一種鐵皮石斛種胚的直播方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，具體是一種鐵皮石斛種胚的直播方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鐵皮石斛是傳統(tǒng)珍稀名貴中藥材，在《道藏》中被列為“中華九大仙草之首”。鐵皮石斛具有滋陰清熱、生津益胃、提高人體免疫力等功效，具有很高的藥用價(jià)值。因其種子發(fā)育不完全，無(wú)胚乳，其自然萌發(fā)需要恰當(dāng)?shù)沫h(huán)境以及共生菌的幫助，對(duì)自然條件要求苛刻，自然條件下的萌發(fā)率極低，現(xiàn)鐵皮石斛野生資源已瀕臨滅絕。
[0003]目前，藥用鐵皮石斛種植所需苗種是通過現(xiàn)代植物組培技術(shù)培育而來。我國(guó)的植物組培技術(shù)發(fā)展于20世紀(jì)50年代，在石斛行業(yè)中的應(yīng)用研宄起源于20世紀(jì)80年代，近十年內(nèi)組培技術(shù)在石斛繁育中得到了快速發(fā)展，但與此同時(shí)問題也逐漸顯露，組培行業(yè)技術(shù)要求高，投資大，條件要求苛刻，風(fēng)險(xiǎn)可控性不強(qiáng)，導(dǎo)致種苗的價(jià)格昂貴，種植戶難以接受，加之非專業(yè)人員的盲目投資導(dǎo)致組培苗種的品種、品質(zhì)良莠不齊，種植成活率不高，往往對(duì)廣大種植戶造成較大損失，嚴(yán)重影響農(nóng)戶種植的積極性，阻礙石斛行業(yè)的健康發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種簡(jiǎn)單實(shí)用、穩(wěn)定可靠、可操作性強(qiáng)的鐵皮石斛種胚的直播方法，經(jīng)該方法直播播種的鐵皮石斛種胚，其萌發(fā)率可達(dá)86.2%以上，株高大于3cm的鐵皮石斛苗的移栽成活率可達(dá)97.9%以上。
[0005]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:一種鐵皮石斛種胚的直播方法，包括以下步驟:
O直播種子的選擇:選擇完全成熟的鐵皮石斛果莢作為直播種子；
2)共生菌培養(yǎng)液的制備:選取帶有部分原始基質(zhì)的野生鐵皮石斛，將其根部連帶原始基質(zhì)浸泡在無(wú)菌水中40?60min，浸泡期間每3?5min搖晃一次，浸泡結(jié)束后得到浸泡液；將得到的浸泡液在150?200rpm轉(zhuǎn)速下離心處理40?80s沉降雜質(zhì)，取上清液并將上清液在3000?4000rpm轉(zhuǎn)速下離心處理10?15min，棄上清后向離心管中加入2?3mL無(wú)菌水后漩渦震蕩45?60s，得到菌液；將得到的菌液接種于馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基中，每10mL馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基接種80?120 μ L菌液，于30?38°C在轉(zhuǎn)速為120?150rpm的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3?5d后收獲共生菌培養(yǎng)液；
3)直播基質(zhì)的選擇及處理:選取發(fā)酵過的粒徑為0.2?2.0cm的松鱗作為直播基質(zhì)，并將松鱗鋪至苗床，然后向苗床澆灌制得的共生菌培養(yǎng)液一次，之后每7?1d用共生菌培養(yǎng)液噴霧處理一次，前后處理時(shí)間為45?60d ；
4)直播種子的預(yù)處理與播種:將選擇的直播種子用70?75%的酒精進(jìn)行表面消毒8?1min,然后切開種子果莢并將種胚倒入含萘乙酸0.6?0.8mg/L、6_芐氨基嘌呤0.2?0.4mg/L、椰汁8?10%的無(wú)菌液中，保證平均每顆種胚用800?1200mL的無(wú)菌液進(jìn)行暗處理，處理時(shí)間為12?15h，得到種子混合液；向得到的種子混合液中加入制得的共生菌培養(yǎng)液，保證平均每升種子混合液用80?120mL的共生菌培養(yǎng)液進(jìn)行暗處理，暗處理4?6h后，得到種子處理液；向經(jīng)噴霧處理的苗床噴灑種子處理液，按照每平方米苗床噴灑0.05-0.15L種子處理液進(jìn)行直播播種；
5)播種后期管理:控制播種后的種子培養(yǎng)環(huán)境的溫度為20?30°C、空氣濕度為70?90%，種子播種后每7?1d噴用一次制得的共生菌培養(yǎng)液，同時(shí)播種后頭7?1d進(jìn)行暗處理，之后的一個(gè)月內(nèi)光照強(qiáng)度控制在1500?2000LUX，待葉片萌發(fā)至株高3cm后進(jìn)行移栽和正常的水肥管理。
