消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在植物組織培養(yǎng)過程中，污染現(xiàn)象是目前組織培養(yǎng)過程中三大難題之一，由于各種原因，造成組織培養(yǎng)苗出現(xiàn)細(xì)菌污染，被污染后的組織培養(yǎng)苗一般是棄之另作，在生產(chǎn)過程中污染細(xì)菌生長(zhǎng)訊速，且易傳播，如果處理不當(dāng)會(huì)造成毀滅性的打擊、生產(chǎn)成本的提高，對(duì)植株資源的保存往往造成無(wú)法挽回的損失。目前組織培養(yǎng)中，多采用抗生素進(jìn)行殺菌處理，但至今并未發(fā)現(xiàn)那種抗生素能夠?qū)Ω鞣N菌都有效，效果不理想，還有的采用氯化汞進(jìn)行防治，但是氯化汞在使用以后，容易造成環(huán)境的二次污染。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。
[0004]本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，該方法將魚腥草、蘆薈、鵝不食草、艾葉、藿香和大蒜等中草藥經(jīng)合理的配伍和處理后加入到常規(guī)培養(yǎng)基中，制備成去污培養(yǎng)基，用于轉(zhuǎn)接污染的組織培養(yǎng)苗，該方法殺菌效果好，操作簡(jiǎn)便，可解決現(xiàn)有技術(shù)存在的滅菌效果不理想、操作復(fù)雜、容易造成二次污染和不具備推廣價(jià)值的問題。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，包括如下步驟:
[0006]步驟A、稱取5-10重量份的鮮魚腥草、3-5重量份的鮮蘆薈、15-20重量份的鮮鵝不食草、10-15重量份的鮮艾葉、3-8重量份的鮮藿香和10-20重量份的大蒜，混合后打漿，得第一中草藥漿；
[0007]步驟B、將所述第一中草藥漿加入100重量份的常規(guī)培養(yǎng)基中，混勻后高壓滅菌，得第一去污培養(yǎng)基；
[0008]步驟C、將污染的組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)接到所述第一去污培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10天；
[0009]步驟D、重復(fù)步驟A至步驟C，直至所述污染的組織培養(yǎng)苗的污染消除，得去污組織培養(yǎng)苗；
[0010]步驟E、將所述去污組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)入常規(guī)培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。
[0011]優(yōu)選的是，所述的消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，所述步驟A中，所述鮮魚腥草為7-8重量份、鮮蘆薈為3.5-4重量份、鮮鵝不食草為17-18重量份、鮮艾葉為12-14重量份、鮮霍香為4_6重量份、大蒜為13_16重量份。
[0012]優(yōu)選的是，所述的消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，所述步驟A中，還包括，將所述第一中草藥漿于50-60°C，超聲波功率為320-380?的條件下，分散提取40min。
[0013]—種消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，包括如下步驟:
[0014]步驟一、稱取2-4重量份的干魚腥草、3-5重量份的鮮蘆薈、4-7重量份的干鵝不食草、3_5重量份的干艾葉、1-3重量份的干霍香和10-20重量份的大蒜，混合后加入25-40重量份的水，于70-80 0C下浸泡2-3小時(shí)，打漿，得第二中草藥漿；
[0015]步驟二、將所述第二中草藥漿加入100重量份的常規(guī)培養(yǎng)基中，混勻后高壓滅菌，
得第二去污培養(yǎng)基；
[0016]步驟三、將污染的組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)接到所述第二去污培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10天；
[0017]步驟四、重復(fù)步驟一至步驟三，直至所述污染的組織培養(yǎng)苗的污染消除，得去污組織培養(yǎng)苗；
[0018]步驟五、將所述去污組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)入常規(guī)培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。
[0019]優(yōu)選的是，所述的消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，所述步驟一中，所述干魚腥草為3重量份、鮮蘆薈為4重量份、干鸛不食草為5重量份、干艾葉為4重量份、干藿香為2重量份、大蒜為15重量份。
[0020]優(yōu)選的是，所述的消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，所述步驟一中，還包括:在浸泡過程中，采用超聲波輔助提取，超聲波提取條件為:超聲波功率350-400?，單次超聲時(shí)間5-8min，間隔時(shí)間15min，超聲次數(shù)6_8次。
[0021]優(yōu)選的是，所述的消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，所述步驟一中，還包括:將所述第二中草藥漿于70-80°C，超聲波功率為350-380W條件下分散提取40min。
[0022]本發(fā)明至少包括以下有益效果:
[0023]第一、通過將魚腥草、蘆薈、鵝不食草、艾葉、藿香和大蒜按照合理的比例進(jìn)行配伍，可拓寬其抗菌譜，增強(qiáng)殺菌藥效，將上述中草藥處理后加入常規(guī)培養(yǎng)基中培養(yǎng)污染的組織培養(yǎng)苗，經(jīng)數(shù)次轉(zhuǎn)接培養(yǎng)即可得到去污培養(yǎng)苗，該方法可殺滅污染的組織培養(yǎng)苗中的各種細(xì)菌，殺菌效果好；
[0024]第二、通過將第一中草藥漿或第二中草藥漿進(jìn)行適當(dāng)?shù)某暡ㄌ幚?，可促進(jìn)漿料中的有效成分充分溶出，提高去污培養(yǎng)基的殺菌能力；
[0025]第三、通過在浸泡過程中添加超聲波處理，可使水分子快速進(jìn)入上述干制中草藥的微孔中，大大縮短上述中草藥的復(fù)水時(shí)間，還可促進(jìn)中草藥中的有效成分的溶出，進(jìn)而提尚去污培養(yǎng)基的殺菌能力；
