專利名稱：農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑及其制備方法與使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種組合物，尤其涉及一種含酶的固體組合物試劑，特別涉及一種機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用含酶的固體組合物試劑。
背景技術(shù)：
殘留農(nóng)藥對(duì)人類健康的危害是食品安全問題中舉世矚目的熱點(diǎn)之一，世界范圍內(nèi)由于有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留超標(biāo)而引起的中毒事件屢有發(fā)生，其中有69.5％是由有機(jī)磷農(nóng)藥所致。因此對(duì)食品、環(huán)境中農(nóng)藥殘留進(jìn)行監(jiān)測是一件非常重要的工作。目前對(duì)于有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測通常采用酶抑制法，利用酶被抑制的程度，借助農(nóng)藥殘毒速測儀通過酶催化動(dòng)力學(xué)光度法測量，或者通過顏色變化，或者通過酸度測量等方法，進(jìn)行有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留毒性的快速檢測。在上述酶催化動(dòng)力學(xué)反應(yīng)體系中，涉及了酶試劑、底物、顯色劑等，而酶試劑在檢測中具有關(guān)鍵性作用。一般而言，酶在室溫(20～25℃)或冰箱冷藏(0～4℃)下儲(chǔ)存易于失活(酶在室溫保存不得超過2天，在冰箱冷藏不得超過1周)直接影響農(nóng)藥殘毒檢測的準(zhǔn)確性。在農(nóng)副產(chǎn)品的產(chǎn)銷過程中，因酶試劑穩(wěn)定性得不到保證，從而影響測量的準(zhǔn)確性，使得絕大多數(shù)的農(nóng)產(chǎn)品在進(jìn)入餐桌之前，食用的安全性難以得到保證，無公害農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)得不到有效的控制。為了適應(yīng)農(nóng)藥殘毒現(xiàn)場檢測的需要，研究酶的固化技術(shù)，使固體酶能穩(wěn)定貯存，是一個(gè)有效解決問題的途徑。酶的固定化方法很多，如物理吸附法、離子結(jié)合法、包埋法、共價(jià)結(jié)合法、交聯(lián)法等。其中包埋、共價(jià)結(jié)合、共價(jià)交聯(lián)三種方法雖結(jié)合力強(qiáng)、但酶活損失較多；吸附法制備簡單，成本低，但結(jié)合差，在受到離子強(qiáng)度、pH變化影響后，酶會(huì)從載體上游離下來。目前已有的固體酶試劑還不能滿足有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑及其制備方法與使用方法。本發(fā)明有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑可在室溫下(20～25℃)穩(wěn)定儲(chǔ)存20天以上，從而克服了已有固體酶試劑存在的缺點(diǎn)，又克服了酶溶液于在-20℃下冷凍儲(chǔ)存由于多次溶凍所帶來的酶活顯著降低的弊病，有效解決了目前有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測存在的問題。
本發(fā)明有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑的組分及配比為膽堿酯酶活度為1000units/mL的乙酰膽堿酯酶或丁酰膽堿酯酶之一 5-50μL、緩沖溶液1)0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液 5-30mL、2)0.1M pH＝7.8-8.2 Tris-HCl緩沖溶液 20-50mL、載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP) 2-10g；本發(fā)明有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測的固體酶試劑的組分及優(yōu)選配比為膽堿酯酶活度為1000units/mL的乙酰膽堿酶或丁酰膽堿酯酶之一10-30μL、緩沖溶液1)0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液 8-20mL、2)0.1M pH＝7.8-8.2 Tris-HCl緩沖溶液 25-40mL、載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP) 5-8g；進(jìn)行有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留毒性的快速篩選檢測，酶試劑在檢測中具有關(guān)鍵性作用，一般而言，酶在室溫(20～25℃)或冰箱冷藏(0～4℃)下儲(chǔ)存易于失活(酶在室溫保存不得超過2天，在冰箱冷藏不得超過1周)，直接影響農(nóng)藥殘毒檢測的準(zhǔn)確性。