專利名稱：Sars冠狀病毒orf8區(qū)域的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及病毒學和分子流行病學領(lǐng)域，更具體地涉及引起嚴重急性呼吸綜合征病毒的SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域的應用。
背景技術(shù)：
2003年我國和世界上許多國家遭到了一次大規(guī)模的非典型肺炎(Atypicalpneumonias)的侵襲，由非典型肺炎引起的嚴重急性呼吸綜合征(Severe AcuteRespiratory Sydrome，SARS)已經(jīng)在22個國家和地區(qū)發(fā)生。世界衛(wèi)生組織(WorldHealth Organization，WHO)在疫情發(fā)生后迅速建立起由全球10個國家的13個實驗室組成的協(xié)作研究和監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)。4月16日，WHO正式確認SARS的病原體是一種新型冠狀病毒，這是一種單鏈RNA病毒。
全球已有8000多例非典型肺炎患者，在某些發(fā)病區(qū)其死亡率達到15％，給人民群眾帶來了極大的恐慌。醫(yī)務工作者和生物學領(lǐng)域的研究人員及時開展SARS冠狀病毒的病原學以及預防、診斷和治療的研究，并且對于該病毒的變異過程和各階段的毒性和傳染力的特點都有了一定的了解。但是目前對于SARS病毒疫苗的工作仍然沒有顯著的進展。
由于SARS冠狀病毒病毒是不斷變異的，其變異一方面隨其進化的程度有一定的相關(guān)，另一方面，也可能與病毒的傳染力相關(guān)。因此迫切需要開發(fā)快速確定各種不同的SARS冠狀病毒變異株的技術(shù)，以便在預防工作中能夠采取合理的隔離措施。然而，到目前為止沒有相應的方法。
因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)可用于防治SARS冠狀病毒的技術(shù)，尤其是快速確定SARS冠狀病毒基因組分型的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種快速確定SARS冠狀病毒基因組分型的方法。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種體外確定SARS冠狀病毒基因組分型的方法，包括步驟(a)抽提待檢測的SARS冠狀病毒的總RNA；(b)以步驟(a)中的總RNA為模板，特異性地擴增SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域，從而獲得ORF8的擴增產(chǎn)物；(c)將擴增產(chǎn)物與具有SEQ ID NO2所示的ORF8序列(基于GZ02 AY390556)進行比較，確定是否存在缺失突變，其中以下缺失突變代表病毒進化的不同階段早期無缺失或82bp缺失，如ZS-A AY394997；中期、晚期29bp缺失，如GZ-A AY394977；39bp缺失，如GZ-B AY394978；或415bp缺失，如CUHK-LC3 AY395000。
在另一優(yōu)選例中，步驟(c)中的比較是通過電泳或測序進行。
在另一優(yōu)選例中，所述的突變是ORF8缺失了SEQ ID NO2中第247-275位的29個核苷酸。
在另一優(yōu)選例中，所述的突變是ORF8缺失了SEQ ID NO2中第221-302位的82個核苷酸。
在另一優(yōu)選例中，所述的突變是ORF8缺失了SEQ ID NO2中第134-172位的39個核苷酸；或者缺失了SEQ ID NO2中第82-496位的415個核苷酸。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域的應用，它被用于篩選預防和治療嚴重急性呼吸綜合征的藥物。
在本發(fā)明的第三方面，提供了一種篩選SARS冠狀病毒生長抑制劑的方法，包括以下步驟(a)在體外培養(yǎng)SARS冠狀病毒的體系中，加入反義寡核苷酸分子，所述的反義寡核苷酸分子特異性地互補于SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域，并且長度為14-25bp(更佳地為18-23bp)；同時將未加入反義寡核苷酸分子的體外培養(yǎng)SARS冠狀病毒的體系作為對照；(b)觀察SARS冠狀病毒的生長情況，如果生長慢于對照，則表明所述的反義寡核苷酸分子是SARS冠狀病毒生長抑制劑。
