專利名稱：結(jié)核桿菌快速藥敏篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種對(duì)結(jié)核桿菌的快速藥敏篩選方法。
現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)結(jié)核桿菌的藥敏篩選通常是采用不同的試劑，就每一種試劑分別的對(duì)結(jié)核桿菌菌落進(jìn)行檢測(cè)試驗(yàn)，從中找到最適合抑制結(jié)核桿菌的藥物，從而達(dá)到根據(jù)不同的病患者對(duì)癥治療的目的。就現(xiàn)有技術(shù)對(duì)結(jié)核桿菌的藥敏篩選方法而言，需要較多的結(jié)核桿菌檢驗(yàn)樣本，以適應(yīng)不同的藥物的藥敏篩選的需要。但是，由于結(jié)核桿菌的分裂、成長(zhǎng)周期較長(zhǎng)，通常要18個(gè)小時(shí)才分裂一次，故需要花較長(zhǎng)的時(shí)間對(duì)結(jié)核桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，取得足夠數(shù)量的結(jié)核桿菌后才能進(jìn)行必要的篩選和檢測(cè)試驗(yàn)。直至目前為止，國(guó)內(nèi)外所有做結(jié)核桿菌(TB)藥敏的方法都需要三天甚至長(zhǎng)達(dá)一周或更多的時(shí)間才能完成。這種情況對(duì)于受結(jié)核桿菌威脅的廣大人群的保健工作是很不利的。
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)方法中的不足，為了解決結(jié)核桿菌藥敏試驗(yàn)的提速目的，提出在微型聚合物的芯片上，對(duì)結(jié)核桿菌進(jìn)行并行分析，以縮短分析周期，減少對(duì)結(jié)核桿菌菌種數(shù)的需要，提高結(jié)核桿菌藥敏速度的方法。
本發(fā)明所述結(jié)核桿菌快速藥敏篩選方法和步驟是(1)對(duì)被檢樣品經(jīng)滅除雜菌預(yù)處理，使注入芯片內(nèi)的樣品中僅存活有結(jié)核桿菌，其它菌均已滅活，并適當(dāng)富集；(2)所說(shuō)的芯片為在聚合物上刻有多路并列通道式的分離柵；柵區(qū)的各通道上帶有供結(jié)核桿菌呼吸之用的儲(chǔ)氣囊，儲(chǔ)氣囊與工作段通道之間有連通道；(3)將芯片上所有通道均置于顯微攝像系統(tǒng)的物鏡一個(gè)視場(chǎng)之內(nèi)，以便供快速同步分離分析之用；(4)將被檢樣品與各種待試藥劑適量混勻后，分別經(jīng)各個(gè)注入口注入芯片各個(gè)相應(yīng)通道入口；(5)注入的同時(shí)，借助顯微鏡系統(tǒng)監(jiān)視芯片上相應(yīng)通道的情況，直至視場(chǎng)內(nèi)出現(xiàn)多個(gè)桿狀菌后，該通道方停止注入；
(6)監(jiān)測(cè)結(jié)核桿菌在藥物作用下的表現(xiàn)；結(jié)核桿菌在藥物作用下的表現(xiàn)，經(jīng)顯微攝像系統(tǒng)直接攝入計(jì)算機(jī)內(nèi)，利用專用的軟件分析各個(gè)通道柵內(nèi)對(duì)應(yīng)結(jié)核桿菌的表現(xiàn)，而得知其活動(dòng)或受抑制結(jié)果；(7)得出抑制結(jié)核桿菌的藥敏篩選結(jié)果。
本發(fā)明所述結(jié)核桿菌快速藥敏篩選方法，提出在微型聚合物的芯片上實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)核桿菌的分離與多路同步分析的功能，從而達(dá)到大幅度減少對(duì)結(jié)核桿菌菌數(shù)量的需要，大量減少分析所需藥劑的需要，由于采用并行分析的方式，提高分析速度，并可同時(shí)對(duì)多路信號(hào)做處理，在一個(gè)視場(chǎng)內(nèi)獲取信號(hào)交由計(jì)算機(jī)分析。從而大幅度提高了結(jié)核桿菌藥敏試驗(yàn)的速度。
附


圖1結(jié)核桿菌快速藥敏篩選方法中采用的芯片結(jié)構(gòu)示意圖。
本發(fā)明所述結(jié)核桿菌的快速藥敏篩選方法是利用在聚合物上刻有多路并列通道式的分離柵2芯片1作為檢驗(yàn)樣品的載體；所說(shuō)的分離柵柵區(qū)的各通道上均帶有供結(jié)核桿菌呼吸之用的儲(chǔ)氣囊3，儲(chǔ)氣囊與工作段通道之間有連通道。
