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人血樹突狀細胞永生化技術(shù)的制作方法

文檔序號:593240閱讀:1186來源:國知局
專利名稱:人血樹突狀細胞永生化技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
生物醫(yī)藥技術(shù)三背景技術(shù)
樹突狀細胞分離技術(shù)、造血干細胞分類技術(shù)
發(fā)明內(nèi)容
樹突狀細胞(dendritic cells,DC)是生物體內(nèi)免疫系統(tǒng)中負責(zé)抗原遞呈的細胞,是機體對免疫原產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要功能細胞之一。DC廣泛存在于血液、淋巴、肝脾及皮膚等組織。DC能激活功能性淋巴細胞,誘導(dǎo)產(chǎn)生細胞介導(dǎo)的細胞毒作用,提高機體的細胞免疫水平。特別是它能顯著提高弱抗原和自身抗原誘導(dǎo)的特異性反應(yīng),因而在抗腫瘤和抗病毒免疫中發(fā)揮重要作用。
DC為終末期細胞,增殖能力有限,難于在體外大量擴增繁殖。人的外周血和臍帶血是分離和培養(yǎng)DC的主要來源。常規(guī)的方法是從外周血和臍帶血中分離出造血干細胞或多能干細胞,然后用各種細胞因子,如干細胞因子(SCF)、粒細胞、巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素4(IL-4)等擴增并誘導(dǎo)干細胞分化成DC。但此法能獲得的DC數(shù)量有限。需要反復(fù)分離,成本較高,滿足不了實際的需求。人血DC永生化技術(shù)的目的就是通過癌基因轉(zhuǎn)化DC,使DC細胞永生化,在體外大量易擴增繁殖,滿足抗腫瘤、抗病毒等免疫治療的需要。
與常規(guī)的從人血中分類和擴增DC的方法相比,本技術(shù)采用癌基因(C-myc、H-ras等)轉(zhuǎn)化DC,使DC永生化,便于DC的擴增和保存,克服了DC不能大量擴增的缺陷。一旦獲得了這種永生化DC,則不需要反復(fù)從血液中分離樹突狀細胞,降低了培養(yǎng)成本、省時省力,更重要是為規(guī)?;囵B(yǎng)與增殖DC以及醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)化奠定了基礎(chǔ)。具體實施例方式首先用單克隆抗體—磁珠分離系統(tǒng)(MACS)從健康人外周血或臍帶血中分離并純化CD34陽性的造血干細胞,然后用多種細胞因子(SCF、GM-SCF、TNF-α、IL-4等)適當組合誘導(dǎo)CD34細胞增殖并分離為DC,同時用癌基因(C-myc、H-ras等)采用電穿孔方法轉(zhuǎn)染DC并培養(yǎng)轉(zhuǎn)染細胞,采用有限稀釋法使培養(yǎng)細胞克隆化,最后用血液DC的標志性分子(CD1α、HLA-DR、B7-1等)進行鑒定,并采用流式細胞術(shù)分離永生化DC。
權(quán)利要求
1.一種使人血樹突狀細胞永生化的技術(shù),其特點是將造血干細胞用常規(guī)方法刺激擴增分化為樹突狀細胞的同時,用c-myc和H-ras癌基因轉(zhuǎn)染培養(yǎng)細胞使樹突狀細胞永生化。
2.用上述方法使非人血液來源的樹突狀細胞永生化。
全文摘要
樹突狀細胞(DC)是專職的抗原遞呈細胞,能顯著增強弱抗原和自身抗原誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性免疫反應(yīng)。人血樹突狀細胞永生化技術(shù)是以從外周血或臍帶血中分離造血干細胞和樹突狀細胞技術(shù)為基礎(chǔ)。用單克隆抗體—磁珠分離系統(tǒng)(MACS)分離獲得造血干細胞后,用細胞因子(SCF、GM-CSF、TNF-α、IL-4等)刺激造血干細胞擴增分化為樹突狀細胞,同時用C-myc和H-ras癌基因轉(zhuǎn)染培養(yǎng)細胞使樹突狀細胞永生化,最后用標志性分子鑒定并克隆化永生化樹突狀細胞。本技術(shù)克服了樹突狀細胞來源有限,不能在體外大量增殖的不足,通過使樹突狀細胞永生化,可以在體外大量擴增和培養(yǎng),為高效疫苗的產(chǎn)業(yè)化奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號C12N5/08GK1408850SQ0114051
公開日2003年4月9日 申請日期2001年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月18日
發(fā)明者王虹 申請人:王虹
網(wǎng)友詢問留言 已有1條留言
  • 183603... 來自[江蘇省常州市電信] 2019年03月15日 15:33
    樹突狀細胞是一種專門的抗原呈遞細胞,在免疫應(yīng)答和調(diào)控上有著重要的作用,有關(guān)樹突狀細胞的轉(zhuǎn)染是可以使用RFECT進行的,在轉(zhuǎn)染效果上是可以的,轉(zhuǎn)陽性率在90%以上,關(guān)鍵是細胞毒性還很低。
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