[0006]步驟2)中所述的馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基的pH值為6.0，該培養(yǎng)基含有馬鈴薯200g/L、蔗糖 30g/L 和麩皮 20g/L。
[0007]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明采用人工培育的共生菌培養(yǎng)液處理直播基質(zhì)和直播種子，使直播種子在人工仿野生環(huán)境下自然萌發(fā)，最終組培得到鐵皮石斛苗，解決了鐵皮石斛直播萌發(fā)條件苛刻和萌發(fā)率極低的問題，為鐵皮石斛的人工培育提供了一條新途徑。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單實(shí)用，穩(wěn)定可靠，可操作性強(qiáng)，成本低廉，經(jīng)本發(fā)明方法直播播種的鐵皮石斛種胚，其萌發(fā)率可達(dá)86.2%以上，株高大于3cm的鐵皮石斛苗的移栽成活率可達(dá)97.9%以上，可大幅降低種植戶的成本投入，滿足鐵皮石斛大規(guī)模種植的需要，符合鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)需求，對(duì)石斛行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有極其重要的意義。
【具體實(shí)施方式】
[0008]以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0009]實(shí)施例一的鐵皮石斛種胚的直播方法，包括以下步驟:
1)直播種子的選擇:選擇購(gòu)自浙江溫州的100%成熟的鐵皮石斛果莢作為直播種子；
2)共生菌培養(yǎng)液的制備:選取帶有部分原始基質(zhì)的浙江野生鐵皮石斛，將其根部連帶原始基質(zhì)浸泡在無(wú)菌水中40min，浸泡期間每3min搖晃一次，浸泡結(jié)束后得到浸泡液；將得到的浸泡液在150rpm轉(zhuǎn)速下離心處理60s沉降雜質(zhì)，取上清液并將上清液在3000rpm轉(zhuǎn)速下離心處理12min，棄上清后向離心管中加入2mL無(wú)菌水后漩渦震蕩45s，得到菌液；將得到的菌液接種于馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基(含有馬鈴薯200g/L、蔗糖30g/L和麩皮20g/L，pH值為6.0)中，每10mL馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基接種90 μ L菌液，于30°C在轉(zhuǎn)速為120rpm的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d后收獲共生菌培養(yǎng)液；
3)直播基質(zhì)的選擇及處理:選取發(fā)酵過的粒徑為1.0?1.5cm的松鱗作為直播基質(zhì)，并將松鱗鋪至苗床，然后向苗床澆灌制得的共生菌培養(yǎng)液一次，之后每7d用共生菌培養(yǎng)液噴霧處理一次，前后處理時(shí)間為49d ；
4)直播種子的預(yù)處理與播種:將選擇的直播種子用70%的酒精進(jìn)行表面消毒8min，然后切開種子果莢并將種胚倒入含萘乙酸0.6mg/L、6-芐氨基嘌呤0.2mg/L、椰汁8%的無(wú)菌液中，保證平均每顆種胚用100mL的無(wú)菌液進(jìn)行暗處理，處理時(shí)間為12h，得到種子混合液；向得到的種子混合液中加入制得的共生菌培養(yǎng)液，保證平均每升種子混合液用10mL的共生菌培養(yǎng)液進(jìn)行暗處理，暗處理4h后，得到種子處理液；向經(jīng)噴霧處理的苗床噴灑種子處理液，按照每平方米苗床噴灑0.1L種子處理液進(jìn)行直播播種；
5)播種后期管理:控制播種后的種子培養(yǎng)環(huán)境的溫度為20?30°C、空氣濕度為70?90%，種子播種后每7d噴用一次制得的共生菌培養(yǎng)液，同時(shí)播種后頭7d進(jìn)行暗處理，之后的一個(gè)月內(nèi)光照強(qiáng)度控制在1500?2000Lux，45d后萌生出第一片葉片，萌發(fā)率為86.2%，株高3cm后進(jìn)行移栽和正常的水肥管理，移栽成活率為97.9%。
[0010]實(shí)施例二的鐵皮石斛種胚的直播方法，包括以下步驟:
O直播種子的選擇:選擇購(gòu)自廣西桂林的100%成熟的鐵皮石斛果莢作為直播種子；
2)共生菌培養(yǎng)液的制備:選取帶有部分原始基質(zhì)的桂林野生鐵皮石斛，將其根部連帶原始基質(zhì)浸泡在無(wú)菌水中50min，浸泡期間每4min搖晃一次，浸泡結(jié)束后得到浸泡液；將得到的浸泡液在180rpm轉(zhuǎn)速下離心處理60s沉降雜質(zhì)，取上清液并將上清液在3500rpm轉(zhuǎn)速下離心處理lOmi