專利名稱：香豆草醚類化合物及其組合物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從菊科植物中提取的香豆草醚類化合物和含有該化合物的藥物組合物或者保健食品在治療惡性腫瘤方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
香豆草醚類化合物(如式I所示)可由植物中提取或化學(xué)合成、半合成、生物轉(zhuǎn)化的方式獲得，例如從菊科植物鱧腸(Eclipta prostrata Linn)、蟛蜞菊(Wedelia chinensis)、或旱蓮草(Eclipta alba)等植物中提取。該化合物在菊科植物中的提取部位為植物的枝、葉或果實(shí)部位，尤其是葉部位。
式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基。
1956年，Govindachari等首次從Wedelia calendulacea中分離出香豆草醚類成分蟛蜞菊內(nèi)酯(wedelolactone)，其結(jié)構(gòu)為 (Govindachari et.al.″Chemical Examination of Wedelia Calendulacea，Part I，Structure of Wedelolactone″，Journal of the Chemical Society(1956)，pp.629-632.；Govindachari et.al.″Chemical Investigation of WedeliaCalendulacea，Part II，The Position of the Methoxyl Group in Wedelolactone″，Journal of the Chemical Society，(1957)，545-547；)。
其后Bhargava等從旱蓮草(Eclipta alba)中分離出去甲蟛蜞菊內(nèi)酯(demethylwedelolactone)，結(jié)構(gòu)式為 (Bhargava KK.et.al Isolation of desmethylwedelolactone and its glucoside fromEclipta alba.Indian J Chem，1970，8(7)664-665)。
Li CC.等及美國(guó)專利6,552,071公開了該類化合物衍生物的結(jié)構(gòu)及合成方法(Li CC.et.al Total synthesis of wedelolactone.J Org Chem.2003 Oct31；68(22)8500-4.)(Yuan et al.Methods for treating cell death diseases andinflammation.United States Patent 6,552,071)。
該類化合物以往被認(rèn)為有護(hù)肝、止血、抗蛇毒等作用(Wong et.al.Wedelolactone and coumestan derivatives as new antihepatotic and antiphlogisticprinciples.Arzneimittelforschung.1998 May 38(5)661-5；Melo.et.al.Inhibitionof the myotoxic and hemorrhagic activities of crotalid venoms by Ecliptaprostrate extracts and constituents.Toxicon.1994 May；32(5)595-603)。
眾所周知，惡性腫瘤嚴(yán)重危脅著人類的身體健康，其治療也成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)，傳統(tǒng)的化療和放療由于缺乏特異性，取得療效的同時(shí)也往往給患者帶來(lái)較大的毒副作用。因此，尋找靶向性的小分子抗腫瘤藥物是新藥研究領(lǐng)域的一個(gè)重點(diǎn)，而從天然植物中篩選具有嶄新分子結(jié)構(gòu)的新化合物或者已知天然化合物的新用途，也成為新藥開發(fā)的主要途徑之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含該化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物在抗惡性腫瘤方面的用途。
本發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)一種香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含該香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物可顯著抑制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)，且基本無(wú)毒；細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)也顯示其對(duì)細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路有顯著的阻遏作用，提示能阻止腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，并能殺死腫瘤細(xì)胞。
