專利名稱：一種重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因及其表達(dá)系統(tǒng)、表達(dá)產(chǎn)物、生產(chǎn)方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因及含有該基因的載體和重組工程菌株以及該基因所編碼和表達(dá)的產(chǎn)物在制備海水魚類使用的生長與繁殖調(diào)控劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腦垂體腺苷酸環(huán)化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activatingpolypeptide，簡稱PACAP)，是38個氨基酸組成的肽類物質(zhì)。PACAP最初是從綿羊下丘腦抽提物中被發(fā)現(xiàn)的，它屬于由血管活性腸肽(VIP)、胰高血糖素(glucagon)、生長激素釋放因子和分泌素所組成的基因家族。目前，在魚類中發(fā)現(xiàn)PACAP對鯉科魚類腦垂體激素分泌活動的具有調(diào)節(jié)作用，并且證明下丘腦產(chǎn)生的PACAP能在腦垂體水平促進(jìn)生長激素和促性腺激素的釋放。但總體來說，魚類PACAP的結(jié)構(gòu)與功能、受體結(jié)合、基因克隆等方面的研究在國內(nèi)外還處于起步階段，雖然編碼PACAP的基因在其他一些魚類中已被克隆，但是對于重要的海洋經(jīng)濟(jì)魚類石斑魚的PACAP基因的克隆和鑒定則仍未見報道。近年來，了解PACAP生理作用機(jī)理，已成為魚類生理研究的熱點。由于PACAP在魚體內(nèi)含量極微，分離提純相當(dāng)困難，難以應(yīng)用于生產(chǎn)。因此分離和鑒定PACAP基因，為下一步采用DNA重組技術(shù)將其克隆到原核或真核細(xì)胞中，可為得到大量廉價的重組PACAP奠定基礎(chǔ)。
石斑魚是海洋珊瑚礁魚類，屬鮨科(Serranidae)，石斑魚屬(Epinephelus)，是一種名貴的海水魚類，具有極高的經(jīng)濟(jì)價值。但目前在石斑魚人工養(yǎng)殖中還沒有一種能有效地調(diào)控其生長與繁殖活動的調(diào)控劑。而石斑魚PACAP則可以用于制備這類調(diào)控劑，因此采用DNA重組技術(shù)來獲得大量的石斑魚PACAP具有很好的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種重組斜帶石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因；
本發(fā)明的另一目的在于提供含有該基因的載體，特別是克隆載體和表達(dá)載體；本發(fā)明的另一目的在于提供上述載體轉(zhuǎn)化的重組工程菌株；本發(fā)明的另一目的在于提供上述基因編碼的并由上述重組工程菌株表達(dá)的重組斜帶石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽；本發(fā)明的另一目的在于提供重組斜帶石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽的生產(chǎn)方法；本發(fā)明的另一目的在于提供上述重組多肽在制備海水魚類使用的生長與繁殖調(diào)控劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因，是以斜帶石斑魚腦組織總RNA為模板，采用RT-PCR和RACE方法而得到的來源于石斑魚的腺苷酸環(huán)化酶激活多肽的成熟肽的結(jié)構(gòu)域所對應(yīng)的基因片段，其核苷酸序列及其所編碼的氨基酸序列如序列表所示。
本發(fā)明還構(gòu)建了含有上述石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因的載體，優(yōu)選的是含有該基因的大腸桿菌表達(dá)載體。該載體的構(gòu)建是按照常規(guī)方法，將通過PCR方法擴(kuò)增合成的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因經(jīng)酶切和分離純化后，接入到已有載體的相應(yīng)酶切位點之間，即構(gòu)建成所需的含有石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因的表達(dá)載體。
上述的含有石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因的大腸桿菌表達(dá)載體優(yōu)選的是由本發(fā)明提供的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因與大腸桿菌載體表達(dá)載體pTRX構(gòu)建而成的重組表達(dá)載體，命名pTRX-PACAP。
本發(fā)明還用上述含有石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因的相應(yīng)載體進(jìn)一步構(gòu)建了高效表達(dá)重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽的大腸桿菌重組工程菌株。
本發(fā)明的能表達(dá)重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽的大腸桿菌重組工程菌株，優(yōu)選的是由含有石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因的表達(dá)載體pTRX-PACAP轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21而得到，并命名為pTRX-PACAP-BL21。