常見的酶試劑保存方法一般是將酶溶液進(jìn)行分裝后于-20℃冷凍儲(chǔ)存的方式以增加酶的儲(chǔ)存周期。但該方法存在著多次溶凍所帶來的酶活性易于降低的問題，如果溶凍次數(shù)超過2次則酶活性降低顯著，使測量結(jié)果不穩(wěn)定，因此該方法也不便于實(shí)際應(yīng)用。
為了便于現(xiàn)場快速、準(zhǔn)確地檢測農(nóng)藥殘毒，其分析用化學(xué)試劑必須在室溫下具有足夠的穩(wěn)定性、容易保存，反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)完全，速度快，操作簡單，攜帶方便等特點(diǎn)，只有具備這些特點(diǎn)才能有效地檢測與控制食品中農(nóng)藥殘毒、真正確保食用安全性。
本發(fā)明有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑所選用的固相載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)與酶的結(jié)合力適中，通過物理吸附方式進(jìn)行固體酶的制備，所制得的固體酶可在室溫(20～25℃)下穩(wěn)定儲(chǔ)存20天以上，可以滿足現(xiàn)場檢測農(nóng)藥殘毒的需要；固體酶的基體對(duì)原酶的活性基本無影響，可保證檢測靈敏度；其水溶解性好，便于實(shí)驗(yàn)操作；其成本低，制備方法簡單，便于推廣應(yīng)。用本發(fā)明固體酶在低溫冷凍下儲(chǔ)存，多次溶凍對(duì)其活性影響較小，便于儲(chǔ)存更長時(shí)間(-20℃下冷凍可穩(wěn)定儲(chǔ)存2年以上)，決解了目前固體酶存在的結(jié)合力不強(qiáng)、酶活損失較多的問題。因此本發(fā)明有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測的固體酶試劑配合使用底物試劑、顯色劑試劑及緩沖溶液試劑，可以滿足蔬菜、水果、環(huán)境水或糧食中農(nóng)藥殘毒現(xiàn)場快速分析的需求并保證測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。
本發(fā)明有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑的制備方法，其步驟如下1)酶溶液A的配制將所需的活度為1000units/mL的膽堿酯酶放入燒杯中，用所需的0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液稀釋，得到酶溶液A；2)酶溶液B的配制向上述已配置好的酶溶液A中加入所需的0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液稀釋，得到酶溶液B；3)載體的溶解將所需的載體放入上述已配置好的酶溶液B中，攪拌，使載體溶解；置于0-4℃冰箱內(nèi)反應(yīng)1小時(shí)以上，使酶與載體結(jié)合；4)凍干將上述酶與載體結(jié)合物轉(zhuǎn)移至凍干瓶中，將凍干瓶置于-20℃以下低溫乙醇浴中輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)凍干，使溶質(zhì)盡量薄且均勻地涂布于瓶壁上，待溶液蒸發(fā)干后，牢固地固定凍干瓶于凍干機(jī)上10小時(shí)；取下內(nèi)壁載有凍干粉的凍干瓶，小心地刮下凍干粉1.0g、2.0g、或6.0g放入2mL的安碚瓶中；抽成真空后封口，置于4℃冰箱中冷藏或于冷凍下保存。
