專利名稱：白花甜菜九號染色體bac芯片及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及白花甜菜九號染色體BAC芯片及其制備方法。
背景技術(shù)：
植物無融合生殖(Apomixis)是指不經(jīng)過精卵融合而以種子進(jìn)行繁殖的一種特殊的無性生殖方式。由于沒有精卵融合產(chǎn)生的二倍體子代，其基因型與母本精確相同，使子代繼承親代固有遺傳特性，形成遺傳上穩(wěn)定，可由種子繁殖的無性系[2]。植物無融合生殖因其通過種子進(jìn)行的特殊無性生殖，所以它可以固定有利基因型，改變育種程序及種子生產(chǎn)，具有重大的經(jīng)濟(jì)意義，如果可以應(yīng)用于重要作物，將是繼二十世紀(jì)六十年代“綠色革命”之后的又一次農(nóng)業(yè)革命——無性生殖革命。Barocka曾報道甜菜屬野生種中存在無融合生殖現(xiàn)象。Jessen報道甜菜屬白花甜菜組(Corollinae Section)的各物種具無融合生殖特征，屬配子體無融合生殖。郭德棟等通過栽培甜菜(vv，2n＝18)與帶有無融合生殖特性的野生種白花甜菜(CCCC，2n＝4x＝36)雜交及回交，獲得了異源三倍體(VVC，2n＝27)；它進(jìn)一步與栽培甜菜(VV，2n＝18)回交，在其后代中篩選到一套完整的帶有白花甜菜染色體的單體附加系(VV+1C)，其中發(fā)現(xiàn)了高頻傳遞的單體附加系M14，經(jīng)過多年傳遞率分析，平均傳遞率達(dá)95％以上，經(jīng)過標(biāo)記基因雜交、傳遞率分析、以及細(xì)胞學(xué)、胚胎學(xué)和分子生物屑鑒定，證實為韭型(Allium-odorum type)二倍體孢子生殖的配子體無融合生殖材料。無融合生殖基因位點定位于附加的白花甜菜9號染色體上。因M14基因組相對較小，遺傳背景相對清晰，而且附加的白花甜菜9號染色體相對獨立，可以單獨構(gòu)建物理圖譜，因此M14是克隆無融合生殖基因的極為難得的材料。既往的工作中，與張洪斌實驗室(Hongbin Zhang，Texas A & M BACCenter，Texas A & M University，USA)合作構(gòu)建了M14品系的雙元BAC庫，該庫庫容49,920克隆，平均插入127kb，覆蓋M14基因組(830Mb)7.5倍；并利用一系列白花甜菜染色體特異性短散在重復(fù)序列為探針篩選BAC庫，已獲得2,377個來自白花甜菜9號染色體BAC克隆，覆蓋該染色體(80Mb)3.4倍，將為白花甜菜9號染色體物理圖譜提供組織框架。目前國際上有文獻(xiàn)報道的已構(gòu)建的無融合生殖材料的BAC文庫僅三個，我們的M14BIBAC文庫不論是庫容、平均克隆片段大小、覆蓋率、載體選擇均大大優(yōu)于上述三個BAC庫，而且M14 BIBAC使用了可直接進(jìn)行大片段植物轉(zhuǎn)化的載體pCLD04541，為今后的工作奠定了良好的基礎(chǔ)。我們利用一組白花甜菜基因組特異性散在重復(fù)序列為探針對M14 BAC進(jìn)行篩選，獲得了2377個克隆，覆蓋白花甜菜染色體3.4倍。該克隆數(shù)與預(yù)期克隆數(shù)基本相符，49920×80Mb/(80Mb+758Mb×2)＝2520。如能將已分離的附加單染色體BAC通過BAC末端分析技術(shù)和指紋圖譜分析構(gòu)建成單染色體重疊群，并將已知無融合生殖相關(guān)基因或重要分子標(biāo)記定位到該物理圖上，將大大縮小無融合生殖基因的尋找范圍，為克隆類似基因?qū)ふ业揭粭l新的可行之路?；蛐酒?又稱DNA芯片或DNA微點陣)技術(shù)是順應(yīng)人類基因組計劃的進(jìn)行而產(chǎn)生的一種高通量、大規(guī)模研究基因功能的新技術(shù)，它是集分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)、化學(xué)、計算機技術(shù)、微電子、光電子學(xué)、精密儀器制造、測量、醫(yī)學(xué)等學(xué)科技術(shù)為一身的高度交叉的新技術(shù)。