本發(fā)明提供了利用該大腸桿菌重組工程菌株生產(chǎn)石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽的方法。先將菌株進(jìn)行發(fā)酵并經(jīng)IPTG誘導(dǎo)使其高效表達(dá)石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽重組蛋白，再收集菌體經(jīng)分離純化得到重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽產(chǎn)品。
利用該大腸桿菌重組菌株pTRX-PACAP-BL21生產(chǎn)石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽的具體步驟為(1)菌種的培養(yǎng)發(fā)酵和誘導(dǎo)表達(dá)將菌種接種在含氨芐青霉素的LB豐富液體培養(yǎng)基中，37℃，150-200轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)過夜，次日以1∶50轉(zhuǎn)種于相同培養(yǎng)基中，37℃，150-200轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)至OD600為0.5，加IPTG至終濃度為0.5mol/L，；25℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)13小時后收菌。
(2)表達(dá)產(chǎn)物的純化收集上述純化的菌體，將細(xì)胞破碎后離心收集包含體沉淀，菌體超聲裂解液進(jìn)行Ni-Chelsting親和層析，Sephadex G-25凝膠過濾脫鹽、去咪唑，DEAE Sepharose陰離子交換柱濃縮并去除堿性雜蛋白，Sephadex G-25凝膠過濾脫鹽，25℃腸激酶切割PACAP-PTRX融合蛋白。DEAE Sepharose陰離子交換層析出去殘余酸性雜蛋白，PACAP-PTRX成熟蛋白經(jīng)Sephadex G-25分子篩更換PB緩沖系統(tǒng)，SP Sepharose陽離子交換柱濃縮并出去雜蛋白，經(jīng)凍干即為純化的重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽。
上述重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽可以直接用于制備適合海水魚類尤其是石斑魚屬使用的生長與繁殖調(diào)控劑，也可以通過適當(dāng)?shù)馁x型劑、保護(hù)劑按一定比例形成組合物來應(yīng)用。
本發(fā)明提供的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因通過與適當(dāng)?shù)妮d體連接后可在相應(yīng)的微生物菌株中高效表達(dá)，分離純化后即可得高純度的重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽，而且具有表達(dá)水平高，容易純化的優(yōu)點。所以通過本發(fā)明，可以方便地大量生產(chǎn)重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽，成本較低。這種來源穩(wěn)定、成本便宜的重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽可進(jìn)一步應(yīng)用于制備適合海水魚類尤其是石斑魚屬使用的生長與繁殖調(diào)控劑。


圖1是通過PCR擴(kuò)增得到石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽(PACAP)cDNA的凝膠電泳分析圖。其中1.100bp DNA相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；2.第一輪PCR產(chǎn)物；3.嵌套PCR產(chǎn)物。
圖2是3’RACE的結(jié)果。其中1.100bp DNA相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；2.第一輪PCR產(chǎn)物；3.嵌套PCR產(chǎn)物。
圖3是5’RACE的結(jié)果。其中1.100bp DNA相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；2.加尾反應(yīng)20分鐘產(chǎn)物；3.加尾反應(yīng)5分鐘產(chǎn)物。
圖4是重組表達(dá)載體PACAP-PTRX的構(gòu)建過程示意圖。
圖5是重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE凝膠電泳圖譜。其中1.蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；2.BL21不誘導(dǎo)；3.pTRX不誘導(dǎo)；4.pTRX-PACAP-BL21誘導(dǎo)。
具體實施例實施例1石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽的cDNA的合成根據(jù)已知的哺乳動物和石斑魚的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽cDNA序列，設(shè)計三條引物senseP15’GCA(GT)G(AG)C(AC)A(AGT)(AG)TCTA GTA(AG)AG C(GT) ACT 3’senseP25’GA(AG)A(AG)GA(AG)C(GC)GAAA(GC)GCATGCAG3’antisenseP35’TA(AGC)(AGC)C(ACT)A(AG)(GCT)CG(AGC)CGTCCTTTG3’senseP1、antisenseP3為合成PACAP 524 bp引物，senseP2、antisenseP3為合成PACAP編碼區(qū)288bp cDNA的引物。以腦總RNA的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA為模板經(jīng)PCR方法擴(kuò)增合成PACAP 524bp、合成PACAP編碼區(qū)288bp的基因。PCR反應(yīng)條件為變性94℃3分鐘；94℃45秒，退火55℃30秒，延伸72℃1分30秒，25個循環(huán)；結(jié)束后72℃延伸10分鐘。
