> (5)生根壯苗培養(yǎng):當(dāng)芽長至2cm時(shí)，切分成小塊，轉(zhuǎn)接到生根壯苗培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，長成幼苗；
(6)移栽煉苗:當(dāng)幼苗長至4?5cm時(shí)，將培養(yǎng)瓶移至溫室大棚中煉苗，I周后，將試管苗取出，用水沖洗干凈后，栽種于穴盤中，基質(zhì)為高要泥炭:珍珠巖等于3:1的混配基質(zhì)中，I株/穴。I個(gè)半月后，長到3?4片葉時(shí)，移栽上盆；
(7)變異單株的選擇:從親本的無性系后代群體中，篩選出葉片變圓形、質(zhì)地變硬和葉柄變粗壯的變異單株，編號(hào)為C2-0(見圖1)，并通過流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞DNA含量進(jìn)行測(cè)定和分析，結(jié)果見圖2:親本僅在相對(duì)熒光強(qiáng)度值約400K位置出現(xiàn)一個(gè)單峰;變異單株C2-0在約800K位置出現(xiàn)一個(gè)單峰，峰值位置約為親本的2倍，由此推斷，變異單株C2-0在葉形和葉片質(zhì)地等發(fā)生明顯改變，是由親本染色體加倍引起的，能夠穩(wěn)定遺傳，從而確定C2-0為花葉芋的優(yōu)選單株；
(8)優(yōu)選單株C2-0無性系后代群體的建立:取優(yōu)選單株C2-0的幼嫩葉片為外植體，進(jìn)行組培擴(kuò)繁，方法同前，并以親本作為對(duì)照，對(duì)幼苗生長、葉片、塊莖和生長勢(shì)等主要性狀，進(jìn)行多年多點(diǎn)試驗(yàn)調(diào)查，驗(yàn)證變異單株后代群體的特異性、一致性和穩(wěn)定性；
(9)新品種的培育:經(jīng)過對(duì)比試驗(yàn)調(diào)查，后代群體植株的株型、葉形和葉色等比較一致，形成了性狀和表現(xiàn)一致的群體，與親本(圖3?圖4)比較，株系的株型變矮，葉片變圓形，葉片質(zhì)地更硬，葉柄更粗壯，符合選育目標(biāo)，確定C2-0為花葉芋新品種。
[0024] 實(shí)施例2
以花葉芋品種‘福利達(dá)’為親本材料，獲得變異單株C3-0新品種的選育方法。該方法按以下步驟進(jìn)行:
(1)培養(yǎng)基的配制:
培養(yǎng)基由以下三部分組成:
a)誘導(dǎo)培養(yǎng)基:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加0.5?2mg/L的6-BA、0.1?lmg/L的2，4-D、25?35g/L鹿糖和6?8g/L卡拉膠，pH5.8?6.0 ；
b)分化培養(yǎng)基:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加I?2mg/L的6-BA、0.1?0.5mg/L的NAA、25?35g/L鹿糖和6?8g/L卡拉膠，pH5.8?6.0 ；
c)生根壯苗培養(yǎng)基:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加0.1?0.5mg/L的NAA、25?35g/L蔗糖和6?8g/L卡拉膠，pH5.8?6.0 ；
(2)外植體的選擇和消毒處理:選取親本‘福利達(dá)’尚未展開的幼嫩葉片為外植體，用70%乙醇浸泡30s，無菌水沖洗2次，0.1%升汞浸泡8?lOmin，最后用無菌水漂洗5次；
(3)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒處理的葉片用刀片切成I?2cm小段，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中黑暗培養(yǎng)；
(4)分化培養(yǎng):將誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基中，于光照條件下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為800?lOOOlux，每天光照時(shí)間12小時(shí)，誘導(dǎo)分化出芽；
(5)生根壯苗培養(yǎng):當(dāng)芽長至2cm時(shí)，切分成小塊，轉(zhuǎn)接到生根壯苗培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，長成幼苗；
(6)移栽煉苗:當(dāng)幼苗長至4?5cm時(shí)，將培養(yǎng)瓶移至溫室大棚中煉苗，I周后，將試管苗取出，用水沖洗干凈后，栽種于穴盤中，基質(zhì)為高要泥炭:珍珠巖等于3: I的混配基質(zhì)中，I株/穴。I個(gè)半月后，長到3-4片葉時(shí)，移栽上盆；