在另一優(yōu)選例中，所述的反義寡核苷酸分子不互補于人類基因組DNA。
在本發(fā)明的第四方面，提供了一種對SARS冠狀病毒進行突變從而提高其體外培養(yǎng)水平的方法，其中所述的SARS冠狀病毒含有完整的ORF8區(qū)域。該方法包括步驟對所述的SARS冠狀病毒RNA的ORF8區(qū)域或附近進行定點缺失，從而獲得重組的SARS冠狀病毒。
在另一優(yōu)選例中，所述的定點缺失選自下組(a)缺失了SEQ ID NO2中第247-275位的29個核苷酸；(b)缺失了SEQ ID NO2中第221-302位的82個核苷酸；(c)缺失了SEQ ID NO2中第134-172位的39個核苷酸(d)缺失了SEQ ID NO2中第82-496位的415個核苷酸。


圖1描述了60種SARS冠狀病毒基因組序列的鄰近關(guān)系，顯示了各病毒株的變異來源的樹狀圖。從下至上為早期、中期、晚期的變異。
圖2顯示了在SARS冠狀病毒中ORF8區(qū)域的缺失情況。其中GZ02、ZS-A、TOR2(相當于GZ-A)等為各SARS冠狀病毒株的名稱。
圖3顯示了早期、中期、晚期SARS與ORF8區(qū)域缺失(deletion)的關(guān)系圖。
具體實施例方式
本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入研究發(fā)現(xiàn)，SARS冠狀病毒在進化過程中的一個重要的反復出現(xiàn)的特征就是在其ORF8區(qū)域出現(xiàn)各種不同的缺失突變。因此ORF8區(qū)域不僅可以作為確定SARS冠狀病毒基因組分型的指標，而且可以作為篩選SARS冠狀病毒抑制劑(或相關(guān)藥物)靶點。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
雖然最早公布的SARS冠狀病毒基因組序列是加拿大分離到的SARS病毒株TOR2的基因序列(Genbank的登錄號AY274119 SARS冠狀病毒TOR2，完全基因組，SEQ ID NO1)。然而，由于早期SARS冠狀病毒的基因組比TOR2要多29個核苷酸堿基。因此，以早期的病毒，例如GZ02的基因組序列(GenBank登錄號AY390556)作為參照更合適。
例如，對于ORF8區(qū)域而言，如以TOR2病毒株為基準，則GZ02含有29bp的插入突變；如以GZ02病毒株為基準，則TOR2含有29bp的缺失突變。因此，為了更清楚地描述早期、中期和晚期SARS冠狀病毒中ORF8的的變異情況，優(yōu)選采用GZ02病毒株為基準。
本發(fā)明人通過對來自多個早期、中期和晚期病人的各種不同SARS冠狀病毒的基因組的全序列測定，并結(jié)合已發(fā)表的其他SARS冠狀病毒基因組序列，發(fā)現(xiàn)可將SARS冠狀病毒劃分為早期、中期和晚期SARS冠狀病毒(圖1)。
圖1是SARS病毒各病毒株變異的樹狀圖，其中可見中晚期的病毒與早期病毒相比經(jīng)過了多次變異。而且，其中的基因序列也有了很大的不同，下文的表1顯示了幾種有代表性的SARS病毒核苷酸序列上幾個主要位點的變化。
表1 SARS病毒單核苷酸變異的重要位點(與SEQ ID NO1相比)

各個時期的SARS冠狀病毒基因組中存在一些變異，尤其是ORF8區(qū)域存在特征性的變異情況。如圖2所示，以GZ02的ORF8區(qū)域和鄰近區(qū)域的序列(SEQ IDNO2)為基準，早期的SARS冠狀病毒都含有SEQ ID NO2所示的ORF8。中晚期的SARS冠狀病毒則分別缺失了29bp(SEQ ID NO2中第247-275位)、82bp(SEQ IDNO2中第221-302位)、39bp(SEQ ID NO2中第134-172)或415bp(SEQ ID NO2中第82-496位)。詳細的缺失示意圖見圖3，其中所示的區(qū)域?qū)赥OR2序列(SEQID NO1)的核苷酸27259-28132，或?qū)贕Z02(AY390556)的核苷酸27288-28161。
本發(fā)明人通過流行病學分析發(fā)現(xiàn)，在原始的果子貍序列(SZ16，GenBank登錄號AY304488)以及早期病人(GZ-02，AY390556)分離到的病毒序列中都具有完整的ORF8區(qū)域。根據(jù)臨床觀察，GZ02這種早期的SARS病毒在人體內(nèi)毒性小，感染力弱。雖然該GZ02株分離得自一位老年患者的尸檢材料，但是，其他早期病人均具有同類的突變，且病情較弱。進入中期，SARS病毒株與早期及果子貍的病毒株不同，帶有中晚期病毒的典型的ORF8區(qū)域的29bp缺失變異。而且，不同ORF8區(qū)域缺失在SARS傳播過程中多次發(fā)生。因此，上述研究結(jié)果提示， 利用Orf8區(qū)域的不同缺失可作為其基因組分型的標記，并有可能與SARS病毒的復制或轉(zhuǎn)錄能力相關(guān)，也可能最終與傳染力或毒性相關(guān)。