本發(fā)明有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑的使用方法1)配固體酶試劑每個(gè)裝有6.0g固體酶試劑的安碚瓶為一個(gè)試劑包，每次檢測用量為30mg；使用時(shí)，打開安碚瓶直接稱量使用或用0.1M，pH＝7.8-8.2的Tris-HCl或磷酸鹽緩沖溶液溶解后使用，每30mg固體酶試劑用4mL緩沖溶液溶解；于開口的安碚瓶中盛裝未用盡的固體酶試劑，應(yīng)置于干燥器內(nèi)，于室溫下20日內(nèi)不失效；2)底物試劑將所需底物試劑用水稀釋；按每0.6g.底物稀釋至100mL刻度處稀釋，每個(gè)試劑包內(nèi)裝10mL；底物為碘化硫代乙酰膽堿、溴化硫代乙酰膽堿、氯化硫代乙酰膽堿、碘化硫代丁酰膽堿、溴化硫代丁酰膽堿膽堿、氯化硫代丁酰膽堿、氯化乙酰膽堿、2，6-二氯靛酚乙酯、2，6-二溴靛酚乙酯、2，6-二氯靛酚丙酯或2，6-二溴靛酚丙酯之一；3)顯色劑試劑，僅酶催化動(dòng)力學(xué)光度法測量時(shí)使用；按每0.8g顯色劑稀釋至100mL刻度處稀釋，每個(gè)試劑包內(nèi)裝10mL；顯色劑為5，5’-二硫代-2，2’-二硝基苯甲酸(DTNB)；將上述3種試劑包各一個(gè)、分別用1個(gè)塑料洗瓶盛裝的0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液及0.1M pH＝7.8-8.2 Tris-HCl緩沖溶液各500mL、3-5個(gè)塑料滴瓶放入檢測箱中；每個(gè)檢測箱中的試劑可檢測待測樣品為0.2～1.0g或待測樣品汁0.1～0.5mL的樣品200組；緩沖溶液使用時(shí)也可轉(zhuǎn)入塑料滴瓶中，方便取用。這樣，在進(jìn)行現(xiàn)場檢測操作時(shí)，便不需要很多玻璃器皿，使得操作方便快捷，可靠性高。
4)檢測使用檢測箱中的試劑，利用酶被抑制的程度，借助農(nóng)藥殘毒速測儀通過酶催化動(dòng)力學(xué)光度法測量、通過顏色變化或者通過酸度測量方法之一，進(jìn)行有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留毒性的快速篩選檢測。
具體實(shí)施例方式
在檢測工作中，檢測試劑包中的試劑量可根據(jù)需要按比例擴(kuò)大或縮小，避免浪費(fèi)。磷酸鹽緩沖溶液及Tris-HCl緩沖溶液用于提取樣品或作空白提取液，需要量大，可適時(shí)補(bǔ)充。檢測時(shí)，可先加入酶液，然后加入樣品提取液(或空白提取液)，再加入顯色劑試劑(僅酶催化動(dòng)力學(xué)光度法測量時(shí)使用)，最后加入底物，能達(dá)到最佳效果。
實(shí)施例11)酶溶液A的配制將5μL活度為1000units/mL的乙酰膽堿酯酶放入燒杯中，加入0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液5mL，稀釋乙酰膽堿酯酶得到酶溶液A；2)酶溶液B的配制向上述已配置好的酶溶液A中加入0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液20mL，稀釋酶溶液A，得到酶溶液B；3)載體的溶解取2.0g載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)放入上述已配置好的酶溶液B中，攪拌，使載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)溶解；置于冰箱內(nèi)于0-4℃反應(yīng)1小時(shí)以上使酶與載體結(jié)合；4)凍干將上述酶與載體結(jié)合物轉(zhuǎn)移至凍干瓶中，將凍干瓶置于-20℃以下低溫乙醇浴中輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)凍干瓶，使溶質(zhì)盡量薄且均勻地涂布于瓶壁上，待溶液蒸發(fā)干后，牢固地固定凍干瓶于凍干機(jī)上10小時(shí)；取下內(nèi)壁載有凍干粉的凍干瓶，小心地刮下凍干粉放入小玻璃瓶中，每瓶裝1.0g，抽真空密封；置于4℃冰箱中冷藏或于冷凍下保存；需要對(duì)機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測，按上述使用方法配試劑包，固體酶試劑直接使用，借助農(nóng)藥殘毒速測儀通過酶催化動(dòng)力學(xué)光度法測量，進(jìn)行有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留毒性的快速篩選檢測。
實(shí)施例21)酶溶液A的配制將50μL活度為1000units/mL的丁酰膽堿酯酶；加入0.1M pH＝7..8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液30mL，稀釋酶溶液，得到酶溶液A；2)酶溶液B的配制向上述已配置好的酶溶液A中加入0.1M