(7)變異單株的選擇:從親本的無性系后代群體中，篩選出葉片變圓形、質(zhì)地變硬、葉色變紅和葉柄變粗壯的變異單株，編號(hào)為C3-0;通過流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞DNA含量進(jìn)行測(cè)定和分析，結(jié)果見圖5:親本僅在相對(duì)熒光強(qiáng)度值約500K位置出現(xiàn)一個(gè)單峰；‘C3-0’在約900K位置出現(xiàn)一個(gè)單峰，峰值位置約為親本的1.8倍，由此推斷，‘C3-0’在葉形和葉片質(zhì)地等發(fā)生明顯改變，是由親本染色體加倍引起的，能夠穩(wěn)定遺傳，從而確定C3-0為花葉芋的優(yōu)選單株；
(8)優(yōu)選單株C3-0無性系后代群體的建立:取優(yōu)選品系單株C3-0的幼嫩葉片為外植體，進(jìn)行組培擴(kuò)繁，方法同前，并以親本作為對(duì)照，對(duì)幼苗生長、葉片、塊莖和生長勢(shì)等主要性狀，進(jìn)行多年多點(diǎn)試驗(yàn)調(diào)查，驗(yàn)證變異單株后代群體特異性、一致性和穩(wěn)定性；
(9)新品種的培育:經(jīng)過對(duì)比試驗(yàn)調(diào)查，后代群體植株的株型、葉形和葉色等比較一致，形成了性狀和表現(xiàn)一致的群體，與親本比較(圖6?8)，株系的株型變矮，葉色變紅，葉片變圓形，葉片質(zhì)地更硬，葉柄更粗壯;符合選育目標(biāo)，確定C3-0為花葉芋新品種。
[0025]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種花葉芋體細(xì)胞無性系變異選育方法的培養(yǎng)基，由以下三部分組成: 1)誘導(dǎo)培養(yǎng)基:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加0.5?2mg//L的6-BA、0.1?2mg//L的2，4-D、20?40g/L鹿糖和6?8g/L卡拉膠，pH5.6?6.0 ； 2)分化培養(yǎng)基:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加I?3mg//L的6-BA、0.1?lmg/L的NAA、20?40g/L鹿糖和6?8g/L卡拉膠，pH5.6?6.0 ； 3)生根壯苗培養(yǎng)基:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加0.1?lmg/L的NAA、20?40g/L蔗糖和6?8g/L卡拉膠，pH5.6?6.0。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于:由以下三部分組成: 1)誘導(dǎo)培養(yǎng)基:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加0.5?2mg//L的6-BA、0.1?lmg/L的2，4-D、25?35g/L鹿糖和6?8g/L卡拉膠，pH5.8?6.0 ； 2)分化培養(yǎng)基:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加I?2mg/L的6-BA、0.1?0.5mg/L的NAA、25?35g/L鹿糖和6?8g/L卡拉膠，pH5.8?6.0 ； 3)生根壯苗培養(yǎng)基:在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加0.1?0.5mg/L的NAA、25?35g/L蔗糖和6?8g/L卡拉膠，pH5.8?6.0。3.—種花葉芋體細(xì)胞無性系變異的選育方法，其特征在于，包括下列步驟: (1)培養(yǎng)基的配制:配置權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基； (2)外植體的選擇和消毒處理:選取尚未展開的幼嫩葉片和葉柄為外植體，對(duì)其進(jìn)行消毒處理； (3)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒處理后的葉片切成I?2cm小段，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中黑暗培養(yǎng)； (4)分化培養(yǎng):將誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織轉(zhuǎn)接至分化培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)分化出芽； (5)生根壯苗培養(yǎng):當(dāng)芽長至1.8?2.5cm時(shí)，切分成小塊，轉(zhuǎn)接到生根壯苗培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，長成幼苗； (6)移栽煉苗:當(dāng)幼苗長至4?5cm時(shí)