因此，本發(fā)明提供了一種體外確定SARS冠狀病基因組分型的方法。通常包括步驟
(a)抽提待檢測的SARS冠狀病毒的總RNA；(b)以步驟(a)中的總RNA為模板，特異性地擴增SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域，從而獲得ORF8的擴增產(chǎn)物；(c)將擴增產(chǎn)物與具有ORF8標準品(如SEQ ID NO2所示序列)進行比較，確定是否存在缺失突變，其中可能存在不同的缺失突變，代表病毒進化的不同階段(舉例早期無缺失或82bp缺失，ZS-A AY394997；中期、晚期29bp缺失，GZ-A AY394977；39bp缺失，GZ-B AY394978；415bp缺失，CUHK-LC3 AY395000)。
其中，比較可用常規(guī)方法，通過電泳(比較片段長度)或測序(比較具體序列)進行。
此外，還可直接用針對ORF8區(qū)域不同的已知缺失突變的探針直接進行檢測，以確定待測SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域的缺失情況，進而判斷傳染力大小。
鑒于ORF8在SARS冠狀病毒傳染力方面的重要作用，本發(fā)明還提供了一種SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域的應用，即用于篩選預防和治療嚴重急性呼吸綜合征的藥物。
以篩選小分子反義核酸的方法為例(這些小分子反義核酸可作為SARS冠狀病毒生長抑制劑)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可將SEQ ID NO2作為基礎(chǔ)，用各種市售的計算機軟件方便地設(shè)計出特異性結(jié)合于ORF8的反義寡核苷酸分子，并用常規(guī)方法進行大量人工合成。然后，通過以下步驟篩選出SARS冠狀病毒生長抑制劑(a)在體外培養(yǎng)SARS冠狀病毒的體系中，加入反義寡核苷酸分子，所述的反義寡核苷酸分子特異性地互補于SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域(即不互補于SARS冠狀病毒的其他區(qū)域)，并且長度為14-25bp；同時將未加入反義寡核苷酸分子的體外培養(yǎng)SARS冠狀病毒的體系作為對照；(b)觀察SARS冠狀病毒的生長情況，如果生長慢于對照，則表明所述的反義寡核苷酸分子是SARS冠狀病毒生長抑制劑。
雖然反義寡核苷酸分子可以部分互補于人的基因組序列，但是優(yōu)選的反義寡核苷酸分子是不互補于人類基因組DNA的。
篩選出的SARS冠狀病毒生長抑制劑可進一步通過動物和臨床試驗，以便從中最終篩選出有效的藥物。
此外，中期和晚期的SARS病毒由于感染效力強，在細胞內(nèi)復制增殖的能力強，因此易于培養(yǎng)，但是安全差。而果子貍和早期的病毒由于感染能力弱，難于培養(yǎng)，因此收集困難。基于ORF8區(qū)域與SARS冠狀病毒體外培養(yǎng)(或傳染力)強弱的關(guān)系，本發(fā)明還提供了一種對SARS冠狀病毒進行突變從而提高其體外培養(yǎng)水平的方法，主要是認識到最長的基因組可能不是最有利于培養(yǎng)的。因此，所述的SARS冠狀病毒應含有早期病毒的序列特征但又具有晚期病毒的、具有不同的缺失的ORF8區(qū)域(尤其是中期SARS冠狀病毒或果子貍的冠狀病毒)，即對所述的SARS冠狀病毒RNA的ORF8區(qū)域進行定點缺失，從而獲得重組的SARS冠狀病毒。通過這種方法，可望獲得易于體外培養(yǎng)且毒性低SARS冠狀病毒，從而可用于制備減毒疫苗、滅活疫苗或活疫苗。
可用ORF8區(qū)域經(jīng)過改造的SARS病毒來配制疫苗。為此，將病毒調(diào)節(jié)到合適的濃度并用合適的疫苗佐劑、稀釋劑或載體配制?？蓪⑸韺W上可接受的介質(zhì)用作載體。它們包括但不限于合適的等滲液、磷酸鹽緩沖液等等。
