專利名稱：葡萄糖傳感器中酶的固定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物傳感器中酶的固定方法，更具體地說是涉及一種葡萄糖傳感器中酶的固定方法。
背景技術(shù)：
生物傳感器制備過程中酶的固定是一關(guān)鍵步驟。通常使用的酶固定化方法有吸附法、共價鍵合法、交聯(lián)法、聚合物包埋法，其中聚合物包埋法最為普遍。天然聚合物具有優(yōu)良的生物親和性，能使酶保持較高的活性。但當(dāng)前使用的天然聚合物普遍存在與電極的粘結(jié)性不高，與水接觸易吸水溶脹的缺點，易導(dǎo)致酶膜的脫落和酶的泄漏。魔芋葡甘聚糖經(jīng)去乙酰基改性處理后得到去乙?；в笃细示厶?，其溶膠-凝膠具有強(qiáng)的粘結(jié)力，且所成的膜不會吸水溶脹，具有良好的抗水性。但目前將去乙酰基魔芋葡甘聚糖應(yīng)用于生物傳感器領(lǐng)域中酶的固定化尚未見報導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是將經(jīng)去乙?；男缘哪в笃细示厶菓?yīng)用于生物傳感器中酶的固定，提供一種新的葡萄糖傳感器中酶的固定方法。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案一種葡萄糖傳感器中酶的固定方法，其特征是先制備去乙?；в笃细示厶堑娜苣z-凝膠，然后用所述去乙?；в笃细示厶堑娜苣z-凝膠將葡萄糖氧化酶固定在電極表面制備出葡萄糖傳感器。
所述一種葡萄糖傳感器中酶的固定方法，其特征是
a.將純化過的魔芋精粉5～15g加入到1L濃度為0.1％～0.3％的Na2CO3溶液中，攪拌溶液直至魔芋精粉完全溶解，室溫陳化24～48小時，得到去乙?；в笃细示厶侨苣z-凝膠備用；b.Pt電極經(jīng)金相砂紙打磨，0.05μm的氧化鋁粉拋光，超聲清洗，涼干，配制濃度為900～1100U/ml的葡萄糖氧化酶溶液，用微量移液器移取5～10μl葡萄糖氧化酶溶液與步驟a制備的50～100μl去乙?；в笃细示厶侨苣z-凝膠混合均勻，最后移取混合液2～5μl滴涂于Pt電極上，室溫干燥24～48小時，即制得所述葡萄糖傳感器。
步驟a所述魔芋精粉的純化是將魔芋精粉加入燒杯中，然后加入40％的乙醇，攪拌10min，抽濾，濾渣重復(fù)處理三次；再分別用60％、95％及100％的乙醇重復(fù)攪拌10min，抽濾，濾渣重復(fù)處理三次的步驟；所得濾渣轉(zhuǎn)入表面皿中，常溫放置48小時即得純化過的魔芋精粉。
本發(fā)明的有益效果，魔芋葡甘聚糖側(cè)鏈短支鏈上的乙?；c糖殘基上的羥基形成酯鍵，使魔芋葡甘聚糖形成具有空隙的雙螺旋結(jié)構(gòu)，阻止魔芋葡甘聚糖長鏈相互靠近。因此，魔芋葡甘聚糖易吸水溶脹。在堿性條件下，酯鍵發(fā)生水解，即脫去乙?；扇ヒ阴；в笃细示厶?。由于去乙?；в笃细示厶翘擎湠槁銧睿溟L鏈變得可以相互靠近。于是部分分子間形成氫鍵而產(chǎn)生結(jié)晶作用，以結(jié)晶為結(jié)節(jié)點進(jìn)而形成了網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)體。葡萄糖氧化酶被包埋在網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)體中。該方法制備的酶膜不會吸水溶脹，具有良好的抗水性。本發(fā)明制備的傳感器對濃度為5mmol/L的葡萄糖溶液平行測定50次，RSD為2.4％，具有較高的穩(wěn)定性。傳感器在制成后的三個月內(nèi)(不用時保存于冰箱內(nèi))，對濃度為5mmol/L的葡萄糖溶液重復(fù)測定12次(每星期測定一次)，其響應(yīng)電流幾乎沒有下降，表明該傳感器具有好的使用壽命。傳感器良好的穩(wěn)定性和長的使用壽命說明本發(fā)明有效地改善了酶膜的脫落和酶的泄漏。
具體實施例方式