pH7＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液50mL，稀釋酶溶液A，得到酶溶液B；3)載體的溶解取10g載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)放入上述已配置好的酶溶液B中，攪拌，使載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)溶解；置于0-4℃冰箱內(nèi)反應(yīng)1小時(shí)以上，使酶與載體結(jié)合；4)凍干將上述酶與載體結(jié)合物轉(zhuǎn)移至凍干瓶中，將凍干瓶置于-20℃以下低溫乙醇浴中輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)凍干，使溶質(zhì)盡量薄且均勻地涂布于瓶壁上，待溶液蒸發(fā)干后，牢固地固定凍干瓶于凍干機(jī)上10小時(shí)；取下內(nèi)壁載有凍干粉的凍干瓶，小心地刮下凍干粉放入小玻璃瓶中；每瓶裝6.0g，抽真空密封；置于4℃冰箱中冷藏或于冷凍下保存；需要對(duì)機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測，按上述使用方法配試劑包，用0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液溶解后使用，每30mg固體酶試劑的用4mL緩沖溶液溶解；借助農(nóng)藥殘毒速測儀通過酶催化動(dòng)力學(xué)光度法測量，進(jìn)行有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留毒性的快速篩選檢測。
實(shí)施例31)液A的配制將10μL活度為1000units/mL的乙酰膽堿酯酶放入燒杯中，加入0.1MpH＝7.8＝8.2的磷酸鹽緩沖溶液8mL，稀釋酶溶液，得到酶溶液A；2)酶溶液B的配制向上述已配置好的酶溶液A中加入0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液25mL，稀釋酶溶液A，得到酶溶液B；3)載體的溶解取5.0g載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)放入上述已配置好的酶溶液B中，攪拌，使載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)溶解；置于冰箱內(nèi)反應(yīng)1.0小時(shí)以上使酶與載體結(jié)合；4)凍干將上述酶與載體結(jié)合物轉(zhuǎn)移至凍干瓶中，將凍干瓶置于-20℃以下低溫乙醇浴中輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)凍干，使溶質(zhì)盡量薄且均勻地涂布于瓶壁上，待溶液蒸發(fā)干后，牢固地固定凍干瓶于凍干機(jī)上10小時(shí)，；取下內(nèi)壁載有凍干粉的凍干瓶，小心地刮下凍干粉放入小玻璃瓶中，每瓶裝1.0g，抽真空密封；置于4℃冰箱中冷藏或于冷凍下保存需要對(duì)機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測，按上述使用方法配試劑包，固體酶試劑直接使用，借助農(nóng)藥殘毒速測儀通過酶催化動(dòng)力學(xué)光度法測量，進(jìn)行有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留毒性的快速篩選檢測。
實(shí)施例41)酶溶液A的配制將30μL活度為1000units/mL的丁酰膽堿酯酶；加入0.1M pH＝7..8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液20mL，稀釋酶溶液，得到酶溶液A；2)酶溶液B的配制向上述已配置好的酶溶液A中加入0.1M pH7＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液40mL，稀釋酶溶液A，得到酶溶液B；3)載體的溶解取10g載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)放入上述已配置好的酶溶液B中，攪拌，使載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)溶解；置于0-4℃冰箱內(nèi)反應(yīng)1小時(shí)以上，使酶與載體結(jié)合；4)凍干將上述酶與載體結(jié)合物轉(zhuǎn)移至凍干瓶中，將凍干瓶置于-20℃以下低溫乙醇浴(中輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)凍干，使溶質(zhì)盡量薄且均勻地涂布于瓶壁上，待溶液蒸發(fā)干后，牢固地固定凍干瓶于凍干機(jī)上10小時(shí)；取下內(nèi)壁載有凍干粉的凍干瓶，小心地刮下凍干粉放入小玻璃瓶中；每瓶裝6.0g，抽真空密封，置于4℃冰箱中冷藏或于冷凍下保存；需要對(duì)機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測，按上述使用方法配試劑包，固體酶試劑直接使用，通過顏色變化，進(jìn)行有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留毒性的快速篩選檢測。
