專利名稱：一種抗菌肽及其編碼序列和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗菌肽，特別是斜帶石斑魚抗菌肽，編碼該抗菌肽的核苷酸序列以及該抗菌肽的用途。
背景技術(shù)：
抗菌肽(antimicrobial peptide)是具有抗菌性短肽的總稱。1981年瑞典科學(xué)家Steiner等從惜古比天蠶(Hyatophora cecropia)蛹中分離得到一種殺菌肽，并將其命名為cecropin。到目前，已發(fā)現(xiàn)抗菌肽和類似抗菌肽的小分子短肽廣泛存在于生物界，包括細菌、動植物和人類。這種內(nèi)源性的抗菌肽經(jīng)誘導(dǎo)而合成，在機體抵抗病原體的入侵方面起著重要作用?？咕木哂袕V譜殺菌作用，大多數(shù)對革蘭氏陽性菌有較殺滅作用，有些則對革蘭氏陽性菌和陰性菌均起作用，對某些真菌、原生動物、尤其對耐藥性細菌有殺滅作用。
隨著人們生活水平的提高，對海產(chǎn)品的需求愈來愈大。石斑魚是馳名世界的名貴海產(chǎn)魚類之一，其肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)豐富，深受各地消費者的喜愛。由于養(yǎng)殖密度不斷增高，以及人類活動的影響、環(huán)境的污染，造成石斑魚的育苗和養(yǎng)成過程受到病毒、細菌和寄生蟲的襲擊，造成養(yǎng)殖成活率低于50％，成為制約石斑魚養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要因素。
對于細菌病，目前主要應(yīng)用抗生素進行防治。后果造成了環(huán)境污染；使魚的品質(zhì)口味下降；同時病原體的抗藥性增強，使化學(xué)藥物和抗生素的用量越來越大，但病害問題并未解決；農(nóng)藥和抗生素的殘留影響了水產(chǎn)品的質(zhì)量，如日本和歐盟國家都曾因抗生素殘留問題而拒絕進口中國的水產(chǎn)品。尋找新的生物防治的方法，調(diào)動和開發(fā)石斑魚自身的免疫防御潛力，是保證食品安全和環(huán)境安全的必要手段，是開展健康養(yǎng)殖、實現(xiàn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要戰(zhàn)略。
魚類生活于富含各種各樣微生物的水環(huán)境中，長期的生存適應(yīng)使其形成了有效的防御機制。魚類天然免疫是抵抗感染的第一道防線，能有效阻止微生物的吸附、侵入與復(fù)制。由于是非特異的，不必依賴于對病原特異分子結(jié)構(gòu)的識別，因而可對多種入侵病原發(fā)生反應(yīng)；而且這種反應(yīng)迅速，沒有時間延遲，即便是經(jīng)過誘導(dǎo)產(chǎn)生也只有很短的時間延緩，這樣給病原體留下較少的生存時間。目前認為，非特異性天然免疫對于魚類比對于恒溫動物更為重要，在抵抗感染中發(fā)揮重要作用。
隨著研究的深入，一些重要的魚類抗菌肽基因正陸續(xù)被克隆。現(xiàn)己從美洲黃蓋鰈、鱸魚、真鯛中克隆到一些抗菌肽基因。另從一些魚類中獲得了具有抗菌肽活性的肽，如豹鰨、海士鰓鰻、海鞘、泥鰍、鯰等。研究表明，魚類抗菌肽是魚體非特異性免疫系統(tǒng)的重要組成部分，當魚體受到損傷或病原微生物侵襲時，能迅速產(chǎn)生抗菌肽以預(yù)防和殺傷病原微生物的入侵。其合成速度快，在體內(nèi)擴散迅速、靈活的特點是其它大分子蛋白(如抗體)和免疫細胞所不具備的。
目前研究證實許多抗菌肽對魚類特異性的甚至其它動物的病原微生物都具有殺傷活性。最低殺死濃度多在微摩爾水平。Jia等發(fā)現(xiàn)cecropin-melittin重組肽和C端酰胺化的pleurocidin可保護銀大麻哈魚抵御鰻弧菌(Vibrio anguillarum)的感染。隨著對水產(chǎn)養(yǎng)殖品種抗菌肽的分離、結(jié)構(gòu)與功能的研究，改造并合成既具有穩(wěn)定高效抗菌活性又具特異抗菌譜且同時對宿主無害的抗菌肽基因，并通過基因工程在原核細胞、真核細胞或某些藻類中進行表達，以批量生產(chǎn)，將有希望成為對付水產(chǎn)養(yǎng)殖品種主要病原體特別是耐藥菌的新型藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新的抗菌肽，以及編碼該抗菌肽的核苷酸序列和該抗菌肽的用途。
