的配方如下(組分及其重量百分比％)胰蛋白胨(1.8-2.2)、枸櫞酸鈉(0.4-0.5)、去氧膽酸鈉(0.04-0.06)、磷酸二氫鉀(0.14-0.16)、磷酸氫二鉀(0.38-0.42)、氯化鈉(0.4-0.5)、葡萄糖(0.10-0.12)、甘露醇(0.15-0.25)、小牛血清(0.4-0.5)、蒸餾水加至100ml。
本培養(yǎng)基含有枸櫞酸鈉和去氧膽酸鈉，對(duì)革蘭氏陰性菌有抑制作用，大腸桿菌，綠膿桿菌及變形桿菌，在接種6小時(shí)內(nèi)生長(zhǎng)緩慢，而痢疾桿菌可相對(duì)地得到增殖.氯化鈉用于調(diào)整滲透壓；磷酸二氫鉀用于調(diào)節(jié)pH。胰蛋白胨、小牛血清、葡萄糖、甘露醇是培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)和支持成分。標(biāo)本接種后即計(jì)算時(shí)間，在通常室溫下或37℃培養(yǎng)，均有增菌作用.增菌培養(yǎng)6小時(shí)后，即用劃線法移種到腸道選擇性培養(yǎng)基上以分離致病菌。
本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是1)、將胰蛋白胨、枸櫞酸鈉、去氧膽酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、葡萄糖、甘露醇按比例加入蒸餾水中，再加熱溶解，矯正pH至7.0矯正pH至6.8，用濾紙過濾；2)、壓力蒸汽滅菌0.70kg15分鐘；3)、無菌條件下，加入無菌小牛血清，分裝安培瓶，每瓶約5ml，存于冰箱中備用。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)所需接種量小，培養(yǎng)時(shí)間短，少量細(xì)菌即可迅速繁殖，在通常室溫下或37℃培養(yǎng)5-6小時(shí)即可觀察結(jié)果；(2)不易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性；(3)能破壞標(biāo)本中存在的四環(huán)素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明按照下表所列數(shù)據(jù)(重量百分比％)及其所述步驟進(jìn)行配置配方一
胰蛋白胨 1.8-2.2枸櫞酸鈉 0.4-0.5去氧膽酸鈉0.04-0.06磷酸二氫鉀0.14-0.16磷酸氫二鉀0.38-0.42氯化鈉0.4-0.5葡萄糖0.10-0.12甘露醇0.15-0.25小牛血清 0.4-0.5蒸餾水加至100
配方二胰蛋白胨 1.8-2.0枸櫞酸鈉 0.4-0.45去氧膽酸鈉0.04-0.05磷酸二氫鉀0.14-0.15磷酸氫二鉀0.38-0.40氯化鈉0.4-0.45葡萄糖0.10-0.11甘露醇0.15-0.20小牛血清 0.4-0.45蒸餾水加至100
配方三胰蛋白胨 2.0-2.2枸櫞酸鈉 0.45-0.5去氧膽酸鈉0.05-0.06磷酸二氫鉀0.15-0.16磷酸氫二鉀0.40-0.42氯化鈉0.45-0.5葡萄糖0.11-0.12甘露醇0.18-0.25小牛血清 0.45-0.5蒸餾水加至100
配方四
胰蛋白胨 1.9-2.1枸櫞酸鈉 0.42-0.45去氧膽酸鈉0.05-0.06磷酸二氫鉀0.15-0.16磷酸氫二鉀0.39-0.40氯化鈉0.42-0.45葡萄糖0.11-0.12甘露醇0.17-0.22小牛血清 0.42-0.45蒸餾水加至100
權(quán)利要求
1.一種革蘭氏陰性桿菌增菌培養(yǎng)基，是以胰蛋白胨、枸櫞酸鈉、去氧膽酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、小牛血清、葡萄糖、甘露醇為主要成分，其特征在于具有如下配方(組分及其重量百分比％)胰蛋白胨(1.8-2.2)、枸櫞酸鈉(0.4-0.5)、去氧膽酸鈉(0.04-0.06)、磷酸二氫鉀(0.14-0.16)、磷酸氫二鉀(0.38-0.42)、氯化鈉(0.4-0.5)、葡萄糖(0.10-0.12)、甘露醇(0.15-0.25)、小牛血清(0.4-0.5)、蒸餾水100ml。
2.一種權(quán)利要求1所述革蘭氏陰性桿菌增菌培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于具有如下的步驟1)、將胰蛋白胨、枸櫞酸鈉、去氧膽酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、葡萄糖、甘露醇按比例加入蒸餾水中，再加熱溶解，矯正pH至7.0矯正pH至6.8，用濾紙過濾；2)、壓力蒸汽滅菌0.70kg15分鐘；3)、無菌條件下，加入無菌小牛血清，分裝安培瓶，每瓶約5ml，存于冰箱中備用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種革蘭氏陰性桿菌增菌培養(yǎng)基，其主要成分是胰蛋白胨、枸櫞酸鈉、去氧膽酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、小牛血清、葡萄糖、甘露醇經(jīng)一定的工藝制成。用以供糞便增菌培養(yǎng)痢疾桿菌用。本培養(yǎng)基含有枸櫞酸鈉和去氧膽酸鈉，對(duì)革蘭氏陰性菌有抑制作用，大腸桿菌，綠膿桿菌及變形桿菌，在接種6小時(shí)內(nèi)生長(zhǎng)緩慢，而痢疾桿菌可相對(duì)地得到增殖，氯化鈉用于調(diào)整滲透壓；磷酸二氫鉀用于調(diào)節(jié)pH。胰蛋白胨、小牛血清、葡萄糖、甘露醇是培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)和支持成分。標(biāo)本接種后即計(jì)算時(shí)間，在通常室溫下或37℃培養(yǎng)，均有增菌作用.增菌培養(yǎng)6小時(shí)后，即用劃線法移種到腸道選擇性培養(yǎng)基上以分離致病菌。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)所需接種量小，培養(yǎng)時(shí)間短，少量細(xì)菌即可迅速繁殖，在通常室溫下或37℃培養(yǎng)5－6小時(shí)即可觀察結(jié)果；(2)不易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性；(3)能破壞標(biāo)本中存在的四環(huán)素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101089174SQ20061004487
公開日2007年12月19日 申請(qǐng)日期2006年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月16日
發(fā)明者馬樂好, 曲奕 申請(qǐng)人:馬樂好, 曲奕