，將培養(yǎng)瓶移至溫室大棚中煉苗5?8天后，將試管苗取出，沖洗干凈，栽種于穴盤中；待植株長到有3-4片葉時(shí)，將苗移栽上盆； (7)變異單株的選擇:從親本的無性系后代群體中，篩選出性狀獨(dú)特的變異單株，并采用流式細(xì)胞儀對(duì)變異單株的細(xì)胞DNA含量進(jìn)行測(cè)定和分析，變異單株的峰值位置為親本的1.6?2.2倍，確定變異單株由親本染色體加倍引起，能夠穩(wěn)定遺傳，為花葉芋的優(yōu)選單株； (8)優(yōu)選單株的無性系后代群體的建立:取優(yōu)選單株的幼嫩葉片為外植體，進(jìn)行組培擴(kuò)繁，并以親本為對(duì)照，對(duì)植株生長、葉片、塊莖和生長勢(shì)等主要性狀，進(jìn)行多年多點(diǎn)試驗(yàn)調(diào)查，驗(yàn)證優(yōu)選單株后代群體的特異性、一致性和穩(wěn)定性； (9)新品種的培育:經(jīng)品種比較試驗(yàn)調(diào)查，后代群體植株具有獨(dú)特的觀賞性狀，形成性狀和表現(xiàn)一致的群體，符合育種目標(biāo)，定為新品種。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的選育方法，其特征在于:步驟(2)中的外植體的消毒處理步驟為70%乙醇浸泡30s，無菌水沖洗2次，0.1%升汞浸泡8-10min，最后用無菌水漂洗5次。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的選育方法，其特征在于:步驟(4)中分化培養(yǎng)的條件為光照強(qiáng)度為800?1000 Iux，光照時(shí)間為每天11?13小時(shí)。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的選育方法，其特征在于:步驟(6)中穴盤中的基質(zhì)為高要泥炭:珍珠巖的質(zhì)量比為3:1的混合基質(zhì)。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的選育方法，其特征在于:步驟(7)中篩選變異單株的標(biāo)準(zhǔn)包括:葉片變圓形、質(zhì)地變硬、葉柄變粗壯和/或株型變矮。8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的選育方法，其特征在于:步驟(7)中變異單株采用流式細(xì)胞儀對(duì)變異單株的細(xì)胞DNA含量進(jìn)行測(cè)定和分析，變異單株的峰值位置為親本的1.8?2倍，確定為花葉芋的優(yōu)選單株。9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的選育方法，其特征在于:花葉芋品種選自‘玫瑰花蕾’、‘福利達(dá)’、‘白鷺’、‘凱瑟琳’、‘迷你白’、‘金哲蘭’。10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的選育方法，其特征在于:花葉芋品種為‘玫瑰花蕾’或‘福利達(dá)，。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種花葉芋體細(xì)胞無性系變異的選育方法，屬于花卉遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明方法是通過愈傷組織誘導(dǎo)途徑，建立親本的組織培養(yǎng)快繁體系；從后代群體中篩選出性狀獨(dú)特的變異單株，進(jìn)行編號(hào)并對(duì)變異單株的相對(duì)核DNA含量進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)變異單株的峰值位置為親本的1.6～2.2倍時(shí)，確定為花葉芋的優(yōu)選單株；建立優(yōu)選單株的無性系后代群體，對(duì)后代群體的主要性狀進(jìn)行多年多點(diǎn)試驗(yàn)調(diào)查，驗(yàn)證優(yōu)選單株后代群體的特異性、一致性和穩(wěn)定性，最終確定為花葉芋的新品種。本發(fā)明能有效獲得花葉芋優(yōu)良變異單株，且變異單株能夠很快穩(wěn)定下來，操作方法簡便，縮短育種年限，提高育種效率。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105557525
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610023954
【發(fā)明人】劉金梅, 趙超藝, 鐘榮輝, 于波, 尤毅, 章金輝, 陳香羅
【申請(qǐng)人】廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境園藝研究所
【公開日】2016年5月11日
【申請(qǐng)日】2016年1月13日