專利名稱：枸櫞酸鹽瓊脂培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種枸櫞酸鹽瓊脂培養(yǎng)基，其主要成分是枸櫞酸鈉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、溴麝香草酚藍、小牛血清、瓊脂，經(jīng)一定的工藝制成。用以鑒別細菌能否利用枸櫞酸鹽。利用生化反應(yīng)試驗鑒別細菌的種類，其關(guān)鍵在于準確、快速、簡便。由于不同細菌具有其各自的獨特酶系統(tǒng)，因而在代謝過程中所產(chǎn)生的分解和合成的代謝產(chǎn)物也不同，這些分解或合成的代謝產(chǎn)物又各具有不同的生化特點，再利用其不同生化特點在相應(yīng)的培養(yǎng)條件下所產(chǎn)生的生化反應(yīng)，來進行細菌種類的鑒別，這是目前微生物實驗室最常用的手段。由于目前培養(yǎng)條件及指示劑的應(yīng)用范圍所限，生化反應(yīng)試驗中觀察細菌對有機酸鹽及銨鹽利用的鑒別培養(yǎng)基存在所需接種量大、培養(yǎng)時間長、指示劑變色不明顯、易出現(xiàn)假陽性或假陰性等問題。枸櫞酸鹽瓊脂培養(yǎng)基是觀察細菌對有機酸鹽及銨鹽利用的一綜合性培養(yǎng)基，用以鑒別細菌能否利用枸櫞酸鹽，從而進一步判斷細菌的種類及生化特點。隨著生物研究的進展，國內(nèi)外對細菌鑒別的研究也在不斷的發(fā)展中。生物工作者一直希望能有一種能克服上述不足的鑒別培養(yǎng)基----枸櫞酸鹽瓊脂培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
本發(fā)明的目的在于提供一種能克服已有鑒別培養(yǎng)基不足的枸櫞酸鹽瓊脂培養(yǎng)基。與其它同類培養(yǎng)基相比具備下列特點所需接種量小，少量細菌即可出現(xiàn)產(chǎn)堿變色；指示劑變色快速明顯，24小時即可觀察結(jié)果；不易出現(xiàn)假陽性，僅限能利用枸櫞酸鈉的細菌能生長、變色；不易出現(xiàn)假陰性，能破壞標本中存在的抑菌物質(zhì)，使細菌生長不受抑制；試驗陽性對照菌在該固體培養(yǎng)基中增菌繁殖迅速，并且產(chǎn)堿使培養(yǎng)基變色。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的要點在于選擇合適的組分，并進行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種枸櫞酸鹽瓊脂培養(yǎng)基。
本發(fā)明選擇的配方如下(組分及其重量百分比％)枸櫞酸鈉(0.3-0.7)、氯化鈉(0.3-0.7)、硫酸鎂(0.01-0.03)、磷酸二氫鉀(0.08-0.12)、磷酸二氫銨(0.08-0.12)、溴麝香草酚藍(0.8-1.2)、小牛血清(2.5-3.0)、瓊脂(1.5-2.5)、蒸餾水加至100。
枸櫞酸鈉是培養(yǎng)基中碳的唯一來源，而磷酸二氫銨是培養(yǎng)基中氮的唯一來源。能利用枸櫞酸鈉為碳源的細菌在培養(yǎng)基上能生長，并且分解枸櫞酸鹽最后產(chǎn)生碳酸鹽，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，此時培養(yǎng)基中的溴麝香草酚藍指示劑由綠色變?yōu)樯钏{色。硫酸鎂能破壞標本中存在的四環(huán)素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用；氯化鈉用于調(diào)整滲透壓；磷酸二氫鉀用于調(diào)節(jié)pH。小牛血清、瓊脂是培養(yǎng)基中的營養(yǎng)和支持成分；試驗陽性對照菌在該固體培養(yǎng)基中增菌繁殖，并且產(chǎn)堿使培養(yǎng)基變色。
本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是1)、將枸櫞酸鈉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、瓊脂按比例加入蒸餾水中，再加熱溶解，矯正pH至6.8，以絨布過濾；2)、再加入溴麝香草酚藍混勻，壓力蒸汽滅菌1.05kg15分鐘；3)、無菌條件下，加入無菌小牛血清，分裝試管，每管約2ml，趁熱將含有培養(yǎng)基的滅菌試管傾斜一定角度，冷凝后制成斜面，待用。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(1)所需接種量小，少量細菌即可出現(xiàn)產(chǎn)堿變色；(2)指示劑變色快速明顯，24小時即可觀察結(jié)果；(3)不易出現(xiàn)假陽性，僅限能利用枸櫞酸鈉的細菌能生長、變色；(4)不易出現(xiàn)假陰性，硫酸鎂能破壞標本中存在的四環(huán)素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用；(5)試驗陽性對照菌在該固體培養(yǎng)基中增菌繁殖迅速，并且產(chǎn)堿使培養(yǎng)基變色。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明按照下表所列數(shù)據(jù)(重量百分比％)及其所述步驟進行配置配方一枸櫞酸鈉 0.3-0.7氯化鈉 0.3-0.7硫酸鎂 0.01-0.031％溴麝香草酚藍酒精溶液0.8-1.2磷酸二氫鉀 0.08-0.12磷酸二氫銨 0.08-0.12小牛血清 2.5-3.0瓊脂 1.5-2.5蒸餾水 加至100