由于基因芯片具有高通量、并行處理、微型化、高效率等特點，該技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于生物學(xué)及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究的各個領(lǐng)域，包括基因表達(dá)譜分析、新基因發(fā)現(xiàn)、基因突變及多態(tài)性分析、基因組文庫作圖、疾病診斷和預(yù)測、藥物篩選、基因測序等方面。目前國外在利用BAC庫構(gòu)建物理圖譜時，開始利用芯片的高通量性，但是僅僅局限于密度較低的膜芯片，而且是將整個BAC質(zhì)粒直接固定于膜，在利用同位素標(biāo)記的探針進(jìn)行雜交檢測，這種技術(shù)方法雖然在一定程度上提高了已知探針定位的效率，但是存在著不足，一方面大片段的BACDNA(＞100kb)所帶有的復(fù)雜性及菌原位裂解殘留的基因組等存在污染，極大的影響了探針雜交的特異性，而且敏感的同位素標(biāo)記也不利于特異性分析。往往信號稍強的點就會掩蓋附近的陽性信號。另一方面，膜芯片的密度限制，使得同一個探針需要雜交幾十張膜，這樣帶來的不同膜之間的信號值出現(xiàn)不可比性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種覆蓋白花甜菜第九號染色體3.4倍的BAC克隆庫中的全部或部分DNA與固相載體相復(fù)合構(gòu)成的BAC高密度芯片，以及該芯片的制備方法。本發(fā)明中白花甜菜九號染色體BAC芯片為白花甜菜九號染色體BAC芯片上的BAC克隆是利用白花甜菜染色體散在重復(fù)序列做為特異性探針篩選BAC庫所獲得的BAC DNA，前述BAC DNA與載體相復(fù)合即得，其中，利用白花甜菜染色體散在重復(fù)序列做為特異性探針篩選BAC庫所獲得的2377個BACDNA中，全部或部分與載體復(fù)合都為本發(fā)明所述BAC芯片。本發(fā)明白花甜菜九號染色體BAC芯片的制備步驟為(1)BAC初步處理a.將5～10μg已純化提取的BAC DNA溶解于50μl的0.1-0.15M NaOH溶液中，并在60-70℃溫度下水浴30-60分鐘；b.加入5μl的溶于異丙醇的0.1-0.2M環(huán)氧丙氧基三甲氧基硅烷；c.在60-70℃水浴鍋中水浴3-5個小時；e.加50μl中和液，中和液為0.2M Tris HCl和1M NaCl的混合液；f.加入200μl的乙醇進(jìn)行純化回收，即完成了BAC的初步處理；(2)點樣前處理BAC DNA將初步處理的BAC DNA加入25μl 45～55mMNaOH溶液中進(jìn)行變性，在所得液體中再加25μl 0.08-0.12M的Tris HCl即完成處理；(3)BAC芯片制備a.將完成點樣前處理的BAC DNA立刻向玻片上進(jìn)行點樣；b.點樣完成后，立刻將玻片放在80℃溫度下干烤2～4小時；c.取出玻片，在濃度為80％的乙醇中浸泡，然后將玻片用保鮮膜包住使其密封，再在60-70℃的水浴鍋中水浴4～8小時；d.用濃度為80％的乙醇清洗至其表面雜質(zhì)清除；e用氣流吹干或用550rpm離心機離心3min，即得本發(fā)明所述芯片。本發(fā)明基因芯片可用生物功能的研究，所說的生物包括甜菜及它的細(xì)胞、組織器官及其系統(tǒng)。用獲得的白花甜菜9號染色體BAC克隆制成BAC芯片具有許多商用價值和科研價值應(yīng)用該基因芯片可以快速、高效的進(jìn)行M14和M14染色體附加系差異表達(dá)基因篩選；應(yīng)用該基因芯片可以快速、高效的進(jìn)行M14和M14染色體附加系的基因組差異分析；應(yīng)用該基因芯片可以快速、高效的對M14和M14染色體附加系獲得的消減雜交基因的定位及拷貝數(shù)分析；應(yīng)用該基因芯片可以快速、高效的對白花甜菜9號單體染色體的物理圖譜構(gòu)建研究；應(yīng)用該基因芯片也可用于對植物的雜種優(yōu)勢進(jìn)行早期預(yù)測，篩選出最佳的優(yōu)勢雜交種。