本發(fā)明通過構(gòu)建斜帶石斑魚白細胞cDNA文庫，并通過測序和篩選，獲得了一種斜帶石斑魚抗菌肽的cDNA。同時，通過人工合成方法和原核表達載體重組表達方法，分別獲得了該抗菌肽cDNA所編碼的多肽片段，并經(jīng)試驗證明該多肽片段具有較強的抗菌作用，是一種新的抗菌肽。
本發(fā)明的抗菌肽，其特征在于，它含有序列表sEQ ID NO2中1至23位的氨基酸序列。它可以是序列表SEQ ID NO2中1至23位、1至49位或-22至49位的氨基酸序列。優(yōu)選為序列表SEQ ID NO2中1至23位的氨基酸序列。
本發(fā)明還提供編碼以上所述抗菌肽的多核苷酸。該多核苷酸含有編碼序列表SEQ ID NO2中1至23位、1至49位或-22至49位的氨基酸序列的核苷酸序列或它們的互補序列?？梢允切蛄斜鞸EQ ID NO1的核苷酸序列或其中的156～224位多核苷酸，或它們的互補序列。序列表SEQ ID NO3是SEQ ID NO1核苷酸序列的互補序列。
本發(fā)明還提供一種表達載體，它含有編碼以上所述抗菌肽的多核苷酸。該多核苷酸可以是含有編碼序列表SEQ ID NO2中1至23位、1至49位或-22至49位的氨基酸序列的核苷酸序列或它們的互補序列；可以是序列表SEQ ID NO1的核苷酸序列或其中的156～224位多核苷酸，或它們的互補序列。該表達載體可以是在原核表達載體prSET A(購自Invitrogen公司)的多酶切位點插入上述的多核苷酸而構(gòu)建成的表達質(zhì)粒。
本發(fā)明還提供一種重組工程菌，它含上述的表達載體。它可以是將上述的表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌(例如大腸桿菌BL21)而得到。
本發(fā)明經(jīng)實驗證明，上述本發(fā)明的抗菌肽，對多種細菌(包括多種水產(chǎn)細菌)有較強的殺滅作用(參見實施例二，表1)。因此，該抗菌肽可用于制備細菌抗菌劑，特別是用于制備預(yù)防和治療水生生物細菌病的抗菌劑。
本發(fā)明的抗菌肽可通過以下方法制備1.根據(jù)所述抗菌肽的氨基酸序列(例如SEQ ID NO2中1～23位氨基酸殘基的序列)，用固相合成法合成多肽，并將C端酰胺化。
2.將編碼所述抗菌肽的核苷酸序列(例如SEQ ID NO1中156～224位的多核苷酸)克隆入重組表達載體，并將重組后的DNA轉(zhuǎn)化入宿主細胞，進行重組表達。純化后獲得該抗菌肽。
本發(fā)明的抗菌肽及其多核苷酸序列還具有下列用途1.在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用該抗菌肽可通過浸泡、注射、添加于飼料等方法，用來預(yù)防和治療魚類或其它水生生物的細菌性疾病。
2.該抗菌肽與牛血清白蛋白偶聯(lián)后免疫動物，可以制備與抗菌肽特異性結(jié)合的抗體。該抗體可以用于檢測溶液中抗菌肽的存在，及通過免疫組化的方法檢測抗菌肽在魚體內(nèi)不同組織的表達情況。
3.將SEQ ID NO1或與其互補的多核苷酸(包括DNA或RNA)，或其片段，進行標記后，可以通過Southern印跡、Northern印跡、基因芯片、微陳列等技術(shù)，檢測動物基因組中抗菌肽基因片段的存在，或檢測抗菌肽基因的轉(zhuǎn)錄情況。
4.根據(jù)SEQ ID NO1或與其互補的多核苷酸設(shè)計引物，可通過反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測抗菌肽基因在動物體內(nèi)各組織中、不同發(fā)育階段的轉(zhuǎn)錄情況下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步具體說明。
具體實施例方式
實施例一斜帶石斑魚抗菌肽cDNA的獲取本發(fā)明人用Clontech公司SMARTcDNA文庫構(gòu)建試劑盒，構(gòu)建了斜帶石斑魚白細胞cDNA文庫，通過隨機挑取克隆測序，并將測得序列用BLAST程序與Genbank序列進行比較，獲得了抗菌肽的cDNA。