實(shí)施例51)液A的配制將25μL活度為1000units/mL的乙酰膽堿酯酶放入燒杯中，加入0.1MpH＝7.8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液18mL，稀釋酶溶液，得到酶溶液A；2)酶溶液B的配制向上述已配置好的酶溶液A中加入0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液28mL，稀釋酶溶液A，得到酶溶液B；3)載體的溶解取8.0g載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)放入上述已配置好的酶溶液B中，攪拌，使載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP)溶解；置于冰箱內(nèi)反應(yīng)1小時(shí)以上使酶與載體結(jié)合；4)凍干將上述酶與載體結(jié)合物轉(zhuǎn)移至凍干瓶中，將凍干瓶置于-20℃以下低溫乙醇浴中輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)凍干，使溶質(zhì)盡量薄且均勻地涂布于瓶壁上，待溶液蒸發(fā)干后，牢固地固定凍干瓶于凍干機(jī)上10小時(shí)；取下內(nèi)壁載有凍干粉的凍干瓶，小心地刮下凍干粉放入小玻璃瓶中，每瓶裝2.0g，抽真空密封；置于4℃冰箱中冷藏或于冷凍下保存；需要對(duì)機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測，按上述使用方法配試劑包，固體酶試劑用0.1M，pH＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液溶解后使用，每30mg固體酶試劑的用4mL緩沖溶液溶解；通過酸度測量，進(jìn)行有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留毒性的快速篩選檢測。
權(quán)利要求
1.一種有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑，其特征在于，其組分及配比為膽堿酯酶活度為1000units/mL的乙酰膽堿酯酶或丁酰膽堿酯酶之一 5-50μL、緩沖溶液1)0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液 5-30mL、2)0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液20-50mL、載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP). 2-10g。
2.一種如權(quán)利要求1所述有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑，其特征在于，其組分及配比為膽堿酯酶活度為1000units/mL的乙酰膽堿酶或丁酰膽堿酯酶之一10-30μL、緩沖溶液1)0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液 8-20mL、2)0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液25-40mL、載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP). 5-8g。
3.一種如權(quán)利要求2所述有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑，其特征在于，其組分及配比為膽堿酯酶活度為1000units/mL的乙酰膽堿酯酶或丁酰膽堿酯酶之一 10μL、緩沖溶液1)0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液 8mL、2)0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液25mL、載體聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP). 5g。