該基因芯片還可用于對一些重要生殖相關(guān)基因的BAC定位及拷貝數(shù)分析；該基因芯片還可用于對無融合生殖基因的研究；可以利用這些BAC克隆繪制基因組圖譜。利用BAC末端分析技術(shù)進(jìn)行重疊群構(gòu)建及基因圖制作。BAC可以作為基因探針，對其在染色體上進(jìn)行定位跟蹤。尋找可能的重要無融合基因相關(guān)線索。另外，本發(fā)明的制備方法簡單，容易操作，利于推廣應(yīng)用。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式中，白花甜菜九號染色體BAC芯片上的BAC克隆是利用白花甜菜染色體散在重復(fù)序列做為特異性探針篩選BAC庫所獲得的BAC DNA，前述BAC DNA與載體相復(fù)合即得，本實施方式利用白花甜菜染色體散在重復(fù)序列做為特異性探針篩選BAC庫所獲得的2377個BAC DNA中全部與載體復(fù)合，所述載體為固相載體，本實施方式的固相載體為玻片。它的制備步驟為(1)BAC初步處理a.將5～10μg已純化提取的BAC DNA溶解于50μl的0.1-0.15M NaOH溶液中，并在60-70℃溫度下水浴30-60分鐘；b.加入5μl的溶于異丙醇的0.1-0.2M環(huán)氧丙氧基三甲氧基硅烷；c.在60-70℃水浴鍋中水浴3-5個小時；e.加50μl中和液，中和液為0.2M Tris HCl和1M NaCl的混合液；f.加入200μl的乙醇進(jìn)行純化回收，即完成了BAC的初步處理；(2)點樣前處理BACDNA將初步處理的BAC DNA加入25μl 45～55mM NaOH溶液中進(jìn)行變性，在所得液體中再加25μl 0.08-0.12M的Tris HCl即完成處理；(3)BAC芯片制備a.將完成點樣前處理的BAC DNA立刻向玻片上進(jìn)行點樣；b.點樣完成后，立刻將玻片放在80℃溫度下干烤2～4小時；c.取出玻片，在濃度為80％的乙醇中浸泡，然后將玻片用保鮮膜包住使其密封，再在60-70℃的水浴鍋中水浴4～8小時；d.用濃度為80％的乙醇清洗至其表面雜質(zhì)清除；e.用氣流吹干或用550rpm離心機離心3min，即得本發(fā)明所述芯片。本實施方式以玻片做為載體，首先經(jīng)過以下程序的特殊處理a.初步清洗(1)用自來水洗一次，每片時間為30-40秒；(2)用去離子水洗一次，每片時間為30-40秒；(3)用去離子水超聲20-30分鐘；(4)用去離子水沖洗10-15分鐘；(5)用無水乙醇超聲10-15分鐘；(6)用去離子水沖洗10-15分鐘；b.精洗(1)用濃硫酸和雙氧水按體積比7∶3的比例配制的溶液煮20-30分鐘；(2)用去離子水沖洗10-15分鐘；(3)用無水乙醇超聲10-15分鐘；(4)用去離子水沖洗10-15分鐘；c.高密度羥基化處理(1)用氫氧化鈉(60g/l)煮10-15分鐘；(2)用去離子水沖洗10-15分鐘；(3)用去離子水超聲10-15分鐘；(4)用去離子水沖洗10-15分鐘；(5)放入烘箱中烘干即可。
本發(fā)明是利用分離出覆蓋白花甜菜第九號染色體3.4倍的2377個BAC克隆質(zhì)粒，與載體復(fù)合的BAC芯片，本發(fā)明通過對BAC質(zhì)粒的特殊處理，使其形成較小片段的DNA片段，這樣有利于充分分散開DNA，可以極大的提高探針雜交的特異性。另一方面，通過芯片片基的特殊處理，成倍的增加了芯片的密度，可以達(dá)到同時分析9600個BAC/1片的能力，并提高了信號的可比性。更準(zhǔn)確的，快速的進(jìn)行探針定位分析。從而也更快的進(jìn)行物理圖譜的繪制工作。