佐劑可用多種方法分類(Cox和Coulter，1997；Gupta和Siber，1995；Hughes和Babiuk，1994)。廣義而言有兩大類，顆粒狀或非顆粒狀佐劑。在顆粒狀佐劑中有鋁鹽、鈣鹽、油包水乳液、水包油乳液、免疫刺激復合物(ISCOM)和ISCOM基質(zhì)、脂質(zhì)體、納米和微米顆粒、蛋白質(zhì)體、病毒顆粒、硬酯酰酪氨酸和-菊粉。非顆粒佐劑包括胞壁酰二肽(MDP)和衍生物(如蘇氨酰MDP、胞壁肽等)、非離子嵌段共聚物、皂苷(如Quil A和QS21)、脂類A或其衍生物4′一磷酯酰脂A(MPL)、二霉菌酸海藻糖脂(TDM)、各種細胞因子(包括γ-干擾素和白細胞介素2或4)、糖類聚合物、衍生的多糖(如二乙基氨基乙基葡萄糖)等。現(xiàn)代佐劑制劑常常設(shè)計成各種成分的組合以產(chǎn)生最大的特異性免疫應答。
在本發(fā)明的一個實施方案中，使用ORF8區(qū)域經(jīng)過改造的SARS減毒病毒或滅活疫苗制備疫苗組合物。病毒可與冷凍防護添加劑或穩(wěn)定劑混合，例如蛋白質(zhì)(如白蛋白、明膠)、糖(如蔗糖、乳糖、山梨糖醇)、氨基酸(如谷氨酸鈉)、鹽水或其它保護劑。將這種混合物維持在液體狀態(tài)，或然后干燥或凍干以便運輸和保存，在使用前再臨時與水混合。
包含本發(fā)明ORF8區(qū)域經(jīng)過改造的SARS病毒的制劑可以用來免疫人或動物，以誘導產(chǎn)生抗SARS冠狀病毒感染的保護力。
為了激發(fā)免疫應答，必須給予個體以合適次數(shù)的足量疫苗。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員能容易地確定該用量和劑次。給藥可以通過任一常規(guī)有效方式，例如鼻內(nèi)、腸胃外、經(jīng)口或局部施用于粘膜表面，例如通過氣溶膠噴霧。較佳的施用方式是腸胃外給藥。
鑒于ORF8與SARS冠狀病毒傳染力之間的關(guān)系，ORF8區(qū)域可作為快速地確定SARS冠狀病毒的傳染力的標志物，并且可用作篩選預防和治療嚴重急性呼吸綜合征的藥物的靶點，還可用于提高早期和果子貍SARS冠狀病毒的體外培養(yǎng)水平，因此具有廣泛的應用前景。
下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆實驗室手冊(New YorkColdSpring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實施例1SARS冠狀病毒基因組分型檢測試劑盒的制備制備一試劑盒，它含有名稱序列(5′→3′) 編號 濃度正向引物atgaatgagc tcactttaatSEQ ID NO3 干粉2OD反向引物ttaatttgtt cgtttatttaSEQ ID NO4 干粉2ODPCR反應液 含Taq酶dNTP鎂離子PCR反應緩沖液實施例2對SARS冠狀病毒傳染力和基因組分型的檢測用實施例1中的試劑盒，對待測的三種SARS冠狀病毒病毒株(盲法)進行PCR擴增(請稍詳細地描述一下檢測過程)，然后對擴增產(chǎn)物進行序列測定。根據(jù)ORF8區(qū)域是否缺失確定其傳染力大小。
檢測結(jié)果與三種SARS冠狀病毒病毒株的實際傳染力大小(即臨床上傳染人數(shù))相符，此外，根據(jù)缺失而確定的SARS冠狀病毒基因型完全正確。
在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
序列表<110>國家人類基因組南方研究中心廣東省疾病預防控制中心<120>SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域的應用<130>040485<160>4<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>29751<212>DNA<213>SARS冠狀病毒(SARS coronavirus)<400>1atattaggtt tttacctacc caggaaaagc caaccaacct cgatctcttg tagatctgtt60ctctaaacga actttaaaat ctgtgtagct gtcgctcggc tgcatgccta gtgcacctac 120gcagtataaa caataataaa ttttactgtc gttgacaaga aacgagtaac tcgtccctct 180tctgcagact gcttacggtt tcgtccgtgt tgcagtcgat catcagcata cctaggtttc 240gtccgggtgt gaccgaaagg taagatggag agccttgttc ttggtgtcaa cgagaaaaca 300cacgtccaac tcagtttgcc tgtccttcag gttagagacg tgctagtgcg tggcttcggg 360gactctgtgg aagaggccct atcggaggca