本發(fā)明所提供的物質(zhì)是一種式I的香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含式I的香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物 式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、C1-C8烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等，優(yōu)選具有1～4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，最優(yōu)選甲基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；在另一優(yōu)選例中，所述的藥學(xué)上可接受的鹽是式I化合物與選自下組的酸所形成的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來(lái)酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲基苯磺酸或羥乙磺酸。
在另一優(yōu)選例中，所述的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽是從菊科植物中提取的。
在另一優(yōu)選例中，所述的菊科植物選自鱧腸(Eclipta prostrata Linn)、蟛蜞菊(Wedelia chinensis)或旱蓮草(Eclipta alba)。
在另一優(yōu)選例中，所述的式I化合物是如同式II的蟛蜞菊內(nèi)酯
在另一優(yōu)選例中，式I化合物是通過化學(xué)全合成、化學(xué)半合成或用生物轉(zhuǎn)換的方式獲得的，如化合物1R1＝R2＝H，R3＝R4＝OH；化合物2R1＝OH，R2＝CH3，R3＝R4＝OH；化合物3R1＝OH，R2＝CH3，R3＝Cl，R4＝OH；化合物4R1＝OCH3，R2＝H，R3＝Cl，R4＝H；化合物5R1＝H，R2＝(CH2)2CH3，R3＝OCH3，R4＝Cl；化合物6R1＝OH，R2＝CH3，R3＝H，R4＝OH。
本發(fā)明還包括一種用于治療惡性腫瘤的藥物組合物，它含有(a)有效量的作為活性成分的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含式I的香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物，和(b)藥學(xué)上可接受的載體。
其中，該藥物組合物還可以包括選自下組的一種或多種輔助活性成分紫杉醇、長(zhǎng)春花堿、喜樹堿、替尼泊苷、秋水仙堿、高三尖杉酯堿、依托泊苷、丙卡巴肼、門冬酰胺酶、順鉑、卡鉑、米托蒽醌、他莫昔芬、環(huán)磷酰胺、鹽酸氮芥、洛莫司汀、司莫司汀、塞替派、白消安、氮甲、苯丁酸氮芥、氟尿嘧啶、喃氟啶、優(yōu)氟啶、卡莫氟、巰嘌呤、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、環(huán)胞苷、硫鳥嘌呤、六甲蜜胺、羥基脲、絲裂霉素、阿霉素、表柔比星、博萊霉素、培萊霉素、放線菌素D和阿伐司汀、赫賽汀、格列衛(wèi)、吉西他濱、托泊替康、多西他賽、泰索帝、亮丙瑞林等。
本發(fā)明還包括一種用于輔助治療惡性腫瘤的保健食品，它含有(a)有效量的作為活性成分的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含式I的香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物，和(b)食品上可接受的載體。
如本文所用，烷基是指具有1～8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等。優(yōu)選具有1～4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。最優(yōu)選甲基。
本發(fā)明的化合物可以以由藥學(xué)上或生理學(xué)可接受的酸或堿衍生的鹽形式使用。這些鹽包括(但不限于)與如下酸形成的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來(lái)酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、或羥乙磺酸。其他鹽包括與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鈣或鎂)形成的鹽，以及以酯、氨基甲酸酯或其他常規(guī)的“前體藥物”的形式(當(dāng)以這種形式給藥時(shí)，在體內(nèi)可轉(zhuǎn)化成活性部分)。
含有式I化合物的提取物也可用于本發(fā)明。一種優(yōu)選的提取方法如本發(fā)明人在其另一項(xiàng)專利《治療關(guān)節(jié)炎的藥物》(申請(qǐng)?zhí)?00310124512)中所述。通常，在提取物中式I化合物的純度按重量計(jì)應(yīng)在40％-99.9％，更佳地為50-98％。
本發(fā)明還包括其藥物組合物以及治療惡性腫瘤的方法，它包括給哺乳動(dòng)物施用藥物有效量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明的香豆草醚類化合物可用于治療惡性腫瘤。
