專利名稱：干細(xì)胞與膠原促生腦組織的制備及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)生物材料技術(shù)領(lǐng)域和組織工程學(xué)領(lǐng)域，具體涉及到一種細(xì)胞與膠原促生腦組織的制備及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著醫(yī)療科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步及醫(yī)學(xué)材料的不斷發(fā)展，近年來(lái)在醫(yī)療領(lǐng)域以膠原蛋白為基礎(chǔ)的產(chǎn)品獲得了顯著的發(fā)展，如中國(guó)專利，專利號(hào)為021212779，專利名稱為醫(yī)用膠原蛋白材料及其制造工藝就公開了一種醫(yī)用膠原蛋白材料，由牛肌腱組織為基料，經(jīng)過(guò)除雜、清洗、酸、堿、酶處理、硫酸軟骨素交聯(lián)、冷凍干燥及環(huán)氧乙烷滅菌等工序制成具有孔隙、海綿狀醫(yī)用膠原蛋白材料，具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、生物相容性好、可吸收的特點(diǎn)。目前，已在臨床上用于硬腦膜、硬脊膜的修復(fù)和防粘連。使用這種材料同時(shí)應(yīng)用組織工程技術(shù)擴(kuò)大和延伸到其他治療領(lǐng)域是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要課題。
目前，對(duì)因腦血栓或腦血管病變所引起的腦實(shí)質(zhì)的局部病變壞死大多采用保守藥物治療，一般情況壞死腦組織無(wú)法修復(fù)，其相應(yīng)引發(fā)的后遺癥是長(zhǎng)期而且很難治愈。組織工程學(xué)是以生物材料、細(xì)胞和生長(zhǎng)因子為基礎(chǔ)的復(fù)合方法用于組織修復(fù)再生。在軟骨損傷、腦膜缺損、周圍神經(jīng)缺損以及其他組織損傷都已得到應(yīng)用，其特點(diǎn)不僅僅是修復(fù)有損傷的組織而是使其受損組織再次形成具有其功能的相同組織。由于腦實(shí)質(zhì)在供應(yīng)大腦血液的動(dòng)脈血管受到血栓阻塞時(shí)，血管遠(yuǎn)端的腦實(shí)質(zhì)缺血壞死，形成腔穴。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)阻止干擾了腦組織的再生，病變的后果造成許多嚴(yán)重后遺癥。如何利用生物材料、細(xì)胞為基礎(chǔ)的組織工程技術(shù)修復(fù)受損的腦組織是本發(fā)明要解決的課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高純度的I型膠原蛋白配以自體骨髓干細(xì)胞的復(fù)合生物材料，植入損傷部位用于修復(fù)受損的腦組織。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案進(jìn)行制備干細(xì)胞與膠原促生腦組織由牛肌腱組織為基料，經(jīng)過(guò)除雜、清洗、酸、堿、酶處理、硫酸軟骨素交聯(lián)，將蛋白純度在95％以上的I型膠原蛋白在冷凍干燥工藝下制成具有50-200μ孔隙、可降解的1×10毫米柱狀海綿載體。取20～50毫升自體骨髓血，經(jīng)一周標(biāo)準(zhǔn)溫箱培養(yǎng)，將分離出的骨髓干細(xì)胞種植于柱狀膠原內(nèi)；再經(jīng)兩周標(biāo)準(zhǔn)溫箱培養(yǎng)，使其骨髓干細(xì)胞含量達(dá)到200～600萬(wàn)；將1-5個(gè)攜帶干細(xì)胞的膠原柱，采用三維定位無(wú)創(chuàng)技術(shù)將帶有干細(xì)胞的膠原柱導(dǎo)入壞死腔穴中。其內(nèi)的干細(xì)胞在膠原上生長(zhǎng)，阻斷膠質(zhì)細(xì)胞的增生，治療因腦血管疾病所引起的腦組織壞死或因軟化所造成的腦實(shí)質(zhì)病變，從而促進(jìn)壞死組織的新生，使病人的癥狀得到不同程度的改善。