[0026]第四、本發(fā)明的方法可解決現(xiàn)有技術(shù)存在的滅菌效果不理想、操作復(fù)雜、容易造成二次污染和不具備推廣價(jià)值的問題，對(duì)組織培養(yǎng)苗的損傷小，成本低，操作簡(jiǎn)便，適用于工業(yè)推廣。
[0027]本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說(shuō)明體現(xiàn)，部分還將通過對(duì)本發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
【具體實(shí)施方式】
[0028]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說(shuō)明書文字能夠據(jù)以實(shí)施。
[0029]需要說(shuō)明的是，下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法，所述試劑和材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得。
[0030]實(shí)施例1:
[0031 ] 一種消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，包括如下步驟:
[0032]步驟A、稱取5重量份的鮮魚腥草、5重量份的鮮蘆薈、15重量份的鮮鵝不食草、15重量份的鮮艾葉、8重量份的鮮藿香和10重量份的大蒜，混合后打漿，得第一中草藥漿；
[0033]步驟B、將所述第一中草藥漿加入100重量份的常規(guī)姜黃培養(yǎng)基中，混勻后高壓滅菌，得第一去污培養(yǎng)基；
[0034]步驟C、將污染的姜黃組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)接到所述第一去污培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-270C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8-10h/d的條件下培養(yǎng)，每周轉(zhuǎn)接一次，經(jīng)過四周的培養(yǎng)，即可消除污染，獲得健壯姜黃組織培養(yǎng)苗；
[0035]步驟D、將所得健壯姜黃組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)入常規(guī)姜黃培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。
[0036]實(shí)施例2:
[0037]—種消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，包括如下步驟:
[0038]步驟A、稱取8重量份的鮮魚腥草、5重量份的鮮蘆薈、15重量份的鮮鵝不食草、10重量份的鮮艾葉、8重量份的鮮藿香和10重量份的大蒜，混合后打漿，得第一中草藥漿；
[0039]步驟B、將所述第一中草藥漿加入100重量份的常規(guī)黃斑唇柱苣苔培養(yǎng)基中，混勻后高壓滅菌，得第一去污培養(yǎng)基；
[0040]步驟C、將污染的黃斑唇柱苣苔組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)接到所述第一去污培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-270C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10h/d的條件下培養(yǎng)，每周轉(zhuǎn)接一次，經(jīng)過三周的培養(yǎng)，即可消除污染，獲得健壯黃斑唇柱苣苔組織培養(yǎng)苗；
[0041]步驟D、將所得健壯黃斑唇柱苣苔組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)入常規(guī)黃斑唇柱苣苔培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。
[0042]實(shí)施例3:
[0043]—種消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，包括如下步驟:
[0044]步驟A、稱取10重量份的鮮魚腥草、5重量份的鮮蘆薈、16重量份的鮮鵝不食草、15重量份的鮮艾葉、5重量份的鮮藿香和20重量份的大蒜，混合后打漿，得第一中草藥漿；
[0045]步驟B、將所述第一中草藥漿加入100重量份的常規(guī)黃精培養(yǎng)基中，混勻后高壓滅菌，得第一去污培養(yǎng)基；
[0046]步驟C、將污染的黃精組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)接到所述第一去污培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-270C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8-10h/d的條件下培養(yǎng)，每周轉(zhuǎn)接一次，經(jīng)過四周的培養(yǎng)，即可消除污染，獲得健壯黃精組織培養(yǎng)苗；
[0047]步驟D、將所得健壯黃精組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)入常規(guī)黃精培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。
[0048]實(shí)施例4:
[0049]—種消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，包括如下步驟:
[0050]步驟A、稱取8重量份的鮮魚腥草、5重量份的鮮蘆薈、15重量份的鮮鵝不食草、15重量份的鮮艾葉、8重量份的鮮藿香和20重量份的大蒜，混合后打漿，得第一中草藥漿；
[0051]步驟B、將所述第一中草藥漿加入100重量份的常規(guī)鐵皮石斛培養(yǎng)基中，混勻后高壓滅菌，得第一去污培養(yǎng)基；
[0052]步驟C、將污染的鐵皮石斛組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)接到所述第一去污培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-270C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10h/d的條件下培養(yǎng)，每周轉(zhuǎn)接一次，經(jīng)過四周的培養(yǎng)，即可消除污染，獲得健壯鐵皮石斛組織培養(yǎng)苗；
[0053 ]步驟D、將所得健壯鐵皮石斛組織培養(yǎng)苗轉(zhuǎn)入常規(guī)鐵皮石斛培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。
[0054]實(shí)施例5:
[0055]—種消除組織培養(yǎng)苗細(xì)菌污染的方法，包括如下步