本發(fā)明涉及的藥物組合物包含有效量的本發(fā)明涉及的化合物和藥物上可接受的載體?！坝行Я俊毕抵冈谄毡檎J(rèn)同的醫(yī)學(xué)判定范疇內(nèi)，化合物的用量足以改善待治病情，且治療時(shí)并未出現(xiàn)嚴(yán)重的副作用。某化合物的有效量應(yīng)根據(jù)具體的待治病情、接受治療的病人的年齡和生理狀況、病情嚴(yán)重程度、療程長(zhǎng)短、藥用載體及給藥途徑等因素而確定。此時(shí)本發(fā)明藥物組合物中包含按重量計(jì)約0.1％至約99.9％，通常為0.05-90％(重量)的香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或含有它們的提取物。
通常，當(dāng)本發(fā)明化合物用于上述用途時(shí)，它們可與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑混合，如添加劑、稀釋劑、載體或拋射劑等以混合物形式使用，制成粉霧劑、氣霧劑或噴霧劑。粉霧劑中適合的稀釋劑或載體的實(shí)例包括乳糖、葡聚糖、阿拉伯膠、甘露糖醇和葡萄糖。氣霧劑和噴霧劑中適合的溶劑為乙醇或油酸，適合的潛溶劑為甘油、丙二醇或聚乙二醇。溶劑和潛溶劑可統(tǒng)稱為稀釋劑。適合的拋射劑為三氯一氟甲烷，二氯二氟甲烷，二氯四氟乙烷、丙烷、異丁烷、正丁烷、二氧化碳、一氧化二氮、氮?dú)獾取?br> 或者可以用如下形式口服給藥片劑、膠囊、可分散的粉末、顆?；驊腋∫?含有如約0.05-5％懸浮劑)、糖漿(含有如約10-50％糖)、和酏劑(含有約20-50％乙醇)，或者以無(wú)菌可注射溶液或懸浮液形式(在等滲介質(zhì)中含有約0.05-5％懸浮劑)進(jìn)行非腸胃給藥。例如，這些藥物制劑可含有與載體混合的約2.5-90％，通常約為5％-60％(重量)的活性成分。
常見的藥物劑型包括粉霧劑、氣霧劑、噴霧劑、粒劑、粉劑、片劑、膠囊、糖漿、栓劑、注射劑、乳劑、酊劑、懸浮液、溶液的形式口服或非口服給藥。
對(duì)于非口服給藥，可使用粉霧劑、氣霧劑、噴霧劑。
對(duì)于口服給藥，可使用片劑、錠劑、膠囊、丸劑、粉末、顆粒、糊劑、混懸劑、乳劑或者溶液劑。
對(duì)于非胃腸道給藥，可使用注射劑和輸液劑。
對(duì)于肌肉內(nèi)注射，可使用水溶液和油溶液或者混懸劑以及相應(yīng)的貯存庫(kù)制劑。
所用的活性成分的有效劑量可隨給藥的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重程度而變化。然而，通常當(dāng)本發(fā)明的化合物每天以約0.5-500mg/kg動(dòng)物體重的劑量給予時(shí)，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以2-4次分開的劑量給予，或以緩釋形式給藥。對(duì)大部分大型哺乳動(dòng)物而言，每天的總劑量約為1-100mg。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學(xué)上可接受的載體混合的約0.5-500mg的活性化合物?？烧{(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng)答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每天給予若干次分開的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。通常，成年人的口服每日的合適臨床劑量的選擇范圍為1-1000mg，優(yōu)選為10-200mg，成人非口服的每日劑量為0.1-100mg，優(yōu)選1-100mg。
在優(yōu)選例中，本發(fā)明的化合物可通過口服以及靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑給藥。固態(tài)載體包括淀粉、乳糖、磷酸氫鈣、微晶纖維素、蔗糖和白陶土，而液態(tài)載體包括無(wú)菌水、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要適合活性成分的特性和所需的特定給藥方式。在制備藥物組合物中通常使用的佐劑也可有利地被包括，例如調(diào)味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑如維生素E、維生素C、BHT和BHA。
如本文所用，“非口服”包括皮下注射，靜脈注射，腹膜內(nèi)注射和滴注輸液，使用合適的分散劑或潤(rùn)滑劑及懸浮劑，由本領(lǐng)域常規(guī)方法可制得注射制劑如無(wú)菌注射的水性或油性懸浮劑，無(wú)菌注射的制劑為在稀釋劑中或溶液中的無(wú)毒、非口服施用的溶液或懸浮劑，例如水溶液，可用的載體或溶劑包括水、等滲鹽水、無(wú)毒非揮發(fā)性油也可用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可以使用任何非揮發(fā)油或脂肪酸，包括天然、合成或半合成的脂肪油和脂肪酸以及天然、合成或半合成的單、雙或三甘油酯。
直腸用藥的栓劑的制備可用藥物與一種合適的無(wú)刺激性賦形劑混合而成，賦形劑在常溫下為固體，而在腸內(nèi)溫度下為液體從而溶解、將藥物釋放到直腸中，如可可脂或聚乙二醇。
口服用藥的固體藥劑如上所述，包括粉劑、粒劑、片劑、丸劑、膠囊。這種劑型可用有效組分與至少一種添加劑混合而成，這些添加劑包括蔗糖、乳糖、纖維素糖、甘露醇、麥芽糖、葡聚糖、淀粉、瓊脂、藻酸炎、殼質(zhì)、殼聚糖、果膠、黃耆膠、阿拉伯膠、明膠、膠原、酪蛋白、白蛋白以及合成或半合成的聚合物和甘油酯，一般這些劑型可含有另外的添加劑，包括惰性稀釋劑，潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂，防腐劑如對(duì)羥苯甲酸酯類，山梨酸，抗氧劑如維生素C、α-維生素E和半胱氨酸，分解劑，粘結(jié)劑，增稠劑，緩沖液，甜味劑，調(diào)味劑和香料。片劑和丸劑也可覆以腸衣?？诜囊后w劑型包括可藥用的乳劑、糖漿、酊劑、懸液和溶液，可以含有常用的惰性稀釋劑，如水。