1.斜帶石斑魚白細胞總RNA的提取健康斜帶石斑魚(重約600g)，腹腔注射polyIC(購自Amersham Pharmacia)0.4ml，濃度為2mg/ml。72h后，從尾靜脈抽血，加至四倍體積含肝素的生理鹽水。將此懸液緩慢加在二倍懸液體積的Ficoll-Paque Plus淋巴細胞分離液(購自Amersham Pharmacia)的表面。平衡后于室溫400g離心30min。吸出中間層的白細胞，用生理鹽水洗兩次，每次于200g離心15min并棄上清。細胞用1ml生理鹽水重懸，用細胞計數(shù)板計數(shù)后，分裝至1.5ml離心管中，400g離心2min棄上清。用Tripure試劑(購自Roche Diagnostics公司)提取總RNA。
2.cDNA一鏈的合成總RNA(0.25μg/μl)3μlSMART III寡聚核苷酸 1μlCDS III/3’PCR引物1μl總體積5μl將以上成分混勻，在離心機上甩一下，于72℃孵育2min。接著置冰浴2min。再在離心機上甩一下，然后于管中依次加入5×1st鏈緩沖液 2.0μlDTT(20mmol/L) 1.0μldNTP mix(10mmol/L)1.0μlSUPERSCRIPTTMII反轉(zhuǎn)錄酶(200u/μl) 1.0μl總體積10.0μl輕輕吹打混勻以上成分，在離心機上甩一下。加1滴礦物油，于42℃溫育1h。取出管子置冰浴終止第一鏈cDNA合成。
3.cDNA的長距離PCR取一0.5ml Eppendorf管依次加入1st鏈cDNA 2μl去離子水 80μl10×cDNA PCR緩沖液 10μl50×dNTP mix 2μl5’PCR引物 2μlCDS III/3’PCR引物 2μl50×Advantage cDNA聚合酶混合物 2μl總體積 100μl輕彈管壁混勻以上成分，在離心上甩一下。加2滴礦物油，將反應(yīng)管置于已預(yù)熱至95℃C的PCR儀上，進行長距離PCR(LD-PCR)。
反應(yīng)程序為(1)95℃1min；(2)95℃15sec，68℃6min，30個循環(huán)。
反應(yīng)完畢，取5μl PCR產(chǎn)物，于1.1％瓊脂糖凝膠上，以0.1μg 1kb DNA Ladder為分子量標準進行電泳檢測。
4.LD-PCR產(chǎn)物的蛋白酶K消化于一滅菌0.5ml管加入50μl LD-PCR產(chǎn)物和2μl蛋白酶K(20μg/μl)，混勻，稍離心。將反應(yīng)管置于45℃孵育20min，稍離心。加50μl去離子水至管中，再加入100μl酚∶氯仿∶異戊醇(25∶24∶1)，來回緩慢顛倒1-2min。以14,000×g離心5min。移上層水相至一滅菌0.5ml管，加入10μl 3mol/LNaAc溶液、1.3μl糖原溶液(20μg/μl)、260μl 95％乙醇(室溫)，立即于室溫以14,000×g離心20min。小心移去上清，用100μl 80％乙醇洗滌沉淀?？諝飧稍锍恋?～10min。接著加入79μl去離子水重懸沉淀。
5.cDNA進行Sfi I酶切取一滅菌0.5ml管依次加入cDNA79μl10×Sfi I緩沖液 10μlSfi I酶(20u/μl)10μl100×BSA1μl總體積 100μl將管中以上成分充分混合，在離心上甩一下。置于50℃溫育2h。接著加入2μl 1％二甲苯青，充分混合。
6.cDNA的分部分離取16支1.5ml管，按1-16順序編號并依次放置在試管架上。將100μl Sfi I酶切的cDNA與二甲苯青混合物小心地逐滴加入到CHROMA SPIN-400柱子中基質(zhì)表面的中心，讓樣品被基質(zhì)充分吸收。用100μl CHROMA柱緩沖液洗柱。待緩沖液流盡后，加入600μl CHROMA柱緩沖液至柱中，立即開始逐滴收集流出的液滴到1#-16#管(約35μl/管)。每管分別取3μl收集液于1.1％瓊脂糖凝膠150V電泳10min，以0.1μg 1kb DNA為分子量標準。在紫外燈下觀察cDNA帶的亮度。將亮度最高的，即cDNA含量最高的3管收集液集中至一1.5ml管，加入1/10體積3mol/L NaAc(pH4.8)、1.3μl糖原(20mg/ml)、2.5倍體積95％乙醇(-20℃)，緩慢地來回顛倒。將管置于-20℃放1h。室溫下14,000×g離心20min，小心移走上清，空氣干燥8～10min，用7μl去離子水重懸沉淀。
7.cDNA與載體的連接由于難以確定多少量的cDNA與載體連接效果最好，故進行了一系列預(yù)連接和包裝反應(yīng)。按如下方法于3個0.5ml管內(nèi)建立3組連接-包裝反應(yīng)