配方二枸櫞酸鈉 0.3-0.6氯化鈉 0.3-0.6硫酸鎂 0.01-0.021％溴麝香草酚藍酒精溶液0.8-1.1磷酸二氫鉀 0.08-0.11磷酸二氫銨 0.08-0.11瓊脂 1.5-2.2小牛血清 2.5-2.8蒸餾水 加至100
配方三枸櫞酸鈉 0.4-0.7氯化鈉 0.4-0.7硫酸鎂 0.02-0.031％溴麝香草酚藍酒精溶液0.9-1.2磷酸二氫鉀 0.09-0.12磷酸二氫銨 0.09-0.12小牛血清 2.7-3.0
瓊脂 1.8-2.5蒸餾水 加至100
配方四枸櫞酸鈉 0.4-0.6氯化鈉 0.4-0.6硫酸鎂 0.01-0.031％溴麝香草酚藍酒精溶液0.9-1.1磷酸二氫鉀 0.09-0.11磷酸二氫銨 0.09-0.11瓊脂 1.8-2.2小牛血清 2.6-2.8蒸餾水 加至100
權(quán)利要求
1.一種枸櫞酸鹽瓊脂培養(yǎng)基，是以枸櫞酸鈉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、溴麝香草酚藍、瓊脂為主要組分，其特征在于具有如下配方(組分及其重量百分比％)枸櫞酸鈉(0.3-0.7)、氯化鈉(0.3-0.7)、硫酸鎂(0.01-0.03)、磷酸二氫鉀(0.08-0.12)、磷酸二氫銨(0.08-0.12)、溴麝香草酚藍(0.8-1.2)、小牛血清(2.5-3.0)、瓊脂(1.5-2.5)、蒸餾水加至100。
2.一種權(quán)利要求1所述枸櫞酸鹽瓊脂培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于具有如下的步驟1)、將枸櫞酸鈉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、瓊脂按比例加入蒸餾水中，再加熱溶解，矯正pH至6.8，以絨布過濾；2)、再加入溴麝香草酚藍混勻，壓力蒸汽滅菌1.05kg15分鐘；3)、無菌條件下，加入無菌小牛血清，分裝試管，每管約2ml，趁熱將含有培養(yǎng)基的滅菌試管傾斜一定角度，冷凝后制成斜面，待用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種枸櫞酸鹽瓊脂培養(yǎng)基，是以枸櫞酸鈉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、溴麝香草酚藍、小牛血清、瓊脂為主要成分，用以鑒別細菌能否利用枸櫞酸鹽。枸櫞酸鈉是培養(yǎng)基中碳的唯一來源，而磷酸二氫銨是培養(yǎng)基中氮的唯一來源；能利用枸櫞酸鈉為碳源的細菌在培養(yǎng)基上能生長，并且分解枸櫞酸鹽最后產(chǎn)生碳酸鹽，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，此時培養(yǎng)基中的溴麝香草酚藍指示劑由綠色變?yōu)樯钏{色；硫酸鎂能破壞標本中存在的四環(huán)素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用；氯化鈉用于調(diào)整滲透壓；磷酸二氫鉀用于調(diào)節(jié)pH；試驗陽性對照菌在該固體培養(yǎng)基中增菌繁殖迅速，并且產(chǎn)堿使培養(yǎng)基變色。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(1)所需接種量小，少量細菌即可出現(xiàn)產(chǎn)堿變色；(2)指示劑變色快速明顯，24小時即可觀察結(jié)果；(3)不易出現(xiàn)假陽性，僅限能利用枸櫞酸鈉的細菌能生長、變色；(4)不易出現(xiàn)假陰性，硫酸鎂能破壞標本中存在的四環(huán)素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用；(5)試驗陽性對照菌在該固體培養(yǎng)基中增菌繁殖迅速，并且產(chǎn)堿使培養(yǎng)基變色。
文檔編號C12Q1/04GK101089192SQ20061004487
公開日2007年12月19日 申請日期2006年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月16日
發(fā)明者曲奕, 馬樂好 申請人:曲奕, 馬樂好