從易于制備和給藥的立場(chǎng)看，優(yōu)選的藥物組合物是固態(tài)組合物，尤其是片劑和固體填充或液體填充的膠囊?？诜o藥是優(yōu)選的。
本發(fā)明中所說的“保健食品”是指表明具有特定保健功能的食品，即適用于特定人群食用，具有調(diào)節(jié)機(jī)體功能的作用，不直接以治療為目的的食品。其中通常含有0.05-50％(重量)的香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或含有它們的提取物。
本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于1.本發(fā)明從天然植物中找到了-類香豆草醚類化合物，該化合物能被用于制備治療惡性腫瘤的新藥。細(xì)胞試驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn)顯示該化合物能顯著抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，且對(duì)人體無(wú)毒副作用。
2.本發(fā)明化合物可將其單獨(dú)或與其它藥物共同作為活性成分制成治療惡性腫瘤的藥品，也可將其單獨(dú)或與其它活性成分及食品上可接受的載體制成輔助治療惡性腫瘤的保健食品。


圖1為蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)于脫壁懸浮引起的NF-κB因子轉(zhuǎn)錄活性的影響的示意圖；圖2為蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)S180細(xì)胞的細(xì)胞毒性的影響的示意圖。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1如結(jié)構(gòu)式II所示的香豆草醚類化合物抑制NF-κB細(xì)胞因子的活力NF-κB即核因子，在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中有重要作用。以往對(duì)NF-κB的認(rèn)識(shí)只限制于其在炎癥、應(yīng)激、免疫方面的作用，Beg等[Beg A A，Sha W C，Bronson R T，et al.Nature，1995，376(6536)167～170]最早發(fā)現(xiàn)NF-κB與細(xì)胞死亡有關(guān)，并發(fā)現(xiàn)缺乏NF-κB鼠的肝臟由于肝細(xì)胞凋亡而出現(xiàn)退行性變，認(rèn)為NF-κB與抑制胚胎細(xì)胞凋亡有關(guān)，因而推想其可以抑制腫瘤細(xì)胞凋亡。接下來(lái)的研究表明許多高表達(dá)NF-κB的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出對(duì)射線、化療、腫瘤壞死因子TNF介導(dǎo)的凋亡的抵抗作用，抑制NF-κB可以提高腫瘤細(xì)胞對(duì)TNF的敏感性[NF-κB與腫瘤發(fā)生及藥物篩選.劉巍峰，于姍姍，李越中.生物工程學(xué)報(bào)，2005，21(1)12-18.]。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑诿摫趹腋顟B(tài)下，被轉(zhuǎn)化的人腎胚胎細(xì)胞HEK293細(xì)胞株以及其它腫瘤細(xì)胞株中的NF-κB轉(zhuǎn)錄因子的活性會(huì)隨著懸浮時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增強(qiáng)；本試驗(yàn)在于觀察天然化合物蟛蜞菊內(nèi)酯(如式II所示)對(duì)于脫壁懸浮引起的NF-κB轉(zhuǎn)錄因子活性的影響。
實(shí)驗(yàn)材料1)細(xì)胞株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了NF-κB-luciferase報(bào)告基因質(zhì)粒的HEK2932)質(zhì)粒NF-κB-luc+plasmid3)熒光素酶檢測(cè)試劑盒(promega E1500)實(shí)驗(yàn)方法1)培養(yǎng)過夜的HEK293細(xì)胞，胰酶消化，以每孔2×105個(gè)細(xì)胞分裝于eppendorf管中；2)用新鮮配制的含蟛蜞菊內(nèi)酯(如式II所示)的DMEM(含10％小牛血清)補(bǔ)足上述培養(yǎng)基至1毫升，混勻，使其中的蟛蜞菊內(nèi)酯(如式II所示)終濃度為80μM；3)將上述細(xì)胞懸液滴入瓊脂覆蓋的24孔培養(yǎng)板中，于培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)3h、5h、15h；4)2000rpm，4℃，離心5min，收集細(xì)胞；