所說的BAC克隆具有以下特征是與張洪斌實驗室(Hongbin Zhang，TexasA & M BAC Center，Texas A & M University，USA)合作構(gòu)建的M14品系的雙元BAC庫，該庫庫容49,920克隆，平均插入127kb，覆蓋M14基因組(830Mb)7.5倍；并利用一系列白花甜菜染色體特異性短散在重復(fù)序列為探針篩選BAC庫，獲得的2,377個來自白花甜菜9號染色體BAC克隆，覆蓋該染色體(80Mb)3.4倍。
上述BAC克隆中的一條或數(shù)條的組合所組成的基因芯片是在載體上結(jié)合有以上特征的核酸分子。載體為固相載體。固相載體為玻片、硅片、尼龍膜、硝酸纖維膜或凝膠。所說的核酸分子是脫氧核糖核酸、核糖核酸和多聚寡核苷酸。
BAC克隆中的一條或數(shù)條的組合所組成的基因芯片用于生物功能的研究。所說的生物包括甜菜及它的細(xì)胞、組織器官及其系統(tǒng)；所說的生物功能的研究包括M14和M14染色體附加系的差異表達(dá)基因研究；M14和M14染色體附加系的基因組差異分析；對M14和M14染色體附加系獲得的消減雜交基因的定位；對一些重要生殖相關(guān)基因的BAC定位及拷貝數(shù)分析；對白花甜菜9號單體染色體的物理圖譜構(gòu)建研究；對無融合生殖基因的研究。
具體實施例方式
二利用白花甜菜染色體散在重復(fù)序列做為特異性探針篩選BAC庫所獲得的2377個BAC DNA中一部分與載體復(fù)合。
具體實施例方式
三本實施方式中的載體為硅片、尼龍膜、硝酸纖維膜或凝膠。
具體實施例方式
四本實施方式中的載體為液相載體。
具體實施例方式
五制備中的具體參數(shù)優(yōu)化為(1)BAC初步處理a.將8μg已純化提取的BAC DNA溶解于50μl的0.12M NaOH溶液中，并在65℃溫度下水浴55分鐘；b.加入5μl的溶于異丙醇的0.15M環(huán)氧丙氧基三甲氧基硅烷；c.在65℃水浴鍋中水浴4個小時；e.加50μl中和液，中和液為0.2M Tris HCl和1M NaCl的混合液；f.加入200μl的乙醇進(jìn)行純化回收，即完成了BAC的初步處理；(2)點樣前處理BAC DNA將初步處理的BAC DNA加入25μl 50mM NaOH溶液中進(jìn)行變性，在所得液體中再加25μl 0.1M的Tris HCl即完成處理；(3)BAC芯片制備a.將完成點樣前處理的BAC DNA立刻向玻片上進(jìn)行點樣；b.點樣完成后，立刻將玻片放在80℃溫度下干烤3小時；c.取出玻片，在濃度為80％的乙醇中浸泡，然后將玻片用保鮮膜包住使其密封，再在65℃的水浴鍋中水浴6小時；d.用濃度為80％的乙醇清洗至其表面雜質(zhì)清除；e.用氣流吹干或用550rpm離心機離心3min，即得本發(fā)明所述芯片。
下面過程用于檢測本發(fā)明所述芯片的陽性探針熒光標(biāo)記PCR反應(yīng)摻入熒光物(模板即探針)每50μl PCR體系10×PCR buffer 5ul2mM dGTP，dATP，dCTP，(Lower dTTP 1.8mM)1.25ul1mM cy3 dUTP0.25-1.25ulprimerl(20uM) 1.25ul
primer2(20uM) 1.25ulDNA template 0.5ulExTaq(5U/ul) 0.2ulddH2O39.3-40..3ulLower dNTP配方100mM dA、G、CTP各5ul100mM dTTP 4.5uladd water 230.5ul to 250ul(2)利用Microncon30柱純化1)將樣品放入Microcon30微濃縮器，并加入450μl TE(10mM Tris，pH8.0，1mM EDTA)，在臺式離心機上高速14000g離心5-10分鐘，以調(diào)整體積至20μl(可以觀察濕潤膜)，棄流出液；2)加450μl TE，再次14000g離心；3)二次14000g離心后，Microcon30滯存的探針應(yīng)顯著比流出液清亮。這一個成功標(biāo)記反應(yīng)的非常有力的指示現(xiàn)象。如果沒有一點顏色滯存，標(biāo)記反應(yīng)就不太可能產(chǎn)生好的雜交結(jié)果。4)將離心柱反轉(zhuǎn)，再14000g離心1分鐘，以收集探針，用離心柱調(diào)整體積至8μl即得熒光標(biāo)記探針。