下面通過實施例對本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)描述，一種葡萄糖傳感器中酶的固定方法，先制備去乙酰基魔芋葡甘聚糖的溶膠-凝膠，然后用所述去乙?；в笃细示厶堑娜苣z-凝膠將葡萄糖氧化酶固定在電極表面制備出葡萄糖傳感器。更具體的來說，所述一種葡萄糖傳感器中酶的固定方法是a.將純化過的魔芋精粉5～15g加入到1L濃度為0.1％～0.3％的Na2CO3溶液中，攪拌溶液直至魔芋精粉完全溶解，室溫陳化24～48小時，得到去乙?；в笃细示厶侨苣z-凝膠備用；b.Pt電極經(jīng)金相砂紙打磨，0.05μm的氧化鋁粉拋光，超聲清洗，涼干，配制濃度為900～1100U/ml的葡萄糖氧化酶溶液，用微量移液器移取5～10μl葡萄糖氧化酶溶液與步驟a制備的50～100μl去乙?；в笃细示厶侨苣z-凝膠混合均勻，最后移取混合液2～5μl滴涂于Pt電極上，室溫干燥24～48小時，即制得所述葡萄糖傳感器。步驟a所述魔芋精粉的純化是將魔芋精粉加入燒杯中，然后加入40％的乙醇，攪拌10min，抽濾，濾渣重復(fù)處理三次；再分別用60％、95％及100％的乙醇重復(fù)攪拌10min，抽濾，濾渣重復(fù)處理三次的步驟；所得濾渣轉(zhuǎn)入表面皿中，常溫放置48小時即得純化過的魔芋精粉。
實施例1第一步魔芋精粉的純化將魔芋精粉加入燒杯中，然后加入40％的乙醇，攪拌10min，抽濾，濾渣重復(fù)處理三次。再分別用60％、95％及100％的乙醇重復(fù)上述步驟。所得濾渣轉(zhuǎn)入表面皿中，常溫放置48小時即得純化好的魔芋精粉。
第二步去乙?；в笃细示厶侨苣z-凝膠的制備稱取純化過的魔芋精粉8g加入到1L濃度為0.2％的Na2CO3溶液中，攪拌溶液直至魔芋精粉完全溶解。室溫陳化24小時，即得去乙?；в笃细示厶侨苣z-凝膠。
第三步葡萄糖傳感器中酶的固定Pt電極經(jīng)金相砂紙打磨，0.05μm的氧化鋁粉拋光，超聲清洗，涼干。配制濃度為1000U/ml的葡萄糖氧化酶(GOD)溶液。用微量移液器移取5μl該溶液與50μl去乙?；в笃细示厶侨苣z混合。再移取上述混合液2μl滴涂于Pt電極上，室溫干燥24小時，即制得傳感器。
以上所述內(nèi)容僅為本發(fā)明構(gòu)思下的基本說明，而依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案所作的任何等效變換，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種葡萄糖傳感器中酶的固定方法，其特征是先制備去乙?；в笃细示厶堑娜苣z-凝膠，然后用所述去乙?；в笃细示厶堑娜苣z-凝膠將葡萄糖氧化酶固定在電極表面制備出葡萄糖傳感器。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種葡萄糖傳感器中酶的固定方法，其特征是a.將純化過的魔芋精粉5～15g加入到1L濃度為0.1％～0.3％的Na2CO3溶液中，攪拌溶液直至魔芋精粉完全溶解，室溫陳化24～48小時，得到去乙酰基魔芋葡甘聚糖溶膠-凝膠備用；b.Pt電極經(jīng)金相砂紙打磨，0.05μm的氧化鋁粉拋光，超聲清洗，涼干，配制濃度為900～1100U/ml的葡萄糖氧化酶溶液，用微量移液器移取5～10μl葡萄糖氧化酶溶液與步驟a制備的50～100μl去乙?；в笃细示厶侨苣z-凝膠混合均勻，最后移取混合液2～5μl滴涂于Pt電極上，室溫干燥24～48小時，即制得所述葡萄糖傳感器。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種葡萄糖傳感器中酶的固定方法，其特征是步驟a所述魔芋精粉的純化是將魔芋精粉加入燒杯中，然后加入40％的乙醇，攪拌10min，抽濾，濾渣重復(fù)處理三次；再分別用60％、95％及100％的乙醇重復(fù)攪拌10min，抽濾，濾渣重復(fù)處理三次的步驟；所得濾渣轉(zhuǎn)入表面皿中，常溫放置48小時即得純化過的魔芋精粉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種葡萄糖傳感器中酶的固定方法，其特征是先制備去乙?；в笃细示厶堑娜苣z－凝膠，然后用所述去乙酰基魔芋葡甘聚糖的溶膠－凝膠將葡萄糖氧化酶固定在電極表面制備出葡萄糖傳感器。本發(fā)明所制備的去乙酰基魔芋葡甘聚糖膜具有良好的抗水性、強(qiáng)的粘結(jié)力、優(yōu)良的生物親和性。在此基礎(chǔ)上將去乙?；в笃细示厶怯糜陔姌O表面葡萄糖氧化酶的固定，制備了相應(yīng)的葡萄糖傳感器。傳感器具有高穩(wěn)定性和長的使用壽命。采用本方法固定葡萄糖氧化酶有效地改善了酶的失活和泄漏，從而提高了葡萄糖傳感器的穩(wěn)定性和使用壽命。
文檔編號C12N11/00GK1885024SQ200610028189
公開日2006年12月27日 申請日期2006年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月27日
發(fā)明者郭曉明, 王根禮, 周祖新 申請人:上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院