將以上各管混勻后在離心上甩一下，于PCR儀上16℃溫育過夜。
8.連接產(chǎn)物的包裝按MaxPlax Lambda包裝提取物說明書進行。
9.插入子的PCR擴增從文庫平板隨機挑取單個噬菌斑，加至500μlλ噬菌體稀釋液，室溫放置1-2h，以使噬菌體從瓊脂中釋放出來。取1μl噬菌體做模板，用Advantage cDNA PCR試劑盒(Clontech)進行PCR，鑒定插入子的大小。
所用引物λTriplEx 5’長距離插入子篩選引物(AP1)5’-CTC GGG AAG CGC GCC ATT GTG TTG GT-3’，λTriplEx 3’長距離插入子篩選引物(AP2)5’-ATA CGA CTC ACT ATA GGG CGA ATT GGC C-3’PCR反應(yīng)混合液10×PCR緩沖液5μl，AP1和AP2引物(每種10μmol/L)2μl，4×dNTP混合液(每種10mmol/L)1μl，cDNA聚合酶混合物1μl，水40.5μl。
PCR循環(huán)參數(shù)94℃，10min；30次循環(huán)94℃，30s；68℃，3min。68℃，3min。PCR結(jié)束后取5μl進行瓊脂糖凝膠電泳。大于500bp的PCR產(chǎn)物，用PCR產(chǎn)物膠回收試劑盒(購自上海生工生物工程有限公司)進行回收純化。
10.序列測定委托上?；瞪锕こ逃邢薰就瓿?。
11.測序結(jié)果的分析用美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)的BLAST N和BLAST X工具，與GenBank的數(shù)據(jù)庫進行同源性比較。發(fā)現(xiàn)一個序列與其它抗菌肽的cDNA有一定的同源性，經(jīng)分析確認為是斜帶石斑魚的抗菌肽cDNA序列，該序列如序列表SEQ ID NO1所示。
實施例二抗菌肽的固相化學(xué)合成及最低殺菌濃度的測定1.抗菌肽的固相化學(xué)合成按序列表SEQ ID NO2的1至23位氨基酸殘基的序列，委托深圳翰宇生物技術(shù)有限公司合成多肽，并將C末端酰胺化。合成后經(jīng)純化，達到85％的純度。
2.最低殺菌濃度的測定將不同細菌用營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基于37℃振蕩培養(yǎng)過夜。將過夜菌用營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基稀釋至約2×105克隆形成單位每毫升(CFU ml-1)。分別取25μl菌液與等體積不同濃度的用1mmol/L醋酸緩沖液(pH4.0)稀釋的上述合成得到的抗菌肽溶液(400μg/ml至0.5μg/ml)在96孔細胞培養(yǎng)板孔中混勻，菌液與等體積醋酸緩沖液混勻做為對照，放于細菌培養(yǎng)箱中37℃溫育1h，然后取孔中的液體涂于營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基平板，放37℃溫育過夜。數(shù)出平板上的菌落數(shù)目。與對照的平板相比，菌落數(shù)小于對照平板1％數(shù)目的平板的抗菌肽濃度做為對該菌的最低殺菌濃度(minimal bacteriacideconcentration，MBC)。結(jié)果如表1所示。
表1 斜帶石斑魚抗菌肽對一些細菌的最低殺菌濃度

如表1所示，該抗菌肽對多種細菌，特別是魚類最重要的病原菌弧菌類，有很好的殺滅作用，在制備抗菌劑以及魚類細菌病的預(yù)防和治療方面有著很大的應(yīng)用前景。
實施例三石斑魚抗菌肽在原核表達載體的重組表達根據(jù)SEQ ID NO1中156～224位多核苷酸的兩端序列和原核表達載體pRSET A的多酶切位點，合成一對引物，序列如下上游引物，5’-GCGGATCC ATC TTT GGA TTG CTT CTC-3’，其中下劃線部分為BamHI酶切位點；下游引物，5’-CGGAATTC ATG GCG CCT AAC AAG CCC-3’，其中下劃線部分為EcoRI酶切位點。
PCR擴增、基因克隆皆按常規(guī)方法進行。PCR產(chǎn)物約80bp。將目的基因(SEQ ID NO1的核苷酸序列或其中的156～224位多核苷酸)克隆到原核表達載體pRSET A上，構(gòu)建成表達質(zhì)粒pRSET-Epi，經(jīng)酶切鑒定和測序分析表明克隆的基因為目的基因。
