專(zhuān)利名稱(chēng)：銪標(biāo)記巨細(xì)胞病毒感染早期診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種指示巨細(xì)胞病毒早期感染的檢測(cè)試劑，能鑒別是由于巨細(xì)胞活動(dòng)性感染狀態(tài)。
背景技術(shù)：
目前，市場(chǎng)上多用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑來(lái)判斷巨細(xì)胞病毒感染，當(dāng)人體被巨細(xì)胞病毒感染后，先產(chǎn)生IgM抗體，該抗體在體內(nèi)呈現(xiàn)先升高后降低的濃度曲線(xiàn)。酶標(biāo)記技術(shù)多采用如辣根過(guò)氧化物酶，容易受環(huán)境溫度及PH值的影響，且酶本身屬于大分子蛋白，對(duì)被標(biāo)記的蛋白有占位影響，導(dǎo)致方法靈敏度低，穩(wěn)定性差。

發(fā)明內(nèi)容
本實(shí)用新型的目的是為克服現(xiàn)有技術(shù)存在的靈敏度低及穩(wěn)定性差的不足之處，采用銪標(biāo)記技術(shù)，提供銪標(biāo)記巨細(xì)胞病毒感染早期診斷試劑盒，以提高方法靈敏度及穩(wěn)定性。
本實(shí)用新型由盒體、包被板、襯墊，銪標(biāo)記抗體、陰性質(zhì)控品、陽(yáng)性質(zhì)控品、稀釋用緩沖液、反應(yīng)緩沖液、洗滌緩沖液、增強(qiáng)液組成，襯墊上設(shè)有容器孔，分別放置銪標(biāo)記抗體、陰性質(zhì)控品、陽(yáng)性質(zhì)控品、稀釋用緩沖液、反應(yīng)緩沖液、洗滌緩沖液、增強(qiáng)液。
本實(shí)用新型由盒體、包被板、襯墊，銪標(biāo)記抗體、陰性質(zhì)控品、陽(yáng)性質(zhì)控品、稀釋用緩沖液、反應(yīng)緩沖液、洗滌緩沖液、增強(qiáng)液及操作說(shuō)明書(shū)組成，襯墊上設(shè)有容器孔，分別放置銪標(biāo)記抗體、陰性質(zhì)控品、陽(yáng)性質(zhì)控品、稀釋用緩沖液、反應(yīng)緩沖液、洗滌緩沖液、增強(qiáng)液。
包被板為特異性CMV重組抗原包被的板、反應(yīng)緩沖液為T(mén)ris反應(yīng)緩沖液(50mmol/L Tris-HCl，含0.9％NaCl，0.5％BSA溶液)、樣本稀釋緩沖液、銪標(biāo)記抗IgM抗體(～0.2mg/ml)、洗板用洗滌液、熒光增強(qiáng)液、陰陽(yáng)性質(zhì)控品7部分組成。
本實(shí)用新型的有益效果是檢測(cè)時(shí)間短快速，檢測(cè)方法特異、敏感、準(zhǔn)確，試劑穩(wěn)定性好，保存時(shí)間長(zhǎng)達(dá)1年之久。試劑盒設(shè)計(jì)合理，制備簡(jiǎn)便，成本低。


圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖。
圖2為反應(yīng)步驟圖。
具體實(shí)施方式
下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步說(shuō)明。
參見(jiàn)圖1，本實(shí)用新型由盒體1、包被板2、襯墊3、銪標(biāo)記抗體4、陰性質(zhì)控品5、陽(yáng)性質(zhì)控品6、稀釋用緩沖液7、反應(yīng)緩沖液8、洗滌緩沖液9、增強(qiáng)液10、操作說(shuō)明書(shū)11組成，襯墊3上設(shè)有容器孔，分別放置銪標(biāo)記抗體4、陰性質(zhì)控品5、陽(yáng)性質(zhì)控品6、稀釋用緩沖液7、反應(yīng)緩沖液8、洗滌緩沖液9、增強(qiáng)液10。
試劑組成由特異性CMV重組抗原包被的板、Tris反應(yīng)緩沖液(50mmol/LTris-HCl，含0.9％NaCl，0.5％BSA溶液)、樣本稀釋緩沖液、銪標(biāo)記抗IgM抗體(～0.2mg/ml)、洗板用洗滌液、熒光增強(qiáng)液、陰陽(yáng)性質(zhì)控品7部分組成。
使用時(shí)，將試劑恢復(fù)到室溫后，用樣本稀釋緩沖液將標(biāo)本及質(zhì)控品按100∶1稀釋?zhuān)魅?00ul加入到包被板的微孔中，室溫下慢振30分鐘后，洗板6次，加標(biāo)記物100ul每孔，室溫下慢振30分鐘后，洗板6次，加增強(qiáng)液200ul每孔，室溫下慢振5分鐘后，在特定儀器下讀數(shù)測(cè)定，根據(jù)與質(zhì)控品的熒光值比較判斷，總反應(yīng)時(shí)間僅1小時(shí)，反應(yīng)步驟參見(jiàn)圖2，圖2中a代表特異性重組抗原包被的微孔板；b代表樣本中能與重組抗原特異性結(jié)合的IgM抗體；c代表特異性重組抗原-IgM結(jié)合復(fù)合物；d代表銪標(biāo)記的抗IgM抗體；e代表特異性重組抗原-IgM-銪標(biāo)記的抗IgM抗體結(jié)合復(fù)合物；f代表熒光增強(qiáng)液；g代表產(chǎn)生熒光。
與進(jìn)口歐蒙試劑一起對(duì)2000例血清標(biāo)本進(jìn)行了臨床檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)下表

本實(shí)用新型試劑盒靈敏度高，能更早期查出是否感染。
以銪標(biāo)記技術(shù)取代酶標(biāo)記技術(shù)，銪為鑭系元素的一種，激發(fā)光與發(fā)射光之間有一個(gè)較大的Stokes位移，通過(guò)排除激發(fā)光源和非特異熒光物的干擾，增強(qiáng)了熒光信號(hào)測(cè)量的特異性，所產(chǎn)生的熒光壽命長(zhǎng)，比普通熒光高5-6個(gè)數(shù)量級(jí)，利用延時(shí)測(cè)量方法消除雜質(zhì)熒光干擾，提高了實(shí)驗(yàn)檢測(cè)靈敏度；鑭系元素離子不易脫落，標(biāo)記物可在1-2年內(nèi)使用，不受環(huán)境溫度及PH的影響，穩(wěn)定性好。
權(quán)利要求1.銪標(biāo)記巨細(xì)胞病毒感染早期診斷試劑盒，其特征是由盒體(1)、包被板(2)、襯墊(3)、銪標(biāo)記抗體(4)、陰性質(zhì)控品(5)、陽(yáng)性質(zhì)控品(6)、稀釋用緩沖液(7)、反應(yīng)緩沖液(8)、洗滌緩沖液(9)、增強(qiáng)液(10)組成，襯墊(3)上設(shè)有容器孔，分別放置銪標(biāo)記抗體(4)、陰性質(zhì)控品(5)、陽(yáng)性質(zhì)控品(6)、稀釋用緩沖液(7)、反應(yīng)緩沖液(8)、洗滌緩沖液(9)、增強(qiáng)液(10)。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型提供銪標(biāo)記巨細(xì)胞病毒感染早期診斷試劑盒，由盒體1、包被板2、襯墊3、銪標(biāo)記抗體4、陰性質(zhì)控品5、陽(yáng)性質(zhì)控品6、稀釋用緩沖液7、反應(yīng)緩沖液8、洗滌緩沖液9、增強(qiáng)液10、操作說(shuō)明書(shū)11組成。本實(shí)用新型提供的試劑盒，標(biāo)記物可在1－2年內(nèi)使用，不受環(huán)境溫度及pH的影響，穩(wěn)定性好，檢測(cè)時(shí)間短快速，檢測(cè)方法特異、敏感、準(zhǔn)確。試劑盒設(shè)計(jì)合理，制備簡(jiǎn)便，成本低。
文檔編號(hào)C12Q1/02GK2857013SQ2005200140
公開(kāi)日2007年1月10日 申請(qǐng)日期2005年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月12日
發(fā)明者趙正言, 俞錫林, 尚世強(qiáng) 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)