下述過程為對本發(fā)明所述芯片進(jìn)行的雜交檢測1)預(yù)雜交與block用5ug CotI DNA和20ug salmon sperm DNA在6×SSPE，2％SDS，于60-68℃，預(yù)雜交5-8小時；2)探針變性將探針混和雜交液以后在98℃條件下進(jìn)行2-3min變性，然后14000g離心冷卻到室溫；3)雜交在預(yù)熱的雜交盒中放置入芯片，然后將雜交混合液加于芯片表面，蓋上專用蓋玻片，擰緊雜交盒，于65℃水浴，約16-22小時；4)洗滌水1分鐘2次，然后在65℃ 2×SSC，0.5％SDS，清洗45min；最后水清洗1分鐘，最后離心甩干；5)經(jīng)過洗滌后的芯片立刻用Axon4000A型掃描儀進(jìn)行掃描，在波長為550nm下，經(jīng)過AXON公司的掃描儀進(jìn)行掃描后，點陣清晰，背景低，而信號值高，有利于進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
本發(fā)明所使用的原料不限于說明書和權(quán)利要求書所表述的克數(shù)，只要各原料的克數(shù)比例與本發(fā)明各原料克數(shù)的比例相同即在本發(fā)明的保護(hù)范圍。
另外，在實踐操作中，比如時間、濃度等各具體數(shù)值不可能控制得與本發(fā)明所述數(shù)值絕對一致，所以即使在實踐中各數(shù)值與本發(fā)明所述數(shù)值略有偏差，也應(yīng)在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種白花甜菜九號染色體BAC芯片，其特征在于白花甜菜九號染色體BAC芯片上的BAC克隆是利用白花甜菜染色體散在重復(fù)序列做為特異性探針篩選BAC庫所獲得的BAC DNA，前述BAC DNA與載體相復(fù)合即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白花甜菜九號染色體BAC芯片，其特征在于利用白花甜菜染色體散在重復(fù)序列做為特異性探針篩選BAC庫所獲得的2377個BACDNA中全部與載體復(fù)合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白花甜菜九號染色體BAC芯片，其特征在于利用白花甜菜染色體散在重復(fù)序列做為特異性探針篩選BAC庫所獲得的2377個BACDNA中部分與載體復(fù)合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的白花甜菜九號染色體BAC芯片，其特征在于所述載體為固相載體或液相載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的白花甜菜九號染色體BAC芯片，其特征在于所述固相載體為玻片、硅片、尼龍膜、硝酸纖維膜或凝膠。
6.一種白花甜菜九號染色體BAC芯片的制備方法，其特征在于它的制備步驟為(1)BAC初步處理a.將5～10μg已純化提取的BAC DNA溶解于50μl的0.1-0.15M NaOH溶液中，并在60-70℃溫度下水浴30-60分鐘；b.加入5μl的溶于異丙醇的0.1-0.2M環(huán)氧丙氧基三甲氧基硅烷；c.在60-70℃水浴鍋中水浴3-5個小時；e.加50μl中和液，中和液為0.2M Tris HCl和1M NaCl的混合液；f.加入200μl的乙醇進(jìn)行純化回收，即完成了BAC的初步處理；(2)點樣前處理BACDNA將初步處理的BAC DNA加入25μl 45～55mM NaOH溶液中進(jìn)行變性，在所得液體中再加25μl 0.08-0.12M的Tris HCl即完成處理；(3)BAC芯片制備a.將完成點樣前處理的BAC DNA立刻向玻片上進(jìn)行點樣；b.點樣完成后，立刻將玻片放在80℃溫度下干烤2～4小時；c.取出玻片，在濃度為80％的乙醇中浸泡，然后將玻片用保鮮膜包住使其密封，再在60-70℃的水浴鍋中水浴4～8小時；d.