將表達質(zhì)粒pRSET-Epi轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21。含目的基因的工程菌在37℃生長到OD600＝0.5時，立即加入終濃度為0.1M的異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)4小時。收集菌體，經(jīng)分離純化得到分子量為6kD的目標蛋白。經(jīng)免疫印跡表明所得到的目標蛋白的氨基酸序列與SEQ ID NO2的N末端相符。
序列表<110>中山大學(xué)<120>一種抗菌肽及其編碼序列和用途<160>3<210>1<211>613<212>cDNA<213>斜帶石斑魚(Epinephelus coioides)<220>
<221>CDS<222>(90)...(305)<400>1gagacacaga tatattacat accctgtgaa tctctcacta ctctgtttga gagcagcctt 60ttgcctttga ctctgagtca gtggaaagg atg aag tgt act gtg gtc ttt ctt 113Met Lys Cys Thr Val Val Phe Leu-20 -15gtg ttg tcc atg gtc gta ttc atg gct gaa cct gga gag tgt atc ttt 161Val Leu Ser Met Val Val Phe Met Ala Glu Pro Gly Glu Cys Ile Phe-10 -5 -11gga ttg ctt ctc cac gga gcc att cac gtt ggc aaa ctg atc cat ggg 209Gly Leu Leu Leu His Gly Ala Ile His Val Gly Lys Leu Ile His Gly5 10 15
ctt gtt agg cgc cat ggg gaa gag cag ctg gat gac cta gag cag ctg 257Leu Val Arg Arg His Gly Glu Glu Gln Leu Asp Asp Leu Glu Gln Leu20 25 30gac gaa cgt gca ctt gat tat aac ccg ggg cgg cct ggt ttt gac tag 305Asp Glu Arg Ala Leu Asp Tyr Asn Pro Gly Arg Pro Gly Phe Asp ***35 40 45actgcggggg caactctgaa gctacatgtt ggatccccgt cgaaaacgag atgctctatc 365tcaagaggct atcctaaata aattgaattg aattgaatct gaattggatt aaaagatttg 425cttctggctt cttcctcttc aaaatgagaa agaaaagtgt ctttcaagcg ccagaaacca 485tcgcttgaaa aacacactga gtgatgataa ccttttgaat taattttggt acagtggcaa 545gccgtaaaaa ctcaaaataa aataaaaatt gcccttttaa atccatggaa aaaaaaaaaa 605aaa aaa aa613<210>2<211>71<212>PRT<213>斜帶石斑魚(Epinephelus coioides)<400>2Met Lys Cys Thr Val Val Phe Leu Val Leu Ser Met Val Val Phe Met-20 -15 -10Ala Glu Pro Gly Glu Cys Ile Phe Gly Leu Leu Leu His Gly Ala Ile-5 -11 5 10His Val Gly Lys Leu Ile His Gly Leu Val Arg Arg His Gly Glu Glu15 20 25Gln Leu Asp Asp Leu Glu Gln Leu Asp Glu Arg Ala Leu Asp Tyr Asn30 35 40Pro Gly Arg Pro Gly Phe Asp45<210>3<211>613<212>cDNA<213>斜帶石斑魚(Epinephelus