5)用預(yù)冷PBS(磷酸鹽緩沖液)漂洗一遍，2000rpm，4℃，離心5min，棄上清，收集細(xì)胞；6)加100μl熒光素酶裂解液(CCLR)，渦旋振蕩10s；7)13200rpm，4℃，離心2min，收集上清；8)取20μl上述上清液于96孔白板(Costar)中，加30μl熒光素酶底物，快速混勻，于luminometer(TECAN GENion)中檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論如圖1所示，蟛蜞菊內(nèi)酯(如式II所示)能有效抑制HEK293細(xì)胞脫壁懸浮所引起的NF-κB因子轉(zhuǎn)錄的激活效應(yīng)，提示蟛蜞菊內(nèi)酯(如式II所示)可能通過抑制脫壁腫瘤細(xì)胞中的NF-κB的活力來(lái)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞脫壁調(diào)亡，從而阻止腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
實(shí)施例2如結(jié)構(gòu)式II所示的香豆草醚類化合物對(duì)小鼠S180肉瘤細(xì)胞的殺傷效果實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察天然化合物蟛蜞菊內(nèi)酯(如式II所示)對(duì)于小鼠S180肉瘤細(xì)胞的體外細(xì)胞毒性。
實(shí)驗(yàn)材料S180肉瘤細(xì)胞，噻唑藍(lán)(MTT)。
實(shí)驗(yàn)步驟1.收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度，取90μl種于96孔板，使每孔細(xì)胞濃度為1×104。
2.配10倍濃度各藥，取10μl加入各孔，每種藥物設(shè)三個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)僅加藥物(無(wú)細(xì)胞)的對(duì)照孔三個(gè)。
3.37℃5％CO2培養(yǎng)48小時(shí)，每孔加入5mg/ml的MTT 10μl，37℃4小時(shí)。每孔加入三聯(lián)液(5％SDS，10mm HCl，5％異丙醇)，37℃過夜。
4.595nm和620nm測(cè)吸光度。
計(jì)算公式survival cell percent(％)＝(樣品OD值/對(duì)照OD值)×100％實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2
實(shí)驗(yàn)結(jié)論在5～100μM的濃度范圍內(nèi)，蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)S180肉瘤細(xì)胞有顯著殺傷作用。
實(shí)施例3 如結(jié)構(gòu)式II所示的香豆草醚類化合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抗腫瘤效果實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察蟛蜞菊內(nèi)酯(如式II所示)對(duì)小鼠S180肉瘤生長(zhǎng)有無(wú)抑制作用。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雌性昆明小鼠20只，體重18-25g，由本公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供。隨機(jī)均分為2組，每組10只，分別為陰性對(duì)照組、給藥組。
實(shí)驗(yàn)方法稱取一定量純度為98％蟛蜞菊內(nèi)酯(如式II所示)，用0.5％CMC稀釋配制成100mg/kg劑量。0.5％CMC設(shè)立為陰性對(duì)照組。給小鼠接種S180肉瘤細(xì)胞，7天后在無(wú)菌條件下抽取腹水，1200rpm離心5min，棄去上清。細(xì)胞沉淀用生理鹽水稀釋成1∶80的混懸液備用(細(xì)胞濃度為5×106個(gè)/ml)。將稀釋的S180懸液注射在小鼠右前肢腋部皮下，注射量每只0.2ml，制造荷瘤小鼠，進(jìn)行抑瘤作用的檢測(cè)。接種24小時(shí)后，將小鼠隨機(jī)分組，進(jìn)行腹腔注射給藥，每日1次，連續(xù)給藥10天后停藥，放置4天后處死小鼠，剝?nèi)×鰤K稱重，計(jì)算每組平均值，進(jìn)行t檢驗(yàn)，并計(jì)算抑瘤率。
抑瘤率＝(對(duì)照組瘤重-給藥組瘤重)/對(duì)照組瘤重×100％。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表

“*”表示p＜0.01與陰性對(duì)照組(0.5％CMC)相比有非常顯著性差異。
上表的結(jié)果表明給藥組體重與陰性對(duì)照組相比，蟛蜞菊內(nèi)酯(如式II所示)具有顯著的抑瘤活性(p＜0.01)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論本次實(shí)驗(yàn)中，純度為98％的蟛蜞菊內(nèi)酯(如式II所示)在100mg/kg劑量時(shí)對(duì)小鼠S180肉瘤生長(zhǎng)的有明顯抑制作用。
實(shí)施例4 片劑的制備利用常規(guī)技術(shù)，混合以下組分，然后直接壓片，制備片劑形式的藥物組合物，其配方如下

實(shí)施例5 注射劑的制備稱取1.0g純度為98％的蟛蜞菊內(nèi)酯(如結(jié)構(gòu)式II所示)，加入50g聚乙二醇PEG-400，使其完全溶解；配制50g pH5.5的磷酸鹽緩沖液，稱取0.02g亞硫酸氫鈉加入到上述磷酸鹽緩沖液中；將緩沖液加入到蟛蜞菊內(nèi)酯(如式II所示)的PEG溶液中，混合均勻，加入0.01％針用活性碳100℃保溫30分鐘，G3垂熔玻璃漏斗過濾、0.22μm微孔濾膜過濾，過濾后的藥液分裝成2ml/支的針劑50支，分裝好的注射劑壓塞、壓鋁蓋成針劑。