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳鑒定見圖1。從圖1可見PCR擴(kuò)增了一段約290bp的序列。
將擴(kuò)增產(chǎn)物連接到pGEM-T Easy載體上得到重組質(zhì)粒，以重組質(zhì)粒為模板，應(yīng)用通用引物T7和SP6進(jìn)行測序，并與其它哺乳動物和石斑魚進(jìn)行同源性比較，結(jié)果表明克隆的PCR產(chǎn)物是石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽。測序結(jié)果見序列表。實施例2含石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因的大腸桿菌表達(dá)載體pTRX-PACAP的構(gòu)建將含有雙酶切位點和PACAP序列的PCR產(chǎn)物經(jīng)過限制性酶KpnI及NotI酶切后進(jìn)行凝膠電泳，分離純化約140bp的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽片段；大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒pTRX經(jīng)限制性酶KpnI及NotI酶切后分離純化5.8kb的大片段，與140bp的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽片段按1∶3混合，用T4連接酶連接16小時后轉(zhuǎn)化入感受態(tài)大腸桿菌BL21中，篩選具氨卞青霉素抗性的轉(zhuǎn)化子，用Omega公司質(zhì)粒提出試劑盒篩選大小約6kb的重組質(zhì)粒，用限制性酶KpnI及NotI酶切重組質(zhì)粒，得到140bp和5.8kb的兩個片段，大小分別與石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽和表達(dá)載體pTRX大小相同，表明石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽已克隆入大腸桿菌表達(dá)載體pTRX中，重組質(zhì)粒命名為pTRX-PACAP(質(zhì)粒構(gòu)建圖見圖4)。實施例3能高效表達(dá)重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽的大腸桿菌重組工程菌株pTRX-PACAP-BL21的構(gòu)建用CaCl2法將pTRX-PACAP轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21，在含氨芐青霉素的LB平板上篩選轉(zhuǎn)化子，經(jīng)質(zhì)粒檢測和酶切分析獲得含pTRX-PACAP的重組轉(zhuǎn)化子pTRX-PACAP-BL21。
實施例4利用大腸桿菌重組工程菌株pTRX-PACAP-BL21生產(chǎn)重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽。(1)菌種的培養(yǎng)發(fā)酵將菌種接種在含氨芐青霉素的LB豐富液體培養(yǎng)基中，37℃，150-200轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)過夜，次日以1∶50轉(zhuǎn)種于相同培養(yǎng)基中，37℃，150-200轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)至OD600為0.5，加IPTG至終濃度為0.5mol/L，；25℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)13小時后收菌。
取少量細(xì)胞加2x上樣緩沖液，煮沸5分鐘后，按標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳。結(jié)果見圖5，顯示經(jīng)誘導(dǎo)的pTRX-PACAP-BL21在20kd的位置上，出現(xiàn)一條新的蛋白帶，經(jīng)誘導(dǎo)的空載體pTRX及空宿主BL21不出現(xiàn)此帶，證明石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽已在pTRX-PACAP-BL21中誘導(dǎo)表達(dá)。(2)重組的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽的純化收集上述純化的菌體，將細(xì)胞破碎后離心收集包含體沉淀，菌體超聲裂解液進(jìn)行Ni-Chelsting親和層析，Sephadex G-25凝膠過濾脫鹽、去咪唑，DEAESepharose陰離子交換柱濃縮并去處堿性雜蛋白，Sephadex G-25凝膠過濾脫鹽，25℃腸激酶切割pTRX-PACAP融合蛋白。DEAE Sepharose陰離子交換層析出去殘余酸性雜蛋白，pTRX-PACAP成熟蛋白經(jīng)Sephadex G-25分子篩更換PB緩沖系統(tǒng)，SP Sepharose陽離子交換柱濃縮并除去雜蛋白，經(jīng)凍干即為純化的重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽。