具體實(shí)施方法干細(xì)胞膠原促生腦組織在動(dòng)物身上進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)表明由牛肌腱組織為基料，經(jīng)過(guò)除雜、清洗、酸、堿、酶處理、硫酸軟骨素交聯(lián)，將蛋白純度在95％以上的I型膠原蛋白在冷凍干燥工藝下制成具有50-200μ孔隙、可降解的1×10毫米柱狀海綿載體。取20毫升自體骨髓血，經(jīng)一周標(biāo)準(zhǔn)溫箱培養(yǎng)，將分離出的骨髓干細(xì)胞種植于柱狀膠原內(nèi)；再經(jīng)兩周標(biāo)準(zhǔn)溫箱培養(yǎng)，使其骨髓干細(xì)胞含量達(dá)到200～600萬(wàn)；將3個(gè)攜帶干細(xì)胞的膠原柱，采用三維定位無(wú)創(chuàng)技術(shù)將帶有干細(xì)胞的膠原柱導(dǎo)入壞死腔穴中。細(xì)胞膠原腦組織在腦壞死腔穴中植入后，干細(xì)胞很快在膠原上生長(zhǎng)，阻斷了膠質(zhì)細(xì)胞的增生，促進(jìn)壞死腦組織的新生，癥狀得到不同程度的改善。
本發(fā)明提供一種純度高的I型膠原蛋白和干細(xì)胞的腦組織，可以促進(jìn)干細(xì)胞在膠原上生長(zhǎng)，阻斷膠質(zhì)細(xì)胞的增生，修復(fù)受損的腦組織，有效的治療因腦血管疾病所引起的腦組織壞死、軟化所造成的腦實(shí)質(zhì)病變，使病人的癥狀得到不同程度的改善。
權(quán)利要求
1)一種干細(xì)胞膠原促生腦組織的制備方法及應(yīng)用，步驟如下由牛肌腱組織為基料，經(jīng)過(guò)除雜、清洗、酸、堿、酶處理、硫酸軟骨劑交聯(lián)，將蛋白純度在95％以上的I型膠原蛋白在冷凍干燥工藝下制成具有50-200μ孔隙、可降解的1×10毫米柱狀海綿載體。取20～50毫升自體骨髓血，經(jīng)一周標(biāo)準(zhǔn)溫箱培養(yǎng)，將分離出的骨髓干細(xì)胞種植于柱狀膠原內(nèi)；再經(jīng)兩周標(biāo)準(zhǔn)溫箱培養(yǎng)，使其骨髓干細(xì)胞含量達(dá)到200～600萬(wàn)，構(gòu)成細(xì)胞膠原腦組織。將1-5個(gè)攜帶干細(xì)胞的膠原柱，采用三維定位無(wú)創(chuàng)技術(shù)將帶有干細(xì)胞的膠原柱導(dǎo)入壞死腔穴中是細(xì)胞膠原腦組織的應(yīng)用方法。
2)根據(jù)權(quán)利要求1所述干細(xì)胞膠原促生腦組織的制備方法，其特征在于蛋白純度在95％以上的1×10毫米柱狀海綿I型膠原為載體。
3)根據(jù)權(quán)利要求1所述干細(xì)胞膠原促生腦組織的制備方法，其特征在于取20～50毫升自體骨髓血，經(jīng)一周標(biāo)準(zhǔn)溫箱培養(yǎng)，將分離出的骨髓干細(xì)胞種植于柱狀膠原內(nèi)；再經(jīng)兩周標(biāo)準(zhǔn)溫箱培養(yǎng)，使其骨髓干細(xì)胞含量達(dá)到200～600萬(wàn)，構(gòu)成細(xì)胞膠原腦組織。
4)根據(jù)權(quán)利要求1所述干細(xì)胞膠原促生腦組織是通過(guò)三維定位無(wú)創(chuàng)技術(shù)將帶有干細(xì)胞的膠原柱導(dǎo)入壞死腔穴中。
全文摘要
本發(fā)明公開一種干細(xì)胞膠原促生腦組織的制備及應(yīng)用，由牛肌腱組織為基料，經(jīng)過(guò)除雜、清洗、酸、堿、酶處理、硫酸軟骨劑交聯(lián)，將蛋白純度在95％以上的I型膠原蛋白在冷凍干燥工藝下制成具有50－200μ孔隙、可降解的1×10毫米柱狀海綿載體。取20～50毫升自體骨髓血，經(jīng)一周標(biāo)準(zhǔn)溫箱培養(yǎng)，將分離出的骨髓干細(xì)胞種植于柱狀膠原內(nèi)；再經(jīng)兩周標(biāo)準(zhǔn)溫箱培養(yǎng)，使其骨髓干細(xì)胞含量達(dá)到200～600萬(wàn)；將1－5個(gè)攜帶干細(xì)胞的膠原柱，采用三維定位無(wú)創(chuàng)技術(shù)將帶有干細(xì)胞的膠原柱導(dǎo)入壞死腔穴中。其內(nèi)的干細(xì)胞在膠原上生長(zhǎng)，阻斷膠質(zhì)細(xì)胞的增生，治療因腦血管疾病所引起的腦組織壞死、軟化所造成的腦實(shí)質(zhì)病變，從而促進(jìn)壞死組織的新生，使病人的癥狀得到不同程度的改善。
文檔編號(hào)C12N5/08GK1796545SQ20041010159
公開日2006年7月5日 申請(qǐng)日期2004年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月24日
發(fā)明者于海鷹, 許和平 申請(qǐng)人:于海鷹, 許和平