用濃度為80％的乙醇清洗至其表面雜質(zhì)清除；e.用氣流吹干或用550rpm離心機離心3min，即得本發(fā)明所述芯片。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的白花甜菜九號染色體BAC芯片的制備方法，其特征在于在制備中的具體參數(shù)優(yōu)化為(1)BAC初步處理a.將8μg已純化提取的BAC DNA溶解于50μl的0.12M NaOH溶液中，并在65℃溫度下水浴55分鐘；b.加入5μl的溶于異丙醇的0.15M環(huán)氧丙氧基三甲氧基硅烷；c.在65℃水浴鍋中水浴4個小時；e.加50μl中和液，中和液為0.2M Tris HCl和1M NaCl的混合液；f.加入200μl的乙醇進(jìn)行純化回收，即完成了BAC的初步處理；(2)點樣前處理BAC DNA將初步處理的BAC DNA加入25μl 50mM NaOH溶液中進(jìn)行變性，在所得液體中再加25μl 0.1M的Tris HCl即完成處理；(3)BAC芯片制備a.將完成點樣前處理的BAC DNA立刻向玻片上進(jìn)行點樣；b.點樣完成后，立刻將玻片放在80℃溫度下干烤3小時；c.取出玻片，在濃度為80％的乙醇中浸泡，然后將玻片用保鮮膜包住使其密封，再在65℃的水浴鍋中水浴6小時；d.用濃度為80％的乙醇清洗至其表面雜質(zhì)清除；e.用氣流吹干或用550rpm離心機離心3min，即得本發(fā)明所述芯片。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的白花甜菜九號染色體BAC芯片的制備方法，其特征在于以玻片做為載體，首先經(jīng)過以下程序的特殊處理a.初步清洗(1)用自來水洗一次，每片時間為30-40秒；(2)用去離子水洗一次，每片時間為30-40秒；(3)用去離子水超聲20-30分鐘；(4)用去離子水沖洗10-15分鐘；(5)用無水乙醇超聲10-15分鐘；(6)用去離子水沖洗10-15分鐘；b.精洗(1)用濃硫酸和雙氧水按7∶3比例配制的溶液煮20-30分鐘；(2)用去離子水沖洗10-15分鐘；(3)用無水乙醇超聲10-15分鐘；(4)用去離子水沖洗10-15分鐘；c.高密度羥基化處理(1)用60g/l的氫氧化鈉煮10-15分鐘；(2)用去離子水沖洗10-15分鐘；(3)用去離子水超聲10-15分鐘；(4)用去離子水沖洗10-15分鐘；(5)放入烘箱中烘干即可。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的白花甜菜九號染色體BAC芯片的制備方法，其特征在于所述玻片可以用硅片、尼龍膜、硝酸纖維膜或凝膠代替。
全文摘要
白花甜菜九號染色體BAC芯片及其制備方法，它涉及一種生物技術(shù)領(lǐng)域。現(xiàn)有大片段的BAC DNA所帶有的復(fù)雜性及其菌種在尼龍膜表面進(jìn)行原位裂解殘留的基因組污染對后續(xù)的雜交分析存在影響，降低探針雜交的特異性。本發(fā)明的BAC芯片上的BAC克隆是利用白花甜菜染色體散在重復(fù)序列為特異探針篩選BAC庫獲得，然后將BAC克隆與載體相復(fù)合獲得芯片，它的制備方法包括BAC的初步處理、點樣前的BAC處理和BAC芯片的制備過程。本發(fā)明芯片可以快速、高效的進(jìn)行M14和M14染色體附加系差異表達(dá)基因篩選、基因組差異分析、對消減雜交獲得的基因定位及拷貝數(shù)分析。本發(fā)明的制備方法簡單，容易操作，利于推廣應(yīng)用。
文檔編號C12Q1/68GK1570144SQ20041001373
公開日2005年1月26日 申請日期2004年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月30日
發(fā)明者顧雪鋒, 王志偉, 李海英, 韓俊, 郭德棟, 朱大海 申請人:黑龍江大學(xué), 哈爾濱基太生物芯片開發(fā)有限責(zé)任公司