序列表<110>中山大學(xué)<120>一種重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因及其表達(dá)系統(tǒng)、表達(dá)產(chǎn)物、生產(chǎn)方法和應(yīng)用<160>2<210>1<211>1028<212>DNA<213>斜帶石斑魚(Epinephelus coioides)<220><221>CDS<222>(339)---(866)<220><221>Sig_peptide<222>339--404<400>1GGGGGGGGGG CAAGGCTTAC GATACACGGA TAAAAATCCA AGGCAATCAC AGCACAGGAC 60AAAAGTTTTG GAGCAACGAT ATGCAGACGA ACATACGGCG CACTTTGCCC AGCCGAGTTT 120CTCTGTTCGC CGGTGCGACT GCTTGACTCC TATTAATTGT GTCTAAGAGT GAGATAGGCT 180GCACTGAGGG GAACATAAGG AGACGACGGA GGCGCTTCAG CCAGGGAAGA AGTGCCGTGA 240GAAAGAAACC GTCTCTCTCA CACACTCACA CACACTTACC ACCACAGCCG CGCCCGGATC 300ACATCCTACA GCACAGCGCT CTGCTCCCCT GCTATAGC ATG GCC AGT TCG AGT AAA 356Met Ala Ser Ser Ser Lys 6GCC ACT TTA ATC TTG CTC GTC TAC GGA ATC TTA ATG CAC TAC AGC GTC TTC 407Ala Thr Leu Ile Leu Leu Val Tyr Gly Ile Leu Met His Tyr Ser Val Phe 23TGC ACA CCT ATC GGA CTA AGT TAC CCT AAG ATT AGA CTT GAA AAC GAC GCC 458Cys Thr Pro Ile Gly Leu Ser Thr Pro Lys Ile Arg Leu Glu Asn Asp Ala 40TTC GAT GAG GAT GGG AAT GCA TTA TCC GAC ATG GGT TTT GAT AGC GAT CAG 509Phe Asp Glu Asp Gly Asn Ala Leu Ser Asp Met Gly Phe Asp Ser Asp Gln 57ATT GCT ATA CGA AGC CCA CCA TCC TTA AAC GAC GAC GCG TAC ACT CTC TAC 560Ile Ala Ile Arg Ser Pro Pro Ser Leu Asn Asp Asp Ala Tyr Thr Leu Tyr 7474TAC CCA CCA GAG AAG AGA CCA GAA AGG CAT GCT GAG GAA GAA TTA GAT AGA 611Tyr Pro Pro Glu Lys Arg Pro Glu Arg His Ala Glu Glu Glu Leu Asp Arg 9191GCC TTG AGG GAG ATC CTG GGT CAG TTA ACA GCG AGA CAT TAT CTG CAT TCT 662Ala Leu Arg Glu Ile Leu Gly Gln Leu Thr Ala Arg His Tyr Leu His Ser 108108CTG ATG ACA ATT CGT GCA GGT GAA GAC AAC AGC ATG GAG GAA GAG TCA GAG 713Leu Met Thr Ile Arg Ala Gly Glu Asp Asn Ser Met Glu Glu Glu Ser Glu 125CCC TTA TCC AAA AGA CAT TCA GAT GGG ATC TTC ACC GAC AGC TAC AGT CGC 764Pro Leu Ser Lys Arg His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg 142TAT AGA AAG CAG ATG GCC GTG CAG AAA TAC CTG GCA GCG GTT CTG GGA AGA 815Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Gln Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Arg 159AGG TAC AGA CAG AGA GTT AGG AAC AAA GGA CGC CGG CTT GCC TAT TTG TAG 866Arg Tyr Arg Gln Arg Val Arg Asn Lys Gly Arg Arg Leu Ala Tyr Leu * 175CGTTGTTACA GCGCCCTTAA ACTGCCCTCC TGTGTATATA CATCCAGTCG TTAAATCAAA 926GTCATTCAGA TATATCTGAC CAACCAGTGG ATTGCGCCTG TGTTCTTTCA ACATGTATTT 986ATGTATGAAG TAAAGCCATT AAAATGAATA TTTTAATAATAA 1028<210>2<211>175<212>PRT<213>斜帶石斑魚(EpinePhelus coioides)<400>2Met Ala Ser Ser Ser Lys Ala Thr Leu Ile Leu Leu Val Tyr Gly Ile 16Leu Met His Tyr Ser Val Phe Cys Thr Pro Ile Gly Leu Ser Thr Pro 32Lys Ile Arg Leu Glu Asn Asp Ala Phe Asp Glu Asp Gly Asn Ala Leu 48Ser Asp Met Gly Phe Asp Ser Asp Gln Ile Ala Ile Arg Ser Pro Pro 64Ser Leu Asn Asp Asp Ala Tyr Thr Leu Tyr Tyr Pro Pro Glu Lys Arg 80Pro Glu Arg His Ala Glu Glu Glu Leu Asp Arg Ala Leu Arg Glu Ile 96Leu Gly Gln Leu Thr Ala Arg His Tyr Leu His Ser Leu Met Thr Ile 112Arg Ala Gly Glu Asp Asn Ser Met Glu Glu Glu Ser Glu Pro Leu Ser 128lys Arg His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg 144Lys Gln Met Ala Val Gln Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Arg Arg 160Tyr Arg Gln Arg Val Arg Ash Lys Gly Arg Arg Leu Ala Tyr Leu * 17權(quán)利要求