權(quán)利要求
1.一種式I的香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含式I的香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物的用途，其特征在于可用于制備治療惡性腫瘤的藥物和制備輔助治療惡性腫瘤的保健食品。 式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥學(xué)上可接受的鹽是式I化合物與選自下組的酸所形成的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來(lái)酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸或羥乙磺酸。
3.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的式I化合物是化合物1R1＝R2＝H，R3＝R4＝OH；化合物2R1＝OH，R2＝CH3，R3＝R4＝OH；化合物3R1＝OH，R2＝CH3，R3＝Cl，R4＝OH；化合物4R1＝OCH3，R2＝H，R3＝Cl，R4＝H；化合物5R1＝H，R2＝(CH2)2CH3，R3＝OCH3，R4＝Cl；化合物6R1＝OH，R2＝CH3，R3＝H，R4＝OH。
4.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的式I化合物或所述的提取物是從菊科植物中提取的。
5.如權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述的菊科植物選自鱧腸(Eclipta prostrata Linn)、蟛蜞菊(Wedelia chinensis)或旱蓮草(Eclipta alba)。
6.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的式I化合物是具有式II的蟛蜞菊內(nèi)酯
7.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的惡性腫瘤選自下組惡性肉瘤、鱗狀上皮細(xì)胞癌和腺上皮細(xì)胞癌。包括但不限于惡性黑色素瘤、皮膚癌、淋巴癌、甲狀腺癌、腦癌、骨癌、白血病、鼻咽癌、肺癌、咽喉癌、食道癌、胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宮癌、絨毛膜細(xì)胞癌、陰道癌、陰莖癌、睪丸癌、前列腺癌、腎癌、膀胱癌和惡性肉瘤。
8.一種治療惡性腫瘤的藥物組合物，其特征在于，它含有(a)作為活性成分的有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含式I的香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物 式中，R1代表氫原子、羥基或甲氧基；R2代表氫原子或C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基或甲氧基；和(b)藥學(xué)上可接受的載體。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于其還包括選自下組的一種或多種輔助活性成分紫杉醇、長(zhǎng)春花堿、喜樹堿、替尼泊苷、秋水仙堿、高三尖杉酯堿、依托泊苷、丙卡巴肼、門冬酰胺酶、順鉑、卡鉑、米托蒽醌、他莫昔芬、環(huán)磷酰胺、鹽酸氮芥、洛莫司汀、司莫司汀、塞替派、白消安、氮甲、苯丁酸氮芥、氟尿嘧啶、喃氟啶、優(yōu)氟啶、卡莫氟、巰嘌呤、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、環(huán)胞苷、硫鳥嘌呤、六甲蜜胺、羥基脲、絲裂霉素、阿霉素、表柔比星、博萊霉素、培萊霉素、放線菌素D和阿伐司汀、赫賽汀、格列衛(wèi)、吉西他濱、托泊替康、多西他賽、泰索帝、亮丙瑞林。
10.一種用于惡性腫瘤輔助治療的保健食品，其特征在于，它含有(a)有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者含式I的香豆草醚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的提取物 式中，R1代表氫原子、羥基或甲氧基；R2代表氫原子或C1-C8烷基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、羥基或甲氧基；和(b)食品上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從菊科植物中提取的香豆草醚類化合物的用途。該化合物及以該化合物為主要成分的藥物組合物，可以被用來(lái)治療惡性腫瘤。細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn)證明，這種香豆草醚類化合物可有效抑制并殺死腫瘤細(xì)胞，可被開發(fā)成新型的抗腫瘤一類新藥。
文檔編號(hào)A23L1/30GK1990489SQ20051011243
公開日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2005年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月30日
發(fā)明者俞強(qiáng) 申請(qǐng)人:上海安普生物科技有限公司