cgtgaacacc tcaaaaatgg cacttgtggt 420ctagtagagc tggaaaaagg cgtactgccc cagcttgaac agccctatgt gttcattaaa 480cgttctgatg ccttaagcac caatcacggc cacaaggtcg ttgagctggt tgcagaaatg 540gacggcattc agtacggtcg tagcggtata acactgggag tactcgtgcc acatgtgggc 600gaaaccccaa ttgcataccg caatgttctt cttcgtaaga acggtaataa gggagccggt 660ggtcatagct atggcatcga tctaaagtct tatgacttag gtgacgagct tggcactgat 720cccattgaag attatgaaca aaactggaac actaagcatg gcagtggtgc actccgtgaa 780ctcactcgtg agctcaatgg aggtgcagtc actcgctatg tcgacaacaa tttctgtggc 840ccagatgggt accctcttga ttgcatcaaa gattttctcg cacgcgcggg caagtcaatg 900tgcactcttt ccgaacaact tgattacatc gagtcgaaga gaggtgtcta ctgctgccgt 960gaccatgagc atgaaattgc ctggttcact gagcgctctg ataagagcta cgagcaccag 1020acacccttcg aaattaagag tgccaagaaa tttgacactt tcaaagggga atgcccaaag 1080tttgtgtttc ctcttaactc aaaagtcaaa gtcattcaac cacgtgttga aaagaaaaag 1140actgagggtt tcatggggcg tatacgctct gtgtaccctg ttgcatctcc acaggagtgt 1200aacaatatgc acttgtctac cttgatgaaa tgtaatcatt gcgatgaagt ttcatggcag 1260acgtgcgact ttctgaaagc cacttgtgaa cattgtggca ctgaaaattt agttattgaa 1320ggacctacta catgtgggta cctacctact aatgctgtag tgaaaatgcc atgtcctgcc 1380tgtcaagacc cagagattgg acctgagcat agtgttgcag attatcacaa ccactcaaac 1440attgaaactc gactccgcaa gggaggtagg actagatgtt ttggaggctg tgtgtttgcc 1500tatgttggct gctataataa gcgtgcctac tgggttcctc gtgctagtgc tgatattggc 1560tcaggccata ctggcattac tggtgacaat gtggagacct tgaatgagga tctccttgag 1620atactgagtc gtgaacgtgt taacattaac attgttggcg attttcattt gaatgaagag 1680gttgccatca ttttggcatc tttctctgct tctacaagtg cctttattga cactataaag 1740agtcttgatt acaagtcttt caaaaccatt gttgagtcct gcggtaacta taaagttacc 1800aagggaaagc ccgtaaaagg tgcttggaac attggacaac agagatcagt tttaacacca 1860ctgtgtggtt ttccctcaca ggctgctggt gttatcagat caatttttgc gcgcacactt 1920gatgcagcaa accactcaat tcctgatttg caaagagcag ctgtcaccat acttgatggt 1980atttctgaac agtcattacg tcttgtcgac gccatggttt atacttcaga cctgctcacc 2040aacagtgtca ttattatggc atatgtaact ggtggtcttg tacaacagac ttctcagtgg 2100ttgtctaatc ttttgggcac tactgttgaa aaactcaggc ctatctttga atggattgag 2160