1.一種石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因，其核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列如序列表所示。
2.如權(quán)利要求1所述的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因，其特征在于它是以石斑魚腦組織總RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，經(jīng)PCR和RACE方法擴(kuò)增而得到的具有石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽全長cDNA的核苷酸序列。
3.一種克隆載體，其特征在于含有權(quán)利要求1所述的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因的。
4.如權(quán)利要求3所述的克隆載體，其特征在于該載體為大腸桿菌克隆載體pGEMT-PACAP。
5.一種重組工程菌株，其特征在于是由權(quán)利要求4所述的克隆載體pGEMT-PACAP轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α中所形成的大腸桿菌重組工程菌株pGEMT-PACAP-DH5α。
6.一種表達(dá)載體，其特征在于含有權(quán)利要求1所述的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因。
7.如權(quán)利要求6所述的表達(dá)載體，其特征在于該載體為大腸桿菌表達(dá)載體pTRX-PACAP。
8.一種重組工程菌株，其特征在于是由權(quán)利要求7所述的表達(dá)載體pTRX-PACAP轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)中所形成的大腸桿菌重組工程菌株pTRX-PACAP-BL21。
9.利用權(quán)利要求8所述的大腸桿菌重組工程菌株生產(chǎn)重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽的方法，其步驟為(1)菌種的培養(yǎng)發(fā)酵和誘導(dǎo)表達(dá)將菌種接種在含氨芐青霉素的LB豐富液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)過夜，次日轉(zhuǎn)種于相同培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)至OD600為0.5，加IPTG至終濃度為0.5mol/L；25℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)13小時后收菌。(2)表達(dá)產(chǎn)物的純化收集菌體，細(xì)胞破碎后離心收集包含體沉淀，菌體裂解液進(jìn)行Ni-Chelsting親和層析，Sephadex G-25凝膠過濾脫鹽、去咪唑，DEAE Sepharose陰離子交換柱濃縮并去除堿性雜蛋白，Sephadex G-25凝膠過濾脫鹽，腸激酶切割PACAP-PTRX融合蛋白。DEAE Sepharose陰離子交換層析除去殘余酸性雜蛋白，成熟蛋白經(jīng)Sephadex G-25分子篩和SPSepharose陽離子交換柱濃縮并除去雜蛋白，再凍干。
10.一種石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽重組蛋白，其特征是由權(quán)利要求8所述的重組工程菌株通過權(quán)利要求9所述的方法而獲得的。
11.權(quán)利要求10所述的重組石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽在制備海水魚類使用的生長與繁殖調(diào)控制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因，該基因是以石斑魚腦組織總RNA為模板，經(jīng)RT－PCR和RACE方法而得到的具有石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽基因全長cDNA序列的基因片段；本發(fā)明還構(gòu)建了含該基因的載體和重組工程菌株；本發(fā)明還涉及了由該基因編碼和重組工程菌株表達(dá)的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽重組蛋白，并提供了該重組蛋白的生產(chǎn)方法；利用本發(fā)明可以獲得來源穩(wěn)定、成本便宜的石斑魚腺苷酸環(huán)化酶激活多肽重組蛋白，并進(jìn)一步制備適合海水魚類使用的生長與繁殖調(diào)控劑。
文檔編號C12P21/02GK1473932SQ0313963
公開日2004年2月11日 申請日期2003年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月30日
發(fā)明者李文笙, 江涌, 林浩然 申請人:中山大學(xué)