將芯片1上所有通道的工作段(如附
圖1所示的帶儲(chǔ)氣囊的直通區(qū))均置于顯微攝像系統(tǒng)的物鏡一個(gè)視場(chǎng)4之內(nèi)，以便供快速同步分離分析之用。
被檢樣品5(結(jié)核桿菌)在檢驗(yàn)前應(yīng)當(dāng)作滅除雜菌處理，使注入芯片內(nèi)的樣品中僅存活有結(jié)核桿菌，并適當(dāng)富集；將被檢樣品與各種不同待試藥劑適量混勻后，將每一種加有檢驗(yàn)樣品的藥劑分別經(jīng)各注入口6注入到芯片1各個(gè)相應(yīng)通道之中；注入的同時(shí)，借助顯微鏡系統(tǒng)監(jiān)視芯片上相應(yīng)通道的情況，直至視場(chǎng)4內(nèi)出現(xiàn)多個(gè)有活動(dòng)表現(xiàn)的桿狀菌后，該通道停止注入。
被樣品注入之后，經(jīng)顯微攝像系統(tǒng)監(jiān)測(cè)結(jié)核桿菌在藥物作用下的表現(xiàn)；將結(jié)核桿菌在藥物作用下的表現(xiàn)，經(jīng)顯微攝像系統(tǒng)直接攝入計(jì)算機(jī)內(nèi)，利用專用的軟件分析各通道柵內(nèi)對(duì)應(yīng)結(jié)核桿菌的狀況，從而得知其結(jié)核桿菌的活動(dòng)情況或受抑制結(jié)果最終得出抑制結(jié)核桿菌的藥敏篩選結(jié)果。
所說(shuō)的顯微攝像系統(tǒng)最好具有10bit或10bit以上量化精度，以保證獲知目標(biāo)微弱變化狀況，其工作光波波段為0.4～0.95μm；所說(shuō)的芯片1的照明光源可為下方，或上方，或雙重傾斜施照，所用光源可為光纖束引入的鹵鎢燈光源。
權(quán)利要求
1.一種結(jié)核桿菌快速藥敏篩選方法為(1)對(duì)被檢樣品經(jīng)滅除雜菌預(yù)處理，使注入芯片內(nèi)的樣品中僅存活有結(jié)核桿菌，其它菌均已滅活；(2)所說(shuō)的芯片為在聚合物上刻有多路并列通道式的分離柵；柵區(qū)的各通道上帶有供結(jié)核桿菌呼吸之用的儲(chǔ)氣囊；(3)將芯片上所有通道的工作段均置于顯微攝像系統(tǒng)的物鏡一個(gè)視場(chǎng)之內(nèi)；(4)將被檢樣品與各種待試藥劑適量混勻后，分別經(jīng)各個(gè)注入口注入芯片各個(gè)相應(yīng)通道入口；(5)注入的同時(shí)，借助顯微鏡系統(tǒng)監(jiān)視芯片上相應(yīng)通道的情況，直至視場(chǎng)內(nèi)出現(xiàn)多個(gè)有活動(dòng)表現(xiàn)的桿狀菌后，該通道方停止注入(6)監(jiān)測(cè)結(jié)核桿菌在藥物作用下的表現(xiàn)；結(jié)核桿菌在藥物作用下的表現(xiàn)，經(jīng)顯微攝像系統(tǒng)直接攝入計(jì)算機(jī)內(nèi)，利用專用的軟件分析各個(gè)通道柵內(nèi)對(duì)應(yīng)結(jié)核桿菌的表現(xiàn)，而得知其活動(dòng)或受抑制結(jié)果。(7)得出抑制結(jié)核桿菌的藥敏篩選結(jié)果。
全文摘要
本發(fā)明屬于一種對(duì)結(jié)核桿菌快速藥敏篩選方法。采用在刻有多路并列通道分離柵的微型聚合物的芯片上,經(jīng)各注入口注入被檢樣品與各種待試藥劑的混勻劑,在顯微攝像系統(tǒng)物鏡的一個(gè)視場(chǎng)內(nèi)監(jiān)視芯片上相應(yīng)通道的情況;經(jīng)顯微攝像系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)分析各通道柵內(nèi)對(duì)應(yīng)結(jié)核桿菌的表現(xiàn),得知其活動(dòng)或受抑制結(jié)果。本發(fā)明所述方法可對(duì)結(jié)核桿菌實(shí)現(xiàn)多路同步分析,并大為減少對(duì)結(jié)核桿菌菌數(shù)及分析所需藥劑的需要,大幅提高結(jié)核桿菌藥敏試驗(yàn)的速度。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK1299878SQ0013129
公開(kāi)日2001年6月20日 申請(qǐng)日期2000年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月20日
發(fā)明者葉虎年, 程冬娥, 葉梅, 楊新立 申請(qǐng)人:華中科技大學(xué)