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<213>人工序列<220>
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權(quán)利要求
1.一種體外測定SARS冠狀病毒基因型的方法，其特征在于，包括步驟(a)抽提待檢測的SARS冠狀病毒的總RNA；(b)以步驟(a)中的總RNA為模板，特異性地擴增SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域，從而獲得ORF8的擴增產(chǎn)物；(c)將擴增產(chǎn)物與具有SEQ ID NO2所示的序列進行比較，確定是否存在缺失突變，其中以下缺失突變代表病毒進化的不同階段早期無缺失或82bp缺失；中期、晚期29bp缺失、39bp缺失、或415bp缺失。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(c)中的比較是通過電泳或測序進行。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的突變是ORF8缺失了SEQ IDNO2中第247-275位的29個核苷酸。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的突變是ORF8缺失了SEQID NO2中第221-302位的82個核苷酸。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的突變是ORF8缺失了SEQID NO2中第134-172位的39個核苷酸；或者缺失了SEQ ID NO2中第82-496位的415個核苷酸。
6.一種SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域的應用，其特征在于，用于篩選預防和治療嚴重急性呼吸綜合征的藥物。
7.一種篩選SARS冠狀病毒生長抑制劑的方法，其特征在于，包括以下步驟(a)在體外培養(yǎng)SARS冠狀病毒的體系中，加入反義寡核苷酸分子，所述的反義寡核苷酸分子特異性地互補于SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域，并且長度為14-25bp；同時將未加入反義寡核苷酸分子的體外培養(yǎng)SARS冠狀病毒的體系作為對照；(b)觀察SARS冠狀病毒的生長情況，如果生長慢于對照，則表明所述的反義寡核苷酸分子是SARS冠狀病毒生長抑制劑。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述的反義寡核苷酸分子不互補于人類基因組DNA。
9.一種對SARS冠狀病毒進行突變從而提高其體外培養(yǎng)水平的方法，其中所述的SARS冠狀病毒含有完整的ORF8區(qū)域，其特征在于，包括步驟對所述的SARS冠狀病毒RNA的ORF8區(qū)域進行定點缺失，從而獲得重組的SARS冠狀病毒。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述的定點缺失選自下組(a)缺失了SEQ ID NO2中第247-275位的29個核苷酸；(b)缺失了SEQ ID NO2中第221-302位的82個核苷酸；(c)缺失了SEQ ID NO2中第134-172位的39個核苷酸(d)缺失了SEQ ID NO2中第82-496位的415個核苷酸。
全文摘要
本發(fā)明公開了引起嚴重急性呼吸綜合征病毒的SARS冠狀病毒ORF8區(qū)域與病毒進化階段之間的相關(guān)性?；谶@種相關(guān)性，本發(fā)明提供了體外測定SARS冠狀病毒基因型的方法，對SARS冠狀病毒進行突變從而穩(wěn)定其體外培養(yǎng)水平的方法，以及ORF8區(qū)域作為藥靶篩選預防和治療嚴重急性呼吸綜合征的藥物的應用。
文檔編號C12Q1/18GK1648260SQ20041001606
公開日2005年8月3日 申請日期2004年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月29日
發(fā)明者趙國屏, 林錦炎, 宋懷東, 鄭煥英, 王升躍, 何劍峰, 任雙喜, 鄢心革, 李亦學, 萬卓越, 孔祥銀, 許銳恒, 郝沛, 吳新偉, 顧伯偉, 侯金林, 陳竺, 閔軍, 繆有剛, 徐軍, 傅剛, 陸家海, 張樹義, 王小寧 申請人:國家人類基因組南方研究中心, 廣東省疾病預防控制中心