coioides)<400>3tttttttttt tttttttttt ccatggattt aaaagggcaa tttttatttt attttgagtt 60tttacggctt gccactgtac caaaattaat tcaaaaggtt atcatcactc agtgtgtttt 120tcaagcgatg gtttctggcg cttgaaagac acttttcttt ctcattttga agaggaagaa 180gccagaagca aatcttttaa tccaattcag attcaattca attcaattta tttaggatag 240cctcttgaga tagagcatct cgttttcgac ggggatccaa catgtagctt cagagttgcc 300cccgcagtct agtcaaaacc aggccgcccc gggttataat caagtgcacg ttcgtccagc 360tgctctaggt catccagctg ctcttcccca tggcgcctaa caagcccatg gatcagtttg 420ccaacgtgaa tggctccgtg gagaagcaat ccaaagatac actctccagg ttcagccatg 480aatacgacca tggacaacac aagaaagacc acagtacact tcatcctttc cactgactca 540gagtcaaagg caaaaggctg ctctcaaaca gagtagtgag agattcacag ggtatgtaat 600atatctgtgt ctc 61權(quán)利要求
1.一種抗菌肽，其特征在于，它是SEQ ID NO2中1至23位的氨基酸序列。
2.一種編碼權(quán)利要求1所述抗菌肽的多核苷酸。
3.按照權(quán)利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，它是編碼SEQ ID NO2中1至23位的氨基酸序列的核苷酸序列或它們的互補序列。
4.按照權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，它是SEQ ID NO1中156至224位的核苷酸序列或其互補序列。
5.一種表達載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求2，3或4所述的多核苷酸。
6.一種重組工程菌，其特征在于，它含有權(quán)利要求5所述的表達載體。
7.按照權(quán)利要求6所述的重組工程菌，其特征在于，它是將權(quán)利要求5所述的表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌而得到的。
8.權(quán)利要求1所述抗菌肽在制備細菌抗菌劑中的應(yīng)用。
9.按照權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述抗菌劑是用于預(yù)防和治療水生生物細菌病的抗菌劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抗菌肽、編碼該抗菌肽的多核苷酸以及該抗菌肽的用途。該抗菌肽是含有序列表SEQ ID NO2中1至23位的氨基酸序列。編碼該抗菌肽的多核苷酸是含有編碼序列表SEQ ID NO2中1至23位、1至49位或－22至49位的氨基酸序列的核苷酸序列或它們的互補序列。該抗菌肽對多種細菌(包括多種水產(chǎn)細菌)有明顯的殺滅作用，對副溶血弧菌、溶藻弧菌、美人魚弧菌、摩根爾摩根菌、食酸假單胞菌、創(chuàng)傷弧菌、腦膜炎膿毒性黃桿菌、少動假單胞菌、施氏假單胞菌的最低殺死濃度達小于10μmol/L，可用于制備抗菌劑或殺菌劑，特別是用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中預(yù)防和治療細菌性疾病。
文檔編號C12N1/21GK1821271SQ20051012103
公開日2006年8月23日 申請日期2005年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月29日
發(fā)明者殷志新, 陳偉堅, 黃仙德, 周志成, 何建國 申請人:中山大學(xué)