專利名稱：一種新的環(huán)肽類抗腫瘤抗病毒抗菌活性化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從海洋細(xì)菌的發(fā)酵液中提取分離有生物活性的化合物，具體地說是從海洋細(xì)菌Bacillus sp.發(fā)酵液中提取分離的一種新的環(huán)肽類抗腫瘤抗病毒抗菌活性化合物Mixirin A。
背景技術(shù)：
海洋微生物已證明是一種產(chǎn)生新型抗生素、抗腫瘤和抗炎藥的豐富源泉(Fenical，W.Chem.Rev.，93，1673-1683(1993).)。近年來，已從海洋微生物代謝產(chǎn)物中分離得到非常多的結(jié)構(gòu)新穎的活性化合物，對海洋微生物的研究主要包括海洋細(xì)菌、真菌、放線菌及海洋藍(lán)細(xì)菌等，其中對海洋細(xì)菌的研究最早，研究的最多。海洋細(xì)菌分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌兩大類，其中革蘭氏陰性菌占到90％，以海洋屬Vibrio為代表，主要生活在海水中；革蘭氏陽性菌中以Bacillus為代表。其他較重要的海洋細(xì)菌棲息的微環(huán)境是沉積泥，有生命、無生命物體的表面和無脊椎動(dòng)物的內(nèi)部空間。細(xì)菌可能是海綿、海鞘和其它無脊椎動(dòng)物中分離到的許多化合物的真正產(chǎn)生者。
伊枯草菌素是一種特征性的環(huán)脂肽，它由7個(gè)氨基酸殘基和一個(gè)長鏈β-氨基酸或長鏈β-酰氧基脂肪酸環(huán)合而成。已有人分離到過此類成分，但到目前為止，尚未見象Mixirin A這樣結(jié)構(gòu)的化合物的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于利用豐富的海洋微生物資源尋找新的環(huán)肽類抗腫瘤抗病毒抗菌化合物，為研究開發(fā)新的抗癌藥提供先導(dǎo)化合物。
本發(fā)明是以采自北極附近沉積泥中的海洋細(xì)菌Bacillus sp.的發(fā)酵液為原料，經(jīng)溶劑萃取和多種柱層析技術(shù)相結(jié)合，分離得到一種新的環(huán)脂肽類化合物，采用高分辨質(zhì)譜和核磁共振等光譜技術(shù)，確定了該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。命名為Mixirin A，化學(xué)結(jié)構(gòu)如下
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是該化合物經(jīng)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)，該化合物抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116的IC50為0.86μg/ml.對金黃色葡萄球菌和病毒也有很好的抑制作用?？捎糜谥苽渲委熒鲜霭┌Y和金黃色葡萄球菌及病毒感染引起的疾病的藥物。


圖1為1H和13C核磁共振數(shù)據(jù)表
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所用的原料海洋細(xì)菌采自北極附近的海底的沉積泥，當(dāng)然原料不局限于上述地區(qū)，經(jīng)國家海洋局第一海洋研究所田黎教授鑒定為Bacillus sp.
海洋細(xì)菌Bacillus sp.純化后培養(yǎng)在蛋白胨海水培養(yǎng)基上(固體培養(yǎng)基及發(fā)酵均用該培養(yǎng)基)培養(yǎng)基配方為蛋白胨7g，酵母粉2g，葡萄糖2g，海水1000ml。
菌落不透明，有褶皺，邊緣鋸齒狀，菌體桿狀，0.6～2.7μm×1.1～9.8μm，革蘭氏染色陽性，周邊，有芽孢，接觸酶陽性，根據(jù)此特征鑒定為芽孢桿菌Bacillussp.
大量發(fā)酵生產(chǎn)菌MIX-62 Bacillus sp.菌株，得到發(fā)酵液30L，菌液稍呈淡黃色，澄清，稍有臭味，用等量的乙酸乙酯萃取，然后再用正丁醇萃取，將萃取所得的兩部分浸膏合并(2.6g)，經(jīng)多次硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱層析和HPLC等手段分離得到Mixirin A單體化合物。物理常數(shù)及波譜數(shù)據(jù)如下Mixirin A白色無定形粉末，熔點(diǎn)HRFABMS確定分子式為C48H75N12O14，分子量為[M+H]+m/z 1043.5411(Calcd.for 1043.5426)。采用高分辨核磁共振儀(600MHz)測定了該化合物的1H-1H COSY，HMQC，HMBC，TOCSY和NOESY譜等二維相關(guān)譜，確定了該化合物所有碳原子和氫原子的信號歸屬。
權(quán)利要求
1.一種新的環(huán)肽類抗腫瘤抗病毒抗菌活性化合物，其特征在于以采自海洋沉積泥中的海洋細(xì)菌Bacillus sp.的發(fā)酵液為原料，經(jīng)溶劑萃取和多種柱層析技術(shù)相結(jié)合，分離得到一種新的環(huán)脂肽類化合物，采用高分辨質(zhì)譜和核磁共振等光譜技術(shù)，確定了該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，
2.一種如權(quán)利要求1所述的新的環(huán)肽類抗腫瘤抗病毒抗菌活性化合物，其特征在于用海洋中海底沉積泥中的海洋細(xì)菌Bacillus sp.純化后培養(yǎng)在蛋白胨海水培養(yǎng)基上，固體培養(yǎng)基及發(fā)酵均用該培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方為蛋白胨7g，酵母粉2g，葡萄糖2g，海水1000ml，菌落不透明，有褶皺，邊緣鋸齒狀，菌體桿狀，0.6～2.7μm×1.1～9.8μm，革蘭氏染色陽性，周邊，有芽孢，接觸酶陽性，根據(jù)此特征鑒定為芽孢桿菌Bacillus sp，大量發(fā)酵生產(chǎn)菌MIX-62Bacillus sp.菌株，得到發(fā)酵液30L，菌液稍呈淡黃色，澄清，稍有臭味，用等量的乙酸乙酯萃取，然后再用正丁醇萃取，將萃取所得的兩部分浸膏合并(2.6g)，經(jīng)多次硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱層析和HPLC等手段分離得到Mixirin A單體化合物。
3.一種如權(quán)利要求1所述的新的環(huán)肽類抗腫瘤抗病毒抗菌活性化合物，其特征在于該化合物可用于制備治療結(jié)腸癌的藥物，也可用于制備治療金黃色葡萄球菌及病毒感染的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種環(huán)肽類抗腫瘤抗病毒抗菌活性化合物，以采自海洋沉積泥中的海洋細(xì)菌Bacillus sp.的發(fā)酵液為原料，經(jīng)溶劑萃取和多種柱層析技術(shù)相結(jié)合，分離得到一種新的環(huán)脂肽類化合物，采用高分辨質(zhì)譜和核磁共振等光譜技術(shù)，確定了該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。該化合物可望成為治療癌癥或金黃色葡萄球菌及病毒感染的藥物。
文檔編號C12P21/02GK1616484SQ20041005052
公開日2005年5月18日 申請日期2004年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月27日
發(fā)明者裴月湖, 張海龍, 田黎 申請人:沈陽藥科大學(xué)