4.一種如權(quán)利要求1-3之一所述有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑的制備方法，其步驟如下1)酶溶液A的配制將所需的活度為1000units/mL的膽堿酯酶放入燒杯中，用所需的0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液稀釋，得到酶溶液A；；2)酶溶液B的配制向上述已配置好的酶溶液A中加入所需的0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl緩沖溶液稀釋，得到酶溶液B；3)載體的溶解將所需的載體加入上述已配置好的酶溶液B中，攪拌，使載體溶解；置于0-4℃冰箱內(nèi)反應(yīng)1小時(shí)以上，使酶與載體結(jié)合；4)凍干將上述酶與載體結(jié)合物轉(zhuǎn)移至凍干瓶中，將凍干瓶置于-20℃以下低溫乙醇浴中輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)凍干，使溶質(zhì)盡量薄且均勻地涂布于瓶壁上，待溶液蒸發(fā)干后，牢固地固定凍干瓶于凍干機(jī)上10小時(shí)；取下內(nèi)壁載有凍干粉的凍干瓶，小心地刮下凍干粉放入小玻璃瓶中；每瓶裝6.0g，抽真空密封，置于4℃冰箱中冷藏或于冷凍下保存。
5.一種如權(quán)利要求1-3之一所述有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑的使用方法，其步驟如下1)配固體酶試劑每個(gè)裝有6.0g固體酶試劑的小玻璃瓶為一個(gè)試劑包；每次檢測用量為30mg；使用時(shí)，打開安碚瓶直接稱量使用或用0.1M，pH＝7.8-8.2的Tris-HCl或磷酸鹽緩沖溶液溶解后使用，每30mg固體酶試劑用4mL緩沖溶液溶解；于開口的安碚瓶中盛裝未用盡的固體酶試劑，應(yīng)置于干燥器內(nèi)，于室溫下20日內(nèi)不失效；2)底物試劑將所需底物試劑用水稀釋；按每0.6g.底物稀釋至100mL刻度處稀釋，每個(gè)試劑包內(nèi)裝10mL；底物為碘化硫代乙酰膽堿、溴化硫代乙酰膽堿、氯化硫代乙酰膽堿、碘化硫代丁酰膽堿、溴化硫代丁酰膽堿膽堿、氯化硫代丁酰膽堿、氯化乙酰膽堿、2，6-二氯靛酚乙酯、2，6-二溴靛酚乙酯、2，6-二氯靛酚丙酯或2，6-二溴靛酚丙酯之一；3)顯色劑試劑，僅酶催化動(dòng)力學(xué)光度法測量時(shí)使用；按每0.8g顯色劑稀釋至100mL刻度處稀釋，每個(gè)試劑包內(nèi)裝10mL；顯色劑為5，5’-二硫代-2，2’-二硝基苯甲酸(DTNB)；將上述3種試劑包各一個(gè)、0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸鹽緩沖溶液及0.1M pH＝7.8-8.2Tris-HCl緩沖溶液各500mL分別用1個(gè)塑料洗瓶盛裝、3-5個(gè)塑料滴瓶放入檢測箱中；每個(gè)檢測箱中的試劑可檢測待測樣品為0.2～1.0g或待測樣品汁0.1～0.5mL的樣品200組；使用檢測箱中的試劑，利用酶被抑制的程度，借助農(nóng)藥殘毒速測儀通過酶催化動(dòng)力學(xué)光度法測量、通過顏色變化或者通過酸度測量方法之一，進(jìn)行有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留毒性的快速篩選檢測。
全文摘要
本發(fā)明提供一種有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑及其制備方法與使用方法。本發(fā)明有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測用固體酶試劑由膽堿酯酶、緩沖溶液、載體組成。本發(fā)明固體酶試劑可在室溫下(20～25℃)穩(wěn)定儲(chǔ)存20天以上，解決了酶在室溫(20～25℃)或冰箱冷藏(0～4℃)下儲(chǔ)存易于失活、酶溶液于在－20℃下冷凍儲(chǔ)存由于多次溶凍所帶來的酶活顯著降低、固體酶試劑合力差、酶活損失較多導(dǎo)致直接影響農(nóng)藥殘毒檢測的準(zhǔn)確性的問題。本發(fā)明固體酶成本低，制備方法簡單，便于推廣應(yīng)用，其配合使用底物試劑、顯色劑試劑及緩沖溶液試劑，可以滿足蔬菜、水果、環(huán)境水或糧食中農(nóng)藥殘毒現(xiàn)場快速分析的需求并保證測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。
文檔編號(hào)C12Q1/00GK1731155SQ20051008626
公開日2006年2月8日 申請(qǐng)日期2005年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月19日
發(fā)明者鄒明強(qiáng), 王大寧, 陳彥長, 張曉華, 李錦豐, 齊小花 申請(qǐng)人:中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院